全 文 ：第 24 卷　第 2 期　　　　　　　　　　　　　植　　　物　　　研　　　究 2004年　4 月
Vol.24　No.2　　　　　　　　　　　　BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH April 　2004
不同激素对花生离体分化的影响
梁丽琨　林荣双　由翠荣　王庆华　肖显华
(烟台大学生化系 ,烟台　264005)
摘　要　对 TDZ和 2 ,4-D等激素在花生成熟胚外植体分化中的影响进行了研究。结果表明 ,花
生成熟胚 3 ～ 5 d龄实生苗的幼叶和胚轴在低浓度 TDZ 的诱导下 ,可分化产生高频不定芽和少量
体细胞胚 ,转到无激素 MS 培养基或 MS +BA 0.5 mg/ L+NAA 0.4 mg/L的培养基后形成丛生
苗。丛生苗分离后转入含 1/2 MS(大量元素)+IBA 0.4 mg/ L的培养基中诱导生根 ,可形成完整
的再生植株。幼叶分化率高于胚轴 ,但胚轴分化成苗速度快 。无菌水浸泡 16 ～ 24 h的胚轴在5 ～
30 mg/ L 2 , 4-D的诱导下 ,分化产生低频不定芽;而胚叶则产生高频体细胞胚 ,但畸形较严重 。
关键词　花生;成熟胚;TDZ ;2 ,4-D;体细胞胚
Effects of different plant hormones In-vitro differentiation of peanut
LIANG Li-Kun　LIN Rong-Shuang　YOU Cui-Rong 　WANG Qing-Hua　XIAO Xian-Hua
(Depar tment of Biochemistry , Yantai Univ ersity , Yantai　264005)
Abstract　The effects of TDZ and 2 , 4-D on the differentiat ion of mature peanut(Arachis hypogaea
L.)embryonic explants w ere investigated.The results showed that leaf lets and embryonic axes of 3
～ 5-day-old seedlings produced multiple buds and somatic embryos , which developed into shoots fol-
lowing transferred to MS medium without hormone or M S medium supplemented w ith BA0.5 mg/L
and NAA 0.4 mg/L .These shoots regenerated normal plants af ter they w ere t ransferred to medium
containing half st reng th major elements and 0.4 mg/ L IBA.The dif ferentiation rate of leaflets is
higher than that of embryonic axes w hile the lat ter produced regenerated plants in a shorter period of
time.Embryonic axes soaked in sterile water for 16 ～ 24 h could form adventitious buds with low fre-
quency on medium containing 5 ～ 30 mg/L 2 ,4-D and young leaf lets of embryos differentiated somatic
