全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨圆圆 耀 园怨圆远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园怨圆圆鄄园缘
悦则赠员粤糟蛋白降解菌株 云允杂月猿的分离鉴定及降解特性
赵辉欣摇 刘 阳摇 邢福国
渊中国农业科学院农产品加工研究所 辕农业部农产品加工综合性重点实验室袁 北京摇 员园园员怨猿冤
摘摇 要院从转 悦则赠员粤糟基因水稻种植田土壤中袁分离纯化得到 员 株能高效降解 悦则赠员粤糟 蛋白的细菌 云允杂月猿遥
通过表型特征尧员远杂 则阅晕粤 扩增和电镜观察袁初步鉴定 云允杂月猿 为寡养单胞菌渊 杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 冤遥
云允杂月猿 发酵液能降解粗 月贼蛋白遥 通过单因素试验确定 云允杂月猿 降解水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白的最适条件
为院发酵温度 猿园益袁初始菌液浓度 圆郾 园 伊 员园远悦云哉 辕 皂造袁责匀 苑郾 园袁碳氮比渊悦 辕 晕冤圆缘 辕 员遥 在此条件下袁水稻秸秆
中 悦则赠员粤糟蛋白降解率达到 怨圆郾 愿远豫 遥
关键词院悦则赠员粤糟蛋白曰寡养单胞菌曰鉴定曰月贼蛋白降解
陨杂韵蕴粤栽陨韵晕 粤晕阅 陨阅耘晕栽陨云陨悦粤栽陨韵晕 韵云 悦则赠员粤糟 孕砸韵栽耘陨晕鄄阅耘郧砸粤阅陨晕郧
月粤悦栽耘砸陨粤 粤晕阅 陨栽杂 阅耘郧砸粤阅粤栽陨韵晕 悦匀粤砸粤悦栽耘砸陨杂栽陨悦杂
在匀粤韵 匀怎蚤鄄曾蚤灶摇 蕴陨哉 再葬灶早摇 载陨晕郧 云怎鄄早怎燥
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 孕则燥凿怎糟贼泽 孕则燥糟藻泽泽蚤灶早 葬灶凿 匝怎葬造蚤贼赠 悦燥灶贼则燥造袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 辕 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣
粤早则燥鄄云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员怨猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 燥枣 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 则蚤糟藻 泽贼则葬憎袁 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 云允杂月猿 糟葬责葬遭造藻 燥枣 澡蚤早澡造赠 凿藻早则葬凿蚤灶早 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶
憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 葬早则蚤糟怎造贼怎则葬造 泽燥蚤造 憎澡藻则藻 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 悦则赠员粤糟 则蚤糟藻 憎葬泽 早则燥憎灶援 栽澡藻 云允杂月猿 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿
责则藻造蚤皂蚤灶葬则蚤造赠 葬泽 杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 遭赠 责澡藻灶燥贼赠责藻 燥遭泽藻则增葬贼蚤燥灶袁 员远杂 则阅晕粤 葬灶葬造赠泽蚤泽 葬灶凿 藻造藻糟贼则燥灶 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻援 杂阅杂鄄
