全 文 ：核 农 学 报 , 令
动 心 “ 亡 心 月
苹果叶片愈伤组织植株再生研究
达克东 李雅志 束怀瑞
山东农业大学 泰安
本研 究 以 苹果品 种 千 秋 试 管苗叶 片为试 材 , 接种 于 附 加 不 同浓度 和
激素组 合 的培养墓上 , 经愈伤组 织 诱导 、 不 定 芽诱导 , 一 步诱 导千秋 叶 片再 生
不 定 芽 。 得到苹果品 种 千秋叶 片一愈伤组织一不定 芽再生 的适 宜培养条件 为基本培养基附加 , 黑暗诱导 个星期后 在同种培养基
中转入光照培养 , 每天光照 , 培养室温度为 士 ℃ 组织 学观察表 明 , 不
定 芽起源 为愈伤组织 薄壁细胞 。 本文 还研 究 了激素配比 、 暗处理时问长短 、 叶 片在植
株上着生的 节位 、 叶 片在培养基 中的接种方式对千秋叶片不定 芽再生 的影响 , 及 同一
培养墓 中不 同苹果品种 千秋 、 嘎拉 、 富士 试管苗叶片再生不定 芽的能 力 , 并探讨 了
该技术在苹果育种 中的应 用前景 。
关钮词 苹果 叶 片 愈伤组织 不 定 芽 植株再生
目 舀
苹果为多年生木本植物 , 在遗传上都是杂合体 , 由于对控制性状的基因了解较少 , 使得通
过杂交育种培育苹果新品种有一定困难 苹果在自然界产生自发突变的频率较低 , 但利用物理
和化学因素诱发可遗传的变异 , 则可提高突变频率 。倍川 。 人工诱变和组织培养相结
合是进行苹果育种的有效途径之一 。 苹果组织培养 中的不定芽技术是实现上述 目标的关键步
骤之一 。 苹果叶片培养虽有报道 ’〕, 但培养条件复杂 , 再生频率普遍较低 。 本试验以生产上有
希望的栽培品种千秋为试材 , 采用一步培养法 , 获得高频率叶片不定芽再生 , 为这一技术应用
于苹果诱变育种奠定了基础
材 料 与 方 法
以苹果品种千秋转接两年试管苗叶片为材料 , 接种于 附加 、
、 、 和
、 、 组合培养基上 , 培养条件为先黑暗诱导数天 , 然后转入 光照
条件下 , 每夭 , 培养室温度 士 ℃ 。 统计除黑暗处理对分化的影响外 , 其余均为黑暗诱导
的结果
激素配 比对千秋叶片不定芽分化的影响 , 所取材料为千秋试管苗顶部前 片展开叶
黑暗诱导对分化的影响 、 叶片接种方式对分化的影响 , 所用材料为千秋试管苗顶部前 片
展开叶 , 所用培养基为激素配 比试验得到的最适配方 。
叶片在植株上着生节位对分化影响 , 所用材料为千秋试管苗顶部第 展开叶往下数第 、
此文于 年 月 日收到 。
核 农 学 报
、 节位叶片 , 所用培养基为 。
不同品种对分化的影响 , 材料为苹果品种 千秋 、嘎拉 、富士 试管苗顶部前 片展开叶 , 所
用培养基为
。
组织学观察 , 自黑暗诱导 起 , 每隔 取材 次 , 共取 次 , 氏固定液固定 , 石蜡
制片法切片 , 切片厚度 。拼 , 番红 一 固绿法染色 , 中性树胶封片后显微镜观察 。
结 果 与 分 析
一 不同因紊对叶片分化不定芽的影响
不同激素配 比对千秋叶片不定芽分化的影响 和 激素组合
最适于千秋叶片再生不定芽 。 浓度从 上升到 , 分化百分数呈现低一高
一低的变化趋势
, 最适浓度为 浓度从 。 上升到 。 , 分化百分数
亦呈现低一 高一低的变化
, 最适浓度为 从浓度比值看 , 浓度比值在
左右有利于千秋叶片不定芽分化 。 高浓度 和 抑制千秋叶片不定芽分化 。
表 和 对分化的影响
植物激素
’ 接种叶数 黑暗诱导 分化叶数 分化百分数
。
黑暗处理时间长短对千秋叶片不定芽分化的影响 由表 可以看出 , 接种叶片首先进行
脱分化形成愈伤组织 图版 卜 , 而后才进行分化 图版 卜 。 由脱分化向分化转化 , 黑暗环
境条件是关键 , 其它条件相同 , 而置光照条件下培养 , 尽管也进行脱分化 , 却始终不能进人分
化 。 表 结果还显示 , 随黑暗诱导时间增加 , 分化百分数增加 , 但至一定暗处理时间 , 趋于稳定