embryos w ith abno rmali ty on the induct ion of 5 ～ 30 mg/L 2 , 4-D.
Key words　peanut;mature embryo;TDZ ;2 ,4-D;somatic embryo
花生组织培养工作始于 1968年 ,三十多年来 ,人
们对花生的组织培养和植株再生进行了广泛的研究 ,
特别是近年来 ,利用花生成熟胚外植体获得再生植株
进展很快[ 1～ 12] 。以不同器官为外植体 ,通过器官发生
和体细胞胚发生途径 ,以及原生质体培养再生植株均
获成功 ,但普遍存在植株再生频率低 、体细胞胚畸形 、
存在基因型特异性等问题。建立高效植株再生体系
的是花生基因工程的关键。影响花生离体分化的因
素很多 ,如基因型 、外植体类型 、培养基组成 、环境条
件等 ,激素是影响花生离体培养的主要因素之一。苯
基金项目:山东省自然科学基金资助项目(Y97D16075)。 Supported by Shandong Natural S cience Foundation(Y97D16075)
第一作者简介:梁丽琨(1966—),女 ,讲师 ,硕士 ,主要从事植物组织培养方面的研究。
收稿日期:2003-11-18
基脲化合物如CPPU 、TDZ有较高细胞分裂素活性 ,已
被用于多种组织培养困难的植物中 ,获得再生植
株[4 ～ 6] 。许多报道表明 ,2 ,4-D是诱导体细胞胚发生
的有效生长素[3 , 7 ,8] 。国内不定芽和体细胞胚诱导多
采用2 ,4-D、NAA 、BA 、ZT 等激素 ,关于苯基脲化合物
细胞分裂素活性的研究已有报道[ 13] ,但用于诱导花生
离体分化除本实验室外未见报道 ,对 TDZ和2 ,4-D两
种激素对花生离体分化影响的比较未见报道。本文
利用 TDZ和2 ,4-D对花生成熟胚的幼叶和胚轴进行诱
导 ,同时研究了TDZ与NAA 、2 ,4-D与BA配合使用的
诱导效果 ,比较了不同激素对花生离体分化的影响。
本实验建立的 TDZ 诱导花生胚轴和幼叶分化的植株
再生体系 ,可作为良好的转基因受体系统 ,从而促进
花生基因工程的发展。
1　材料和方法
1.1　实验材料　鲁花九号花生(Arachis hypogaea
L.)种子 ,购于山东省花生研究所。
1.2　培养基　采用MS基本培养基 ,附加不同种类
和浓度的激素(mg/ L)。诱导培养基:(1)MS+TDZ
(2)MS+TDZ+NAA 0.4(3)MS+2 ,4-D +BA 1.0
(4)MS+2 ,4-D;继代培养基:(1)MS;(2)MS+BA
0.5+NAA 0.4;生根培养基:1/2 MS(大量元素)+IBA
0.4;发胚培养基:MS+TDZ 0.3。
以上培养基 均含 3%蔗 糖 , 0.8%琼 脂 ,
100 mg/L水解酪蛋白 ,pH 5.8。
1.3　离体组织培养　将花生果实去壳 ,挑选籽粒饱
满的种子 ,作如下处理:
(1)取花生种子 ,于0.1%HgCl2溶液中搅拌灭
菌15 min ,无菌水洗涤5次 ,接种于铺有潮湿纱布的
无菌罐头瓶中 ,25 ～ 28℃暗培养 3 ～ 7 d。取萌发良
好 ,露白约 3 ～ 7 mm 的种子 ,去种皮 、子叶 ,将幼叶
横切为二;上胚轴纵切为二 ,接种于诱导培养基
(1) (2)中。3周后转入继代培养基(1)中 ,继续培
养20 ～ 40 d ,统计分化率 。
(2)剥出花生成熟种胚 ,于 0.1%HgCl2 溶液中
搅拌灭菌 8 min ,无菌水洗涤 5次 ,接种于发胚培养
基上 ,以下方法同(1)。
(3)剥出花生成熟种胚 ,于无菌水中浸泡 16 ～
24 h ,将胚叶从基部切下;胚轴横切为 2 mm的薄片 ,
将胚叶和胚轴接种于诱导培养基(3)(4)中。4周后
