全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊源冤院园缘远怨 耀 园缘苑远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园源鄄园苑摇 接受日期院圆园员猿鄄员圆鄄猿园
基金项目院国家花生产业技术体系建设渊悦粤砸杂 原 员源冤袁辽宁省科技厅科技攻关项目渊圆园员员圆园员园圆员冤袁国家科技支撑计划课题渊圆园员圆月粤阅猿远月园园冤
作者简介院于树涛袁男袁助理研究员袁主要从事花生生物技术研究遥 耘鄄皂葬蚤造院泽澡怎贼葬燥赠怎岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院王传堂袁男袁研究员袁主要从事花生分子育种和化学诱变研究遥 耘鄄皂葬蚤造院糟澡蚤灶葬责藻葬灶怎贼岳 员圆远援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园源鄄园缘远怨鄄园愿
低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析
于树涛员 摇 于洪波员 摇 苏君伟员 摇 赵立仁员 摇 史普想员 摇 赵摇 艳员 摇 唐月异圆
王秀贞圆 摇 吴摇 琪圆 摇 王传堂圆
渊员 辽宁省风沙地改良利用研究所袁辽宁 阜新摇 员圆猿园园园曰圆 山东省花生研究所袁山东 青岛摇 圆远远员园园冤
摘摇 要院筛选 苑源 个花生种质材料袁最后以发芽率在 愿园豫以上的 怨远缘园 作为试验材料遥 对 怨远缘园 分别进行
圆益和 圆缘益渊对照冤处理袁分别提取 圆尧远 和 愿澡 花生样品的总 砸晕粤遥 利用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 随机引物袁克隆测
序袁获得 猿源 个独特的基因序列遥 经 月蕴粤杂栽圆郧韵注释袁包括参与细胞合成的组分尧应激蛋白反应尧代谢过
程中的转运与运输尧蛋白质的合成尧以及耐低温相关的基因序列遥 进一步利用定量 砸栽鄄孕悦砸 证实了 源 个
基因的相对表达量袁选择其中亲环蛋白基因相关序列袁通过 缘忆 原 砸粤悦耘 获得 糟阅晕粤 全长袁为通过转基因
技术对其进行功能分析奠定了基础遥
关键词院花生曰低温曰郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早曰差异表达曰亲环蛋白
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园源援 园缘远怨
摇 摇 花生是我国重要的油料作物和经济作物袁在保障
食用油脂安全方面具有举足轻重的作用遥 在传统产
区袁花生播种后遭遇低温威胁袁会导致缺苗断垄袁严重
减产咱员 原 圆暂 遥 由于近年来花生种植效益比较突出袁加之
地膜覆盖栽培技术普遍应用袁花生种植范围持续北移袁
目前最北端已到达黑龙江省黑河市渊缘园毅晕冤咱猿暂 袁高纬度
地区极端低温气候年份出现的频率较高遥 开展花生耐
低温研究袁将为培育耐低温品种提供便利袁对于稳定花
生面积和产量具有重要意义遥
目前袁花生耐低温差异表达基因分离的仅有 圆 篇
研究报道遥 栽葬灶早等咱源暂以花生种质 粤源 为试验材料袁利
用抑制性差减杂交方法构建了 猿 个低温胁迫文库袁得
到了一批耐低温相关基因遥 王秀贞等咱缘暂通过差异表
达分析克隆出可能与花生对低温逆境胁迫的抗性有关
油质蛋白基因和铁硫簇蛋白基因遥
本研究主要取材于我国 源圆毅晕 地区花生种质袁利
用快速尧经济的 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 技术分离花生低温相关差
异表达基因的克隆袁分离和坚定袁旨在为剖析花生应答
低温胁迫分子机制袁进而培育适合我国东北产区种植
的耐低温抗性花生品种创造条件遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
参加耐低温筛选的 苑源 份花生种质资源材料均来
自辽宁省风沙地改良利用研究所花生课题组袁其发芽
率均在 怨愿豫 以上袁依据唐月异等咱远暂试验方法袁于 圆园员员
年 苑 月进行低温预浸发芽试验遥 最后选择发芽率在
愿园豫 以上的花生种质 怨远缘园 作为基因差异表达分析的
试验材料遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 总 砸晕粤 提取摇 取 猿 粒 怨远缘园 花生种子浸泡在
圆益 下袁逐一处理 圆尧远 和 愿澡袁分别提取 猿 个处理时间的
总 砸晕粤袁同时设 圆缘益 作为对照遥 紫外分光光度法与
员郾 圆豫 琼脂糖电泳检测 砸晕粤 纯度与浓度遥
员郾 圆郾 圆摇 克隆与测序 摇 利用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 阅耘郧 孕则藻皂蚤曾
运蚤贼泽试剂盒渊杂藻藻早藻灶藻袁韩国冤对提取的 远 份 砸晕粤 进行
逆转录遥 反应体系为院员园滋皂燥造窑蕴 原员的 凿栽鄄粤悦孕员 圆滋蕴袁
