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胡黄连的组织培养和植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 3期,2007年 6月 511
胡黄连的组织培养和植株再生
薛润光, 杨少华, 和寿星*
云南省农业科学院高山经济植物研究所,云南丽江 674100
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Picrorhiza scrophulariiflora Pennell
XUE Run-Guang, YANG Shao-Hua, HE Shou-Xing*
Alpine Economic Plants Research Institute, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Lijiang, Yunnan 674100, China
收稿 2007-02-07 修定 2007-05-15
* 通讯作者(E-mail:hsxabc@hotmail.com;Tel:0888-
3 1 1 3 7 7 1 )。
1 植物名称 胡黄连(Picrorhiza scrophulariiflora
Pennell)。
2 材料类别 幼叶、幼嫩茎段。
3 培养条件 以MS为基本培养基。(1)愈伤组织与
芽诱导培养基:MS+6-BA 0.5 mg·L-1 (单位下同)+
NAA 1+2,4-D 0.2;(2)愈伤组织增殖培养基:
MS+6-BA 0.25+NAA 2;(3)丛生芽增殖培养基:
MS+6-BA 0.5+NAA 1;(4)芽分化培养基:MS+6-
BA 0.5;(5)生根培养基:MS+NAA 1。上述培养
基均附加 7 g·L-1琼脂、30 g·L-1蔗糖,pH 5.8。
培养温度为(20±2) ℃,光照强度 30~40 µmol·m-2·s-1,
光照时间 14 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 愈伤组织与芽的诱导 切取胡黄连植株顶端约
带 10 片叶的幼嫩部分,将叶片和茎段分开,切
除老化、变黄、褐死部分,洗去泥污,置流水
下冲洗约30 min后浸入0.1% HgCl2溶液中15 min,
无菌水清洗 3 ~5 次,在超净台上用滤纸吸干水
分,将叶片切成约 1 cm×1 cm小块,将幼嫩茎
段切成至少带 1个芽点的小块,分别接种于培养
基(1)上,每瓶接种 2块。接种 15 d后,未污染
叶片开始膨大形成愈伤组织,一部分茎段形成愈
伤组织,一部分茎段则直接长出芽。
4.2 愈伤组织增殖 将诱导出的愈伤组织转接到培
养基(2)上,愈伤组织大量增殖,以 30~45 d为一
周期反复继代培养,可获得大量愈伤组织。愈伤
组织的生长受NAA和 6-BA浓度共同影响,NAA
浓度过高,愈伤组织生长的同时分化大量的根;
6-BA浓度过高则大量分化芽。
4.3 丛生芽增殖 将诱导出的芽转接到培养基(3)
上,形成丛生芽,以 30~45 d为一周期继代培养,
增殖系数可达 6.5,相对于愈伤组织途径变异几率
小,芽较壮,但增殖稍慢,操作也较麻烦。
4.4 芽分化培养 将旺盛生长的愈伤组织分割后转
接到培养基(4)上,约 15 d后也可分化出大量绿色
芽点,不久形成丛生芽。
4.5 生根培养 将高3 cm以上的芽切下接入培养基
(5 )中,20 d左右即可诱导出根,经抽样测定,
生根率达 100%,每株平均生根数为 4.3条。
4.6 移栽 在生根培养基上培养约 45 d后,新芽
生长到约 10 cm高,有 6~8片叶,根长满培养基。
逐步揭开瓶盖培养 3~4 d后取出组培苗,洗净培
养基,以 70%多菌灵 500倍液浸泡 15 min,稍
阴干后种植于干净的细沙土中,保持温度15~20 ℃、
空气湿度 80%左右,每周喷洒 0.1%磷酸二氢钾
和 0.05%尿素混合溶液,每月喷 1 000倍 70%多
菌灵溶液 2次,移栽成活率可达 85% 以上。
5 意义与进展 胡黄连为玄参科胡黄连属多年生
低矮草本植物,为东喜马拉雅高山地区特有种,
我国云南、四川和西藏有少量分布,尼泊尔等国
亦有。胡黄连属于国家 II级重点保护野生植物,
是一种稀有药材,有清热、除湿、明目、补肝、
益胆和杀虫的效用,主治痨热咳嗽、湿热泻痢、
小儿疳积、目赤等疾病。玄参科植物组织培养的
报道较多,但胡黄连的组培快繁未见报道。胡黄
连为寡属种植物,一般靠种子和分株繁殖。本文
结果对胡黄连的规模化栽培可能有一定的意义。