全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2015, 51 (12): 2239~2246　　doi: 10.13592/j.cnki.ppj.2015.0360 2239
收稿 2015-09-10　　修定 2015-10-30
资助 上海市种业发展项目[沪农科种字(2013)第13号]、上海市
科学技术委员会科研计划项目(13395800300)。
* 共同通讯作者(E-mail: yaoquanhong88@163.com, Tel:
021-62203180; E-mail: zhangzh@njau.edu.cn, Tel: 025-
84395724)。
八棱海棠MdPPO2B基因的表达及功能分析
沈雪芳1,2, 韩晴2, 高建杰3, 彭日荷3, 王波3, 高志红1, 姚泉洪1,3,*, 章镇1,*
1南京农业大学园艺学院, 南京210095; 2上海市农业科学院作物育种栽培研究所, 上海201403; 3上海市农业科学院生物技术
研究所, 上海201106
摘要: 多酚氧化酶(PPO)是一种含多个铜离子的氧化还原酶, 可催化酚类物质氧化为醌类物质。我们从八棱海棠中克隆到
一个PPO的同源基因MdPPO2B, 构建该基因酵母分泌表达载体并转化到毕赤酵母GS115中。SDS-PAGE电泳结果显示, 表
达蛋白MdPPO2B的分子量约为66.4 kDa。以邻苯二酚作为底物, 该酶的最适pH和温度分别为6.5和40 ℃。除Cu2+、Na+、
Mg2+和Li+外, 4 mmol·L-1的Fe3+、Zn2+、Mn2+对酶活力表现出较强的抑制作用。在最适条件下, 当苯酚浓度达600 μmol·L-1
时, 反应4 h, MdPPO2B表达菌株可降解80%的苯酚。表明该基因在工业污水处理中具有广阔的应用潜力。
关键词: 多酚氧化酶; 八棱海棠; 酶学性质; 苯酚降解
Expression and Functional Analysis of MdPPO2B from Malus robusta
SHEN Xue-Fang1,2, HAN Qing2, GAO Jian-Jie3, PENG Ri-He3, WANG Bo3, GAO Zhi-Hong1, YAO Quan-Hong1,3,*,
ZHANG Zhen1,*
1College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2Crop Breeding and Cultivation Research
Institute, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China; 3Agro-Biotechnology Research Center, Shanghai
Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China
Abstract: Polyphenol oxidase (PPO) is one of oxidoreductase enzymes, which catalyzes the phenols to diqui-
nones. A putative PPO gene (MdPPO2B) was cloned from Malus robusta and exogenously expressed in Pichia
pastoris GS115. SDS-PAGE showed that MdPPO2B has a molecular mass of approximately 66.4 kDa. With
catechol as substrate, it was showed that the optimum pH and temperature for MdPPO2B was 6.5 and 40 ℃,
respectively. Except for Cu2+, Na+, Mg2+ and Li+, Fe3+, Zn2+ and Mn2+ inhibited the enzyme activity at a concen-
tration of 4 mmol·L-1. The MdPPO2B degraded 80% phenol after incubated for 4 h under the optimum condi-
tion. In short, our original research on MdPPO2B may provide reference for the application of microorganism
in industrial wastewater.
