全 文 ：文章编号 :100028551 (2009) 022228207
N + 注入选育漆酶高产菌株及其产酶优化研究
王力生1 朱洪龙2 李春凤1 程茂基1 蔡海莹1
(1. 安徽农业大学动物科技学院 ,安徽 合肥 230036 ; 2. 南京农业大学动物科技学院 ,江苏 南京 210095)
摘 要 :以糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus WY01 为出发菌株 ,通过 N + 注入诱变处理担孢子、RBBR2PDA 平板
变色法初筛、ATBS 法测定漆酶活性复筛 ,获得 1 株漆酶高产诱变菌株 ADW208。用高碳低氮无机盐制备
的油菜秸固体培养基 (SM) 培养 ,其峰值酶活力比出发菌株高出 2180 倍 ,达 7178 UΠg ,且产酶稳定。对
ADW208 固体培养产酶条件的研究表明 ,以葡萄糖为碳源明显优于蔗糖、麦芽糖、麸皮和可溶性淀粉 ;酒
石酸铵较有利于 ADW208 漆酶的分泌 ;适宜初始 pH 为 510 或 610 ;ABTS 和藜芦醇对产酶均有明显的诱
导作用 ,而吐温 - 80 对产酶有一定的抑制作用 ;正交试验结果表明 ,葡萄糖、酒石酸铵和 pH 最佳参数分
别为 1510gΠL、012gΠL 和 512 ,酶活峰值为 8133 UΠg。
关键词 : 糙皮侧耳 ;N + 注入诱变 ;条件优化 ;漆酶
SCREENING OF FUNGAL MUTANT STRAIN WITH HIGH LACCASE YIELD BY N+2IMPLANTATION
AND ENZYME PRODUCTION CONDITION OPTIMIZATION
WANGLi2sheng1 ZHU Hong2long2 LI Chun2feng1 CHENG Mao2ji1 CAI Hai2ying1
(11 College of Animal Science and Technology , Anhui Agricultural University , Hefei , Anhui 230036 ;
21 College of Animal Science and Technology , Nanjing Agricultural University , Nanjing , Jiangsu 210095)
Abstract :The basidiospores of Pleurotus ostreatus WY01 were exposed to N+ beam and the treated basidiospores were screened
in RBBR2containing PDA plates. Then the laccase activities of the selected strains were determined by ABTS , and a mutant
named ADW208 with high yield of laccase was obtained. The maximum activity of laccase of ADW208 increased up to 7178 UΠg ,
218 times of the original stain , and its laccase production ability was stable in high carbon and low nitrogen rape straw solid
medium (SM) . Results showed that glucose as carbon source was obviously superior to sucrose , maltose , wheat bran and soluble
amylum in soild culture for ADW208. Ammonium tartrate as nitrogen source was more suitable than other nitrogen sources for the
laccase secretion. The optimal initial pH was 510 or 6101 The ability of laccase production clearly increased by ABTS and
veratryl alcohol induction , but was inhibited by Tween 801 When the optimum parameters for laccase production got from
orthogonal design were as follows :glucose 15gΠL , ammonium tartrate 012gΠL ,pH 512 , the peak value of Lac activity was 8133UΠ
g.