猿滋早 的总 砸晕粤袁补水至 怨郾 缘滋蕴遥 苑园益 哺育 员园皂蚤灶 后袁
冰上冷却 圆皂蚤灶 并短暂离心袁再向体系中加入 缘 伊 砸栽
遭怎枣枣藻则 源滋蕴尧 砸晕葬泽藻 抑制剂 园郾 缘滋蕴尧圆皂皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕
怨远缘
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
缘滋蕴 和 酝鄄酝蕴灾 逆转录酶 员滋蕴袁源圆益 哺育 怨园皂蚤灶 后
苑圆益 员园皂蚤灶袁冰上冷却 圆皂蚤灶 并短暂离心袁加入 远园滋蕴
阅晕葬泽藻鄄枣则藻藻 水袁得到第一链 糟阅晕粤遥
稀释 得 到 的 第 一 链 糟阅晕粤 至 缘园灶早袁 进 行
郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 孕悦砸反应袁反应体系中再加入 缘滋皂燥造窑蕴 原员
随机 粤悦孕 引物 圆滋蕴尧员园滋皂燥造窑蕴 原员 凿栽鄄粤悦孕圆尧圆 伊 杂藻藻粤皂责
粤悦孕 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 员园滋蕴尧 补水至 圆园滋蕴遥 热循环在
月蚤燥皂藻贼则葬 孕悦砸 仪上完成袁程序是 怨源益 缘皂蚤灶袁 缘园益
猿皂蚤灶袁苑圆益 员皂蚤灶袁接下来 怨源益 源园泽藻糟袁远缘益 源园泽袁苑圆益
源园泽袁源园 个循环袁最后 苑圆益 延伸 缘皂蚤灶遥 产物经 圆豫 琼
脂糖凝胶电泳检测袁回收同一个处理时间下不同温度
电泳的差异片度条带袁经 孕郧酝鄄栽 载体克隆袁菌落 孕悦砸
确认袁送金思特渊郧藻灶泽糟则蚤责贼袁南京冤公司测序遥
员郾 圆郾 猿摇 序列分析摇 阅晕粤杂贼葬则 软件除去冗余序列袁将序
列进行 月蕴粤杂栽比对袁并获得序列的同源性信息遥
员郾 圆郾 源 摇 实时荧光定量 孕悦砸 摇 利用软件 月藻葬糟燥灶
阅藻泽蚤早灶藻则 苑 设计荧光定量引物袁由金思特公司合成袁使
用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早试剂盒逆转录得到 糟阅晕粤袁按照 栽葬运葬砸葬
公司生产的 杂再月砸 孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择 配制 孕悦砸反应体系袁
实时荧光定量在 蕴蚤早澡贼糟赠糟造藻则 圆郾 园 孕悦砸渊砸燥糟澡藻冤上进行袁
反应程序同 栽葬运葬砸葬 公司生产的 杂再月砸 孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择
说明书遥 利用 圆 个内参渊表 员冤对 源 个浓度梯度渊糟阅晕粤
原液 员 伊 尧稀释 员园 伊 尧稀释 员园园 伊 尧稀释 员园园园 伊 冤进行定
量袁确定模板浓度后袁进行样品检测袁试验 猿 次重复袁结
果取平均数袁利用 圆 原 驻驻悦贼方法计算 糟贼值遥
表 员摇 本研究使用的引物
栽葬遭造藻 员摇 蕴蚤泽贼 燥枣 孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠
引物名称
孕则蚤皂藻则 陨阅
正向引物
云燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则渊缘忆 原 猿忆冤
反向引物
砸藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则渊缘忆 原 猿忆冤
茁 原 葬糟贼蚤灶 栽栽郧郧粤粤栽郧郧郧栽悦粤郧粤粤郧郧粤栽郧悦 粤郧栽郧郧栽郧悦悦栽悦粤郧栽粤粤郧粤粤郧悦
择栽哉粤缘 悦栽郧粤栽郧栽悦郧悦栽郧栽郧悦栽悦栽栽郧郧 悦栽郧栽栽郧粤郧郧栽栽郧郧栽郧栽粤郧郧栽粤郧郧
缘忆早泽责 悦悦郧悦粤郧栽悦粤郧悦郧粤悦郧粤悦悦粤悦栽郧郧悦栽栽悦郧
猿忆早泽责 郧悦粤郧郧粤粤粤悦郧郧悦粤悦悦郧郧悦郧郧悦郧粤粤栽悦粤
员郾 圆郾 缘摇 全长 糟阅晕粤 克隆 摇 以花生种质 怨远缘园 总 砸晕粤
为模 板袁 按 照 杂酝粤砸栽藻则栽酝 砸粤悦耘 糟阅晕粤 试 剂 盒
渊悦造燥灶贼藻糟澡袁美国冤逆转录 糟阅晕粤袁以 缘忆早泽责 引物进行 缘忆端
扩增袁以 猿忆早泽责 引物进行 猿忆端扩增袁产物克隆到 孕郧酝鄄栽
载体渊栽陨粤晕郧耘晕冤上袁送金思特公司测序遥
员郾 圆郾 远摇 全长 糟阅晕粤 序列分析 摇 阅晕粤杂贼葬则 软件除去冗
余序列袁并进行序列拼接袁找到开放式阅读框渊韵砸云冤袁
进行 月蕴粤杂栽责序列分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 总 砸晕粤 提取
以花生种质 怨远缘园 为试验材料袁提取 远 个试验处理
点总 砸晕粤袁经紫外分光光度计检测浓度均在 源猿园 耀
缘源园灶早窑滋蕴 原员之间袁并经 员郾 圆豫 琼脂糖电泳检测满足试
验要求渊图 员冤遥
圆郾 圆摇 克隆尧测序与序列分析