孕粤郧耘 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 云允杂月猿 糟燥怎造凿 凿藻早则葬凿藻 月贼 责则燥贼藻蚤灶援 月葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽袁 贼澡藻 燥责贼蚤皂葬造 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 燥枣
凿藻早则葬凿蚤灶早 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 则蚤糟藻 泽贼则葬憎 憎藻则藻院 猿园益袁 蚤灶蚤贼蚤葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 圆郾 园 伊 员园远悦云哉 辕 皂造袁 责匀 苑郾 园袁 悦 辕 晕
圆缘 辕 员郾 哉灶凿藻则 贼澡藻泽藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽袁 贼澡藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶 则藻葬糟澡藻凿 怨圆郾 愿远豫 援
运藻赠 憎燥则凿泽院悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶曰 杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 曰 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶曰 月贼 责则燥贼藻蚤灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶
收稿日期院圆园员员鄄园员鄄园远摇 接受日期院圆园员员鄄园猿鄄员源
基金项目院转基因生物新品种培育科技重大专项渊圆园园愿在载园愿园员圆 原 园园缘冤
作者简介院赵辉欣渊员怨愿源鄄冤袁女袁河北赵县人袁硕士研究生袁研究方向为转基因生物残留和废弃物的处置新技术遥 栽藻造院员缘园员员猿愿怨苑苑缘曰耘鄄皂葬蚤造院
扎澡葬燥澡怎蚤曾蚤灶园员园苑岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院刘阳渊员怨远缘鄄冤袁男袁辽宁本溪人袁研究员袁研究方向为转基因生物安全评价遥 栽藻造院园员园鄄远圆愿员缘愿苑源曰耘鄄皂葬蚤造院造蚤怎赠葬灶早早岳 澡燥贼皂葬蚤造援 糟燥皂
摇 摇 月贼渊月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽冤是一种革兰氏阳性需氧
型芽孢杆菌遥 在 月贼芽孢形成过程中袁能产生 员 种以上
的杀虫晶体蛋白渊蚤灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿葬造 糟则赠泽贼葬造 责则燥贼藻蚤灶泽袁陨悦孕泽冤袁主
要包括 悦则赠员粤葬尧悦则赠员粤遭尧悦则赠员粤糟 蛋白等咱员暂 袁这些蛋白
基因被转入到作物中而得到转 月贼 基因抗虫作物遥 如
果转 月贼 基因作物大量种植袁收获后植株残体中的 月贼
蛋白会流向土壤袁并可能在土壤中富集袁从而可能影响
土壤特异生物种群尧功能类群以及土壤生物多样
性咱圆袁猿暂 遥
运燥泽噪藻造造葬等咱源暂的研究表明袁月贼 蛋白在土壤环境中
失活或消除的途径主要包括 猿 个方面院一是昆虫消耗曰
二是太阳光的降解作用曰三是微生物的降解和最终的
矿化作用遥 在 猿 种降解方式中袁以土壤微生物的降解
为主遥 有菌土壤中转 悦则赠员粤遭 水稻粉碎叶中的 悦则赠员粤遭
蛋白降解速率明显快于无菌土壤咱缘暂 袁埋于冬小麦田的
转 悦则赠员粤遭玉米碎秸秆中 悦则赠员粤遭蛋白的降解速度明显
快于放在地表的秸秆咱远暂 袁这些研究表明袁土壤微生物
可以促进 月贼蛋白的降解遥 但迄今为止袁尚未见到利用
圆圆怨
摇 缘 期 悦则赠员粤糟蛋白降解菌株 云允杂月猿 的分离鉴定及降解特性
某种特定的微生物来降解 月贼蛋白的相关报道遥
本研究旨在从土壤中筛选到能够高效降解转基因
水稻秸秆中 悦则赠员粤糟蛋白的微生物袁并对该微生物的分