Key words : Pleurotus ostreatus ; N + implantation mutation ; condition optimization ; laccase
收稿日期 :2008207216 接受日期 :2008209226
基金项目 :国家自然科学基金项目 (30671526) ;安徽省科技攻关项目 (06013040A)
作者简介 :王力生 (19572) ,男 ,安徽巢湖人 ,硕士 ,副教授 ,研究方向为菌种选育与生物饲料。E2mail :wanglisheng @ahau. edu. cn
通讯作者 :程茂基 (19682) ,男 ,安徽六安人 ,博士 ,教授 ,研究方向为菌种选育与生物饲料。E2mail :cmj681212 @sohu. com 漆酶 (Laccase 简称 Lac EC 11101312) 是一组对双酚蓝铜氧化酶 ,广泛存在于真菌、昆虫、细菌和植物中 ,其中最主要的产漆酶者是担子菌中的白腐菌 ,长期以来被人们用作研究漆酶的模式物。由于漆酶具有较高 的氧化还原电位 (780 mV) ,在没有 H2O2和其他次级代谢产物存在下 ,可直接氧化底物[1 ] ,因此漆酶在造纸工业、环境污染处理、食品工业、生物传感器等方面得到广泛的研究与应用[2 ] 。糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus 是
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一种富产漆酶的白腐菌 ,由于漆酶是其次代谢产物 ,加
上受菌株遗传背景、培养基质和生长条件等因素限制 ,
导致目前大多研究报道的漆酶活性偏低[3～7 ] ,谢君等
发现在麦草固体培养基中 Lac 酶活低于 1100 UΠg ,
Ivana Eichlerova 等用麦秸培养 Pleurotus ostreatus Lac 最
高活性出现在第 10 天 ,为 51687UΠg。多年来 ,研究者
们对漆酶及其产生菌的研究内容多涉及菌株生长特
性、酶学性质、酶的分离纯化鉴定和酶的合成调控与表
达等方面[8～12 ] ,而尝试寻找新的选育漆酶高产菌株方
法 ,优化其产酶条件仍是一个值得研究的领域。
离子注入育种是我国学者首创的高新技术 ,经过
近几年的发展已经取得了一系列成就 ,并引起美国、日
本和澳大利亚等国家学者的密切关注 ,逐渐形成了一
门新兴学科 ———离子束生物工程学[13 ] ,并在食品添加
剂、动物益生菌、工业微生物以及农作物选育上取得成
功[14～18 ] 。该技术目前尚未应用于选育能够分泌漆酶
降解芳香类化合物的白腐菌研究 ,为此 ,本试验拟利用
与传统诱变方法不同的 N+ 离子束注入对 Pleurotus
ostreatus 进行诱变处理 , 旨在进一步提高 Pleurotus
ostreatus 产漆酶能力 ,实现固体培养基产酶条件的优
化。
1 材料与方法
111 材料
11111 试验菌株 白腐菌 Pleurotus ostreatus WY01 由
安徽农业大学食用菌研究所分离并鉴定。
11112 培养基 PDA 斜面培养基 (/ L) :葡萄糖 20g ,
KH2 PO4 3g ,MgSO4·7H2O 115g ,VB1 10mg ,马铃薯 20g ,琼
脂 20g ,pH 自然。限氮液体培养基 (LM) (ΠL) [19 ] :葡萄
糖 1010g , 酒石酸铵 012g , KH2 PO4 210g , CaCl2 011g ,
MgSO4 ·7H2O 015g , 微量元素溶液 70ml , 011gΠL VB1
10ml ,011molΠL 乳酸缓冲液 (pH412) 100ml。微量元素溶
液 (ΠL ) : MgSO4 ·7H2O 013g , MnSO4 ·H2O 015g , NaC1
110g , FeSO4 ·7H2O 011g , CoCl2 ·6H2O 01185g , CaCl2
0108g ,ZnSO4·7H2O 0118g ,CuSO4·5H2O 011g ,A1K(SO4 )