转入继代培养基(2)中 ,继续培养 30 ～ 40 d ,统计分
化率。离体分化培养条件均为 25 ～ 28℃, 光照
16 h/d ,光照强度 1 500 ～ 2 000 lx 。
1.4　石蜡切片制样　不同时期的培养材料用 FAA
固定液固定36 h ,70%乙醇冲洗 ,常规石蜡切片 ,切
片厚度 7 ～ 8μm。埃氏苏木精染色 ,中性树胶封固。
Olympus BH-2光学显微镜下观察 、拍照。
2　结果
2.1　不同外植体对花生离体分化的影响
TDZ诱导花生成熟胚外植体分化 ,常采用成熟
种子萌发的无菌实生苗的幼叶 、胚轴和子叶为外植
体[ 4 ～ 6 ,10 ～ 12] 。种子萌发方式及发育时期是影响离
体分化的重要因素 ,我们比较了水萌发种子和发胚
培养基萌发种胚两种萌发方法实生苗的外植体对离
体分化的影响。采用水萌发种子 ,由于种子个体及
萌发环境差异等原因 ,萌发情况差别很大 ,萌发差的
种子不仅操作困难而且由于外植体太小而褐化严
重 ,因此造成外植体数目减少 ,影响试验结果。采用
发胚培养基萌发种胚 ,由于胚得到一致的营养和萌
发条件 ,生长同步性大大提高 ,胚轴明显伸长 ,幼叶
增厚 ,易于操作。将两种萌发方式的 3 、5 、7 d龄实
生苗的幼叶和胚轴接入含 TDZ 0.3mg/L、NAA 0.4
mg/L的诱导培养基中诱导分化 ,结果见表 1。采用
水萌发幼苗的胚轴和幼叶接种于诱导培养基中 , 3 d
和5 d龄实生苗的胚轴8 ～ 10 d开始分化 、幼叶12 ～
15 d开始分化 ,3 d龄和 5 d龄外植体的分化率没有
显著差异。发胚培养基萌发的 3 d和 5 d龄实生苗
的外植体接入诱导培养基后 , 3 ～ 4 d胚轴即开始分
化 、幼叶 4 ～ 5 d开始分化 ,分化时间提前 、分化率明
显高于前者 ,可能是由于种胚较早接触 TDZ 的原
因。虽然 3 d龄外植体比 5 d龄的在分化时间上稍
有优势 ,但 3 d龄幼苗切割外植体时操作困难 ,且分
化过程中易褐化 ,所以采用 5 d龄实生苗外植体较
合适。而不管采用哪种萌发方式的 7 d龄实生苗的
外植体都不分化。
2 ,4-D不能诱导萌发 3 ～ 5 d龄实生苗的胚轴和
幼叶分化产生不定芽或体细胞胚(数据未列出),但
可诱导无菌水浸泡 16 ～ 24 h种胚的胚轴和胚叶产
生不定芽或体细胞胚 。显然两种激素诱导花生分化
最适合的外植体是不同的。
2.2　NAA和不同浓度 TDZ对花生分化的影响
将发胚培养基萌发种胚 5 d实生苗的胚轴和幼
叶接种于含0.02 、0.1 、0.2 、0.3 、0.5 mg/L TDZ 的诱
导培养基中诱导分化 。胚轴分化多出现在靠近胚芽
的一端 ,4 d后胚轴表面出现白色毛状 、褐色疏松和
绿色致密三种愈伤组织 ,其中前两种愈伤组织虽能
188 　　　　　　植　　物　　研　　究　　　　　　　　　　　　　　　　　　24 卷
表 1　不同外植体对花生分化的影响
Table 1　Effects o f different explants on differentiation of peanut
外植体
Expl-
ants
水萌发种子 Seedlings on water 培养基萌发种胚 S eedlings on TDZ
3天
3-day-old
5天
5-day-old
7天
7-day-old
3天
3-day-old
5天
5-day-old
7天
7-day-old
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
分化时间
DF(d)
分化率
DR(%)
轴Axis 8 63 10 68.5 - 0 3 92 4 93 - 0
叶 Leaf 12 68 15 70 - 0 4 85.5 5 88.8 - 0
DF:dif ferentiation t ime DR:di fferentiation rate
