全 文 :核 农 学 报 2011,25(1):0185 ~ 0190
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
收稿日期:2010-05-07 接受日期:2010-06-21
基金项目:教育部博士点基金(J20091612),浙江省教育厅项目(N20090180)
作者简介:于勇(1978-),男,博士,副教授,硕士生导师,从事农产品加工及品质检测技术研究。Tel:0571-88982181;E-mail:yyuzju@ zju. edu. cn
文章编号:1000-8551(2011)01-0185-06
薄荷生长环境与其超弱发光特性的关系
于 勇1 林 怡1 王为民2 田 凤3 毛 明1
(1. 浙江大学生物系统工程与食品科学学院,浙江 杭州 310058;
2. 农业部科技发展中心,北京 100026;3. 农业部管理干部学院,北京 102208)
摘 要:为获得多个生长环境因素影响下植物的超弱发光特性,以薄荷为试验样品,采用二次正交旋转组
合实验优化设计方案,研究了光照、温度、湿度和水分 4 个环境因素对薄荷叶片超弱发光值的影响,建立
了 4 因素对超弱发光值的影响模型。通过分析发现,不同因素及其交互作用对超弱发光值影响的显著
性也不同。其中光照和湿度的交互项对超弱发光值的影响最显著(p≤0. 01)。当光照采用 10 根灯管
(即照度值均值为 4229lx)且温度、湿度和水分分别控制在 35℃、65%和 90ml / d 时,薄荷样品的超弱发
光值最大。在此基础上获得了使超弱发光值最大的因素组合,并进一步分析了对超弱发光值存在影响
作用的各单因素及交互作用的影响规律。
关键词:薄荷;生长环境;超弱发光
RELATIONSHIP BETWEEN GROWTH ENVIRONMENT
AND ULTRAWEAK LUMINESCENCE OF MINT
YU Yong1 LIN Yi1 WANG Wei-min2 TIAN Feng3 MAO Ming1
(1. College of Biosystems Engineering and Food Science,Zhejiang University,Hangzhou,Zhejiang 310058;
2. The Science and Technology Development Center of the Ministry of Agriculture,Beijing,100026;
3. Agricultural Management Institute,Ministry of Agriculture,Beijing 102208)
Abstract:To obtain the ultraweak luminescence properties of plant affected by multilateral growth environment factors
mint was used as the research material to study the effect of illumination,temperature,relative humidity,and moisture
on the ultra-weak luminescence of mint leaves by quadratic rotation-orthogonal composite experimental design. The
model of four environmental factors to ultra-weak luminescence of mint leaves was established. The ANOVA(analysis of
variance)analysis indicated that the significant value of influence of different factors showed different their interaction on
ultra-weak luminescence. Effect of relative humidity and illumination on the bio-illumination of mint sample is most
significant,with p-value ≤ 0. 01. And when light by 10 tube (intensity of illumination value 4229Lx) and mean
temperature,humidity and water respectively controlling in 35 ℃ 90ml / d,65%,the value of ultraweak luminescence
was maximum. On the basis of that,the combination of environmental factors to the maximum value of ultra-weak
luminescence was included as well as influence rule of each influential environmental factors and their interactions on the
ultra-weak luminescence.
