全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊源冤院园远怨圆 耀 园远怨愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园猿鄄员源摇 接受日期院圆园员源鄄员员鄄员园
基金项目院国家野愿远猿冶计划渊圆园员员粤粤员园粤员园猿冤
作者简介院刘春华袁女袁主要从事玉米遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院缘愿源源圆猿远猿圆岳 择择援 糟燥皂
通讯作者院兰海袁男袁副研究员袁主要从事作物遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院员怨员员园缘愿怨岳 择择援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园源鄄园远怨圆鄄园苑
玉米转录因子基因 在皂孕栽云员在转基因烟草中的表达
刘春华摇 高剑瑞摇 王摇 鹏摇 夏摇 超摇 董晓秋摇 刘摇 兵
赵摇 丹摇 韦如俊摇 兰摇 海
渊四川农业大学玉米所袁四川 成都摇 远员员员猿源冤
摘摇 要院为了探讨转录因子基因 在皂孕栽云员 在玉米种子萌发中的作用袁本研究根据 郧藻灶月葬灶噪 中收录的玉米
孕栽云员 序列设计 孕悦砸引物袁利用普通玉米自交系 粤猿员愿 克隆得到 在皂孕栽云员 的全长 糟阅晕粤序列遥 该序列开
放阅读框包括 员 源源远遭责碱基袁由 源愿员 个氨基酸组成遥 本文构建植物表达载体 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员 转
化烟草 宰猿愿袁经过抗生素筛选和 孕悦砸鉴定得到转基因阳性烟草袁对 圆 株生长正常的 栽员 转基因烟草进行
泽燥怎贼澡藻则灶 杂交分析及 砸栽鄄孕悦砸 检测袁结果表明外源 在皂孕栽云员 已经整合进了烟草基因组中并且能正常转录
并遗传遥 与对照相比袁转基因烟草种子的发芽率尧发芽势及萌发种子 琢鄄淀粉酶活性显着增高袁表明
在皂孕栽云员 基因过表达会促进烟草种子提前解除休眠进入发芽阶段袁提高烟草种子发芽势和发芽率遥 该
研究结果为进一步研究 在皂孕栽云员 基因的功能提供理论依据遥
关键词院在皂孕栽云员曰烟草曰 萌发曰琢鄄淀粉酶曰泽燥怎贼澡藻则灶杂交
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园源援 园远怨圆
摇 摇 转录因子渊 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽冤又称反式作用因
子袁是指与靶基因启动子中的顺式作用元件发生特异
性相互作用袁并在转录过程中起激活或抑制作用的
阅晕粤结合蛋白咱员暂 遥 遭匀蕴匀 转录因子渊遭葬泽蚤糟 澡藻造蚤曾鄄造燥燥责鄄
澡藻造蚤曾 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽冤 是一类含有 遭匀蕴匀 结构域的
转录因子家族袁其结构由 圆 个保守区域构成院即分布在
晕端大约 员缘 个氨基酸组成的碱性区域袁该区域识别不
同形式的 耘鄄遭燥曾渊悦粤晕晕栽郧冤并与之结合调控靶基因表
达咱圆暂 曰另一部分是分布在 悦 端主要由疏水氨基酸残基
构成的 匀蕴匀区域袁能够与其它相关蛋白形成同源或异
源二聚体互作袁从而与靶基因启动子的不同部位相结
合袁对基因的转录发挥调控作用咱猿暂 遥
遭匀蕴匀转录因子作为植物转录因子最大的家族之
一咱源暂 袁在高等植物不同组织中广泛存在参与众多代谢
过程的调控袁在植物生长发育尧胁迫应答及植物次生代