·12H2O 010lg ,H3BO3 0101g ,NaMoO4·2H2O 01012g ,氨基
乙酸 115g。固体产孢及发酵培养基 :精确称取 12510 g
过 35 目筛的油菜秸秆粉 ,按 1∶3 (mΠv) 加入 LM 培养
液 ,混匀构成固体培养基 SM ,高压灭菌 (121 ℃, 30
min) ,备用。PDA2RBBR 初筛培养基 :将已灭菌的 510
mgΠml RBBR 溶液与冷至 60 ℃左右的 PDA 培养基混
匀 ,制成 RBBR 浓度为 625μgΠml 的 RBBR2PDA 平板。
不同初始 pH培养液 :用已灭菌的 1molΠL HCl 和 1molΠL
NaOH 调节LM 的 pH 分别为 410、510、610、710 ,其余条
件不变。
11113 主要仪器与试剂 吐温 - 80 为 ( Tween280) 化
学纯 ,购自国药集团化学试剂有限公司 ;ABTS (2 ,2′2
连氮2二 (32乙基苯并噻唑262磺酸) ,C18 H24 N6O6 S4 ) 为超
纯 (Utra pure) ,购自 AMRESCO 公司 ;藜芦醇 (C9 H12O3 ) ,
RBBR ( Remazo brilliant blue R ) , 均 购 自 SIGMA2
ALDRICH公司 ;水为双蒸水。低能离子注入仪为中国
科学院等离子体物理研究所研制 ; TU21901 双光束紫
外可见分光光度计为北京普析通用仪器有限公司产
品 ;pH225 型 pH计为上海精科雷磁公司产品。
112 方法
11211 菌株的活化与保存 将试验菌株接种于 PDA
培养基斜面上 ,25 ℃下活化培养 7d ,然后将活化后的
菌株接种于 PDA 培养基平板上 ,28 ℃下培养 7d 于 4 ℃
保存备用。
11212 孢子悬浮液的制备 参照黄乾明等[20 ] 方法并
稍有修改 ,具体为 :在固体产孢培养基上 , 28 ℃培养
Pleurotus ostreatus WY01 至菌丝布满整个培养基 ,再于
20 ℃培养生长出子实体。经子实体切片镜检确认已有
提孢子产生后 ,取部分子实体 ,在 20 ℃培养箱中 ,用钟
罩法收集担孢子于无菌蒸馏水中 ,用无菌蒸馏水稀释
后血球板计数 ,调整孢子悬浮液浓度为 1 ×107 个Πml ,
保存于 4 ℃备用。
11213 离子注入 取 100μl 孢子悬浮液涂于无菌空白
培养皿中 ,置于超净台风干制成菌膜 ,在中国科学院等
离子体物理研究所离子束生物工程实验室的离子注入
机上进行 N + 离子注入 ,注入前靶室用紫外灯灭菌
30min。孢子悬浮液的制备按文献 [20 ]方法进行。将
孢子悬液放于靶室 ,分别用 216 ×1014 ionsΠcm2 的 0、20、
40、60、80、100、120 和 140 倍的不同剂量注入离子。将
诱变孢子适当稀释 ,涂布于 PDA 培养基平板上 ,28 ℃
培养产生单菌落。以置于小靶室真空中不经离子注入
的孢子悬液为对照 ,计算存活率。
11214 菌株突变 白腐菌 Pleurotus ostreatus WY01 孢
子经不同注量处理并接入 PDA 平板培养基培养后 ,随
机挑选 60 株单菌落 ,接种于发酵培养基中培养 20d ,测
其漆酶活性 ,计算突变率。规定酶活高于出发株 10 %
为正突变 ,反之为负突变 ,酶活与出发菌株相比无变化
为无突变。
11215 优良菌株的初筛和复筛 从 PDA 平板上挑选
分离良好的经 N + 注入后的单菌落 ,接种于 PDA2RBBR
初筛平板上 ,28 ℃继续培养 ,挑选菌丝生长良好、使
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RBBR 变色能力强、变色速度快的平板 ,并接种 PDA 斜
面 ,于 - 4 ℃保存。
将初筛得到的菌株制成孢子悬液 (108 个Πml) , 取
3ml 分别接种于上述固体发酵培养基上 , 混匀于 28 ℃
培养 30d ,测定漆酶活性。
11216 固体发酵培养基中酶液的提取 称取 210g 油
菜秸杆固体培养物 ,用 1210ml 双蒸水于 4 ℃浸提 ,油菜