Key words:mint;growth environment;ultraweak luminescence
人们对植物超微弱发光的认识已近一个世纪,虽
然其发光机理尚未揭示清楚,但研究已证明,超弱发光
反映了生物体细胞内和细胞间的新陈代谢、功能调解
和信息交换,是生物体生长代谢的动态指标[1,2]。在
581
核 农 学 报 25 卷
所获得的成果中,植物的超微弱发光值与其生活力有
密切正相关关系是最基础的研究成果之一,也是超弱
发光检测技术用于现代农事管理最重要的应用基础之
一[3]。例如,经过电磁辐射处理的大豆的生活力比未
处理的种子大大增强,而同时其超微弱发光值也显著
增加;而当采用代谢抑制剂处理绿豆种子后,种子活性
大大降低,其超微弱发光值也同时降低[4]。在对稻
谷、花生叶片、菠菜等的研究中,研究人员也得到了类
似的研究结果[5]。
在此基础上,研究人员进行了大量以植物生活力
保障或检测为目标的植物超弱发光影响因素及其规律
的研究,进而发现一些物理因素(如氧、温度、辐照
等)[6 ~ 9]、化学因素(氧化剂、代谢抑制剂等)[10]以及
激素和环境胁迫等在影响植物生活力的同时还影响植
物的超微弱发光[11 ~ 13]。得益于电子和信息技术的发
展,这些因素所致的植物超微弱发光的变化往往比其
生活力特征的变化更早被识别,并有可能将超弱发光
技术应用在植物工厂化育苗、智能化栽培与培育等领
域。
然而,目前针对影响植物的超弱发光因素的研究
还不够全面,尤其是多个生长环境因素影响下的植物
超弱发光特性综合研究还罕有报道,而不同因素对植
物超弱发光影响的交互特性更未明晰,这在很大程度
上制约了超弱发光检测技术在上述领域的应用。
本研究以生活力较为旺盛的薄荷为研究对象,采
用二次正交旋转组合实验优化设计方案,以获得薄荷
在多个生长环境因素变化情况下的超弱发光特性,并
探索各因素及其交互作用与薄荷超弱发光特性的关
系,为推进超弱发光检测技术在植物现代化农事管理
方面的应用做相关的技术准备。
1 材料与方法
1. 1 材料及处理
薄荷样品 15 株,盆栽,由杭州蓝天园林建设集团有
限公司下属中泰苗木基地提供。薄荷样品在同一温室
及相同环境、养分条件下以盆栽方式种植 45d,枝叶茂密
程度类似。采集薄荷叶片样品放入人工气候箱(RXZ
型),并在原温室环境相近的温度 30℃、湿度 90%及自
然光的条件下保存待用。预试验证明,5 株薄荷样品的
培养并均匀选取叶片(手工摘取)足以满足本试验要求,
15 株薄荷样品以 5 株为 1 组,设 3 个重复。
1. 2 环境控制因素范围
本试验所研究的薄荷基本生长环境因素包括光
照、温度、湿度、水分 4 个因素。其中光照、温度、湿度
由所采用的 RXZ 型智能人工气候箱控制,水分采用有
刻度的注射器人工控制。各因素的研究范围具体设置
如下。
1. 2. 1 光照 根据温室平均照度范围及人工气候箱
所能提供的照度范围进行设置。人工气候箱采用
40W 日光灯管(0 ~ 10 根)进行光照,不同的光照采用
日光灯管打开的数量进行控制,选取的光照值范围为
2 ~ 10 根灯管的照度值。单根 40W 日光灯管的照度
值为(422. 9 ± 10. 1)lx,采用 TES - 1339 专业级照度计
测得。
1. 2. 2 温度 根据薄荷生长所需的最适温度范围
(20℃ ~ 30℃)进行设置,并进行适当放大,以获得较
大范围的温度因素与薄荷叶片超弱发光值的关系。本
试验选取的温度范围为 15℃ ~ 35℃,由人工气候箱进
行自动控制,控制精度为 ± 0. 5℃。
1. 2. 3 湿度 采用空气相对湿度指标,根据薄荷生长
所需的最适空气相对湿度范围(70% ~ 80%)进行设
置,并适当放大,以获得较大范围的湿度因素与薄荷叶
片超弱发光值的关系。选取的空气相对湿度范围为
65% ~ 85%,由人工气候箱进行自动控制,控制精度为
± 1%。
1. 2. 4 水分 根据预试验获得选取的水分范围为 10
~ 90ml / d,日施水量低于 10ml 薄荷时样品会在 24h 内
明显发蔫,而日施水量大于 90ml 薄荷时样品所施水分
将流出。水分为人工采用有刻度的注射器在每天同一
时间进行浇灌的方法控制。
1. 3 超弱发光值测定
经过预试验获得超弱发光测量仪的最优检测条
件:检测前先进行 2d 的稳定培养,取 0. 2g 薄荷叶片样
品,在 35℃的检测条件下检测。
薄荷叶片超弱发光值采用中国科学院生物物理研
究所研制的 BPCL-2 型超微弱发光测量仪测定。预实
验发现,进行超弱发光检测时,在检测初始阶段,由于
存在受到外界光线照射后的延迟发光现象,薄荷叶片
单位时间的发光量迅速下降并有明显波动;而 3 ~
5min 后,延迟发光逐渐消失,单位时间的发光值也趋
于平稳。因此,每次试验中,薄荷叶片样品检测时间设
定为 10min,去本底(无样品状态下,空检测杯的发光
值)之后取后 5min 的稳定数据,并计算单位时间的发
光值。
1. 4 试验设计及数据分析
试验采用二次正交旋转组合试验设计,综合分析光
照(编码值 x1,实际值 X1)、温度(编码值 x2,实际值
681
1 期 薄荷生长环境与其超弱发光特性的关系
X2)、湿度(编码值 x3,实际值 X3)、水分(编码值 x4,实际
值 X4)这 4 个试验因素及其交互作用对薄荷叶片超弱
发光值(Y)指标的影响。基于二次正交旋转组合试验
设计方法的各样品及其控制因素的编码值和实际值见
表 1,试验在零水平处重复 12 次,总试验次数为 36 次。
表 1 二次正交旋转组合试验设计各样品及其
控制因素的编码值和实际值
Table 1 Quadratic rotation-orthogonal composite
experimental design in coded and
actual level of variables
样品号
sample
No.