Key words: polyphenol oxidase; Malus robusta; enzymatic characteristics; phenol degradation
八棱海棠(Malus robusta Rehd.)又名海红, 蔷
薇科苹果属落叶乔木, 是苹果属乔木山定子和海
棠果的杂交种, 至今已有千余年的栽培历史。八
棱海棠根系发达, 植株强壮, 具有抗寒抗旱、耐盐
碱和耐贫瘠等特点, 常作为苹果嫁接的砧木。众
多研究表明, 苹果等水果的褐变现象是其体内释
放的酚类物质在多酚氧化酶(polyphenol oxidase,
P P O )的作用下氧化产生醌类的结果 (李萍等
2008)。褐变不仅影响果蔬的风味、营养、加工和
外观品质, 而且还降低耐贮性。
PPO是一类含铜的膜结合蛋白, 可以催化一
元酚转化为二元酚, 二元酚再氧化为醌类物质。
PPO广泛分布于植物体内的质体中, 是六大酶中第
一大氧化还原酶。根据PPO催化的底物不同和底
物中酚羟基的位置和数目可以将PPO分为三大类:
单酚氧化酶、双酚氧化酶和漆酶(Park等1997;
Kruger等1994; Hatcher和Kruger 1993)。PPO基因
已从苹果、茶树、草莓、马铃薯、茶叶、莲、莲
藕、鸭梨、紫竹、香蕉、橄榄等植物中克隆获得,
并在序列和生物信息学分析方面展开研究, 但相
关的功能研究并不多(Beecher和Skinner 2011; John
等2011)。韩国延世大学(Yonsei University)的Kim
等(2001)克隆了一个苹果PPO基因, 并进行了初步
的表达模式分析。Hunt等(1993)、Shallar (1992)、
植物生理学报2240
Cary等(1992)分别克隆出2个编码番茄分生组织
66.3 kDa的PPO基因(cP2/A7、gP2/B)、2个编码蚕
豆叶片68 kDa的PPO基因(pPPO-A1和pPPO-B5)、
2个编码马铃薯叶片67 kDa的PPO基因(PPO-P1和
PPO-P2)。
PPO作为氧化还原酶, 参与植物色素的生成
并且还与植物抗逆、生长发育有关, 可能促进乙
烯的代谢。此外 , 人们还发现了PPO在光合作
用、抗病虫等方面的生理功能。PPO可催化木质
素及醌类化合物形成, 构成保护性屏障而使细胞
免受病菌的侵害(马长青等2013)。PPO是酚酸类
物质降解的关键酶(程鹏等2013), 可以催化一元
酚转化为二元酚, 二元酚再氧化为醌类物质。酚
类有机污染物的微生物修复就是利用这一特性,
达到降解有毒酚类的作用。本研究首次从八棱海
棠克隆到一个PPO的同源基因MdPPO2B, 将其转
化到毕赤酵母菌株GS115中, 成功地筛选到阳性
克隆菌株。以收集到的粗酶液为材料, 对其蛋白
进行纯化, 研究其酶学性质、动力学和酚类物质
降解, 旨在为研究分泌表达八棱海棠PPO基因的
毕赤酵母工程菌株对有机污染物的分解功能以
及果蔬生产和加工过程中的褐化现象提供理论
依据。
材料与方法
1 材料
巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115
购自Invitrogen (USA); 转毕赤酵母的MdPPO2B阳
性表达菌株为本实验室筛选。丙烯酰胺(acryl-
amide)、甲叉双丙烯酰胺(bis-acrylamide)和尿素
(urea)购自Sigma Chemical公司。胶回收试剂盒
(QIAquick Gel Extraction Kit)购买于Qiagen公司。
酵母培养基BMY以及其他培养基都是按照毕赤酵
母表达指南(Invitrogen, USA)进行配制。电击仪器
Bio-Rad Genepulser购自美国Hercules。其他化学
试剂购买于上海国药公司(Sinopharm Chemical
Reagent)。
2 MdPPO2B基因克隆
八棱海棠多酚氧化酶基因MdPPO2B的克隆
采用RT-PCR技术, 抽提八棱海棠幼苗的总RNA, 反
转录合成cDNA, 以合成的cDNA第一链为模板, 加
入1对特异引物, 进行RT-PCR扩增。MdPPO2B基
因的扩增引物为: R23853, 5′-GAATTCGGATC-
CATGACTTCATCTCCCTTACC-3′; R23854,
