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唐古特大黄的离体快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 40 卷 第 2期,2004 年 4 月202
收稿 2003-04-23 修定   2003-11-03
资助 中国科学院“西部之光”项目(2000 年度)和国家中西
部专项基金(2001BA901A47)。
* 通讯作者(E-mail:gcchen@mail.nwipb.ac.cn,Tel:0971-
6143523)。
唐古特大黄的离体快速繁殖
徐文华 王莉 李毅 陈桂琛*
中国科学院西北高原生物研究所,西宁 810001
In vitro Rapid Propagation of Rheum tanguticum
XU Wen-Hua, WANG Li, LI Yi, CHEN Gui-Chen*
Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences, Xining 810001
1 植物名称 唐古特大黄 (Rheum tanguticum), 又
名鸡爪大黄。
2 材料类别 无菌种子苗。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1)MS无激素培养
基。前期分化培养基:(2)MS+2,4-D 1 mg.L-1(单位
下同)+KT 1+ZT 0.5+6-BA 0.5。后期分化培养基:
(3)MS+ 2,4-D 1+KT 2+ZT 0.5+6-BA 1。以上3种培
养基均附加CH 300、肌醇200、3% 蔗糖、5 g.L-1
琼脂粉。生根培养基:(4)MS+NAA 1+3 % 蔗糖;
(5)1/2MS+NAA 1+3% 蔗糖;(6)1/2MS+NAA
0.5+1.5% 蔗糖;(7)1/2MS + NAA 0.5+3%蔗糖;
(8)1/2MS+NAA 1+1.5% 蔗糖。pH 5.8。培养温度
为(25±1)℃,光源为日光灯,光照度为2 000~
3 000 lx,光照时间12 h.d-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌种子苗的培育 唐古特大黄种子在52℃的
水浴锅内恒温浸泡12 min后,置冷蒸馏水中5~6
h。在超净工作台上,将处理过的种子用 0.2% 的
HgCl2 溶液浸泡灭菌10~12 min,无菌水冲洗4~5
遍,接种到培养基(1)上。培养1周后种子开始发
芽,再过5~7 d萌发成长为具有2片子叶的无菌幼
苗,备用。
4.2 丛生芽的诱导 将种子萌发2片子叶未伸展的
无菌幼苗接种到培养基(2)上进行光照培养,子叶
伸展变绿,幼苗长大,3 周后开始芽的分化,分
化出 2~5 个芽。
4.3 快速繁殖 将丛生芽切割,接种到培养基(3)
上,3 周后即可形成大量的丛生芽,平均达到
8.75个,芽数明显多于培养基(2)上的芽数。将丛
生芽再切割在培养基(3)上继代培养,即可继续不
断得到大量丛生芽。
4.4 根的诱导和植株再生 将增殖形成的高2.0~
3.5 cm的粗壮芽分割成单芽,分别转接到培养基
(4)~(8)上诱导生根。2周后,培养基(7)上芽基部
形成少量愈伤组织,根原基变白、突起,根开
始长出,1 个月后有 4~5 条白色小根长出,长达
2~3 cm,形成一株健壮的再生小植株。培养基
(5)上试管苗第30天开始长根;(6)、(8)上第35天
开始长根;(4)上 45 d后开始长根,形成粗壮根。
培养基(4)~(8)上的生根率分别为 80%、100%、
87. 5 %、88. 8 %、50%。
4.5 移栽 在苗根长至3~4 cm时,将培养瓶的封
口膜揭开,在室温下炼苗5~7 d后,取出试管苗,
洗净其根部附着的琼脂,将其根部浸泡在双蒸水
中,同时罩一玻璃罩,注意通风。1 周后移栽到
瓦盆内,保持环境温度 20~25℃和空气相对湿度
75% 左右。后期逐渐通风,增加光照,2~3 d 浇
自来水 1 次。10 d 后幼苗成活率达 60%。
5 意义与进展 唐古特大黄属蓼科大黄属,为药
用大黄(亦称“正品大黄”)之一,多年生粗壮草
本,产于西藏东部、青海、甘肃,是我国著名
的特产药材之一。在医药上主要用于治疗血症、
痰饮、解毒、泻火、清热、导滞、攻积及通
宣气机等。长期以来,大黄的生产一直依赖野生
植物的采收,其资源得不到有效的保护,已陷入
濒危灭绝的境地。作为市场紧缺的名贵中药,其
需求量已呈现供不应求的趋势。采用组织培养技
术进行快速繁殖可在短期内生产大量种苗。本文
采用组织培养技术,通过无菌幼苗分化芽的途径
进行快速繁殖,保持了优质大黄的遗传性,这为
唐古特大黄药材生产的产业化提供了可能的新途
径。以无菌幼苗为外植体离体快速繁殖唐古特大
黄,尚未见报道。