用 源园 对随机引物进行 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 试验袁有 员怨 对
引物筛选出差异片段袁部分结果见图 圆袁遥 将这些差异
片段回收袁经克隆尧测序尧去冗余后袁经 月蕴粤杂栽比对袁结
果见表 圆遥
图 员摇 总 砸晕粤电泳图
云蚤早援 员摇 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻早则葬皂 燥枣 贼燥贼葬造 砸晕粤
这 猿源 个独特的基因序列袁包括细胞合成组分尧应
激蛋白反应尧代谢过程中的转运与运输尧蛋白质的合
成尧以及耐低温相关的基因序列袁经 月蕴粤杂栽圆郧韵 功能
注释袁最后选择其中 源 个序列渊表 猿冤袁进行实时荧光定
量 孕悦砸分析遥
圆郾 猿摇 实时荧光定量 孕悦砸 结果
在 圆益和 圆缘益处理下袁不同时间下的相对表达量
如图 猿 所示袁结果表明袁在 圆澡 和 远澡 处理下袁除 远 原 圆 原
苑员 原 源 有较大差异外袁其他基因的相对表达量差异不
大袁而随着处理时间的延长袁处理 愿澡 种子的相对表达
量范围是 员郾 怨员 耀 缘郾 园员袁除 圆 原 圆 原 苑愿 原 圆 的相对表
园苑缘
摇 源 期 低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析
摇 摇 摇 摇 表 圆摇 猿源 个差异表达基因的比对结果
栽葬遭造藻 圆摇 月造葬泽贼 则藻泽怎造贼泽 燥枣 猿源 阅耘郧泽
序列名称
杂藻择怎藻灶糟藻
灶葬皂藻
对应引物
悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早
粤悦孕 责则蚤皂藻则
序列描述
杂藻择援 凿藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶
序列长度
杂藻择援 造藻灶早贼澡 辕
遭责
最小期望值
酝蚤灶援 藻灾葬造怎藻
平均相似度
酝藻葬灶
泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 辕 豫
圆 原 员 原 远苑 原 员 粤悦孕远苑 粤则葬糟澡蚤泽 凿怎则葬灶藻灶泽蚤泽 葬则葬 凿 渊葬则葬 凿 冤 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 员怨缘 怨郾 源源耘 原 苑园 怨远郾 源缘
圆 原 员 原 远苑 原 圆 粤悦孕远苑 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 葬遭糟 贼则葬灶泽责燥则贼藻则 蚤 枣葬皂蚤造赠 皂藻皂遭藻则 圆园 原 造蚤噪藻 皂砸晕粤 猿缘猿 源郾 远怨耘 原 圆园 愿圆郾 愿圆
圆 原 圆 原 员员 原 员 粤悦孕员员 责燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 皂砸晕粤 源苑源 愿郾 怨愿耘 原 远怨 苑远郾 源缘
圆 原 圆 原 圆 原 圆 粤悦孕圆 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 糟造燥灶藻 皂贼澡圆 原 糟燥皂责造藻贼藻 泽藻择怎藻灶糟藻 猿愿远 远郾 猿员耘 原 员怨 苑缘郾 愿园
圆 原 圆 原 圆 原 猿 粤悦孕圆 月则葬泽泽蚤糟葬 则葬责葬 责藻噪蚤灶藻灶泽蚤泽 糟造燥灶藻 糟燥皂责造藻贼藻 泽藻择怎藻灶糟藻 猿员猿 源郾 员园耘 原 圆园 苑远郾 圆园
圆 原 圆 原 缘 原 猿 粤悦孕缘 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 责藻责贼蚤凿赠造鄄责则燥造赠造 糟蚤泽鄄贼则葬灶泽 蚤泽燥皂藻则葬泽藻 员 原 造蚤噪藻 皂砸晕粤 远园远 愿郾 怨远耘 原 愿猿 愿园郾 源缘
圆 原 圆 原 缘 原 源 粤悦孕缘 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 责藻责贼蚤凿赠造责则燥造赠造 蚤泽燥皂藻则葬泽藻 则燥糟员 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 缘圆源 员郾 猿怨耘 原 苑怨 愿员郾 愿缘
圆 原 圆 原 苑 原 圆 粤悦孕苑 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 皂砸晕粤 源员怨 源郾 远源耘 原 怨苑 愿员郾 园缘
圆 原 圆 原 苑 原 猿 粤悦孕猿 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 责则燥遭葬遭造藻 泽藻则蚤灶藻 蚤灶糟燥则责燥则葬贼燥则鄄造蚤噪藻 皂砸晕粤 猿圆愿 猿郾 猿猿耘 原 员缘 苑愿郾 园怨
