全 文 ：植物生理学通讯 第 40 卷 第 1期，2004 年 2 月48
花烛离体培养中的壮苗
赵云鹏1,* 郭维明1,** 王广东1 文方德2
1南京农业大学园艺学院, 南京 210095; 2珠海园艺研究所, 珠海 519070
提要 针对花烛离体培养中普遍存在的长期培养导致再生苗生长势退化的现象，研究了如何恢复再生苗生长势，获得
健壮的无菌苗。结果表明，花烛离体培养中，随着继代次数的增加，外源生长调节剂浓度应逐步降低直至 0；活性炭对
无菌苗生长势的恢复有较显著效果。无菌苗茎尖是离体培养体系重建中诱导愈伤组织最适宜的外植体；诱导愈伤组织的
适宜培养基为改良的 MS+1.0 mg.L-1 6-BA + 0.1 mg.L-1 2,4-D；TDZ 诱导芽的效果明显优于 6-BA，MS+ 0.01 mg.L-1 TDZ
较适合于芽诱导。
关键词 花烛；壮苗；活性炭；TDZ；培养体系重建
Aseptic Plantlet Hardening of Anthurium andraeanum in vitro Culture
ZHAO Yun-Peng1,*, GUO Wei-Ming1,**, WANG Guang-Dong1, Wen Fang-De2
1College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095; 2Zhuhai Institute of Horticulture, Zhuhai 519070
Abstract The results showed that concentration of exogenous plant growth regulator should be decreased
progressively until to 0 during in vitro culture, and activated charcoal had a remarkable effect on resuming
growth vigor of anthurium aseptic plantlet. Shoot tip of aseptic plantlet was best for callus induction during re-
establishing in vitro culture system and modified MS+1.0 mg.L-1 2,4-D was preferable. MS+0.01 mg.L-1 TDZ
was advantageous for bud induction, and TDZ was better than 6-BA.
Key words Anthurium andraeanum; hardening; activated charcoal; TDZ; re-establishment of in vitro culture
system
收稿 2003-03-17 修定 　2003-10-29
资助　 广东珠海农业科技园（园艺花卉区）建设项目(2002-1-4)。
* 现为浙江大学生命科学学院博士生。
* * 通讯作者(E-mail: guowm@njau.edu.cn, Tel:025-84395231)。
花烛是全球销量第二的热带花卉，离体培养
是目前花烛种苗生产的主要途径和有效方法[1]。
在花烛离体培养中经长期继代培养的愈伤组织往
往会发生不分化、只生根而不分化芽或分化形
成白化苗等现象。其原因之一是愈伤组织细胞
中的叶绿体退化或变异，再生功能丧失[2]。王
进茂等[3]发现，花烛继代次数大于 15 代时，培
养物出现严重退化，表现为芽分化能力降低，生
长减弱，繁殖系数减小，移栽苗的栽培性状也
出现退化，生长缓慢，佛焰苞变小，花柄变短，
产花量降低等。我们在实践中亦发现类似情况。
以上说明恢复培养物的生长势和更新培养体系是
离体培养中保持较高繁殖系数和原植株栽培性状
的一个重要环节。本文研究了花烛‘Jolanba’
因长期继代导致生长势退化的再生芽的复壮，以
及培养体系的更新，以期延长其愈伤组织的培养
寿命和提高可持续培养的效率和效益。
材料与方法
以花烛（Anthurium andraeanum）‘Jolanba’
分化大量细小再生芽的愈伤组织和无菌苗为试材。
无菌苗生长势恢复试验中，在MS+6-BA 0.5
mg.L-1（单位下同）上继代 15次以上分化大量细
小再生芽的愈伤组织，分别接种至MS+6-BA 0.5、
M S 0、M S + 0 . 3 % 活性炭（A C）培养基上，分
别继代 2 次后，比较再生芽的分化及生长状况。
每处理 24 瓶，每瓶接种 1 块外植体。
培养体系的重新建立试验分 2 个方面：（1）
愈伤组织诱导时，分别选取无菌苗的茎尖、叶
柄、带叶片的叶柄、叶片为外植体。无柄叶片
水平放置，其余外植体竖直插入到含不同生长调
节剂配比的培养基上：改良的 MS（1/2 大量元
素 + 全量其它元素，下同）+6-BA 1.0；改良的
MS +2,4-D 1.0；改良的MS+6-BA 1.0+2,4-D 0.1；