5′-GAGCTCTTAGGTAGTATTAATCAGCTCAAT-
GCTAAACCCTCCGATGG-3′。RT-PCR扩增反应
体系为20 μL。反应程序如下: 95 ℃预变性3 min;
95 ℃变性30 s, 59 ℃退火30 s, 72 ℃延伸90 s, 30个
循环; 72 ℃延伸10 min。将回收的PCR产物和
pMD18-ST载体连接, 转化大肠杆菌, 挑取白色阳
性菌落并进行酶切鉴定, 最后测序验证目的基因
的序列准确性。
3 毕赤酵母转化
将带有MdPPO2B基因的表达载体pPIC9K进
行SalI单酶切, 使其线性化, 然后通过电击方法转
化进酵母细胞内。将毕赤酵母细胞涂布于选择培
养基(SD+0.8 mol·L-1山梨醇+5%葡萄糖+2%琼脂)
上, 置于28 ℃培养72 h。用接菌棒接种单菌落到40
孔板内, 加入50 μL BMY进行甲醇诱导蛋白表达,
甲醇终浓度为1%, 250 r·min-1震荡培养24 h后, 每
隔1 d取一次上清液, 用邻苯二酚溶液进行阳性测
定, 筛选出活性最高的菌株。
4 MdPPO2B的纯化和活性测定
采用硫酸铵沉淀法纯化MdPPO2B蛋白。在4
℃条件下, 边搅拌菌体裂解液, 边缓慢加入硫酸铵
粉末, 至终浓度为75%左右, 使蛋白沉淀。透析袋
在使用前煮沸15 min。将沉淀得到的蛋白质液装
入透析袋中, 用0.02 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 7.0)
透析24 h, 期间更换3次缓冲液。16 099×g离心25
min, 得到的上清液即为PPO粗液。在4 ℃冰箱中
将酶液注入镍柱纯化 , 纯化时 , 洗涤缓冲液0.6
mol·L-1 NaCl、20 mmol·L-1磷酸钠盐缓冲液、50
m m o l · L - 1咪唑 , p H 7 . 5 ; 结合缓冲液为含1 0
mmol·L-1咪唑、20 mmol·L-1磷酸钠盐缓冲液, pH
7.5; 溶解缓冲液含0.6 mol·L-1NaCl、20 mmol·L-1
磷酸钠盐缓冲液、250 mmol·L-1咪唑, pH 7.5。
测定PPO活性时, 150 μL的酶促反应体系含50
μL 0.2 mol·L-1磷酸缓冲液(pH 6.0)、50 μL 0.1
mol·L-1的反应底物邻苯二酚、酶液50 μL, 在40 ℃
水浴中反应10 min, 然后置于冰上终止反应。在
420 nm处测得对邻苯二酚底物的氧化量。1个PPO
单位(U)是1 min转化1 μmol·L-1邻苯二酚, 使产物邻
沈雪芳等: 八棱海棠MdPPO2B基因的表达及功能分析 2241
苯二酚自由基浓度从a增加至b (张鹏2007)。酶活
力计算公式如下: 酶活力=[1 000×0.1844×(A2−
A1)×60×稀释倍数]/t。其中, A1和A2分别为反应开
始和结束时的吸光值, t为反应时间, 酶活力单位为
U·min-1·mg-1 (蛋白)。
5 MdPPO2B的酶学性质测定
5.1 最适pH和温度
采用蛋白粗酶液, 以邻苯二酚为底物, 分别配
制0.2 mol·L-1 Na2HPO4和0.1 mol·L
-1柠檬酸(pH
2.2~5.5)、0.2 mol·L-1磷酸缓冲液(pH 6.0~8.0)。反
应时间10 min。150 μL的反应体系中含不同pH值
的缓冲液50 μL、邻苯二酚(0.1 mol·L-1) 50 μL、酶
液50 μL。最适温度采用10、20、30、40、50、
60、70、80 ℃共8个温度梯度, 反应体系同最适
pH, 对照使用100 ℃反应30 min的失活酶液。计算
3次重复的相对酶活力(Krzysztof等2009), 取平
均值。
5.2 温度稳定性
将酶液分别置于30、40、50 、60 ℃水浴中,
反应0、10、20、30、40、50和60 min后,迅速放
于冰上终止反应, 于4 ℃下11 180×g离心5 min。其
他操作参照第4节,计算3次重复的相对酶活力, 取
平均值。
5.3 金属离子和抑制剂对酶活影响
采用0.2 mol·L-1磷酸缓冲液(pH 6.0)配制终浓
度为4 mmol·L-1的KNO3、CaCl2、LiCl、NaCl、
C u S O 4、M g S O 4、F e C l 3、F e S O 4、Z n C l 2和