光照(根)
illumination
(stick)
温度
temperature
(℃)
湿度
relative
humidity
(%)
水分
moisture
(ml / d)
x1 X1 x2 X2 x3 X3 x4 X4
趋弱发光值
luminescence
(photon / s)
1 1 8 1 30 1 80 1 70 3. 4684
2 1 8 1 30 1 80 - 1 30 0. 2619
3 1 8 1 30 - 1 70 1 70 8. 0892
4 1 8 1 30 - 1 70 - 1 30 3. 0494
5 1 8 - 1 20 1 80 1 70 0. 5125
6 1 8 - 1 20 1 80 - 1 30 2. 8520
7 1 8 - 1 20 - 1 70 1 70 5. 4750
8 1 8 - 1 20 - 1 70 - 1 30 2. 4760
9 - 1 4 1 30 1 80 1 70 4. 7678
10 - 1 4 1 30 1 80 - 1 30 3. 1167
11 - 1 4 1 30 - 1 70 1 70 2. 4542
12 - 1 4 1 30 - 1 70 - 1 30 1. 5989
13 - 1 4 - 1 20 1 80 1 70 2. 7782
14 - 1 4 - 1 20 1 80 - 1 30 1. 3977
15 - 1 4 - 1 20 - 1 70 1 70 1. 3967
16 - 1 4 - 1 20 - 1 70 - 1 30 5. 1037
17 - 2 2 0 25 0 75 0 50 4. 9180
18 2 10 0 25 0 75 0 50 3. 6692
19 0 6 - 2 15 0 75 0 50 3. 1311
20 0 6 2 35 0 75 0 50 2. 1710
21 0 6 0 25 - 2 65 0 50 5. 2456
22 0 6 0 25 2 85 0 50 3. 0114
23 0 6 0 25 0 75 - 2 10 2. 5353
24 0 6 0 25 0 75 2 90 6. 0614
25 a 0 6 0 25 0 75 0 50 1. 8312
注:第 25 号为试验中心点,根据二次正交旋转组合试验设计方法
要求,设 12 个重复样品。光照的单位用根表示,即 40W 日光灯管一支,
照度值为 422. 9 ± 10. 1Lx。各样品的超弱发光值为所取 5min 超弱发光
数据的平均值,第 25 个样品的超弱发光值为 12 个重复样品的超弱发
光值的均值,12 个重复样品的超弱发光值分别为:2. 9276、1. 9261、
1. 7713、1. 6092、1. 4454、1. 6138、2. 1855、1. 8487、1. 6902、1. 5273、
1. 5296 和 1. 8996。
Note:No. 25 is the experiment center with 12 repeated samples,
according to the demand of quadratic rotation - orthogonal composite
experimental design method. The unite of light is stick,namely one stick of
40W fluorescent tube with 422. 9 ± 10. 1Lx illumination value. The
ultraweak luminous value of each sample is the average of 5 minutes detected
values. The ultraweak luminous value of No. 25 is the average of ultraweak
luminous values of 12 repeated samples and the ultraweak luminous values of
12 repeated samples are 2. 9276、1. 9261、1. 7713、1. 6092、1. 4454、1. 6138、
2. 1855、1. 8487、1. 6902、1. 5273、1. 5296 and 1. 8996,respectively.