谢中起重要的作用咱缘暂 遥 砸 基因的产物 蕴糟 是第 员 个被
报道的 遭匀蕴匀转录因子调控植物多个组织花青素的合
成咱远暂 遥 孕陨云猿 是 遭匀蕴匀类 孕陨云因子袁它通过与活化的光
敏色素结合参与光调节基因的表达调控咱苑暂 遥 拟南芥
中的 砸郧耘员 基因在鱼雷型胚发育的早期开始表达并逐
渐增强袁在成熟种子的表达量达到最高袁其突变体种子
偏小干瘪尧种皮皱缩咱愿暂 袁说明 砸郧耘员 转录因子参与种子
发育过程遥 遭匀蕴匀 转录因子家族基因 遭葬则则藻灶 泽贼葬造噪员 参
与了玉米天花侧分生组织的起始咱怨暂 遥 野生水稻
韵泽遭匀蕴匀圆 基因增强了拟南芥对盐和渗透胁迫的抗
性咱员园暂 袁韵泽遭匀蕴匀员 基因过量表达能提高转基因植株的耐
低温能力咱员员暂 遥 遭匀蕴匀 转录因子 韵泽陨砸园圆 响应缺铁胁迫
促进水稻在缺铁条件下对铁的吸收袁韵泽陨砸园圆 基因过表
达的水稻植株中植物含 云藻 细胞数量明显高于野生
型咱员圆暂 遥
孕栽云员 是 遭匀蕴匀转录因子家族的成员遥 再蚤 等咱员猿暂最
早从水稻中克隆出 韵泽孕栽云员 基因袁该基因过表达增强
了水稻的分蘖能力根冠比加大袁可使水稻植株干物重
和磷含量高出野生型 猿园豫 遥 郑醒咱员源暂利用水稻中的
韵泽孕栽云员 基因袁通过同源克隆得到大豆中耐低磷相关转
录因子基因 郧皂孕栽云员袁超表达转基因拟南芥耐低磷试
验表明袁该基因能够提高拟南芥在低磷条件下的耐低
磷能力遥 蕴蚤 等咱员缘暂用 砸粤悦耘 等方法从玉米中克隆出
圆怨远
摇 源 期 玉米转录因子基因 在皂孕栽云员 在转基因烟草中的表达
在皂孕栽云员 基因袁其启动子包含了 猿 个 粤月砸耘 序列袁远 个
郧鄄遭燥曾和 酝晕云 顺式元件遥 玉米 在皂孕栽云员 的过表达通
过调控碳代谢和根的生长增加了玉米对低磷的耐性遥
张莹咱员远暂利用数字表达谱分析技术对玉米 在皂孕栽云员 过
表达株系和自交系材料根系进行转录组分析发现
在皂孕栽云员 过表达 引起了蔗糖合成基因 在藻葬 皂葬赠泽
枣则怎糟贼燥泽藻鄄员袁远鄄遭蚤泽责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻 和 遭藻贼葬鄄枣则怎糟贼燥枣怎则葬灶燥泽蚤凿葬泽藻 上
调表达以及海藻糖和淀粉降解酶基因 葬造责澡葬袁葬造责澡葬鄄
贼则藻澡葬造葬泽藻和 遭藻贼葬鄄葬皂赠造皂藻 猿 下调表达袁证明 在皂孕栽云员 参
与了玉米糖代谢调节遥 过表达 在皂孕栽云员 也导致玉米
根系中的生长素和乙烯浓度增加袁细胞分裂素含量降
低遥 此外袁赤霉素受体基因 郧陨阅员 在转基因株系中的
转录丰度显著高于对照的转录丰度袁而 阅耘蕴蕴粤 蛋白
基因表达丰度在转基因株系中低于对照的转录丰度袁
这表明过表达 在皂孕栽云员 可能导致 郧粤 含量增加袁
阅耘蕴蕴粤蛋白对生长的抑制作用减轻袁从而促进了植株
的生长遥 张珉等咱员苑暂利用 糟阅晕粤鄄粤云蕴孕 技术袁从小麦中
鉴定出 员 个与 韵泽孕栽云员 高度同源的 遭匀蕴匀 型转录因子
栽葬匀蕴匀员袁通过基因表达分析发现该转录因子不仅对低
磷胁迫逆境产生明显应答袁而且对低氮尧干旱和高盐等
逆境也有明显应答遥
表 员摇 引物合成列表
栽葬遭造藻 员摇 蕴蚤泽贼 燥枣 责则蚤皂藻则泽
引物
孕则蚤皂藻则
缩写
云燥则 泽澡燥则贼
引物序列
杂藻择怎藻灶糟藻渊缘忆鄄猿忆冤
全长 在皂孕栽云员 特异引物
杂责藻糟蚤葬造 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 造藻灶早贼澡 在皂孕栽云员
孕员鄄云
孕员鄄砸
粤粤悦糟葬贼早早粤栽郧郧粤悦栽栽悦栽悦粤郧悦栽郧郧栽栽悦悦栽
悦郧糟葬糟早贼早栽悦粤悦栽郧栽栽悦郧郧郧粤郧郧郧粤栽栽郧
转基因烟草 在皂孕栽云员 特异检测引物