秸秆固体培养物过夜 ,以 200rpm 振荡提取 1h ,转移提
取液 ;再用 410ml 双蒸水以 200rpm 振荡提取 15min ,重
复 1 次 ,混合均匀 ,以 5000rpm 离心 15min ,取其上清
液 ,用于测定酶活。
11217 Lac 活性测定 Lac 活性测定参照文献采用
ABTS法[21 ] :25 ℃,pH412 ,每分钟使 1μmolΠL ABTS 转化
所需的酶量为 1 个活力单位 (U) 。
2 结果与分析
211 N+ 注入对孢子存活率和突变率的影响
图 1 N + 注入对孢子存活率的影响
Fig. 1 Effect of N + implantation on
survival rate of basidispones
不同剂量 N + 注入对白腐菌 Pleurotus ostreatus
WY01 孢子存活率的影响如图 1 所示。从图中可以看
出 ,小剂量注入 (小于 20 ×216 ×1014 ionsΠcm2 ) 时 ,孢子
的存活率随着注量的增加而降低 ,但随着注量的增加
孢子存活率出现缓慢上升的趋势 ,在注量为 80 ×216
×1014 ionsΠcm2 时出现一较小峰值 ,然后逐渐下降 ,整
个曲线呈马鞍型变化。这与常规紫外线辐照下的直线
型存活曲线有所不同 ,可能是因为在低剂量时 ,离子注
入所产生的能量沉积可引起一系列电离事件 ,动量传
递只对细胞壁、细胞膜表面进行溅射与刻蚀 ,因此在注
量较低情况下 ,注量越大 ,生物体存活率越低。随着大
量连续注入的电荷堆积 ,形成很强的库仑斥力 ,对被注
入细胞形成一个“保护屏障”,进而阻碍后续注入离子
对细胞的损伤 ;同时堆积的电荷形成弱电场 ,可激活生
物体内的各种酶和诱导修复机制的启动 ;另外 ,氮离子
的沉积与周围自由基竞争性反应清除自由基 ,也都对
生物体具有保护作用 ,从而在中等注量时可以减轻对
生物体的伤害 ,表现为存活率并非随着注量的增加而
持续降低。当注量进一步加大 ,电荷的大量堆积达到
一定临界值后 ,将导致库仑保护屏障崩溃 ,对离子注入
具有保护作用的屏障不复存在 ,离子辐照的损伤已超
过生物体的修复能力 ,致使孢子存活率又迅速下降。
由图 2 可以看出 ,孢子突变率与注量成非线性关系 ,
但正突变率和负突变率具有一致性。当注量为 80 ×216
×1014ionsΠcm2 时正突变率与负突变率均最高。注量偏小
时 ,突变率较低 ;随着剂量的加大 ,突变率先上升后下降 ,
其中正突变在中等致死剂量 80 ×216 ×1014 ionsΠcm2 处较
高。可能的解释为 :在小注量时未能激活DNA 修复系统 ,
导致低存活率 ;当注量增大至某一阈值后激活 DNA 修复
系统 ,存活率反而上升。随着注量的增加 ,错配修复造成
的诱变增加 ,致使正突变率也增加。然而随着注量的进
一步增大 ,DNA 被破坏占了主导地位 ,致使存活率下降 ,
正突变率也大幅度降低。
图 2 N + 注入对孢子突变率的影响
Fig. 2 Effect of N + implantation on mutation rate
212 优良突变菌株的获得
从 500 个经诱变处理后生长的单菌落中初筛 15
个菌株 ,编号为 ADW201～ADW220 ,它们比 Pleurotus
ostreatus 出发菌株均具有使 RBBR 更强的变色能力和
更快的变色速度 (表 1) 。进一步复选到 2 株产酶量明
显提高的诱变菌株 ADW208 和 ADW211 ,它们在 SM 中
静置培养 0 - 30d 的产酶情况如图 3。在整个培养期
内 ,ADW208 和 ADW211 产酶量都比 Pleurotus ostreatus
出发菌株高 , 其最高酶活力分别达到 7178UΠg 和
6111UΠg ,分别为出发菌株最高酶活力 2178UΠg 的 2180
倍和 2120 倍。ADW208 和 Pleurotus ostreatus 出发菌株
出现产酶高峰的时间也不完全相同 ,分别在 22d 和
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20d ,ADW208 在 26d 时还出现第 2 次产酶高峰。