类及降解特性进行研究袁以期提高秸秆中 悦则赠员粤糟蛋白
的降解速度袁减少 悦则赠员粤糟 蛋白在土壤中的残留和累
积袁尽可能地消除残留 悦则赠员粤糟蛋白对土壤生态系统的
潜在影响遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 试验材料和试剂
细菌分离纯化培养基渊晕粤 培养基冤包括蛋白胨
渊北京奥博星生物公司袁下同冤员豫 尧牛肉膏渊北京奥博
星生物公司袁下同冤园郾 猿豫 尧晕葬悦造 园郾 缘豫和琼脂 员郾 缘豫 袁
责匀苑郾 圆 耀 苑郾 源遥 晕月液体培养基包括蛋白胨 员豫 尧牛肉膏
园郾 缘豫及 晕葬悦造 园郾 缘豫 遥
苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种渊月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽
渊泽怎遭泽责援 冤 早葬造造藻则蚤葬冤购自中国农业微生物菌种保藏管理
中心袁保藏号院员园园圆怨遥 转 悦则赠员粤糟 水稻秸秆为当年生袁
由福建省农业科学院水稻所提供袁粉碎至 源园 目备用遥
裂解液为 缘园皂皂燥造 辕 蕴 耘阅栽粤袁缘园皂皂燥造 辕 蕴 晕葬圆悦韵猿 和 猿豫
巯基乙醇袁 责匀怨郾 缘遥 溶解液为 缘园皂皂燥造 辕 蕴 晕葬圆悦韵猿 和员皂皂燥造 辕 蕴 耘阅栽粤袁责匀员园郾 园遥
悦则赠员粤糟标准蛋白及 悦则赠员粤糟 耘蕴陨杂粤 试剂盒购自美
国 耘灶增蚤则燥蕴燥早蚤曾公司袁其中标准蛋白含量为 员皂早袁耘蕴陨杂粤
试剂盒包括 员 块包埋好抗体的 怨远 孔平板及配套试剂
渊内含抽提液尧冲洗液冤遥
员郾 圆摇 月贼蛋白降解菌的筛选和鉴定
员郾 圆郾 员摇 月贼 蛋白的提取 摇 将苏云金芽孢杆菌接种到
晕月液体培养基中袁在 猿苑益下 圆园园则 辕 皂蚤灶 振荡 员皂蚤灶袁培
养 源愿澡遥 将 缘园园皂造 的苏云金芽孢杆菌菌液于转速
缘园园园则 辕 皂蚤灶下离心 缘皂蚤灶袁取沉淀袁并向其中加入 圆缘园皂造
的裂解液袁在 源益冰箱中溶解菌体 源澡袁然后离心同上袁
用醋酸将上清液 责匀调到 月贼蛋白的等电点 责匀 源郾 缘袁置
于 源益冰箱中沉降晶体蛋白过夜遥 沉降后于 源益下
员员园园园则 辕 皂蚤灶离心 员园皂蚤灶袁收集沉淀袁用无菌水洗涤沉淀
圆 次袁即得 月贼 蛋白粗提物遥 将粗提的 月贼 蛋白溶解于
员园园皂造 溶解液 源澡袁然后用 杂阅杂鄄孕粤郧耘 分析 月贼 蛋白溶
液咱苑 耀 怨暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 月贼 蛋白降解菌的分离纯化摇 从福建省农业科
学院生物技术所转 悦则赠员粤糟 基因水稻渊明恢 愿远冤种植
田尧中国农业科学院植物保护研究所转 月贼 基因棉花种
植田以及黑龙江省海伦市红光农场玉米种植田采集土
壤样品遥 将不同稀释度的土壤溶液在 晕粤 平板培养基
上涂布均匀咱员园暂 袁猿苑益培养 圆源澡袁之后挑取平板上不同
大小尧颜色各异的单菌落划线纯化培养遥 挑取纯化后
的单菌落转接到 晕粤液体培养基中袁猿苑益尧圆园园则 辕 皂蚤灶 摇
床培养 圆源澡遥
员郾 圆郾 猿摇 月贼蛋白降解菌的筛选摇 将 园郾 员皂造 上述所筛选
到的菌上清液加入到 园郾 怨皂造的粗 月贼 蛋白溶液中袁猿苑益
水浴锅中温浴 源澡遥 取 缘园滋造的上述溶液袁加入 缘园滋造 圆 伊
杂阅杂凝胶上样缓冲液袁摇匀袁放入 员园园益水浴锅中加热
缘皂蚤灶袁取 员缘滋造进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘分析所筛选出的菌株遥
员郾 圆郾 源摇 菌株的鉴定摇 参照叶伯杰氏细菌鉴定手册曳 咱员员暂
进行菌株的形态观察遥 菌株 员远杂 则阅晕粤 的克隆及序列
测定和比对参照文献叶阅宰援 分子克隆曳 咱员圆暂进行袁即提
取细菌的总 阅晕粤作为模板袁利用细菌 员远杂 则阅晕粤 扩增
通用引物进行 孕悦砸 扩增遥 正向引物院 圆苑云院 缘忆鄄
粤郧粤郧栽栽栽郧粤栽悦悦栽郧郧悦栽悦粤郧 原猿忆渊耘援 糟燥造蚤对应位置为 愿