杂责藻糟蚤葬造 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 在皂孕栽云员 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥
孕圆鄄云
孕圆鄄砸
栽悦栽粤栽栽粤悦悦栽郧郧悦郧粤郧粤悦
粤栽郧粤郧郧悦粤郧栽栽粤栽郧粤粤粤郧栽
烟草 粤糟贼蚤灶内参引物
孕则蚤皂藻则泽 燥枣 粤糟贼蚤灶 葬泽 葬灶 蚤灶贼藻则灶葬造 糟燥灶贼则燥造 蚤灶 贼燥遭葬糟糟燥
粤糟贼蚤灶鄄云
粤糟贼蚤灶鄄砸
悦粤粤郧郧粤粤粤栽悦粤悦悦郧悦栽栽栽郧郧
粤粤郧郧郧粤栽郧悦郧粤郧郧粤栽郧郧粤
摇 摇 遭匀蕴匀转录因子功能多样袁尽管前人已经做了一
些关于 在皂孕栽云员 基因的研究袁但是对于其作用机理以
及参与的调控网络的了解仍然有限遥 为进一步研究该
基因的作用机理及其生物学功能袁本研究从玉米中克
隆出 在皂孕栽云员 基因通过农杆菌介导法将该基因转入
模式植物烟草中袁发现过表达该基因可以促进烟草种
子吸胀后提前解除休眠进入萌发阶段遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
以 宰猿愿 烟草为转基因受体及对照材料遥 具有弱
休眠性的玉米自交系 粤猿员愿 为基因克隆材料遥
克隆载体 责酝阅员怨鄄栽 购自大连宝生物工程有限公
司遥 大肠杆菌菌株 阅匀缘琢尧农杆菌菌株 耘匀粤员园怨 和质
粒载体 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员 由四川农业大学玉米所保存遥
引物及测序由上海市 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司合成遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员 摇 在皂孕栽云员 基 因 的 获 得 摇 用 栽则蚤扎燥造 试 剂
渊栽葬运葬砸葬袁上海市 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司冤提取玉米自交系
粤猿员愿 的总 砸晕粤遥 用 砸藻增藻则泽藻 栽则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻 酝鄄酝蕴灾
渊砸灶葬泽藻 匀 冤 试剂盒渊栽葬运葬砸葬袁上海市 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司冤
合成双链 糟阅晕粤遥 根据 郧藻灶月葬灶噪 中收录的玉米 孕栽云员
序列设计 孕悦砸 特异引物 孕员 渊表 员冤袁 以合成的双链
糟阅晕粤为模板 孕悦砸扩增得到基因的开放阅读框遥 将目
的片段克隆到 责酝阅员怨鄄栽 载体上测序遥
员郾 圆郾 圆摇 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员 植物表达载体的构建
摇 利用植物表达载体 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员 携带的 悦葬酝灾 猿缘杂
责则燥皂燥贼藻则下游存在的 晕糟燥陨 和 孕皂葬糟陨 位点袁将带有 晕糟燥陨
和 孕皂葬糟陨 酶 切 位 点 的 在皂孕栽云员 片 段 插 入 到
孕悦粤酝月陨粤猿猿园员 的 悦葬酝灾 猿缘杂 责则燥皂燥贼藻则与 晕燥泽 责燥造赠鄄粤之
间遥 将连接产物转化入大肠杆菌 阅匀缘琢袁涂布在含有
卡那霉素的 蕴月 平板生长袁挑取单克隆扩大培养后提
取质粒 阅晕粤袁用 晕糟燥陨和 孕皂葬糟陨双酶切质粒验证目的基
因是否正确连接入植物表达载体遥