试验结果采用 DPS 数据处理软件进行分析,建立
各环境因素与薄荷样品超弱发光值的关系模型,获得
使薄荷样品超弱发光值最大的各最优环境因素值,并
对有影响的因素及有影响的交互作用对薄荷样品超弱
发光值的影响规律进行进一步分析。
2 结果与讨论
2. 1 回归分析及最优参数分析
试验结果采用 DPS 软件进行分析,获得含有一次
项、二次项和交互项的多项式回归方程,并对各项进行
方差分析,结果见表 2。
表 2 表明,4 个环境因素的单因素对薄荷样品超
弱发光值的影响情况不同。其中,光照因素的一次项
对超弱发光值影响不显著(P > 0. 10),而其二次项(平
方项)对超弱发光值影响显著(P≤0. 05);湿度和水分
因素的一次项和二次项均对超弱发光值影响显著(P
≤0. 05);而温度因素无论是其一次项还是二次项均
对超弱发光值影响均不显著(P > 0. 10)。
表 2 各因素取编码值时的多项式方程及方差分析结果
Table 2 Model and condensed ANOVA(analysis of
variance)table in coded level of variables
多项式的项
source of
variations
多项式系数
coefficient of
polynomial
F 值
F-Value
常数 1. 83119
x1 0. 04471 0. 03496 NS
x2 0. 12061 0. 25445NS
x3 - 0. 62317 6. 79296
x4 0. 67242 7. 90896
x21 0. 48344 5. 45088
x22 0. 07280 0. 12361NS
x23 0. 44216 4. 55968
x24 0. 48463 5. 47771
x1 x2 0. 14325 0. 23931NS
x1 x3 - 0. 84385 8. 30386
x1 x4 0. 54536 3. 46835 *
x2 x3 0. 20839 0. 50640NS
x2 x4 0. 77622 7. 02619
x3 x4 - 0. 08052 0. 07561NS
r 0. 933 —
注:x1:光照;x2:温度;x3:湿度;x4:水分;NS:影响不显著,P >
0. 10;* :有影响,P≤0. 10;影响显著,P≤0. 05;影响极显著,P≤
0. 01。
Note:Variables:x1:light,x2:temperature,x3:relative humidity,x4:
moisture. NS:Non - significant at P > 0. 10;* :Significant at P≤0. 10;
:Significant at P≤0. 05;:Significant at p≤0. 01.
4 个环境因素的两两之间交互作用对薄荷样品超
弱发光值的影响也不同。其中光照和湿度的交互项对
超弱发光值的影响极显著(P≤0. 01),光照和水分的
781
核 农 学 报 25 卷
交互项对超弱发光值有影响(P≤0. 1),而温度和水分
的交互项对超弱发光值的影响显著(P≤0. 05)。其他
交互项的影响均不显著(P > 0. 10)。
此外,所得的 4 个试验因素对响应函数回归方程
的相关系数较高(r = 0. 933),可以用于试验范围内对
薄荷超弱发光值的预测。
为了确定薄荷样品对光照、温度、湿度、水分等 4
个环境因素的较优需求值,并基于植物的超微弱发光
值与其生活力的密切的正相关关系[3],本研究对薄荷
样品的超弱发光值进行优化计算。目标函数取表 2 所
示的回归方程,约束条件为表 1 中编码值的取值范围,
优化结果如表 3 所示。由表 3 可知,在试验范围内,当
光照采用 10 根灯管(即照度值均值为 4229lx)且温度、
湿度和水分分别控制在 35℃、65%和 90ml / d 时,薄荷
样品的超弱发光值最大(18. 7 个光子 / s),由于植物的
超微弱发光值与其生活力密切的正相关关系,在该环
境条件下,薄荷样品的生活力最高,较其他环境条件更
适合薄荷样品的生长。
表 3 优化分析结果
Table 3 Optimization analysis result
项目
item
因素
parameters
超弱发光值
(光子 / s)
ultra-weak
luminescence
(photon / s)
最优因素编码值 x1 2
optimum conditions x2 2
in coded level x3 - 2
x4 2
最优因素实际值 X1 10
optimum conditions X2 35