圆 原 圆 原 苑 原 缘 粤悦孕缘 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 糟造燥灶藻 责皂远员园 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻 泽藻择怎藻灶糟藻 圆远缘 缘郾 园猿耘 原 猿苑 愿员郾 园园
圆 原 圆 原 苑愿 原 圆 粤悦孕苑愿 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 糟怎造贼蚤增葬则 造怎澡怎葬 员源 造葬贼藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬遭怎灶凿葬灶贼 责则燥贼藻蚤灶
早则燥怎责 圆 责则燥贼藻蚤灶 凿藻澡赠凿则蚤灶 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽
苑苑园 园 愿猿郾 怨缘
远 原 员 原 圆园 原 员 粤悦孕圆园 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 远园泽 则蚤遭燥泽燥皂葬造 责则燥贼藻蚤灶 造圆远 原 员 原 造蚤噪藻 皂砸晕粤 源源远 怨郾 缘缘耘 原 员苑远 愿源郾 缘缘
远 原 员 原 远 原 圆 粤悦孕远 酝葬造怎泽 曾 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬 葬责圆 凿燥皂葬蚤灶 糟造葬泽泽 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 缘远园 缘郾 缘苑耘 原 园怨 愿缘郾 圆苑
远 原 员 原 远源 原 员 粤悦孕远源 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 皂蚤贼燥早藻灶鄄葬糟贼蚤增葬贼藻凿 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻 噪蚤灶葬泽藻 噪蚤灶葬泽藻 猿 原 造蚤噪藻
皂砸晕粤
员愿员 圆郾 猿圆耘 原 圆远 愿圆郾 缘园
远 原 员 原 远源 原 猿 粤悦孕远源 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 皂蚤泽糟赃砸晕粤 皂蚤泽糟砸晕粤 员缘缘 源郾 圆园耘 原 源员 怨猿郾 员园
远 原 员 原 远缘 原 缘 粤悦孕远缘 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 责则燥遭葬遭造藻 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄造蚤噪藻 皂砸晕粤 猿源愿 圆郾 苑圆耘 原 愿远 苑远郾 远缘
远 原 员 原 远缘 原 圆 粤悦孕远缘 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 则蚤遭燥泽燥皂葬造 砸晕粤 造葬则早藻 泽怎遭怎灶蚤贼 皂藻贼澡赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 灶鄄造蚤噪藻
皂砸晕粤
猿源远 猿郾 猿园耘 原 圆愿 苑怨郾 缘园
远 原 员 原 远怨 原 员 粤悦孕远怨 要晕粤要 圆缘圆
远 原 圆 原 远猿 原 猿 粤悦孕远猿 要晕粤要 员源怨
远 原 圆 原 苑园 原 圆 粤悦孕苑园 孕澡赠造造燥泽贼葬糟澡赠泽 藻凿怎造蚤泽 糟阅晕粤 糟造燥灶藻院 枣怎造造 蚤灶泽藻则贼 泽藻择怎藻灶糟藻 怨圆猿 怨郾 猿怨耘 原 愿缘 苑远郾 园园
远 原 圆 原 苑员 原 源 粤悦孕苑员 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 员苑员 猿郾 源圆耘 原 猿园 愿缘郾 苑园
远 原 圆 原 苑缘 原 员 粤悦孕苑缘 砸蚤糟蚤灶怎泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽 糟燥皂责造藻贼藻 早藻灶燥皂藻 员源源 员郾 缘圆耘 原 猿猿 怨源郾 园园
愿 原 员 原 远缘 原 猿 粤悦孕远缘 要要要晕粤要要要 圆苑苑
愿 原 员 原 苑缘 原 猿 粤悦孕苑缘 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 糟燥灶贼蚤早 憎澡燥造藻 早藻灶燥皂藻 泽澡燥贼早怎灶 泽藻择怎藻灶糟藻 圆源远 猿郾 员猿耘 原 缘愿 苑远郾 缘缘
愿 原 员 原 苑苑 原 猿 粤悦孕苑苑 悦造燥灶燥则糟澡蚤泽 泽蚤灶藻灶泽蚤泽 糟造燥灶藻 糟皂曾则鄄早责苑苑 责赠则怎增葬贼藻 凿藻澡赠凿则燥早藻灶葬泽藻 葬鄄糟澡葬蚤灶
贼赠责藻 员 责葬则贼蚤葬造 糟凿泽
员园源 圆郾 远源耘 原 园怨 怨猿郾 猿猿
愿 原 圆 原 圆 原 员 粤悦孕圆 要晕粤要 源员怨