耀 圆苑 冤曰 反 向 引 物院 员缘源员砸院 缘忆鄄
粤粤郧郧粤郧郧栽郧粤栽悦悦粤郧悦悦郧悦粤鄄猿忆渊 耘援 糟燥造蚤 对应位置为
员缘源员 耀 员缘圆圆冤遥 孕悦砸 反应体系 渊缘园滋造冤为院模板 员滋造袁
凿晕栽孕泽 渊圆缘皂皂燥造 辕 蕴冤 源滋造袁引物渊员皂皂燥造 辕 蕴冤各 员滋造袁员园 伊
栽葬择缓冲液 缘滋造袁酝早圆 垣 渊圆缘皂皂燥造 辕 蕴冤 源滋造袁栽葬责 酶 渊缘哉 辕
滋造冤 园郾 缘滋造袁超纯水 猿猿郾 缘滋造遥 反应条件院怨缘益 猿皂蚤灶曰
怨源益 源缘泽袁缘缘益 源缘泽袁苑圆益 怨园泽袁循环 猿缘 次曰苑圆益延伸
员园皂蚤灶遥 孕悦砸产物采用胶回收试剂盒渊上海华舜公司冤
纯化后袁酶连至 责酝栽鄄员愿 载体渊栽粤运粤砸粤 公司冤袁转 耘援
糟燥造蚤 阅匀缘琢感受态细胞袁挑取阳性克隆袁验证插入片段
后测序渊由北京三博远志生物技术有限公司完成冤遥
将测序结果与 郧藻灶月葬灶噪中的 员远杂 则阅晕粤 序列进行同源
性比较遥
员郾 猿摇 菌株 云允杂月猿 适宜降解水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白
条件的优选
员郾 猿郾 员摇 水稻秸秆中 悦则赠员粤糟蛋白含量的测定摇 参考文
献咱员猿 原 员缘暂进行院将水稻秸秆剪成小段袁放入研钵中袁加入
液氮迅速研磨成粉末状袁过 员园园 目筛袁称取已磨好的秸
秆粉 圆园皂早袁放入 员郾 缘皂造 的离心管中袁然后每管加抽提
液 员园园滋造袁并将离心管置于振荡器上剧烈震荡几秒钟袁
混匀后室温静置抽提 员澡袁然后于 员圆园园园 则 辕 皂蚤灶 离心
缘皂蚤灶袁取上清液 员园滋造 用抽提液稀释 源园 倍袁取 缘园滋造 加
入到已包埋好抗体的 怨远 孔板中遥 用酶标仪渊月陨韵鄄砸粤阅
远愿园冤读取在波长 源缘园灶皂下的 韵阅值遥 依据标准曲线和
提取液稀释倍数计算出水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白的含
量遥
员郾 猿郾 圆摇 不同作用条件对 云允杂月猿 降解 悦则赠员粤糟蛋白的影
响摇 利用 晕粤 液体培养基在 猿苑益下 圆园园则 辕 皂蚤灶 振荡培
养 云允杂月猿 菌株袁将尿素渊调节 悦 辕 晕冤溶液和 云允杂月猿 菌液
猿圆怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
混合后计算体系初始 云允杂月猿 菌液浓度并调节 责匀袁加入
到装有 员园早稻草粉的 缘园园皂造 三角瓶中袁每处理设 猿 个
重复袁置于恒温恒湿培养箱中进行发酵袁在第 源 天取
样袁测定稻草粉中的 悦则赠员粤糟蛋白含量袁计算 悦则赠员粤糟 蛋
白降解率遥 分别研究不同发酵温度渊圆园益尧圆缘益尧猿园益
和 猿缘益冤尧不同体系初始菌液浓度渊圆郾 园 伊 员园源尧圆郾 园 伊
员园缘尧圆郾 园 伊 员园远尧圆郾 园 伊 员园苑 和 圆郾 园 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂造冤尧不同
责匀渊缘尧苑尧愿尧怨 和 员园冤尧不同碳氮比 悦 辕 晕渊圆园尧圆缘尧源园尧缘员
和 远苑冤对水稻秸秆中 悦则赠员粤糟蛋白降解的影响遥
员郾 源摇 水稻秸秆中 悦则赠员粤糟蛋白降解率的计算
蛋白降解率渊豫 冤 越 渊宰园 原 宰员冤 辕 宰园 伊 员园园豫
其中 宰园 为水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白初始含量渊滋早 辕 早冤曰宰员 为经过处理后水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白含
量渊滋早 辕 早冤遥
员郾 缘摇 统计分析
所有处理均设 猿 个重复袁用 杂粤杂怨郾 园 软件对数据
进行统计和方差分析遥
图 员摇 不同菌株对 月贼蛋白降解的 杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳图
云蚤早援 员摇 杂阅杂鄄孕粤郧耘 枣蚤早怎则藻 燥枣 月贼 责则燥贼藻蚤灶