为考察 ADW208、ADW211 产酶的遗传稳定性 ,将
它们在 PDA 斜面上继代培养 5 代 ,结果表明 ,在同一
培养时间下 ADW208 在任意 2 代之间 (从变异菌株 P1
代到变异菌株P5 代) 产酶量差值很小 (图4) ,表明经
表 1 出发菌株和部分初筛诱变菌株在
RBBR2PDA 平板上培养的变色情况
Table 1 Discoloration of original and some primary
screening strains of P. ostreatus cultured
on PDA medium containing RBBR
菌株
strains
培养时间 culture time (d)
2 4 8 10 12 14 16
出发菌株
original strain
± + + + + + + + + + + + +
ADW207 + + + + + + + + + + + + + + +
ADW208 + + + + + + + +
ADW211 + + + + + + + + + + +
ADW212 + + + + + + + + + + + + +
ADW215 ± + + + + + + + + + + +
ADW218 + + + + + + + + + + + +
注 : - 不变色 ; + 、+ + 、+ + + 变色能力渐增 ; + + + + 全变色
Note : - no discoloration , + + + + + + discoloration gradually , + + + +
whole discoloration
图 3 出发菌株和 ADW208、ADW211 固体培养产漆酶的情况
Fig. 3 The Lac production of original strain , ADW208
and ADW211 of P. ostreatus on solid cultivation
图 4 糙皮侧耳诱变菌株 ADW208 继代培养产酶情况
Fig. 4 The Lac production of subcultures
of mutant ADW208 of P. ostreatus
诱变选育得到的 ADW208 菌株的产酶性能较稳定。而
ADW211 在 P1 、P2 、P3 代产酶能力基本稳定 ,但从 P4 开
始大幅度下降 (数据未列出) 。故确定 ADW208 为最终
选择的目标菌株。
213 碳源对白腐真菌 ADW208 漆酶的影响
以限氮液体培养基 (LM) 为基础 ,分别选取葡萄
糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、麸皮为碳源 ,考察不同
碳源对漆酶合成的影响 (图 5) 。结果表明 ,不同的碳
源影响白腐菌 ADW208 漆酶合成 ,其中以葡萄糖较好 ,
其最高酶活分别出现在第 22 天 (7178 UΠg) ,麸皮酶活
峰值为最差 (仅 0156 UΠg) 。
图 5 碳源对 P. ostreatus 诱变菌株
ADW208 漆酶分泌的影响
Fig. 5 Effect of carbon sources on Lac production
of mutant ADW208 of P. ostreatus
214 氮源对白腐真菌 ADW208 漆酶的影响
同样以LM 为基础 ,分别选取酒石酸铵、酵母粉、
蛋白胨、硫酸铵、尿素作为氮源 ,由图 6 可知 ,以添加酒
石酸铵组产酶性能表现最好 ,其峰值为 7178UΠg ,较最
低组尿素峰值提高了 64127 %。
215 起始 pH对白腐真菌 ADW208 漆酶的影响
调节 LM 的 pH 为 410、510、610、710 ,考察了不同
初始 pH对 ADW208 漆酶分泌的影响 (图 7) 。结果表
明 ,初始 pH510 或 610 时 ,有利于漆酶的分泌。
216 诱导剂对白腐真菌 ADW208 漆酶分泌的影响
选用 ABTS (1mmolΠL) 、吐温 - 80 (1 %) 和藜芦醇