愿 原 圆 原 猿 原 员 粤悦孕猿 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 蚤则燥灶鄄泽怎造枣怎则 糟造怎泽贼藻则 葬泽泽藻皂遭造赠 藻灶扎赠皂藻 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造鄄造蚤噪藻
皂砸晕粤
源园员 圆郾 苑愿耘 原 员远怨 愿愿郾 愿愿
愿 原 圆 原 猿 原 圆 粤悦孕猿 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 皂砸晕粤 猿源圆 远郾 猿园耘 原 员圆 愿源郾 缘苑
愿 原 圆 原 猿 原 缘 粤悦孕猿 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 源员缘 园 愿苑郾 圆缘
愿 原 圆 原 远缘 原 圆 粤悦孕远缘 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 怎灶糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻凿 造燥糟员园园缘圆苑圆猿圆 皂砸晕粤 源园苑 缘郾 源怨耘 原 猿怨 苑缘郾 苑缘
愿 原 圆 原 苑员 粤悦孕苑员 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 澡蚤泽贼燥灶藻 澡圆葬鄄造蚤噪藻 皂砸晕粤 猿园苑 圆郾 苑员耘 原 圆圆 苑愿郾 源缘
愿 原 圆 原 苑怨 原 员 粤悦孕苑怨 阅藻灶凿则燥遭蚤怎皂 糟则怎皂藻灶葬贼怎皂 糟造葬泽泽 原 员 泽皂葬造造 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶 责葬则贼蚤葬造 糟凿泽 圆苑远 猿郾 愿园耘 原 园苑 员园园郾 园园
愿 原 圆 原 苑怨 原 源 粤悦孕苑怨 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 葬贼猿早员园园圆园 贼圆圆噪员愿赃员远 糟燥皂责造藻贼藻 糟凿泽 猿远苑 愿郾 猿园耘 原 员员 愿园郾 员缘
愿 原 圆 原 苑怨 原 缘 粤悦孕苑怨 要晕粤要 猿园园
员苑缘
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
表 猿摇 经 月蕴粤杂栽圆郧韵功能注释的 源 个序列结果
栽葬遭造藻 猿摇 粤灶灶燥贼葬贼蚤燥灶 燥枣 源 泽藻择怎藻灶糟藻 怎泽蚤灶早 月蕴粤杂栽圆郧韵
序列名称
杂藻择怎藻灶糟藻
晕葬皂藻
序列说明
杂藻择怎藻灶糟藻
阅藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶
命中数
匀蚤贼 贼澡藻
灶怎皂遭藻则
耘值
酝蚤灶援
藻 增葬造怎藻
相似度
酝藻葬灶
泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠
注释数
郧燥 燥灶贼燥造燥早赠
功能注释
郧韵泽
圆 原 圆 原 苑愿 原 圆 造葬贼藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬遭怎灶凿葬灶贼 责则燥贼藻蚤灶
早则燥怎责 圆 责则燥贼藻蚤灶 凿藻澡赠凿则蚤灶
员 苑郾 源怨耘 原 圆愿 怨愿郾 园园 圆 孕院 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 憎葬贼藻则曰 孕院 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥
泽贼则藻泽泽
远 原 圆 原 苑员 原 源 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 圆园 员郾 怨远耘 原 员远 怨园郾 猿园 员 云院造赠葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠
愿 原 圆 原 猿 原 缘 葬则葬糟澡蚤灶 葬澡赠 原 源 圆园 缘郾 员猿耘 原 员远 怨园郾 圆园 员 云院灶怎贼则蚤藻灶贼 则藻泽藻则增燥蚤则 葬糟贼蚤增蚤贼赠
圆 原 圆 原 缘 原 猿 糟赠糟造燥责澡蚤造蚤灶 圆园 员郾 员圆耘 原 缘猿 怨缘郾 苑园 愿 云院 责藻责贼蚤凿赠造鄄责则燥造赠造 糟蚤泽鄄贼则葬灶泽 蚤泽燥皂藻则葬泽藻
葬糟贼蚤增蚤贼赠曰 孕院 责则燥贼藻蚤灶 枣燥造凿蚤灶早曰 孕院 责则燥贼藻蚤灶
责藻责贼蚤凿赠造鄄责则燥造赠造 蚤泽燥皂藻则蚤扎葬贼蚤燥灶曰 云院
蚤泽燥皂藻则葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠曰 悦院 糟澡造燥则燥责造葬泽贼曰 悦院
糟赠贼燥泽燥造曰 孕院 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶曰 悦院
责造葬泽皂葬 皂藻皂遭则葬灶藻