MnSO4。研究不同抑制剂对PPO影响时, 使用的化
合物为二硫苏糖醇(DTT)、抗坏血酸(VC)、柠檬
酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、L-半胱氨酸、NaCl、
醋酸, 选用0.5、1、10 mmol·L-1三个浓度, 分别用
0.2 mol·L-1磷酸缓冲液(pH 6.0)配制。其他操作参
照第4节, 以最大酶活力为100%, 计算3次重复的相
对酶活力, 取平均值。
5.4 MdPPO2B底物的特异性
以邻苯二酚和焦性没食子酸为底物, 反应体
系为150 μL, 其中酶液10 μL, 邻苯二酚和焦性没食
子酸的浓度为0.1~1 mmol·L-1 (Kátia等2008)。缓冲
液使用pH 6.0的磷酸盐缓冲液。以100 ℃反应30
min后不具有活性的酶液作为对照。反应前40 ℃
活化10 min, 再将底物加入到混合液中。参照上述
步骤测定酶活。邻苯二酚和焦性没食子酸分别在
420和334 nm处测定吸光值, 以OD420和OD334制作
饱和曲线 , 然后根据双倒数作图法绘制米氏曲
线。重复3次反应, 取平均值。
6 苯酚的降解
将表达MdPPO2B的酵母和空载体pPIC9K的
对照酵母菌液OD值调至0.1, 吸取5 μL接种于
BMY平板上(含终浓度1%甲醇、1%甘油和3种
不同浓度酚类化合物), 于27 ℃培养2 d左右, 每
隔24 h加入甲醇诱导。3种酚类物质分别为8.5
mmol·L-1苯酚、45 µmol·L-1 2,4,6-三氯苯酚(tri-
chlorophenol, TCP)和4 mmol·L-1 2,6-二甲基苯酚
(dimethylphenol, DMP)。
用高效液相色谱技术(high performance liquid
chromatography, HPLC)检测PPO降解苯酚的效
果。 2 0 0 μ L的反应体系包括酶液 5 0 μ L、 4
mmol·L-1的CuSO4、0~10
000 μmol·L-1的苯酚。缓
冲液使用pH 6.0的磷酸盐缓冲液。40 ℃反应8 h,
每隔1 h分析苯酚降解效率。分析柱为C18反相柱,
微孔滤膜过滤反应混合液后进行HPLC分析。
HPLC分析条件为: 流动相为甲醇和水(30:70, V/V),
流动相流速为1 mL·min-1, 柱温为30 ℃。进样量为
20 μL, 检测波长为225 nm。
图1 SDS-PAGE检测MdPPO2B
Fig.1 Detection of MdPPO2B by SDS-PAGE
M: 蛋白分子量Marker; E: 纯化的蛋白。
植物生理学报2242
图2 MdPPO2B基因cDNA全长序列及其推导的氨基酸序列
Fig.2 cDNA sequence and deduced amino acid sequence of MdPPO2B
沈雪芳等: 八棱海棠MdPPO2B基因的表达及功能分析 2243
实验结果
1 MdPPO2B的分离纯化
使用硫酸铵对粗酶液进行浓缩和沉淀, 用镍
柱低温纯化沉淀到的粗酶, 获得纯化的重组蛋白,
用于12% SDS-PAGE电泳验证蛋白分子量。结果
显示, 纯化后的重组蛋白条带单一, 并且大小与生
物信息学预测相一致(图1)。说明MdPPO2B基因
在以酵母菌株GS115作为宿主的分泌表达系统中
转化和表达成功。用Bradford染料结合法对纯化
后的蛋白进行蛋白定量, 经测定MdPPO2B的蛋白
含量为0.0302 mg·mL-1。经PCR扩增后, 最终得到
长度为1 773 bp的cDNA序列, 可翻译一条由586个
氨基酸残基组成的多肽, 阴影部分为推测的分泌
信号肽序列(图2)。
2 MdPPO2B最适pH值
由图3可见, 当酶反应体系pH为6.5时, 酶活力
到达最高, 为100%, 即MdPPO2B的最适pH为6.5;
当体系pH低于6.0或高于7.0时, 酶活力逐渐下降;
pH值为3.5时, 酶活力趋于0, PPO基本丧失酶活
力。说明MdPPO2B最适pH为中性或近中性。
3 MdPPO2B的最适温度和热稳定性
如图4-A所示, MdPPO2B最适温度呈倒钟型
形状, 在30~50 ℃范围内, 仍保持较高的酶活, 当酶