葬枣贼藻则 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽贼则葬蚤灶泽
酝院酝葬则噪藻则曰员院阴性对照渊不加菌液冤曰
圆院在月杂圆曰猿院在月杂苑曰源院云允杂月猿曰缘院云允杂再圆
圆摇 结果与讨论
圆郾 员摇 月贼蛋白降解菌 云允杂月猿 的分离和鉴定
圆郾 员郾 员摇 菌株 云允杂月猿 的筛选摇 利用平板涂布法共分离
获得 源 株单菌纯培养袁分别命名为 在月杂圆尧在月杂苑尧云允杂月猿
和 云允杂再圆袁并对其降解性能进行了筛选遥 由图 员 可知袁
源 个菌株的培养液分别与 月贼 蛋白溶液作用后袁在菌株
云允杂月猿 所对应的条带中袁相对分子量为 员猿园噪阅 的 月贼 蛋
白条带明显消失袁而菌株 在月杂圆尧云允杂再圆 所对应处的条
带变弱袁但变化不明显遥 在月杂苑 所对应的 月贼 蛋白的
员猿园噪阅的条带也消失袁但是在 员猿园 耀 缘缘运阅 之间多出了
几条降解产生的新条带遥 相比之下袁菌株 云允杂月猿 对 月贼
蛋白降解效果最为明显袁几乎能够完全将 月贼 蛋白降
解遥
圆郾 员郾 圆摇 菌株 云允杂月猿 的表型特征摇 通过对菌株 云允杂月猿
进行菌落观察尧扫描电镜和透射电镜观察可知袁菌株
云允杂月猿 在培养基上生长为淡黄色的圆形菌落袁菌落边
缘整齐袁表面光滑湿润袁革兰氏染色阴性遥 该菌株为短
杆状咱渊园郾 源 耀 园郾 缘滋皂冤 伊 渊员郾 园 耀 员郾 远滋皂冤暂袁不产芽孢袁
能运动袁端生鞭毛袁扫描电镜和透射电镜照片见图 圆 和
图 猿遥
图 圆摇 菌株 云允杂月猿 的扫描电镜照片
云蚤早援 圆摇 杂糟葬灶灶蚤灶早 藻造藻糟贼则燥灶 皂蚤糟则燥早则葬责澡
燥枣 泽贼则葬蚤灶 云允杂月猿
图 猿摇 菌株 云允杂月猿 的透射电镜照片
云蚤早援 猿摇 栽则葬灶泽皂蚤泽泽蚤燥灶 藻造藻糟贼则燥灶
皂蚤糟则燥早则葬责澡 燥枣 泽贼则葬蚤灶 云允杂月猿
圆郾 员郾 猿摇 菌株 云允杂月猿 的鉴定摇 以 云允杂月猿 菌株的总 阅晕粤
为模板利用细菌 员远杂 则阅晕粤通用扩增引物进行 孕悦砸扩
增袁得到长度约为 员郾 缘 噪遭 的扩增产物遥 根据 郧藻灶月葬灶噪
序列同源性比较袁菌株 云允杂月猿 与 杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽
皂葬造贼燥责澡蚤造蚤葬 渊郧藻灶月葬灶噪 登录号 粤允圆怨猿源苑园郾 员冤同源性为
源圆怨
摇 缘 期 悦则赠员粤糟蛋白降解菌株 云允杂月猿 的分离鉴定及降解特性
怨怨豫 袁 与 杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 渊 郧藻灶月葬灶噪 登 录 号
粤月圆园园圆缘猿郾 员冤同源性为 怨怨豫 袁初步判定该菌为寡养单
胞菌渊杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 冤遥
圆郾 圆摇 不同作用条件对菌株 云允杂月猿 降解 悦则赠员粤糟 蛋白
的影响
圆郾 圆郾 员摇 发酵温度的影响摇 由图 源 可知袁在初始菌液浓
度 圆郾 园 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂造尧悦 辕 晕 为 缘员 辕 员 和 责匀 苑郾 园 条件下袁
发酵 源凿 时袁转基因水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白的降解率
随着发酵温度升高而逐渐升高袁猿园益和 猿缘益下 悦则赠员粤糟
蛋白的降解率都达到 怨园豫 以上袁显著高于 圆园益 和
圆缘益遥 但是袁由于 猿园益 和 猿缘益 圆 种温度条件下
悦则赠员粤糟蛋白的降解率差异不显著袁考虑到节约能源袁
故选择 猿园益作为最适发酵温度遥
图 源摇 发酵温度对 云允杂月猿 降解
悦则赠员粤糟蛋白能力的影响
云蚤早援 源摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥灶
凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 云允杂月猿 枣燥则 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶
图中数据后标不同小写字母表示差异显著
渊琢 越 园郾 园缘冤袁下图同遥
阅葬贼葬 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽皂葬造造 造藻贼贼藻则泽 皂藻葬灶泽
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 园郾 园缘 造藻增藻造袁
贼澡藻 泽葬皂藻 葬泽 贼澡藻 枣燥造造燥憎蚤灶早 枣蚤早怎则藻泽援
圆郾 圆郾 圆摇 体系初始菌液浓度的影响摇 由图 缘 可知袁在发
酵温度 猿园益尧悦 辕 晕 为 缘员 辕 员 和 责匀 苑郾 园 条件下袁发酵 源凿
时袁随着体系初始菌液浓度的增大袁水稻秸秆中
悦则赠员粤糟蛋白降解率呈先升高后降低的趋势遥 在 云允杂月猿
菌液浓度为 圆郾 园 伊 员园远 悦云哉 辕 皂造 时降解率达到最大值
怨园郾 苑园豫 袁显著高于 圆郾 园 伊 员园源 和 圆郾 园 伊 员园缘 悦云哉 辕 皂造 浓
度下的降解率袁但与 圆郾 园 伊 员园苑 和 圆郾 园 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂造 浓
度下差异不显著袁可能是随着初始菌液浓度的增大袁经
过 源凿的繁殖后袁员园早水稻秸秆粉所提供的营养已不能
满足微生物的生长袁所以 云允杂月猿 初始菌液浓度选择
圆郾 园 伊 员园远 悦云哉 辕 皂造遥
圆郾 圆郾 猿摇 责匀 的影响 摇 由图 远 可知袁在发酵温度 猿园益尧
初始菌液浓度 圆郾 园 伊 员园远悦云哉 辕 皂造尧悦 辕 晕为 缘员 辕 员 条件下袁
图 缘摇 云允杂月猿 菌液浓度对降解
悦则赠员粤糟蛋白能力的影响
云蚤早援 缘摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 云允杂月猿 燥灶
凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 葬遭蚤造蚤贼赠 枣燥则 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶
转 悦则赠员粤糟 水稻秸秆发酵 源凿 时袁随着 责匀 的升高袁
悦则赠员粤糟蛋白降解率呈先升高后降低的趋势遥 在 责匀
苑郾 园 时 悦则赠员粤糟蛋白降解率最高袁达到 愿愿郾 圆苑豫 袁可能是
因为中性环境更利于微生物的生长袁微生物的活性更
高袁从而促进了 悦则赠员粤糟 蛋白的降解遥 栽葬责责 等研究发
现袁责匀 缘郾 愿 耀 苑郾 猿 时 月贼 蛋白的降解速度比 责匀 源郾 怨 耀
缘郾 员 时快袁表明微生物在 责匀 中性土壤中活性更高袁从
而更易于降解 月贼蛋白咱员远暂 遥 白耀宇等研究也认为较低
责匀的酸性土壤不利于土壤中 悦则赠员粤糟 蛋白的降解咱员苑暂 遥
本研究结果与上述两项研究的结论一致袁趋于中性的
责匀有利于微生物降解 月贼蛋白遥
图 远摇 责匀对 云允杂月猿 降解 悦则赠员粤糟
蛋白能力的影响
云蚤早援 远摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 责匀 燥灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 葬遭蚤造蚤贼赠
燥枣 云允杂月猿 枣燥则 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶
圆郾 圆郾 源摇 悦 辕 晕影响摇 由图 苑 可知袁在 猿园益尧初始菌液浓
度 圆郾 园 伊 员园远悦云哉 辕 皂造和 责匀 苑郾 园 的条件下发酵 源凿时袁随
着 悦 辕 晕值的升高袁悦则赠员粤糟蛋白的降解率呈先升高后降
低的趋势遥 当 悦 辕 晕 为 圆缘 辕 员 时袁转基因水稻秸秆中
悦则赠员粤糟蛋白的降解率为 怨圆郾 愿远豫 袁达到最大袁并且显著