员郾 圆郾 猿摇 农杆菌介导烟草转化咱员愿暂及转基因植株的获得
摇 使用液氮冻融法将 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员 重组质
粒转入农杆菌 耘匀粤员园怨咱员怨暂 遥 转化后以未转化农杆菌作
对照进行菌液 孕悦砸 鉴定遥 用含有 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄
在皂孕栽云员 重组质粒的农杆菌侵染烟草无菌苗叶片袁侵
染恢复培养后使用卡那霉素筛选愈伤组织袁圆 耀 猿 周后
将抗性芽转入生根培养基诱导生根袁获得转基因烟草遥
员郾 圆郾 源摇 转基因烟草分子鉴定 摇 栽园 烟草小苗使用
在皂孕栽云员 特异引物 孕悦砸检测后移栽至大田袁自交结实
收获种子遥 栽员 植株继续进行 孕悦砸 检测遥 利用 悦栽粤月
猿怨远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
法咱圆园暂提取生长正常的 栽员 孕悦砸阳性转基因烟草基因组
阅晕粤袁分别用 月葬皂匀玉和 耘糟燥砸玉袁以 在皂孕栽云员 基因 孕悦砸
产物为探针袁按照试剂盒的说明进行 泽燥怎贼澡藻则灶 杂交验
证遥 分别提取野生型烟草和 栽员 的转基因烟草的总
砸晕粤袁利用反转录试剂盒合成 糟阅晕粤遥 用 在皂孕栽云员 的
特异检测引物 孕圆 以及烟草的内参基因 粤糟贼蚤灶特异引物
对 栽员 转基因烟草进行 砸栽鄄孕悦砸检测咱圆员暂 遥
员郾 圆郾 缘摇 转基因烟草萌发试验咱圆圆暂 摇 随机抽取 员园园 颗转
基因烟草种子渊栽圆冤和野生型烟草种子袁经表面消毒后
分别置于琼脂平板上袁黑暗条件 圆愿益萌发渊设置 猿 次
重复冤遥 统计发芽情况遥
种子萌发的测定公式如下咱圆猿 原 圆源暂 院
发芽势 越 渊第 苑 天发芽种子数 辕供试种子数冤 伊 员园园豫
发芽率 越 渊第 员源 天发芽种子数 辕供试种子数冤 伊 员园园豫
员郾 圆郾 远摇 琢鄄淀粉酶活性的测定 摇 使用 猿袁缘 原二硝基水
杨酸法分别对吸胀后 员尧猿尧缘尧苑尧员员凿的转基因烟草种子
进行 琢鄄淀粉酶活性测定渊以野生型烟草种子为对照设
置 猿 次重复冤遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 在皂孕栽云员 基因的克隆
提取胚的总 皂砸晕粤为模板逆转录为 糟阅晕粤遥 利用
从 晕悦月陨上下载的玉米 孕栽云员 基因序列设计特异性引
物扩增出 在皂孕栽云员 的 糟阅晕粤全长序列 员 缘园园遭责渊图 员冤遥
测序结果表明该序列含有员 源源远遭责开放阅读框渊韵砸云冤袁
编码 源愿员 个氨基酸的多肽链袁用 阅晕粤杂栽粤砸 软件中的
酝耘郧粤蕴陨郧晕对所测序列与已知 糟阅晕粤 序列分析表明袁
比对结果表明同源性等于 怨怨豫 遥
晕燥贼藻院酝院 阅圆园园园酝葬则噪藻则援 员鄄圆院在皂孕栽云员援
图 员摇 孕悦砸产物凝胶电泳检测图
云蚤早援 员摇 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 遭赠 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽
圆郾 圆摇 植物表达载体的构建
构建的植物表达载体 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员 图
谱如图 圆 所示遥 晕糟燥陨和 孕皂葬糟陨双酶切质粒鉴定基因插
入是否插入正确渊图 猿冤遥
图 圆摇 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员 质粒图谱