本试验为 , 再延长黑暗诱导时间 , 分化百分数不再提高 黑暗处理 一 后 , 将分化的材
料转入光照条件下进行壮苗培养 。
苹果叶片愈伤组织植株再生研究
表 黑暗处理对分化的影响
黑暗处理天数 接种叶数 脱分化叶数 分化叶数 分化百分数
“。
为光照培养 叼 的处理
汤 ,
千秋叶片在植株上着生节位对不定芽分化的影响 表 结果显示 , 叶片着生节位对不定
芽分化有影响 , 第 展开叶由于生长旺盛 , 细胞分裂能力强 , 而具有很高的分化百分数 。 叶片着
生节位越往下 由于叶片成熟度增加 , 细胞分裂能力减弱 , 因而分化百分数较低
表 叶片节位对分化的影响
叶片节 位 接种叶数 黑暗诱导 分化叶数
戈
分化百分效
,曰月丹人内﹄
叶片在培养基上的接种方式对千秋叶片不定芽分化的影响 由表 的结果可以看出 , 叶
片在培养基上的接种方式对不定芽分化有影响 , 切面接触培养基表面而不没入培养基的处理 ,
得到最高的分化百分数 切面没入培养基的处理 , 分化百分数低于切面接触而不没入培养基的
处理 切面不接触培养基的处理 , 不能诱导不定芽分化 。
表 叶方式对分化的影响
置叶方式
卯
接种叶数 黑暗诱导 分化叶数 分化百分数
切面没入培养基
切面接触而不没入培养基
切面不接触培养基
不同品种叶片对 十 十 激素组合诱导的反应 不 同品种叶
片对 十 激素组合诱导不定芽的反应不同 , 千秋叶片具有最高
的分化百分数 , 嘎拉叶片反应中等 , 富士叶片显示最低的分化百分数 。 表 结果说明 , 适于一种
苹果叶片愈伤组织植株再生研究
表 黑暗处理对分化的影响
黑暗处理天数 接种叶数 脱分化叶数 分化叶数 分化百分数
“。
为光照培养 叼 的处理
汤 ,
千秋叶片在植株上着生节位对不定芽分化的影响 表 结果显示 , 叶片着生节位对不定
芽分化有影响 , 第 展开叶由于生长旺盛 , 细胞分裂能力强 , 而具有很高的分化百分数 。 叶片着
生节位越往下 由于叶片成熟度增加 , 细胞分裂能力减弱 , 因而分化百分数较低
表 叶片节位对分化的影响
叶片节 位 接种叶数 黑暗诱导 分化叶数
戈
分化百分效
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叶片在培养基上的接种方式对千秋叶片不定芽分化的影响 由表 的结果可以看出 , 叶
片在培养基上的接种方式对不定芽分化有影响 , 切面接触培养基表面而不没入培养基的处理 ,
得到最高的分化百分数 切面没入培养基的处理 , 分化百分数低于切面接触而不没入培养基的
处理 切面不接触培养基的处理 , 不能诱导不定芽分化 。
表 叶方式对分化的影响
置叶方式
卯
接种叶数 黑暗诱导 分化叶数 分化百分数
切面没入培养基
切面接触而不没入培养基
切面不接触培养基
不同品种叶片对 十 十 激素组合诱导的反应 不 同品种叶
片对 十 激素组合诱导不定芽的反应不同 , 千秋叶片具有最高
的分化百分数 , 嘎拉叶片反应中等 , 富士叶片显示最低的分化百分数 。 表 结果说明 , 适于一种
‘ 岁 心 “ 日 刀“ 廿 口 占
, 一
显微镜观察表明 愈伤组织 自 开始分化不定芽 。 不定芽以不定点
、 多细胞起源方式 由
愈伤组织薄壁细胞发生 图版 卜 , 再生的芽以丛状形式生长 图版 卜
。
将光照培养下壮苗至 高的嫩梢转接到 一 培养基中诱导 生根 ,
后 。 值株生根 图版 一 。
结 语
从 以上结果看出 , 将苹果试管苗顶部展开叶接种在 十 培
养基上 , 黑暗诱导愈伤组织 , 黑暗诱导不定芽 光照壮苗
·
十 培养基诱导生
根 , 移栽成苗 , 可高频率地获得苹果叶片再生植株 。 其中愈伤组织诱导约需 , 不定芽发生需
, 壮苗约需 , 根的发生约需 , 共计需 左右 。 若在培养早期进行人工诱变处理 , 有
可能在短时间内得到变异植株 。
参 考 文 献
王业进 果树 合肥 安徽科学技术出版社 , , 一
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