表 2　NAA 和不同浓度 TDZ对胚轴和幼叶分化的影响(%)
Table 2　Effects of NAA and various concentrations of TDZ on differentiation of embryonic axes and leaflets(%)
培养基
Medium
T 0.02
N 0.4
T 0.1
N 0.4
T 0.2
N 0.4
T 0.3
N 0.4
T 0.5
N 0.4 T 0.02 T 0.1 T 0.2 T 0.3 T 0.5
轴Axis 65.5 74.6 82.8 93 - 59.7 71.3 80.2 86 -
叶 Leaf 71.2 83.3 97.8 88.8 - 69.5 79 92.2 81.5 -
T:TDZ　N:NAA　　　T 0.02 N 0.4:TDZ 0.02 mg/ L+NAA 0.4 mg/ L 其他同。
增殖 ,但难以分化;绿色愈伤组织继续培养 7 ～ 8 d可
见深绿色密集突起产生 ,突起逐渐长大形成丛生芽
(图版 I:1);幼叶在伤口周围靠近叶脉和叶柄部位产
生愈伤组织 ,继而出现密集突起(图版 I:2)。对幼叶
和胚轴产生的丛生芽进行解剖观察 ,发现多数为不
定芽 ,与母体分离后 ,在母体上留下明显的痕迹 ,石
蜡切片可见不定芽与母体联系紧密(图版 I:3);少数
为体细胞胚发育而来的 ,易与母体分离(图版 I:4),
石蜡切片可见愈伤组织中胚性原始细胞(图版 I:5),
及处于球形胚阶段的体细胞胚与母体组织联系极为
松散(图版 I:6)。
不同浓度 TDZ及 TDZ 与NAA配合诱导胚轴和
幼叶的分化率见表 2。当 TDZ浓度在0.3 mg/L以下
时 ,胚轴的分化率随浓度增大而显著提高 , 以
0.3 mg/L时分化率最高 ,当浓度达0.5 mg/L时外植
体很快褐化死亡 。幼叶的分化率在 TDZ 浓度为
0.2 mg/L以下时 ,提高 TDZ 浓度可有效提高分化
率 ,0.2 mg/L时最高 ,当 TDZ至浓度0.3 mg/ L时 ,分
化率有所下降 ,而当浓度达0.5 mg/L时外植体很快
褐化死亡。可见 ,当使用培养基萌发种胚时 ,幼叶的
诱导培养基中 TDZ 的添加量应减少至0.2 mg/L。
低浓度 TDZ 对胚轴和幼叶的诱导效果好于高浓度 ,
与Gill的研究结果相似[ 11] 。
诱导培养基中 TDZ和NAA配合使用 ,胚轴和幼
叶的分化率都比单独使用 TDZ 时的相应浓度高 ,胚
轴最高分化率达 93%,幼叶最高分化率可达97.8%。
对胚轴和幼叶外植体的分化率进行比较 ,可发
现幼叶的分化率均高于胚轴。胚轴产生的丛生芽容
易分化成苗 ,在无激素 MS 培养基或含低浓度 BA和
NAA的继代培养基中形成丛生苗 ,当丛生苗生长至
高约 2 cm 时 ,移至含 IBA的生根培养基中 ,经 20 d
可诱导生根 ,形成完整的再生植株(图版 I:7);而幼
叶产生的丛生芽成苗需时间较长 。此外 ,在组培过
程中还出现了少数扁化苗(图版 I:8),表现在丛生芽
基部茎扁化 ,几个茎融合在一起。丛生苗继续伸长 ,
可分离小植株 ,经诱导生根可发育成正常植株。
2.3　BA和不同浓度 2 ,4-D对胚轴分化的影响
采用浓度为 5 、10 、15 、20 、30 mg/ L 的 2 ,4-D ,诱
导无菌水浸泡 16 ～ 24 h种胚的胚轴和胚叶产生不定
芽和体细胞胚 ,胚轴和胚叶的分化情况差异很大。
胚轴的横切片在不同浓度 2 , 4-D及 2 ,4-D+NAA的
诱导培养基中的分化结果见表 3。在 2 , 4-D的诱导
下 ,胚轴仅产生不定芽(图版 I:9),且发生率较低 ,在
6.3%～ 36.7%之间 ,浓度为15 mg/L时诱导率最高 ,