云蚤早援 圆摇 杂贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 孕悦粤酝月陨粤猿猿园员鄄在皂孕栽云员
图 猿摇 植物表达载体酶切鉴定援
云蚤早援 猿摇 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣
孕悦粤酝月陨粤 猿猿园员鄄在皂孕栽云员
圆郾 猿摇 转基因烟草植株分子鉴定
对 栽员 抗性烟草 孕悦砸检测得到 员苑 株阳性苗袁部分
植株的检测结果见图 源遥 结果显示转基因植株中能扩
增出 员 缘园园遭责左右的片段袁而野生烟草未扩增出目的
条带遥 从 栽员 阳性植株中随机挑选 圆 株生长良好的转
基因烟草进行 杂燥怎贼澡藻则灶 杂交检测袁结果表明 圆 株烟草
均含有外源基因片段袁使用 圆 种不同的酶切结果发现
圆 个样品均是单拷贝渊图 缘冤袁说明外源 在皂孕栽云员 已经
整合到烟草基因组中遥 对 栽员 的转基因烟草进行 砸栽鄄
孕悦砸 检测袁 结果表明外源基因能正常转录袁进一步证
明了 在皂孕栽云员 基因在烟草中能正常转录遗传遥
圆郾 缘摇 转 在皂孕栽云员 烟草种子发芽试验
萌发试验结果显示转基因烟草种子发芽势尧发芽
率分别为 怨苑郾 远苑豫 尧怨愿郾 远苑豫 袁而野生型烟草种子发芽
势尧发芽率分别为 源缘豫 尧怨圆郾 远苑豫 渊表 圆冤遥 结果表明转
源怨远
摇 源 期 玉米转录因子基因 在皂孕栽云员 在转基因烟草中的表达
注院酝院阅圆园园园酝葬则噪藻则曰员院野生对照曰 圆鄄愿院栽员 转基因植株曰怨院水曰员园院质粒遥
晕燥贼藻院酝院阅圆园园园酝葬则噪藻则援 员院灶燥灶鄄贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼援 圆鄄愿院贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽援 怨院憎葬贼藻则援 员园院责造葬泽皂蚤凿援
图 源摇 栽员 代转基因植株 孕悦砸检测
云蚤早援 源摇 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
注院酝院阅晕粤皂葬则噪藻则 员缘 园园园曰 垣 院质粒 园院野生烟草曰员鄄圆院栽员 转基因植
摇 摇 株曰月院月葬皂匀玉酶切结果曰耘院 耘糟燥砸玉酶切结果遥
晕燥贼藻院酝院阅晕粤皂葬则噪藻则 员缘 园园园援 垣 院责造葬泽皂蚤凿援 园院灶燥灶鄄贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼院
员鄄圆院贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽援 月院 月葬皂匀 玉 藻灶扎赠皂藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶援 耘院 耘糟燥砸
玉 摇 摇 藻灶扎赠皂藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶援
图 缘摇 栽员 转基因植株 泽燥怎贼澡藻则灶杂交图
云蚤早援 缘摇 杂燥怎贼澡藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
基因烟草种子发芽势尧发芽率均极显著高于野生型烟
草种子发芽势尧发芽率渊孕 约 园郾 园员冤遥 通过比较种子吸
胀萌发 员缘凿的 栽圆 转基因烟草和野生型烟草幼苗的生
长状态发现袁转基因烟草的苗高显著高于野生型烟草
幼苗渊图 苑冤遥 说明过表达 在皂孕栽云员 具有提前打破种子
休眠袁提高烟草种子发芽率尧发芽势及加快幼苗生长发