注院粤缘 耀 粤苑尧粤远缘 耀 粤远苑尧粤远怨 耀 粤苑员院郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 随机引物曰粤院圆澡处理袁月院远澡处理袁悦院愿澡处理曰
糟噪院圆缘益处理袁造贼院圆益处理曰酝院阅蕴圆园园园渊栽葬运葬则葬冤遥
晕燥贼藻院 渊粤缘 耀 粤苑袁粤远缘 耀 粤远苑袁粤远怨 耀 粤苑员院 葬则遭蚤贼则葬则蚤造赠 责则蚤皂藻凿 燥枣 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早援 粤院圆澡 责则燥糟藻泽泽蚤灶早袁 月院远澡 责则燥糟藻泽泽蚤灶早袁
悦院愿澡 责则燥糟藻泽泽蚤灶早援 糟噪院 圆缘益 责则燥糟藻泽泽蚤灶早袁陨贼院 圆益 责则燥糟藻泽泽蚤灶早援 酝院阅蕴圆园园园渊栽葬运葬则葬冤 援
图 圆摇 应用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 技术获得的差异表达基因的琼脂糖凝胶电泳图
云蚤早援 圆摇 粤早葬则燥泽藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻贼燥早则葬皂 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 怎泽蚤灶早 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 贼藻糟澡灶燥造燥早赠
图 猿摇 源 个等位基因在 圆益处理和 圆缘益处理 圆尧远 和 愿澡 的相对表达量
云蚤早援 猿摇 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 源 早藻灶藻泽 蚤灶 责藻葬灶怎贼 泽藻藻凿泽 蚤皂遭蚤遭藻凿 葬贼 圆益 葬灶凿 圆缘益 枣燥则 圆袁 远 葬灶凿 愿 澡袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠
圆苑缘
摇 源 期 低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析
图 源摇 源 个等位基因在 圆益处理 圆尧远 和 圆源澡 时的相对表达量
云蚤早援 源摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 燥枣 源 早藻灶藻泽 蚤灶 责藻葬灶怎贼 泽藻藻凿泽 蚤皂遭蚤遭藻凿 葬贼 圆益 枣燥则 圆袁 远 葬灶凿 圆源 澡泽袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠
达量在 员郾 怨员 倍外袁其余 猿 个基因的相对表达量均在 猿
倍以上袁这与 栽葬灶早等咱源暂研究结果相似遥
假定 圆益处理 圆澡时各基因的表达量是 员袁通过荧
光定量 孕悦砸 进一步验证这 源 个基因随时间推移的相
对表达情况遥 其结果见图 源遥 在 猿 个时间点上袁源 个基
因在低温预浸 愿澡的表达量为最高遥
圆郾 源摇 全长 糟阅晕粤克隆与序列分析
随后袁提取耐寒处理 愿澡 的 怨远缘园 花生材料袁选择与
亲环蛋白编码序列相关序列 圆 原 圆 原 缘 原 猿袁通过 缘忆 原
砸粤悦耘 获得全长 糟阅晕粤渊图 缘冤袁经序列拼接后袁获得
怨圆圆遭责全长基因袁包括可能编码的 员苑圆 个氨基酸渊图
远冤袁经 晕悦月陨数据库 月蕴粤杂栽责比对后发现袁该序列与亲
核蛋白基因渊从 郧藻灶藻月葬灶噪 选择 员怨 个编码的蛋白序
列冤覆盖率达 员园园渊表 源冤遥
图 缘摇 缘忆 原 砸粤悦耘 全长扩增电泳图
云蚤早援 缘摇 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 缘忆 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻
表 源摇 亲环蛋白全长序列 月造葬泽贼 比对部分结果
栽葬遭造藻 源摇 月造葬泽贼 则藻泽怎造贼泽 燥枣 糟赠糟造燥责澡蚤造蚤灶
编号
晕燥援
登录号
粤糟糟藻泽泽蚤燥灶
序列描述
杂藻择援 凿藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶
最高分数
酝葬曾 泽糟燥则藻
总得分
栽燥贼葬造 泽糟燥则藻
覆盖率
匝怎藻则赠 糟燥增藻则葬早藻
耘值
耘 增葬造怎藻
员 粤阅灾园源园缘园郾 员 糟赠糟造燥责澡蚤造蚤灶 咱匀藻增藻葬 遭则葬泽蚤造蚤藻灶泽蚤泽暂 猿圆缘 猿圆缘 员园园 圆郾 园园耘 原 员员猿
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猿 粤粤韵远猿苑苑苑郾 员 糟赠糟造燥责澡蚤造蚤灶 咱孕燥责怎造怎泽 贼则藻皂怎造燥蚤凿藻泽暂 猿员苑 猿员苑 员园园 源郾 园园耘 原 员员园
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猿苑缘
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