in actual level X3 65
X4 90
响应函数最优值
optimum value
18. 7
2. 2 单因素及其交互作用对超弱发光值的影响规律
分析
为便于进一步分析对超弱发光值存在影响作用的
各单因素及交互作用的影响规律,对表 2 所示回归模
型进行修正。首先将表 2 所示回归模型中的不显著项
剔除,获得剔除不显著项后的环境因素(编码值)与薄
荷样品超弱发光值的关系模型如式(1)所示,其相关
系数进一步提高(r = 0. 953)。进而,将各因素的编码
值转换为实际值,得到环境因素(实际值)与薄荷样品
超弱发光值的关系模型如式(2)所示。
Y = 1. 83119 - 0. 62317x3 + 0. 67242x4 +
0. 48344x21 + 0. 44216x
2
3 + 0. 48463x
2
4 -
0. 84385x1 x3 + 0. 54536x1 x4 + 0. 77622x2 x4(1)
Y = 92. 1833 + 4. 1969X1 - 0. 3881X2 -
2. 2713X3 - 0. 3634X4 + 0. 1209X
2
1 +
0. 0177X23 + 0. 0012X
2
4 - 0. 0844X1X3 +
0. 0136X1X4 + 0. 0078X2X4 (2)
2. 2. 1 单因素对薄荷样品超弱发光值的影响 光照、
湿度和水分 3 因素分别对薄荷叶片超弱发光值都有影
响作用,对这 3 个因素进行单因素影响分析时,以公式
(2)为基础模型,令其他因素取最优值(见表 3),得到
各单因素对薄荷样品超弱发光值的影响模型,如式
(3)、式(4)、式(5)所示,其影响曲线如图 1、图 2、图 3
所示。
图 1 光照对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 1 Effect of illumination on the bio-
illumination of mint sample
图 2 相对湿度对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 2 Effect of relative humidity on the
bio-illumination of mint sample
Y = 7. 3318 - 0. 0651 X1 + 0. 1209 X
2
1 (3)
881
1 期 薄荷生长环境与其超弱发光特性的关系
图 3 水分对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 3 Effect of moisture on the bio-
illumination of mint sample
Y = 146. 483 - 3. 1153 X3 + 0. 0177 X
2
3 (4)
Y = 4. 9468 + 0. 0456 X4 + 0. 0012 X
2
4 (5)
从图 1、图 2、图 3 中不难发现,在试验范围内,当
其他环境因素取最优值时,薄荷样品的超弱发光值随
着光照和水分的增加而增大,随着湿度的升高而减小。
当光照取最大值(10 根灯管,即 4229lx 均值)、取湿度
最小值(65%)和取水分最大值(90ml / d)时,薄荷样品
的超弱发光值最强,由于植物的超微弱发光值与其生
活力密切的正相关关系,此时薄荷样品的生活力也最
强,这与表 3 所示的优化结果相同。
薄荷样品的超弱发光值(生活力)随光照的增加
而增大,这是因为光是光合作用的能量来源,是叶绿体
发育和叶绿素合成的必要条件,光还能调节光合碳循
环某些酶的活性。在一定范围内光合速率随光强几乎
呈线性增加。光照是影响蒸腾作用的最主要外界条
件,光照促进气孔开放,减小气孔阻力。另外光照通过
提高气温和叶温,增加叶内外的蒸汽压梯度,加快蒸腾
速率。因此,适当增大光照强度,可以增大薄荷生长活
力,反应到超弱发光值上即光照增大,发光值增大。
薄荷样品的超弱发光值(生活力)随湿度的升高
而减小,这是因为空气相对湿度直接影响蒸腾速率,当
空气相对湿度减小时,空气蒸汽压也减小,叶内外蒸汽
压差就变大,蒸腾速率增大。蒸腾作用是植物对水分
的吸收和运输的一个主要动力,蒸腾作用也促进植物
对矿质盐类和其他各种溶解于水中物质在体内传到与
分布。因此,在保证植物正常生活的前提下,适当减小
空气湿度,可以加快光合速率,提高作物活力,反应到
超弱发光值上即湿度降低,发光值增大。
薄荷样品的超弱发光值(生活力)随水分的增加
而增大,这是因为,薄荷生长过程需水较多。合理灌溉