图 远摇 栽员 转基因植株 砸栽鄄孕悦砸 检测
云蚤早援 远摇 砸栽鄄孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
育的作用遥
表 圆摇 转基因烟草种子渊栽圆冤发芽情况
栽葬遭造藻 圆摇 郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 葬灶凿 郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶
责燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 泽藻藻凿泽 辕 豫
统计
杂贼葬贼蚤泽贼蚤糟泽
野生型烟草种子
宰蚤造凿 贼赠责藻 泽藻藻凿
转基因烟草种子
栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 泽藻藻凿
发芽率
郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
怨圆郾 远苑 依 园郾 猿猿遭月 怨愿郾 远苑 依 园郾 猿猿葬粤
发芽势
郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 责燥贼藻灶贼蚤葬造
源缘郾 园园 依 园郾 缘愿遭月 怨苑郾 远苑 依 员郾 猿猿葬粤
摇 摇 注院同行数据后不同字母分别表达差异达 园郾 园缘 或 园郾 园员 显著水平遥
下同遥
晕燥贼藻院 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 皂藻葬灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻
葬贼 园郾 园缘 燥则 园郾 园员 造藻增藻造援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
圆郾 缘摇 葬鄄淀粉酶活的测定
种子吸胀萌发过程中转基因烟草种子和野生型烟
草种子的 琢鄄淀粉酶活性存在显著差异渊表 猿冤遥 发芽
缘怨远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 苑摇 转基因烟草种子萌发 员缘凿后幼苗生长情况
云蚤早援 苑摇 郧则燥憎贼澡 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬造造燥 蚤灶 员缘 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 贼澡藻 泽藻藻凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶
第 猿 天 转基因烟草种子 琢鄄淀粉酶活性达到最高袁然后
逐渐降低袁而野生型烟草种子 琢鄄淀粉酶活性在发芽后
第 缘 天才达到最高袁然后逐渐降低遥 分析表明转基因
烟草种子萌发过程中 琢鄄淀粉酶活性显著高于野生型
种子萌发过程 琢鄄淀粉酶活性遥
表 猿摇 转基因烟草种子渊栽圆冤琢鄄淀粉酶活性
栽葬遭造藻 猿摇 琢鄄葬皂赠造葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
贼燥遭葬糟糟燥 泽藻藻凿泽渊栽圆冤 辕 渊皂早窑蕴 原员窑皂蚤灶冤
吸胀天数
陨皂遭蚤遭蚤贼蚤燥灶 凿葬赠泽 辕 凿
野生型烟草种子
宰蚤造凿 贼赠责藻 泽藻藻凿
转基因烟草种子
栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 泽藻藻凿
园 园郾 园苑缘 依 园郾 园园源远遭月 园郾 员源怨 依 园郾 园园远圆葬粤