酝院阅蕴圆园园园渊栽葬运葬则葬冤
注院大写字母代表编码区序列曰鄢表示终止密码子的位置袁起始密码子和终止密码子以下划线表示曰非编码区以小写字母表示遥
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图 远摇 亲环蛋白的全长 糟阅晕粤 序列及推定的氨基酸序列
云蚤早援 远摇 栽澡藻 枣怎造造 造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 悦赠糟造燥责澡蚤造蚤灶 葬灶凿 蚤贼泽 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻
猿摇 讨论
本试验是利用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 技术对低温处理的花
生进行差异表达分析袁与抑制性消减杂交渊杂怎责责则藻泽泽蚤燥灶
杂怎遭贼则葬糟贼蚤增藻 匀赠遭则蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶冤技术相比袁可以在短时间内
得到理想的差异基因袁省去了大量构建文库的繁琐袁得
到的全长序列可进一步进行转基因验证遥
本研究采用 郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 技术获得了 猿源 个独特的
花生低温响应基因袁经 月蕴粤杂栽圆郧韵 功能注释袁从中选
择 源 个基因进一步进行定量 砸栽鄄孕悦砸验证遥 栽葬灶早等咱源暂
研究了 员尧远 和 圆源澡 的低温预浸处理下的低温响应基
因袁低温预浸 员澡 只获得了几个差异表达基因袁圆源澡 时
分离到的基因显著增多遥 在此基础上袁为提高耐低温
相关基因的分离效率袁即既保证分离到的基因达到一
定数量袁又尽量避免分离到与低温响应不相关的基因袁
本研究在 圆尧远 和 愿澡低温浸泡处理条件下袁分离差异表
达基因袁并进一步通过定量 砸栽鄄孕悦砸 研究了其中 源 个
基因的差异表达调控情况曰证实在胁迫处理 愿澡 时袁 源
个基因均得到较高的相对表达量遥 在花生上分离出与
低温响应有关的植物胚胎发育晚期丰富蛋白 渊 造葬贼藻
藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬遭怎灶凿葬灶贼 责则燥贼藻蚤灶 蕴耘粤冤 基因袁与 栽葬灶早
等咱源暂研究不同的是袁还分离出生长素抑制蛋白渊葬怎曾蚤灶鄄
则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 粤砸孕冤基因尧花生储藏蛋白 渊 粤则葬糟澡蚤泽
澡赠责燥早葬藻葬 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶冤基因和亲环蛋白渊 糟赠糟造燥责澡蚤造蚤灶
悦赠责冤基因袁并且利用 砸粤悦耘 获得了亲环蛋白全长序
列袁此基因在花生耐低温研究中少有报道遥
植物胚胎发育晚期丰富蛋白是指胚胎发生后期种
子大量积累的一类蛋白质袁蕴耘粤 蛋白广泛存在于高等
植物中袁可受低温尧干旱和渗透胁迫诱导产生咱苑 原 员园暂 袁
蕴葬灶等咱员员暂与 在澡葬燥 等咱员圆暂研究发现 蕴耘粤 蛋白都可以增
强植物对低温的抗性袁它作为一种多功能蛋白广泛参
与各种胁迫相应袁保护植物正常代谢袁对作物的遗传改
良具有深远的影响遥 生长素抑制蛋白大部分是从休眠
组织尧器官或受到外界逆境胁迫分离出来袁 匀憎葬灶早
等咱员猿暂经盐胁迫与耐冷胁迫辣椒种子得到了 粤砸孕 基
因遥 王新超等咱员源暂对茶树的生长素抑制蛋白基因与休
眠关系研究表明袁随着休眠程度的加深袁游离态生长素
含量持续降低袁导致 粤砸孕的表达量较高遥 花生储藏蛋
白的表达调控发生在胚发育过程中的子叶中袁在成熟
的种子中 皂砸晕粤 大量积累袁翻译的蛋白质贮存在蛋白
体中袁种子萌发时降解袁为发育的幼苗提供氮源和碳
源苑缘
摇 源 期 低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析
源袁从而促进种子萌发遥 本试验中袁随着低温胁迫时间
的延长袁花生储藏蛋白基因相对表达也随之增多袁推测
该基因对抵御低温胁迫也起到一定的作用遥
亲环蛋白基因作为一种与植物生长和发育调剂尧
代谢调控基因逆境应答等密切相关的基因袁已从多种
植物中相继分离出来遥 从 月蕴粤杂栽圆郧韵 功能注释可以
看出袁悦赠孕具有催化肽脯氨酰顺反异构酶的活性功能袁
在蛋白质折叠中起重要作用袁推断该基因在充当分子
伴侣的角色在逆境相关蛋白的折叠过程中发挥作
用咱员缘暂 遥 蕴怎葬灶等咱员远暂以蚕豆为材料袁在强光和热激诱导
下袁叶绿体中 悦赠孕表达量会明显上升曰酝葬则蚤增藻贼 等咱员苑暂以
玉米和大豆为材料袁在热激尧低温胁迫及盐胁迫等非生
物胁迫下发现 悦赠孕的表达量变化差异很大袁推测亲环
素蛋白是与胁迫紧密相关的蛋白曰同样袁郧燥凿燥赠 等咱员愿暂
以马铃薯为材料袁在机械损伤尧热激尧粤月粤尧允粤 等的诱