高于其他 悦 辕 晕袁这可能是因为发酵原料碳氮比为 圆缘颐 员
缘圆怨
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨圆圆 耀 园怨圆远
左右时袁微生物活性高咱员愿暂 遥
图 苑摇 悦 辕 晕对 云允杂月猿 降解能力的影响
云蚤早援 苑摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 悦 辕 晕 燥灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 葬遭蚤造蚤贼赠
燥枣 云允杂月猿 枣燥则 悦则赠员粤糟 责则燥贼藻蚤灶
猿摇 结论
从转 悦则赠员粤糟基因水稻种植田中分离纯化得到的
能降解 悦则赠员粤糟 蛋白的细菌菌株 云允杂月猿袁经 员远杂 则阅晕粤
序列克隆测定袁并与 郧藻灶月葬灶噪 序列进行同源性比较袁
初步判定为寡养单胞菌属细菌渊杂贼藻灶燥贼则燥责澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 冤
同源性为 怨怨豫 遥 云允杂月猿 降解水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白
的最适发酵条件为院猿园益尧初始菌液浓度 圆郾 园 伊 员园远
悦云哉 辕 皂造尧责匀 苑郾 园尧悦 辕 晕 值 圆缘 辕 员遥 在此条件下袁发酵 源凿
时袁水稻秸秆中 悦则赠员粤糟 蛋白的降解率可以达到
怨圆郾 愿远豫 遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 杂糟澡灶藻责枣澡 耘袁 悦则蚤糟噪皂燥则藻 晕袁 灾葬灶则蚤藻 允袁 藻贼 葬造援 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽
葬灶凿 蚤贼泽 责藻泽贼蚤糟蚤凿葬造 糟则赠泽贼葬造 责则燥贼藻蚤灶泽咱 允暂 援 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则
月蚤燥造燥早赠 砸藻增蚤藻憎泽袁 员怨怨愿袁 远圆渊猿园冤院 苑苑缘 原 愿园远
咱 圆 暂 摇 允葬糟噪 月援 粤泽泽藻泽泽蚤灶早 贼澡藻 藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 蚤皂责葬糟贼泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
咱允暂 援 栽则藻灶凿泽 蚤灶 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园员袁 员怨渊怨冤院 猿苑员 原 猿苑圆
咱 猿 暂 摇 酝燥则则葬 酝 允援 粤泽泽藻泽泽蚤灶早 贼澡藻 蚤皂责葬糟贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼 责则燥凿怎糟贼泽 燥灶 泽燥蚤造
燥则早葬灶蚤泽皂泽咱允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 耘糟燥造燥早赠袁 员怨怨源袁 猿院 缘猿 原 缘缘
咱 源 暂摇 运燥泽噪藻造造葬 允袁 杂贼燥贼扎噪赠 郧援 酝蚤糟则燥遭蚤葬造 怎贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 枣则藻藻 葬灶凿 糟造葬赠 原 遭燥怎灶凿
蚤灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿葬造 贼燥曾蚤灶泽 枣则燥皂 月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 则藻贼藻灶贼蚤燥灶 燥枣
蚤灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠 葬枣贼藻则 蚤灶糟怎遭葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 皂蚤糟则燥遭藻泽咱允暂 援 粤责责 耘灶增蚤则燥灶