反应温度为40 ℃时, 酶活力到达最高, 为100%, 即
该酶的最适反应温度为40 ℃。MdPPO2B酶液经
30、40、50、60 ℃共4个温度处理60 min, 每10
min测一次残余酶活。MdPPO2B在30~40 ℃可以
保持较高的稳定性, 30和40 ℃处理60 min后, 仍能
保持90%的酶活; 50 ℃下处理60 min后, MdPPO2B
剩余酶活力为40%; 当温度达60 ℃时, MdPPO2B的
活性迅速降低, 为20%左右。这说明MdPPO2B的
热稳定性较差, 不耐热(图4-B)。
4 金属离子和抑制剂对MdPPO2B活力的影响
不同金属离子对MdPPO2B活性的影响如图
5-A所示, 与不添加金属离子的对照相比, 反应体
系中添加4 mmol·L-1的Cu2+、Na+、Mg2+和Li+对酶
活力表现出较强的促进作用, 残余的酶活力分别
是170%、120%、120%、120%左右, 其中Cu2+促
进作用最强; 4 mmol·L-1的Fe3+、Zn2+、Mn2+对酶活
力表现出较强的抑制作用, 残余酶活分别是20%、
30%、20%; 反应体系中添加Ca2+的相对酶活力为
98%左右, 说明该离子对酶活力影响不大。
由图5-B可见, 0.5 mmol·L-1浓度下的大多数抑
制剂对酶活力影响不大, 而在添加柠檬酸的条件
下酶活率仍然高达50%以上; 当抑制剂浓度达到
1 mmol·L-1时, EDTA、柠檬酸对MdPPO2B活性的
影响较大, 可抑制50%以上的酶活力, 其中柠檬酸
对MdPPO2B活性抑制率达到80%左右, 表现出明
显的抑制作用 , 而添加NaCl后依然能保持几乎
100%的酶活力; 当抑制剂浓度达到10 mmol·L-1时,
除NaCl和醋酸外, 其余抑制剂酶活抑制率达50%
以上。
5 MdPPO2B两种底物的酶动力学参数
根据PPO底物具有非特异性且种类多的特点,
以最常用的PPO底物邻苯二酚、焦性没食子酸来
图3 pH值对MdPPO2B活力的影响
Fig.3 Effect of pH on MdPPO2B activity
图4 温度对MdPPO2B活力(A)和稳定性(B)的影响
Fig.4 Effect of temperature on activity (A) and stability (B) of
MdPPO2B
植物生理学报2244
研究MdPPO2B动力学参数。通过Linewear-Burk
作图法分别以邻苯二酚和焦性没食子酸为底物测
定Km、Vmax及Vmax/Km等参数。Km值反映了酶和各
种底物的亲和力大小, 大多数酶的Km值在10
-6~10-1
mol·L-1, Km值越小, 酶与底物的亲和力越大。从表
1可以看出, 以邻苯二酚和焦性没食子酸作为底物
时 , M d P P O 2 B的K m值分别为0 . 1 6 1和7 . 9 2 0
mmol·L-1, 表明邻苯二酚可与MdPPO2B较强地结
合, 是MdPPO2B的最适底物。
6 MdPPO2B对苯酚的降解
比较转MdPPO2B基因和pPIC9K空载体的酵
母菌株对苯酚、2,4,6-TCP、2,6-DMP三种酚类
化合物的降解能力, 结果表明: 在含有甲醇的SD培
养基上 , 两种酵母菌株都生长正常 , 而在含苯
酚、2,4,6-TCP、2,6-DMP的平板上, 转入空载体
pPIC9K的酵母菌株生长受到了抑制 , 而表达
MdPPO2B的酵母菌株仍保持正常的生长趋势(图
6-A)。HPLC分析的结果显示, 随反应时间增加,
反应体系中苯酚残余量在下降。当苯酚浓度为
600 μmol·L-1, 反应时间1 h时, 苯酚残余量为50%
左右; 当反应4 h时, 苯酚残余量仅剩20%左右,
降解效果显著(图6-B)。这说明MdPPO2B提高了
毕赤酵母对这些酚类化合物的抗性。
讨　　论
酶是具有生物活性的蛋白质, 其活性与环境
pH值关系密切。pH主要通过以下过程影响酶活
力: (1) pH过酸或过碱影响蛋白构象, 从而使酶变
性失活; (2)当pH变化不剧烈时, 会影响酶分子的解
离状态; (3) pH会影响分子中某些基团的解离, 这
些基团的离子状态与酶活力中心构象和酶的专一
性密切相关。酶学特性研究表明, MdPPO2B对pH
图5 不同金属离子(A)和抑制剂(B)对MdPPO2B活力的影响