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改良的MS+6-BA 1.0+2,4-D 1.0；改良的MS+6-BA
0.1+2,4-D 0.1；改良的MS+6-BA 0.1+2,4-D 1.0。
每处理重复 4 瓶，每瓶接种 4 块外植体。接种后
2 个月统计愈伤组织的诱导率和大小。（2）再
生芽诱导时，取由无菌苗茎尖在改良 MS+6 - B A
1.0 +2,4-D 0.1上培养2个月产生的愈伤组织为材
料，接种到不同生长调节剂配比的培养基上：
MS0；MS+6-BA 0.1；MS+6-BA 1.0；MS+ 噻二
唑苯基脲（thidiazuron, TDZ）0.01；MS+TDZ
0.1。每处理重复4瓶，每瓶接种4块外植体。接
种后2个月统计诱导的芽数。试验数据均采用SAS
软件进行方差分析。
以上培养基均添加3% 蔗糖、0.6％琼脂，灭
菌前pH值调至6.0~6.2，1.2 kg.cm-2压力下灭菌17
min。培养室温度(25±2)℃，光照度1 500～2 000
lx，照光12 h.d-1，培养室中空气相对湿度为70％。
实验结果
1 无菌苗生长势的恢复
继代培养 2 次后，在 MS+0.3% AC 中培养的
愈伤组织分化的芽数略有减少，但分化的芽生长
状况明显优于 MS0 和 MS+6-BA 0.5，表现为芽体
和叶柄较粗壮伸长、颜色较红、叶片较宽、叶色
较深；而 MS0 中培养的愈伤组织分化芽较多、芽
体颜色偏白、叶片较小、叶色淡绿；M S + 6 - B A
0.5中愈伤组织分化大量丛生芽，生长势最弱。因
此，我们认为随着继代次数的增加，宜逐步降低
外源生长调节剂浓度，直至完全不添加任何生长
调节剂；A C 对无菌苗生长势的恢复有较显著效
果。但在后续研究中发现，生长势提高后的无菌
苗仍明显不如培养体系重新建立后的再生苗，所
以无菌苗生长势的恢复方法不宜长期应用，应重
新建立培养体系，以提高成苗率和维持试管苗生
产的可持续性。
2 培养体系的重新建立
2.1 影响愈伤组织诱导的因素 从表1可见：
（1）试验的 4 种外植体形成愈伤组织的能力
差异显著。无菌苗茎尖、带叶片的叶柄、叶片
分别于接种后 3~5 周开始出现愈伤组织。无菌苗
茎尖的愈伤组织诱导率最高，生长势也最好，叶
柄在所有培养基上均无愈伤组织产生，其余 2 种
外植体的诱导效果介于二者之间。
（2）单独6-BA 并不能诱导愈伤组织，2,4-D
浓度大于6-BA的组合也不能产生愈伤组织，其它
组合的愈伤组织诱导率因外植体种类而异。高浓
度6-BA 的诱导效果比低浓度的好，当 6-BA 浓度
为 1 mg.L-1 时，随着2,4-D 浓度的升高，茎尖的
愈伤组织诱导率呈现单峰曲线， 6-BA 1 mg.L-1 +2,4-D
0.1 mg.L-1组合的诱导率达到100％。高浓度（1 mg.
L-1）2,4-D除与高浓度6-BA结合使用外，其余单独
或组合使用的均不能诱导茎尖产生愈伤组织。低浓
度2,4-D与高浓度6-BA组合对茎尖愈伤组织的诱
表1 不同外植体和生长调节剂配比对花烛‘Jolanba’愈伤组织诱导的影响
Table 1 Effects of different explants and growth regulator combinations on callus induction of Anthurium andraeanum ‘Jolanba’
愈伤组织诱导率/% 愈伤组织团的大小 /mm
生长调节剂配比
(浓度/mg·L-1) 茎尖 叶柄 带叶片的叶柄 叶片 茎尖 叶柄 带叶片的叶柄 叶片
6-BA 0＋ 2,4-D 0 87.5a 0 12.5c 75.0a 5.12ab － 4.50ab 3.78b
6-BA 1.0＋ 2,4-D 0 0c 0 0c 0c － － － 0c
6-BA 1.0＋ 2,4-D 0.1 100a 0 43.8b 0c 6.94a － 3.00b 0c
6-BA 1.0＋ 2,4-D 1.0 31.3b 0 0c 0c 1.17c － － 0c
6-BA 0.1＋ 2,4-D 0.1 56.3b 0 68.8a 25.0c 3.00bc － 6.06a 11.5a
6-BA 0.1＋ 2,4-D 1.0 0c 0 0c 0c － － － 0c
显著性水平:P＜0.05。
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导和增殖效果均优于其与低浓度6-BA组合。在相
同低浓度（0.1 mg.L-1）6-BA 和 2,4-D 组合的培
养基中带叶片的叶柄的诱导效果最佳。当6-BA浓
度为1 mg.L-1时，低浓度2,4-D虽然可促进愈伤组
织的诱导，但抑制其增殖。
总之，花烛‘Jolanba’离体培养体系重建
过程中诱导愈伤组织时，6-BA的质量浓度不能低
于 2,4-D。
2.2 生长调节剂对再生芽诱导的影响 从表2可
见，外源细胞分裂素类似物明显促进芽的分化，
两种不同的细胞分裂素类似物对再生芽诱导的效果
有显著差异。TDZ 诱导的总芽数尤其是芽体高大
于1 cm的壮芽数明显高于6-BA；0.01和0.1 mg.