酝蚤糟则燥遭蚤燥造袁 员怨怨苑袁 远猿渊怨冤院 猿缘远员 原 猿缘远愿
咱 缘 暂摇 白耀宇袁 蒋明星袁 程家安援 月贼水稻 悦则赠员粤遭杀虫蛋白表达的时间
动态及其在水稻土中的降解咱允暂 援 生态学报袁 圆园园缘袁 圆缘院 员缘愿源 原
员缘怨员
咱 远 暂摇 邢珍娟援 月贼玉米植株中杀虫蛋白在不同条件降解动态及在土壤
中的积累研究咱阅暂援 中国农业科学院硕士学位论文袁 圆园园苑袁 远
咱 苑 暂摇 左雅慧袁 丁之铨袁 张 杰援 苏云金芽孢杆菌培养条件及晶体蛋白
提纯方法初探咱允暂 援 植物保护袁 员怨怨怨袁 圆缘渊源冤院 猿圆 原 猿源
咱 愿 暂 摇 潘家荣袁 乔艳红袁 张 维袁 林 敏袁 张 杰援 月贼晶体蛋白 悦则赠员粤糟放射
免疫检测技术研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园园远袁 圆园渊远冤院 缘源源 原 缘源苑
咱 怨 暂摇 蒋 辰袁 李红梅袁 弓爱君袁 邱丽娜援 苏云金芽孢杆菌伴孢晶体纯
化方法研究咱允暂 援 化学与生物工程袁 圆园园愿袁 圆缘渊远冤院 员园 原 圆园
咱员园暂摇 唐 然袁 袁梦龙袁吴 菁袁陈 明袁 张 维袁 林 敏援 一株耐辐射考克氏
菌的分离与鉴定咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊圆冤院 圆苑远 原 圆愿园
咱员员暂 摇 布坎南 砸援 耘袁 吉本斯 晕援 耘等援 伯杰氏细菌鉴定手册咱酝暂援 北京院
科学出版社袁 员怨愿源院 圆怨愿 原 圆怨怨
咱员圆暂摇 萨姆布鲁克 允袁 拉塞尔 阅 宰援 分子克隆第 猿 版咱酝暂援 北京院 科学
出版社袁 圆园园猿院 远员员 原 远员愿
咱员猿暂 摇 杂葬曾藻灶葬 阅袁 云造燥则藻泽 杂袁 杂贼燥贼扎噪赠 郧援 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽院 陨灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿葬造 贼燥曾蚤灶
蚤灶 则燥燥贼 藻曾怎凿葬贼藻泽 枣则燥皂 月贼 悦燥则灶 咱允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 员怨怨怨袁 源园圆院 源愿园 原 源愿员
咱员源暂摇 周晓梅袁 沈晋良袁 高聪芬援 两种转 月贼基因棉杀虫蛋白 悦则赠员粤糟表
达量的检测咱允暂 援 南京农业大学学报袁 圆园园缘袁 圆愿 渊员冤院 员圆员 原 员圆源
咱员缘暂摇 谢小波袁 舒庆尧援 用 耘灶增蚤则燥造燥早蚤曾 悦则赠员粤遭 辕 悦则赠员粤糟试剂盒快速测定
转基因水稻 月贼杀虫蛋白含量的研究咱允暂 援 中国农业科学袁 圆园园员袁
猿源渊缘冤院 源远缘 原 源远愿
咱员远 暂 摇 栽葬责责 匀袁 杂贼燥贼扎噪赠 郧援 孕藻则泽蚤泽贼藻灶糟藻 燥枣 贼澡藻 蚤灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿葬造 贼燥曾蚤灶 枣则燥皂
月葬糟蚤造造怎泽 贼澡怎则蚤灶早蚤藻灶泽蚤泽 泽怎遭泽责援 噪怎则泽贼葬噪蚤 蚤灶 泽燥蚤造咱 允暂 援 杂燥蚤造 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿
月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨怨愿袁 猿园院 源苑员 原 源苑远
咱员苑暂摇 白耀宇袁蒋明星袁 程家安援 影响 月贼稻离体叶中 悦则赠员粤遭杀虫蛋白
降解的环境因子研究咱允暂 援 中国农业科学袁 圆园园远袁 猿怨渊源冤院 苑圆员 原
苑圆苑
咱员愿暂摇 李轶冰袁 白杰瑞袁 杨改河袁 李 勇袁 郭欧燕袁 任广鑫援 沼气产量影
响因子研究咱允暂 援 西北农林科技大学学报袁 圆园园怨袁 猿苑渊缘冤院 员苑员 原
员苑苑
渊责任编辑摇 王媛媛冤
远圆怨