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火焰兰杂交种的胚培养和离体快繁



全 文 :植物生理学通讯 第41卷 第3期,2005年6月 345
火焰兰杂交种的胚培养和离体快繁
曾宋君 林丹妮 陈之林 黄向力 段俊*
中国科学院华南植物园,广州 510650
Tissue Culture of Embryos and In vitro Propogation of Renanthera Hybrid
ZENG Song-Jun, LIN Dan-Ni, CHEN Zhi-Lin, HUANG Xiang-Li, DUAN Jun*
South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China
收稿 2004-08-05 修定   2004-11-22
资助  中国科学院知识创新工程重要方向项目(kscx2- sw-
3 1 9 ) 、中国科学院华南植物所所长基金前沿项目
(20023301)、广州市科技计划项目(2004J1-C0201)。
*通讯作者(E-mail: duanj@scib.ac.cn,Tel: 020-37252978)。
1 植物名称 火焰兰杂交种(Renanthera coccinea ×
R. imschootiana)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发培养基:(1)VW;(2)VW+椰
子乳 100 mL·L-1;(3)KC;(4)KC+椰子乳 100 mL·L-1;
(5)VW+椰子乳 100 mL·L-1+活性炭2 g·L-1;(6)1/2
MS+ 椰子乳 100 mL·L-1。叶片离体培养基:(7)
VW+2,4-D 1.0 mg·L-1(单位下同)+6-BA 2.5+NAA
0.2;(8)VW+2,4-D 2.0+6-BA 5.0+NAA 0.5。原球
茎继代增殖:(9)花宝1号1.5 g·L-1+花宝2号1.5
g·L-1+椰子乳100 mL·L-1+6-BA 1.0+NAA 1.0;(10)
VW+椰子乳100 mL·L-1+6-BA 1.0+NAA 1.0。生根
壮苗培养基:(11) 花宝1号3 g·L-1+蛋白胨2 g·L-1+
活性炭2 g·L-1+NAA 0.5+6-BA 0.2;(12) 花宝1号
1 g·L-1+花宝2号1 g·L-1+蛋白胨2 g·L-1+活性炭2
g·L-1+NAA 0.5+6-BA 0.2。以上培养基均加1.5% 蔗
糖、0.6%琼脂,pH 5.2~5.4,培养温度(25±2)℃,
光照度1 500~2 000 lx,光照时间12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 将云南火焰兰(R. imschootiana)
的花粉人工授粉至火焰兰(R. coccinea)的柱头上,
150 d 左右荚果成熟,经自来水洗净后,用 70%
的酒精表面消毒30 s,再以0.1%的升汞溶液消毒
15 min,最后用无菌水冲洗5次。将洗净的荚果
置灭菌滤纸上吸干水分,用解剖刀切开荚果,将
种子散落到培养基上。
4.2 种子萌发 接种到培养基(1)~(6)上的种子,暗
培养 10~20 d 后,均可见白色原球茎突破种皮;
转入光下培养,1 周后原球茎转绿,5 周后原球
茎上端出芽。培养基(1)、(3)、(5)上的萌发率相
差不大,都在 60% 左右;培养基(2)、(4)、(6)上
的萌发率达 70% 以上,萌发速度和生长速度比培
养基(1)、(3)、(5)快。萌发后原球茎在(2)、(5)中
长势最好,(2)中生长较快,(5)中原球茎粗壮。生
产中可根据需要选择培养基(2)或(5)。
4.3 叶片诱导原球茎培养 切下种子萌发形成的实
生苗的幼叶培养在培养基(7)、(8)中。50 d左右,
(8)中叶片切口形成原球茎,(7)中65 d左右形成原
球茎。原球茎在(9)、(10)中均能继代增殖,(9)的
效果比(10)略好,40 d 左右增殖倍率可达到3。
4.4 壮苗和生根培养 将种子萌发和叶片初代培养
诱导的原球茎及小苗在培养基(1)~(6)上进行出芽和
壮苗培养,培养基(1)、(3)上原球茎形成植株,
不能增殖,小苗长高;(2)、(4)、(5)、(6)上原球
茎能够增殖并形成小苗,(5)的增殖效果最好,30
d左右能继代1次。将较大的无根小苗转入生根育
苗培养基(11)、(12)上培养,生根率达 100%。植
株生长旺盛,8 周后形成 4~6 cm 高的小苗,在
培养基(11)上比(12)根系发达,但植株较小。生
产中采用(12)作生根壮苗培养基为宜。
4.5 移栽 将培养瓶置于温棚中炼苗1周后,从培
养瓶中取出生根苗,洗净附着的培养基,将白水
苔用1 000倍多菌灵溶液浸泡1 h,挤干水分,包
裹出瓶苗根部,种植于直径 5 cm 小盆中。保持
适宜湿度,置于阴凉通风处栽培,期间不要浇
水。2 周后移入温棚栽培,进行正常水、肥、药
管理,成活率可达 1 0 0 %。
5 意义与进展 火焰兰为兰科火焰兰属植物,我国
仅有火焰兰、云南火焰兰、中华火焰兰 3 种,原
产云南、海南等地区。附生于树上,花序自叶
腋长出,着花可达 10 多朵或数十朵,花色艳丽,
具很高的观赏价值,特别是云南火焰兰为 CITES
公约附录 I 中的保护植物。我们试图用杂交育种
和离体快繁方法,培育花色更艳丽、抗逆性强的
花卉新品种,以充分利用我国的花卉资源。此两
种火焰兰的杂交及种子的离体快繁未见报道。