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唐古特大黄休眠芽诱导植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 40 卷 第 4期,2004 年 8 月 457
唐古特大黄休眠芽诱导植株再生
董相军 王莉* 徐文华 陈桂琛 李毅
中国科学院西北高原生物研究所, 西宁 810001
Plantlet Regeneration from Dormancy Buds of Rheum tanguticum
DONG Xiang-Jun, WANG Li*, XU Wen-Hua, CHEN Gui-Chen, LI Yi
Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences, Xining 810001
收稿 2003-09-16 修定   2004-01-18
资助  2000、2001 年度中国科学院“西部之光”人才培养
计划资金和 2003 年度农业科技成果转化资金项目。
* 通讯作者(E-mail:wang_lii@163.com, Tel: 0971-6101454)。
1 植物名称 唐古特大黄(Rheum tanguticum),又名
鸡爪大黄。
2 材料类别 休眠芽。
3 培养条件 分化培养基:以White、B5和190-2
为基本培养基,附加6-BA 1.0~3.0 mg·L-1(单位下
同)+NAA 0~0.2+ 肌醇 200+CH 300。增殖培养
基: MS+6-BA 3.0+NAA 0.1+ 肌醇 200+CH 300。
诱根培养基:MS+NAA 0.5+ 肌醇 200+CH 300。
上述培养基均附加3%蔗糖、0.5% 琼脂,pH 5.8。
培养温度为(20±1)℃,光源为日光灯,光照度为
2 000 lx,光照时间18 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 休眠芽的获得 取休眠期的大黄根,剥离根端
的干枯叶,用自来水流水冲洗去除泥土。在超净
台上用 75% 的酒精将根端的叶擦拭 3 遍,用无菌
解剖刀剥去外层芽苞,芽中的幼叶一层层剥离露
出芽点。将芽点切下接种在分化培养基上。
4.2 芽的诱导 接种3 d后外植体开始变绿,10 d
后外植体芽开始萌动生长。此后,逐渐有叶片生
长变绿,随着培养的进行外植体上的叶片增多。
30 d后在外植体与培养基接触的基部开始有绿色的
不定芽形成。不定芽生长较快,1 周左右就可以
生长出 3~4 片叶片而形成再生苗。有的外植体上
形成丛生苗。
4.3 芽的增殖 将分化培养基上形成的再生苗适当
分割后转接到增殖培养基上。3 周后,再生植株
的基部又可分化出不定芽和苗。分化培养基上形
成的丛生苗也不断有新苗产生。而且在增殖培养
基上无论是再生苗还是又形成的芽和苗生长都较
快,不断有绿色的新叶产生。每一培养周期再生
苗的平均增殖倍数为 3~4。
4.4 根的诱导 将增殖形成的苗丛分割成单苗,接
种在诱根培养基中。培养 20 d 左右逐渐有根产
生,40 d 后有 80% 的再生植株形成根。有的植
株上形成 2 条根。再生植株上的根由主根和侧根
形成根系,整个根系呈圆锥型(图 1)。
4.5 移栽 将瓶口敞开,让生根的植株在室温下炼
苗 1 d。之后,取出苗,洗净培养基,于蒸馏水
中浸泡 2 d,移入沙质土壤中,保温、保湿、通
风。移栽的成活率达 8 3 % 以上。
5 意义与进展 唐古特大黄属蓼科大黄属植物,生长
在海拔 1 700~4 400 m 的山坡、山谷湿地等处。
大黄是我国特产的世界著名传统中药,具有泻热
通肠、凉血解毒、利胆退黄等功效。青海是大
黄的主要产区,但近十几年来由于过度采挖和垦
荒,大黄的野生资源破坏严重。特别是某些正品
大黄在许多地区已处于野生灭绝状态。大黄的繁
殖主要通过种子进行,以休眠芽为外植体有利于
保持优良品系。本文结果对濒危大黄品种的繁
殖、品种改良和应用基因工程技术培育抗虫或抗
病新品种都有参考价值。国内外的研究主要集中
于大黄特征、化学成分和药理方面,而未见有关
大黄快速繁殖的研究报道。
图1 唐古特大黄的再生苗