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喜树不定芽的诱导及植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 40卷 第 5期,2004年 10月 579
喜树不定芽的诱导及植株再生
陈颖* 曹福亮 李淑娴 谢寅峰
南京林业大学森林资源与环境学院, 南京 210037
Adventitious Bud Induction and Plantlet Regeneration of Camptotheca acuminate
CHEN Ying*, CAO Fu-Liang, LI Shu-Xian, XIE Yin-Feng
College of Forest Resource and Environment, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037
收稿 2003-11-13 修定   2004-07-06
* E-mail:chenying@njfu.edu.cn,Tel: 025-85427323
1 植物名称 喜树(Camptotheca acuminate),别名
旱莲木。
2 材料类别 一年生喜树带芽茎段。
3 培养条件 芽诱导培养基:(1)MS+NAA 0.05
mg· L-1(单位下同)+6-BA 1.0。芽增殖培养基:(2)
MS+NAA 0.1+6-BA 0.5;(3)MS+NAA 0.1+ 6-
BA 1.0;(4)MS+NAA 0.1+6-BA 2.0;(5)MS+NAA
0.5+6-BA 0.5;(6)MS+NAA 0.5+6-BA 1.0;(7)
MS+NAA 0.5+6-BA 2.0。壮苗培养基:(8)MS+
NAA 0.05+6-BA 0.1~0.5。生根培养基:(9)1/2
MS+NAA 0.1+IBA 1.0;(10)1/2MS+NAA 0.5+IBA
1.0;(11)1/2MS+ NAA 1.0+IBA 1.0。 以上所有培
养基均附加6.5 g·L-1琼脂、30 g·L-1蔗糖,pH值为
5.9。培养温度为 (25±2)℃,光照度为 1 000~2 000
lx,光照时间14 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 茎段腋芽的诱导 剪取一年生喜树枝条,去叶,
洗净,流水冲洗4 h,70% 酒精消毒30 s,无菌
水冲洗后用0.1% HgCl2 消毒4~5 min,消毒时加1~2
滴吐温-20。无菌水冲洗4~5次,无菌滤纸吸干水
分,剪成1 cm左右带一个芽的茎段,接种在灭过
菌的芽诱导培养基(1)上。1 周后腋芽萌发,叶片
展开;20 d 后小枝长6 cm,诱导成活率达92%。
4.2 不定芽的诱导 将培养基(1)上诱导的枝条切成
0.8~1 cm 带芽茎段,接种在芽增殖培养基上,
7 d后腋芽开始萌发,继而在芽基部产生大量不定
芽丛,每个芽丛3~4个不定芽。在培养基(2)、(5)
(低浓度 6-BA 0.5 mg·L-1)上,芽的增殖是从长高
芽的叶腋处长出,少部分从基部长出,增殖倍数
为2.0~4.0;在(3)、(4)、(6)、(7)含高浓度 6-BA
(1.0~2.0 mg·L-1)的培养基上, 芽增殖方式是从膨
大的基部分化的,产生的不定芽又会产生更多的
不定芽和腋芽,增殖倍数达7.0~15.0。有的不定
芽丛充满整个茎段,体积达 5 cm3,芽总数可达
几十个甚至上百个。整个组织块上可以看到许多
原有的叶片黄化、干化,将其剥去后看到无数小
芽丛,高0.1~0.5 cm。从整个生长情况来看,培
养基(6)为最佳培养基。
4.3 壮苗培养 为了获得既长得高又较绿的优质芽
苗,采用两步分化方法,即先选用培养基(6)诱导
大量的不定芽,然后切取0.5 cm3 左右、带有众
多小芽的组织块转接到壮苗培养基(8)中。组织块
上的小芽能够正常生长,苗较绿,每块可产生有
效苗(2~3 cm)多达 5~6个,芽苗20 d后可长至3
c m 左右。
4.4 根的诱导 芽苗长至3~4 cm时转到生根培养基
中, 在培养基(9) (NAA 0.1+IBA 1.0)上生根最早而
多,接种后第 4 天就有根长出,其它在 10 d 左
右也有根长出。生根率最高达 9 5 %。
4.5 炼苗及移栽 将生根后15 d的再生植株,去
掉封口膜,炼苗3~5 d,然后移栽于蛭石与营养
土混匀的基质上,用塑料薄膜封盖,注意保湿。
10 d后苗木成活,长势较好,成活率达80%以上。
5 意义与进展 喜树属珙桐科旱莲木属植物,是我
国南方特有的树种,落叶乔木。从喜树的皮中分
离出的喜树碱(camptothecin, CPT)和10-甲氧基喜
树碱具有抗癌活性,已成为继红豆杉之后的第 2
个重要的木本抗癌药用植物。喜树碱过去一直是
从成年喜树上采集果实或从根皮中提取。现在的
研究证明,组织越幼嫩,C P T 含量越高。喜树
嫩叶中 CPT 的含量是种子中的 1.5 倍、树皮中的
2.5倍。说明喜树原料生产应以获取尽可能多的幼
嫩叶片为目的,组织培养将有可能成为实现喜树
工厂化快繁育苗的有力手段。经检索,喜树的组
织培养在国外已有报道,但在国内尚未见。