全 文 ：植物生理学通讯 第 45卷 第 1期，2009年 1月 4 5
耧斗菜的组织培养
李群 1,* , 赵富群 1,2, 陈丽萍 1, 蒋娜 1, 孟亚婷 1
1四川师范大学生命科学学院, 成都 610101; 2华南农业大学林学院, 广州 510642
Tissue Culture of Aquilegia vulgaris L.
LI Qun1,*, ZHAO Fu-Qun1,2, CHEN Li-Ping1, JIANG Na1, MENG Ya-Ting1
1College of Life Sciences, Sichuan Normal University, Chengdu 610101, China; 2College of Forestry, South China Agricultural
University, Guangzhou 510642, China
收稿 2008-10-23 修定 2008-12-04
* E-mail: liqun01234@163.com; Tel: 028-84480660
1 植物名称 耧斗菜(Aquilegia vulgaris L.)。
2 材料类别 幼叶叶片、叶柄。
3 培养条件 愈伤组织诱导和增殖培养基 : (1)
MS+2,4-D 0.5~2.0 mg·L-1 (单位下同)+6-BA 0.5; (2)
MS+NAA 0.2~1.5+6-BA 0.2; (3) MS+NAA 0.2~
1.5+6-BA 2.0。不定芽分化及增殖培养基: (4)
MS+NAA 0.2~1.0+6-BA 0.5; (5) MS+NAA 0.1~0.5+
6-BA 0.5。生根培养基: (6) 1/2MS+NAA 0.1~1.0;
(7) 1/2MS+IBA 0.2、1.0。上述各培养基均含 0.7%
琼脂、3%蔗糖, pH 6.0~6.5。培养温度为(21±2) ℃,
光照强度为 40 µmol·m-2·s-1, 光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 将嫩叶叶片、叶柄分别剪下,
然后用适量洗衣粉浸洗10 min后, 流水冲洗30 min,
用75%酒精消毒20 s, 无菌水冲洗2次后再用0.1%
升汞灭菌, 叶片处理 3 min, 叶柄处理 5 min, 然后于
无菌操作台上用无菌吸水纸吸干表面水分, 叶片剪
去其周围叶缘、叶柄剪成 2 cm左右。
4.2 愈伤组织的诱导和增殖 将外植体分别接种于
培养基(1)~(3)上, 先置于黑暗中培养3 d, 后转入光
照培养箱中培养。外植体培养 5 d左右, 叶片开始
出现皱缩, 叶柄两端开始膨大; 培养 10 d左右后,
叶片边缘、叶柄两端陆续有愈伤形成, 其出现愈伤
组织方式同毛茛科大花飞燕草(何小玲和王金发
1998)和花毛茛的方式相同(李洪忠等 2004)。在培
养基(1)、(3)中, 随着 2,4-D、NAA浓度的增加, 出
现愈伤组织时间短, 出愈率高; 当 2, 4-D超过2.0 mg·L-1
或NAA超过 1.5 mg·L-1时, 愈伤组织呈褐黄色, 并
很快褐化死亡。而在培养基(2)上, 愈伤组织出现
较晚, 愈伤量小, 出愈率低, 愈伤组织深黄色且较硬
实, 增殖较慢甚至不增殖。比较培养基(1)、(3)中
愈伤组织生长状况发现, 首先, 从外植体种类来看,
叶柄的出愈率明显大于叶片的; 其次, 从生长调节
物质作用来看, 2,4-D诱导愈伤组织的作用大于
NAA。总之, 愈伤组织诱导的实验结果表明, 在培
养基MS+2,4-D 1.0+6-BA 0.5上叶片愈伤诱导效果
最好, 诱导率为 28.72%; 在培养基MS+NAA 1.5+
6-BA 2.0上, 叶柄愈伤诱导效果最好, 诱导率为
64.56%。且用培养基MS+2,4-D 0.5+6-BA 0.5和培
养基MS+NAA 0.5+6-BA 2.0作为继代培养基, 愈伤
组织增殖较快且呈致密状态, 每20 d左右继代一次,
可继代增殖 3~4次后转入不定芽分化培养基中。
4.3 不定芽的分化和增殖 选取质地较紧的愈伤组
织切分成 1 cm×1 cm大小, 继代于培养基(4)中, 继
代 15 d后, 有绿色芽点分化。在NAA 0.2 mg·L-1
的培养基中, 芽分化的同时出现根的分化; 在NAA
1.0 mg·L-1的培养基中, 愈伤组织褐化严重, 部分愈
伤组织分化出畸形的叶和芽。在培养基MS+NAA
0.5+6-BA 0.5中, 芽的分化效果最好(图 1), 分化率
高达 80%。将分化出的芽点转移至培养基(5)中,
芽在MS+NAA 0.1+6-BA 0.5中长势好, 分化快, 20 d
后芽增殖倍数达 7.32。随着NAA浓度的增加, 不
定芽叶片逐渐呈现黄色, 当NAA浓度达 0.5 mg·L-1
时, 新生丛生芽生长状态差且少许叶片枯萎。
4.4 生根 待芽长到5 cm左右高时, 将芽切下, 转接
到培养基(6)、(7)中, 培养 20 d后, 所有幼苗基部
均有白色根产生, 但随着NAA、IBA浓度的增加,
幼苗基部出现愈伤组织、叶片逐渐枯萎。当NAA
0.1 mg·L-1或 IBA 0.2 mg·L-1时, 幼苗基部有较多丛
植物生理学通讯 第 45卷 第 1期，2009年 1月4 6
生根产生, 两者对根的生长无明显差别, 生根率均
达 90%以上(图 2)。
图 1 耧斗菜愈伤组织的分化
图 2 耧斗菜的生根
4.5 试管苗的炼苗与移栽 试管苗在生根培养基中
生长 30 d左右、生长健壮时进行移栽。移栽前,
将培养瓶绳头解开, 保留密封膜培养 1 d后, 将培
养瓶密封膜打开, 置于室内自然光下炼苗3~5 d, 然
后将试管苗从瓶中取出, 清水冲净根表面的培养基,
移入蛭石:沙土:腐殖土=1:1:1混合的基质中, 保湿遮
荫。成活率高达 8 0 % 以上。
5 意义与进展 耧斗菜是毛茛科(Ranunculaceae)耧
斗菜属植物。是一种耐寒的多年生宿根草本植
物。花型独特、色彩丰富、花期较长( 5~ 7 月) ,
具有较高观赏价值, 广泛运用于园林绿化、家居绿
化和切花。此外, 耧斗菜的各种器官还有不同的作
用: 其根含糖类物质, 可制饴糖或酿酒; 种子含油,
其植株中含有的黄酮素、皂苷成分, 有较高的药用
价值。耧斗菜主要靠播种和分株繁殖, 而其发芽
率、圃地出苗率和分株繁殖系数都较低, 来年的成
花受播种时间影响, 不能满足生产需求。组培技术
可以加快耧斗菜快速繁殖, 或许可以解决上述问
题。耧斗菜的组织培养尚未见报道。
参考文献
何小玲, 王金发(1998). 大花飞燕草的组织培养及植株再生. 植物
生理学通讯, 34 (1): 39
李洪忠, 彭世勇, 于艳, 冯艳秋, 关丽霞, 林海静(2004). 花毛茛叶
片组织培养的初步探索. 辽宁农业职业技术学院学报, 6 (3): 4