(1mmolΠL) 3 种物质为诱导剂 ,分别于接种后第 4 天加
入LM 中 ,考察了诱导剂对 ADW208 漆酶分泌的影响
(图 8) 。结果显示 ,ABTS 和藜芦醇对 ADW208 漆酶的
产生均有不同程度的诱导作用 ,其中藜芦醇的诱导效
果较好 ,吐温 - 80 对产漆酶有一定的抑制作用。
217 固态培养基优化及最佳条件下白腐菌 ADW208
产酶曲线
根据上述单因素试验结果 ,为获得较高酶活 ,以葡
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图 6 氮源对 P. ostreatus 诱变菌株
ADW208 漆酶分泌的影响
Fig. 6 Effect of nitrogen sources on Lac
production of mutant ADW208 of P. ostreatus
图 7 初始 pH对 P. ostreatus 诱变菌株
ADW208 漆酶分泌的影响
Fig. 7 Effect of initial pH on Lac production of mutant
ADW208 of P. ostreatus
图 8 诱导剂对 P. ostreatus 诱变菌株
ADW208 漆酶分泌的影响
Fig. 8 Effect revulsives on Lac production of
mutant ADW208 of P. ostreatus
萄糖、酒石酸铵和起始 pH为影响因素 ,采用 L16 (43 ) 正
交试验设计对培养基进行优化。培养第 0、2、4、6、8、
10、12、14、16、18、20、22、24、26、28 和 30 天分别测酶活 ,
结果见表 2。
表 2 和表 3 的极差和方差分析结果表明 :碳源葡
萄糖对产酶影响最大 ( P < 0101) , 氮源酒石酸铵次之
( P < 0105) ,起始 pH 影响较小 ( P > 0105) 。优化组合
为 A3B2C1 ,即葡萄糖 1510gΠL ,酒石酸铵 012gΠL ,pH
512。按此条件进行培养 ,漆酶从第 12 天酶活迅速提
升 ,产酶峰值出现在第 18 天达 8133UΠg ,酶活得到进一
步提高 (图 9) 。
表 2 正交试验试验结果及极差分析
Table 2 The results of the orthogonal test
and analysis of its range
序号 No
A 葡萄糖
glucose
(gΠL) B 酒石酸铵ammoniumtartrate (gΠL) CpH 漆酶Lac (UΠg)
1 1(5) 1 (011) 1(512) 2418
2 1(5) 2 (012) 2(514) 2212
3 1(5) 3 (014) 3(516) 1711
4 1(5) 4 (018) 4(518) 1518
5 2(10) 1 (011) 2(514) 3212
6 2(10) 2 (012) 1(512) 3813
7 2(10) 3 (014) 4(518) 2519
8 2(10) 4 (018) 3(516) 2618
9 3(15) 1 (011) 4(518) 4017
10 3(15) 2 (012) 1(512) 4416
11 3(15) 3 (014) 2(514) 3719
12 3(15) 4 (018) 4(518) 3115
13 4(20) 1 (011) 3(516) 2314
14 4(20) 2 (012) 2(514) 3316
15 4(20) 3 (014) 1(512) 2719
16 4(20) 4 (018) 13819 3013
K1 7919 11216 11612
K2 12312 14917 11812
K3 15417 10818 13019
K4 11512 10414 2217
R 7418 4513
表 3 正交试验漆酶方差分析表
Table 3 Results of anova analysis of Lacs
方差来源
sources
自由度
DF
方差
anova SS
均方
mean Square