L-1 TDZ 诱导效果差异不显著；不同浓度 6-BA 的
诱导效果差异极显著，0.1 mg.L-1诱导的总芽数大
大高于1 mg.L-1。这些表明低浓度的6-BA更有利
于芽的分化。
后，重新建立离体培养体系是十分必要的，重建
时间则以再生苗生长势有较大退化之前为好。同
时，在培养体系重建过程中，无菌苗茎尖的愈伤
组织诱导能力较强，可能与其顶端分生组织较发
达有关；单独用叶柄不能产生愈伤组织，而带叶
片的叶柄有较高的诱导频率，其在低浓度6-BA下
的诱导率显著大于高浓度 6-BA，据此推测，叶
片中合成的 CTK 或生长素类物质可能转运至叶柄
基部，两者达到平衡后可促进愈伤组织的产生。
选择可以添加的外源生长调节剂浓度时应该随外植
体种类不同而有所变化，否则可能会降低愈伤组
织诱导率，甚至不能产生愈伤组织。
TDZ 为苯基脲类 CTK，对芽分化和发育有极
强的促进作用，其活性往往比腺嘌呤类 C T K 高
1～2个数量级[4]。崔瑾等[5]在与花烛同科的芋头
（Colocasia esculenta）中发现，0.1 mg.L-1 TDZ
能有效诱导 4 个品种芋头茎尖萌动和生长，促进
丛生芽增殖和无菌苗根系的发生，提高驯化成活
率；同时，0.01 mg.L-1 TDZ 能诱导无菌苗叶片
切块的边缘直接再生芽点，转接后不定芽增殖并
形成再生植株。TDZ 在花烛离体培养中的应用尚
未见报道。本文结果表明，TDZ 诱导花烛愈伤组
织分化芽的效果显著高于6-BA，其对花烛体细胞
胚胎发生也有一定的诱导效应（另文发表）。
TDZ 促进花烛愈伤组织分化芽可能与其能调节愈
伤组织内源细胞分裂素和生长素的代谢有关，其
在花烛离体快繁中和对离体形态发生的作用机制值
得探讨。
参考文献
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表2 不同生长调节剂配比对花烛‘Jolanba’
再生芽诱导的影响
Table 2 Effect of different growth regulator combinations
on bud induction of Anthurium andraeanum ‘Jolanba’
生长调节剂 ≤1 cm的芽 >1 cm的芽 总芽数/
(浓度/mg·L-1) 数/ 愈伤团 数/愈伤团 愈伤团
0 0.19cB 0.06bB 0.25cB
6-BA 0.1 1.38aAB 0bB 1.38bAB
6-BA 1.0 0.44bcB 0bB 0.44cB
TDZ 0.01 1.19abAB 0.81aA 2.00abA
TDZ 0.1 1.75aA 0.63aA 2.38aA
大小写字母分别表示显著性水平为P＜0.01和P＜0.05。
讨 论
以无菌苗为外植体供体重新建立离体培养体
系，不仅可明显降低从盆栽苗重新取材的人力和
物力花费，大大降低污染率，缩短培养周期，提
高培养效率和经济效益，而且诱导的愈伤组织经
增殖3～4代后，再生芽的生长势远远优于长期继
代培养的愈伤组织分化的芽，大大提高成苗质
量。因此我们认为，在花烛离体培养一段时间