为 36.7%。2 , 4-D和 BA 两种激素配合使用诱导不
定芽效果好于单独使用 ,但仍不能诱导体细胞胚发
生 ,说明使用 2 ,4-D诱导体细胞胚 ,这种类型的外植
体不适合。
2.4　BA和不同浓度 2 ,4 D对胚叶分化的影响
将浸泡16 ～ 24 h种胚的胚叶切下 ,接种于含 5 、
10 、15 、20 、30 mg/L 2 ,4-D的诱导培养基上 ,6 d后叶
片开始膨大变厚 ,叶面变形拱起 ,14 d可观察到体细
胞胚直接发生于胚叶表面(图版 I:10),多数胚叶在
叶片中脉两侧各产生一个小突起 ,呈乳白色 ,也常见
叶面上形成多个突起的情况 。2 ,4-D诱导幼叶可产
生几种类型的体细胞胚 ,按照有无生长点可把体细
胞胚分为三大类(图版 I:11):双极型(A)为正常体细
胞胚 ,具有芽和根;单芽极(B)只有茎生长点 ,单根极
(C)只有根生长点 ,后两者均为畸形体细胞胚;此
外 ,体细胞胚的子叶发育呈多样化 ,除双子叶(图版
1892 期　　　　　　　　　　　　　　　梁丽琨等:不同激素对花生离体分化的影响
表 3　BA 和不同浓度 2 , 4-D对胚轴分化的影响
Table 3　Effects of BA and various concentrations of 2 , 4-D on differentia tion of embryonic axes
培养基 Medium D5 D10 D15 D20 D30 D5B1 D10B1 D15B1 D20B1 D30B1
不定芽分化率(%)
Dif ferentiation rate of buds
6.9 15.2 30 29.6 23.5 6.3 20.2 36.7 31.2 25.3
D:2 , 4-D　　B:BA　　D5B1:2 , 4-D5 mg/ L +BA1 mg/ L　其他同。
表 4　BA 和不同浓度 2 , 4-D对胚叶分化的影响(%)
Table 4　Effects of BA and various concentrations of 2 , 4-D on differentiation of young leaflets(%)
培养基 Medium D5 D10 D15 D20 D30 D5B1 D10B1 D15B1 D20B1 D30B1
总胚状体 Embryoid 87 89.2 83.2 92.5 88.2 92.3 86.4 91.8 94.6 89
双极型 Double polar embryo; 44.2 41 44 35 20 40 45.5 59.5 37.6 20
单芽极 Embryo without shoot pole 20.8 36 28.7 37.5 38 30 30.5 27.8 40.5 47.3
单根极 Embryo w ithout ridiculer pole 22 12.2 10.5 20 30.2 22.3 10.4 14.5 16.5 21.7
I:12)外 ,还有多子叶(图版 I:13)、喇叭状子叶(图版
I:14 ～ 16)。胚叶在含不同浓度2 ,4-D及2 ,4-D+BA
的诱导培养基上体细胞胚分化率见表 4。胚叶在不
同浓度 2 ,4-D诱导下 ,均产生高频体细胞胚 ,体细胞
胚分化率均在80%以上 ,2 ,4-D与BA配合使用诱导
率稍高于单独使用 ,体细胞胚诱导率最高可达 94.
6%。不同 2 ,4-D浓度对体细胞胚诱导率没有显著
影响 ,但对体细胞胚形态影响显著 ,高浓度的 2 ,4-D
产生畸形体细胞胚的比例上升。正常体细胞胚在含
低浓度2 , 4-D或 NAA 0.4+BA 0.5的培养基中可
很快生长成苗 ,畸形体细胞胚成苗困难 ,单芽极体细
胞胚成苗率比单根极高。
3　讨论
3.1　不同激素对外植体分化的影响
TDZ 可诱导很多难组织培养的植物分化产生