Fig.5 Effect of metal ions (A) and inhibitors (B) on MdPPO2B activity
*: P<0.05; **: P<0.01。
沈雪芳等: 八棱海棠MdPPO2B基因的表达及功能分析 2245
的变化较敏感, 强酸或强碱环境均影响酶的催化
反应。MdPPO2B在酸性条件下的活性较低, pH
3.5~5.5处相对酶活不足20%。
利用褐变抑制剂处理是目前果蔬贮藏和加工
过程中抑制果蔬褐变最常用的方法之一(Bhande等
2007), 关于抑制酶促褐变的化合物很多, 且很小的
剂量就可以使酶彻底失活。但相当一部分抑制剂
会产生有毒物质, 如亚硫酸盐能产生对人体有毒
物质SO2, 剂量必须严格控制在一定范围内, 且有
时因为浓度而效果不理想, 一般不提倡使用。本
研究发现, 使用抗坏血酸和L-半胱氨酸、柠檬酸等
对PPO活性的抑制效果较好。考虑到抗坏血酸、
L-半胱氨酸存在于大部分果蔬中且是人体健康不
可缺少的营养成分, 生产成本低, PPO活力抑制效
果理想, 适宜作为八棱海棠加工过程中PPO的抑制
剂。另外, 有研究发现ClO2对苹果PPO有明显的抑
制作用(Fu等2007), 高压二氧化碳处理能大大降低
甜菜PPO的热稳定性(Liu等2008), 而γ-射线对新鲜
甘蓝汁PPO的活力没有影响(Kim等2007)。
金属离子一般以酶的辅助因子和激活剂两种
形式参与酶促反应, 通过检测不同金属离子对八
棱海棠PPO活性影响, 发现金属离子不同对PPO酶
活力抑制效果各不同, Cu2+、Mg2+对PPO酶活力有
促进作用, 而Zn2+、Ca2+、Fe3+则抑制酶活力。张
力等(1998)研究发现Fe2+离子对漆酶的催化活性表
现出抑制作用, 并研究了抑制位点和抑制特点, 与
本研究结果不一致。柠檬酸之所以对PPO活性产
生抑制作用, 是因为PPO是一种以铜离子为辅基的
金属蛋白, 柠檬酸中的3个羧基与PPO的铜离子发
生螯合作用, 达到抑制酶活力的目的; 其次, 柠檬
酸通过调节反应体系的pH, 使得八棱海棠PPO远
离最适作用范围而活性降低。金属离子对八棱海
棠PPO活性的影响较复杂, 从中找不到可循规律,
但它们间的关系紧密, 其与酶作用的具体机理尚
需进一步研究。
生产中, 酚类化合物普遍存在于如炼钢、石
油炼制、塑化、造纸、医药、农用化学品、印染
等行业的工业废水中(Ha等2000; Grady 1990)。酚
类化合物经过糖基化作用后, 对生物体的毒性一
般都降低。表达MdPPO2B基因的酵母菌对苯
酚、2,4,6-TCP、2,6-DMP的抗性要高于转入
pPIC9K空载体的酵母菌。这可能由于MdPPO2B
基因对酚类化合物产生糖基化作用后降低了对酵
母菌的毒性。关于微生物降解酚类化合物的研究
已见报道, 并且成效显著。Gaitan等(2011)的研究
表明, 当浓度为15 mg·L-1的2,4,6-TCP反应4 h后, 来
自Trametes pubescens的漆酶降解率达到84.2%。
在本研究中, 当苯酚浓度增加至600 μmol·L-1时, 4
h后MdPPO2B的苯酚降解率达80%左右, 降解浓度
远远高于前者, 且该酶具有很好的稳定性和持久
表1 以邻苯二酚和焦性没食子酸为底物的MdPPO2B动力学参数
Table 1 Kinetic constants of MdPPO2B with catechol and pyrogallic acid as substrate
底物 Km/mmol·
L-1 Vmax/U·min
-1·mg-1 (蛋白) Vmax/Km
邻苯二酚 0.161 6 714.00 4 1613.62
焦性没食子酸 7.920 0.93 0.12
图6 含MdPPO2B基因的酵母菌株对酚类化合物的降解效果
Fig.6 Phenolic compounds were degradated by yeast strain
containing MdPPO2B
A: SD板上的降解效果; B: HPLC分析。
植物生理学报2246
性。总之, 对MdPPO2B基因的研究可以为以后的
植物污染物修复提供重要的参考依据。
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