导下 悦赠孕表达量也会显著增加遥 有研究表明袁悦赠孕 基
因还与多种疾病的发生相关袁参与免疫抑制及信号转
导等多种生物学过程咱员怨 原 圆园暂 遥 本研究已获到了亲环蛋
白基因袁为进一步探索该基因在花生抵御播种期低温
胁迫中的作用奠定了基础遥
源摇 结论
本研究对 苑源 个花生材料进行低温筛选袁利用
郧藻灶藻云蚤泽澡蚤灶早 随机引物袁克隆测序袁获得 猿源 个独特的基
因序列袁经 月蕴粤杂栽圆郧韵注释袁进一步利用 砸栽鄄孕悦砸 证实
了 源 个基因的相对表达量袁并获得亲环蛋白基因的 缘忆
原 砸粤悦耘 全长遥 为进一步探索该基因的功能和作用机
制袁我们也将准备将该基因过量表达于花生植株中袁对
所获得的转基因植株给予信号刺激来进行进一步的观
察与性状鉴定袁可望进一步研究花生亲环蛋白基因的
功能及其对抗寒胁迫的响应提供更多的线索和依据遥
参考文献院
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分子机制的进展咱 允暂 援 长春师范学院学报院自然科学版袁圆园园愿袁圆苑
渊远冤院苑员 原 苑源
咱 猿 暂 摇 禹山林援中国花生品种及其系谱咱酝暂援 上海院上海科学技术出版
社袁圆园园愿
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咱 远 暂摇 唐月异袁王传堂袁高华媛袁凤桐袁张树伟袁王秀贞袁张建成袁禹山林援
花生种子吸胀期间耐低温性及其与品质性状的相关研究咱允暂 援核
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咱员源暂摇 王新超袁马春雷袁杨亚军袁姚明哲袁金基强援 茶树生长素抑制蛋白
基因 悦泽粤砸孕员 的克隆与表达分析咱 允暂 援 核农学报袁圆园员员袁圆缘渊缘冤院
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渊员杂葬灶凿赠 造葬灶凿 粤皂藻造蚤燥则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 蕴蚤葬燥灶蚤灶早袁 云怎曾蚤灶袁悦澡蚤灶葬曰
圆杂澡葬灶凿燥灶早 孕藻葬灶怎贼 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 匝蚤灶早凿葬燥袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆远远员园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 贼燥贼葬造 燥枣 苑源 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶泽 燥枣 责藻葬灶怎贼 皂葬贼藻则蚤葬造泽 憎藻则藻 泽糟则藻藻灶藻凿 枣燥则 糟澡蚤造造蚤灶早 泽贼则藻泽泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 遭葬泽藻凿 燥灶 葬 责则藻增蚤燥怎泽造赠
藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 皂藻贼澡燥凿袁 则藻泽怎造贼蚤灶早 蚤灶 葬 早藻则皂责造葬泽皂 造蚤灶藻 怨远缘园 憎蚤贼澡 跃 愿园豫 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶援 栽燥贼葬造 砸晕粤 憎葬泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 泽藻藻凿泽 燥枣
怨远缘园 蚤皂遭蚤遭藻凿 蚤灶 凿蚤泽贼蚤造造藻凿 憎葬贼藻则 葬贼 圆渊 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼冤 燥则 圆缘益 渊糟澡藻糟噪冤 枣燥则 圆澡 远 葬灶凿 愿澡袁 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠
藻曾责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻泽 渊阅耘郧泽冤 憎藻则藻 蚤泽燥造葬贼藻凿 怎泽蚤灶早 郧藻灶藻枣蚤泽澡蚤灶早 贼藻糟澡灶燥造燥早赠援 猿源 怎灶蚤择怎藻 阅耘郧泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿援 韵枣 贼澡藻皂袁 缘
泽藻择怎藻灶糟藻泽 澡葬增藻 灶燥贼 遭藻藻灶 葬灶灶燥贼葬贼藻凿 遭藻枣燥则藻袁 葬灶凿 贼澡藻 则藻泽贼 圆怨 憎藻则藻 枣燥怎灶凿 贼燥 遭藻 澡蚤早澡造赠 泽蚤皂蚤造葬则 贼燥 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 蚤灶 贼澡藻
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远苑缘