员 园郾 员苑圆 依 园郾 园园源苑遭粤 园郾 圆圆园 依 园郾 园员圆远葬粤
猿 园郾 员怨猿 依 园郾 园园远员遭月 园郾 缘苑圆 依 园郾 园园缘苑葬粤
缘 园郾 猿苑愿 依 园郾 园园员缘遭月 园郾 源怨源 依 园郾 园园源苑葬粤
苑 园郾 猿源猿 依 园郾 园园缘苑遭月 园郾 员苑愿 依 园郾 园园远葬粤
员员 园郾 员源员 依 园郾 园园远园遭月 园郾 员愿猿 依 园郾 园园远员葬粤
猿摇 讨论
本研究以烟草为转基因材料进行 在皂孕栽云员 基因
的功能研究袁一方面烟草是典型的模式植物袁易于进行
组织培养容易得到再生的转化植株袁另一方面是烟草
种子成熟后存在一定程度的休眠有利于目的基因功能
验证遥 通过对 在皂孕栽云员 的深入研究表明该基因过表
达具有提高烟草种子发芽势袁提前打破种子休眠的作
用遥
在皂孕栽云员 是玉米 遭匀蕴匀 家族中的成员遥 从分子水
平上来说袁种子的休眠与萌发是基因选择性表达的结
果袁而转录因子在基因的精确表达中起关键性的作用遥
琢鄄淀粉酶是种子萌发初期最重要的水解酶其活力的高
低反映了种胚的代谢水平袁其合成和释放严格受 郧粤
的诱导遥 本试验发现转基因种子萌发过程中 琢鄄淀粉
酶的活性得到显着提高遥 张莹咱员远暂在玉米耐低磷的研
究中发现 在皂孕栽云员 过表达导致玉米根系中赤霉素受
体基因 郧陨阅员 的转录丰度显著高于 宰栽的转录丰度袁而
阅耘蕴蕴粤蛋白基因表达丰度低于 宰栽 的转录丰度遥 郧粤
信号传递途径主要是通过解除 阅耘蕴蕴粤 蛋白的抑制作
用来实现袁推测转录因子 在皂孕栽云员 可能通过与相关基
因启动子中相应的順式作用元件结合袁从而激活 郧粤
合成途径中的 员 个或多个基因的表达导致 郧粤 含量增
加遥 大量的 郧粤 结合到 郧陨阅员 蛋白上袁引起 郧陨阅员 构象
发生变化袁特殊构象的 郧陨阅员 与 阅耘蕴蕴粤 蛋白相互作用
形成 郧粤 辕 郧陨阅员 辕 阅耘蕴蕴粤复合体袁然后结合到 杂悦云 复合
体上袁通过作用于 杂悦云 复合体的 云鄄遭燥曾 蛋白而与泛素
结合袁随后经泛素 辕 圆远杂 蛋白酶体途径降解咱圆缘暂 遥 解除
阅耘蕴蕴粤对种子萌发的抑制袁可促进种子休眠的打破袁
提高种子的发芽势遥
源摇 结论
本研究使用农杆菌介导法将 在皂孕栽云员 基因转化
入烟草袁经过 砸栽鄄孕悦砸 及 泽燥怎贼澡藻则灶 杂交检测得到能够
稳定遗传的转基因烟草株系袁通过转基因烟草种子萌
发试验尧萌发种子 琢 原淀粉酶活性测定试验结果表明袁
在皂孕栽云员 基因在烟草中过表达能够使萌发种子 琢 原淀
粉酶活性显着增高袁提前打破种子休眠袁并能显著提高
远怨远
摇 源 期 玉米转录因子基因 在皂孕栽云员 在转基因烟草中的表达
种子发芽势尧发芽率及幼苗生长能力遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 蕴葬贼糟澡皂葬灶 阅 杂援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽院 葬灶 燥增藻则增蚤藻憎 咱允暂 援 栽澡藻
陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 驭 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠援 员怨怨苑袁圆怨渊员圆冤
员猿园缘 原 员猿员圆
咱 圆 暂 摇 粤贼糟澡造藻赠 宰 砸袁栽藻则澡葬造造藻 宰袁阅则藻泽泽 粤援 孕燥泽蚤贼蚤燥灶葬造 凿藻责藻灶凿藻灶糟藻袁糟造蚤择怎藻泽袁
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