使植株生长加快,叶面积扩大,增加了光合面积;使根
系活动增强,增加对水分和矿物质的吸收,从而加快光
合速率。因此,适当增大水分可以增大薄荷生活力,反
应到超弱发光值上即水分增加,发光值增大。
2. 2. 2 因素间交互作用对薄荷样品超弱发光值的影
响 对光照和湿度、温度和水分、光照和水分这 3 组交
互作用对薄荷叶片超弱发光值的影响进行了分析。如
表 3 所示,以式 2 为基础模型,令其他因素取最优值,
得到 3 组交互作用对薄荷样品超弱发光值的影响模
型,如式(6)、(7)、(8)所示其影响曲线如图 4、5 和 6
所示。
Y = 80. 1838 + 5. 4209X1 - 2. 2713 X3 + 0. 1209 X
2
1 +
0. 0177 X23 - 0. 0844 X1X3 (6)
Y = 5. 7478 - 1. 2891 X1 - 0. 0904 X4 + 0. 1209 X
2
1 +
0. 0012 X24 + 0. 0136 X1X4 (7)
Y = 18. 5303 - 0. 3881 X2 - 0. 2274 X4 + 0. 0012 X
2
4 +
0. 0078X2X4 (8)
由图 4 可见,随着环境湿度的增高,薄荷样品的超
弱发光值随光照的变化趋势逐渐改变,从随光照的增
加而增大,逐渐变为随光照的增加而先减小后增大。
随着环境光照的增加,薄荷样品的超弱发光值随湿度
的变化趋势也逐渐改变,从随湿度的增加而增大,逐渐
变为随着光照的增加而减小。这是由于薄荷样品超弱
发光值受湿度和光照增加影响的规律不同(如图 1 和
图 2 所示),且其交互作用对薄荷样品超弱发光值有
极显著的影响(如表 2 所示)。
图 4 湿度和光照对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 4 Effect of relative humidity and illumination
on the bio-illumination of mint sample
981
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2011,25(1):0185 ~ 0190
由图 5 可见,随着水分的增加,薄荷样品的超弱发
光值随光照的变化趋势保持不变,即超弱发光值随光
照的增加而先减小后增大。随着光照的增加,薄荷样
品的超弱发光值随水分的变化趋势也保持不变,且超
弱发光值也随水分的增加先减小后增大。这是由于薄
荷样品超弱发光值受水分和光照增加影响的规律相同
(如图 1 和图 3 所示),且其交互作用对薄荷样品超弱
发光值有影响(如表 2 所示)。
图 5 水分和光照对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 5 Effect of moisture and illumination on
the bio-illumination of mint sample
由图 6 可见,随着温度的增加,薄荷样品的超弱发
光值随水分的变化逐渐改变,即超弱发光值从随水分
的增加而先减小后增大,到随水分的增加而增大。随
着水分的增加,薄荷样品的超弱发光值随温度的变化
趋势也逐渐改变,即超弱发光值从随温度的增加而减
小,到随温度的增加而增大。这说明环境温度对薄荷
样品超弱发光值也有影响,但其影响需通过与水分的
交互作用表现出来,且其交互作用对薄荷样品超弱发
光值影响显著(如表 2 所示)。
3 结论
在二次正交旋转组合试验优化设计基础上建立起
来的四元二次多项式模型有效地反映了各环境因素对
薄荷样品超弱发光值的影响,其中光照因素的二次项
对超弱发光值影响显著,湿度和水分因素的一次项和
二次项均对超弱发光值影响显著,光照和湿度的交互
项对超弱发光值的影响极显著,光照和水分的交互项
对超弱发光值有影响,温度和水分的交互项对超弱发
光值的影响显著,而其他项影响均不显著。并由此获
得了使得薄荷样品超弱发光值在试验范围内最大(生
图 6 温度和水分对薄荷样品超弱发光值的影响
Fig. 6 Effect of temperature and moisture on the
bio-illumination of mint sample
活力最高)的各环境因素取值。且在此基础上通过去
除不显著因素建立的修正模型可有效预测不同环境因
素下的薄荷样品超弱发光值。而对超弱发光值存在影
响作用的各单因素及交互作用的影响规律可通过其影
响曲线的二维及三维图形分析获得。
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