F 值
F value
Pr > F
A 葡萄糖
glucose
3 708128 236109 25128 010008
B 酒石酸铵
ammonium tartrate
3 176186 58195 6131 010276
C 起始 pH
initial pH
3 65108 21193 2135 011718
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图 9 最佳条件下的 ADW208 产酶曲线
Fig. 9 Curve of Lac production of mutated strain
ADW208 under optimum condition
3 讨论
离子注入是一种新的用于微生物优良菌株选育和
改良的诱变方法 ,其诱变机制研究表明[22 ] ,低能离子
注入生物体后 ,由于电、能、质的综合作用 ,引起细胞壁
发生溅射、刻蚀 ,从而导致能量传递、质量沉积、动量交
换和电荷交换效应 ,由此形成大量的长寿命自由基 ,进
而造成细胞内染色体 DNA 键的断裂、畸变 ,诱导和激
发细胞对 DNA 进行修复、重组 ,最终诱使生物体发生
变异 ,所以离子注入诱变是一种复合诱变方法。至今
已被广泛运用于工业微生物中 ,如抗菌素、酶制剂、柠
檬酸、维生素、废水处理等高产菌种的诱变选育[23～27 ] ,
并取得良好的效果。近年来 ,也有少数研究者将其运
用于大型丝状真菌的诱变选育中[28～30 ] ,但主要是针对
生长速度、菌丝多糖、氨基酸含量等生物学效应的研
究。
本研究以野生漆酶产生菌 Pleurotus ostreatus WY01
孢子为诱变材料 ,首次利用低能离子束来诱变选育高
产漆酶的大型真菌 ———白腐菌 ,使出发菌株 Pleurotus
ostreatus WY01 漆酶活性得到较大提高 ,经条件优化后
漆酶活性高达 8133 UΠg ,优于国内外报道[3 ,7 ] 。虽然已
有研究者应用生物工程方法 ,采用野生菌株原生质体
融合技术或担孢子单核体杂交构建漆酶高酶活力工程
菌[31 ,32 ] ,但因技术及产物稳定性等问题 ,笔者认为 ,在
菌株遗传背景不很清楚的情况下 ,N + 注入选育显得十
分有效 ,具有方法简便、效果好、直接和可选范围大的
优势。本试验结果表明 ,N + 注入诱变具有正突变率高
(15 %) 、产酶稳定等优点 ,这与王石磊等[33 ] 报道一致。
可以认为低能氮离子注入对白腐菌 Pleurotus ostreatus
WY01 是一种比较理想的诱变技术。
产酶条件试验结果表明 ,无机氮源较有机氮源更
有利于诱变菌株 ADW208 分泌漆酶 ,其中酒石酸铵是
产漆酶较好的氮源 ,硫酸铵次之 ,蛋白胨、酵母粉和尿
素较低 ,推测菌体可能是直接利用氮元素 ,有机氮需要
进一步的转化为无机氮才能被利用 ,与文献报道相
符[34～36 ] 。本试验选择两种碳源 ———合成碳源 (葡萄
糖、可溶性淀粉、麦芽糖和蔗糖)和天然碳源 (麸皮) ,结
果表明 ,诱变菌株 ADW208 均能利用此两种碳源 ,且合
成碳源更有利于漆酶的分泌 ,其中以单糖葡萄糖较好 ,
这与邵强等[37 ]研究结果一致。
至今 ,诱导剂提高酶活性的真正机理仍不十分清
楚 ,但通常认为是一种共代谢方式 ,即诱导剂自身成为
代谢底物的同时促使目标化合物的降解 ,而且 ,随着具
体诱导剂的不同 ,作用机理也有所不同[38 ] 。不同菌种
间最佳诱导剂往往不同 ,因此应用时应根据具体情况
作出选择。王佳玲等[39 ]研究结果也表明 ,结构与木质
素有关的低分子芳香化合物、木质素降解的中间产物
以及某些活性物质均可作为漆酶的诱导剂以提高漆酶
活性。本试验结果表明 ,藜芦醇和 ABTS 对漆酶分泌
均有明显诱导作用 ,与侯红漫等[40 ] 研究结果相符 ,此
外 ,吐温 - 80 对产酶有一定抑制作用 ,这可能是不同
的诱导剂对不同的菌株酶活的影响存在差异性。因
此 ,选择适宜的诱导剂对漆酶分泌是非常重要的。
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