不定芽或体细胞胚[ 13] 。本研究表明 , TDZ可诱导花
生3 ～ 5 d龄实生苗的幼叶和胚轴产生高频不定芽
和少量体细胞胚。TDZ 和NAA联用 ,效果比单独使
用TDZ 好 ,表现在幼叶和胚轴的分化率提高 ,说明
调节生长素和分裂素合适的配比可提高离体分化
率。幼叶和胚轴产生的丛生芽在无激素 MS 或含低
浓度BA和 NAA的培养基中继续生长 ,经 IBA诱导
生根即可形成完整的再生植株。在 2 ,4-D的作用
下 ,经无菌水浸泡 16 ～ 24 h种胚的胚轴可形成低频
不定芽;胚叶则产生高频体细胞胚 ,但体细胞胚畸形
较严重 ,主要表现在缺乏茎或根生长点或子叶畸形。
畸形的体细胞胚在很多植物中有报道 ,畸形胚的产
生主要与培养基成分及激素种类或浓度不合适有
关[ 7] 。本研究表明 ,高浓度的 2 ,4-D易诱导花生成
熟胚的胚叶产生畸形的体细胞胚。怎样使畸形胚正
常化或避免畸形胚的形成尚有待进一步研究。
本研究表明 , TDZ 主要诱导产生不定芽 ,但调节
激素浓度和其他培养条件可提高体细胞胚诱导率。
TDZ诱导的体细胞胚形态是正常 ,在无激素或含低
浓度NAA和 BA的培养基中可很快转变为正常植
株;2 ,4-D主要诱导产生体细胞胚。比较 TDZ 和 2 ,
4-D诱导体细胞胚的发生过程 , TDZ 诱导的体细胞
胚和不定芽均发生于愈伤组织 ,在诱导过程中可见
到愈伤组织形成 ,组织学切片证实不定芽起源于愈
伤组织表层 ,为多细胞起源 ,体细胞胚起源于愈伤组
织中单个胚性原始细胞 ,为典型的间接发生 、单细胞
起源;而 2 ,4-D诱导的体细胞胚发生 ,不经过愈伤组
织阶段 ,由胚叶表皮及表皮下的数层细胞分裂直接
形成胚性细胞团 ,进而发育成胚状体 ,为直接发生 、
多细胞起源[ 10] 。可见 ,TDZ和 2 , 4-D对花生外植体
分化的作用是不同的 ,2 ,4-D是生长激素;TDZ 为苯
环类衍生物 ,有高细胞分裂素活性 ,Gill指出未成熟
胚 、成熟胚及幼苗都具有体细胞胚发生潜能 ,但这种
潜能在培养过程中很快就失去了 ,而 TDZ 有可能刺
激细胞维持胚性发生的潜能 ,它的作用可能是通过
影响花生内源激素的水平而实现的[ 11] 。进一步研
究不同激素诱导外植体分化过程中的特异蛋白的表
达 、同工酶的差异及特异基因的克隆 ,才能真正揭开
它们在外植体培养过程中引起的不同反应和结果。
3.2　不同激素引起的不良反应
利用 TDZ诱导花生外植体分化 ,可在短期内获
得正常的再生植株;但在幼叶分化的丛生芽的培养
过程中易出现矮化现象 ,芽的伸长受抑制 ,表现在幼
叶产生的丛生芽呈拳头状 ,难伸长 TDZ 抑制芽的伸
长 ,在很多植物中有报道[ 13] 。实验证明 ,为使不定
芽能顺利发育成苗 ,必须及时将外植体转入不含激
素的 MS或含有低浓度的NAA和 BA的培养基中。
2 ,4-D诱导的体细胞胚存在较严重的畸形 ,往
往发育不全 ,特别是缺乏茎生长点 ,不易萌发成苗。
畸形体细胞胚可在含有低浓度 BA 、KT 和 TDZ 的培
190 　　　　　　植　　物　　研　　究　　　　　　　　　　　　　　　　　　24 卷
养基中萌发形成再生植株[ 7] 。
3.3　外植体对分化的影响
水萌发种子和发胚培养基萌发种胚的胚轴和幼
叶在 TDZ 的诱导下均获得了再生植株 ,但分化率 、
TDZ 的浓度和成苗周期都不同 ,后者开始分化的时
间和分化率由于较早接触 TDZ而比前者高;幼叶的
分化率比胚轴高 ,但成苗时间长 ,从初代培养到完成
生根一般需 4个月以上;胚轴的分化率稍低 ,但易再
生植株 ,且所需周期短 ,一般 2 ～ 3个月即可获得完
整的再生植株 。Gill报导利用 TDZ诱导花生子叶形
成体细胞胚 ,但我们的研究表明 ,TDZ诱导鲁花九号
花生子叶分化是无效的 ,可能是由于基因型不同所
致。2 ,4-D不能诱导萌发 3 ～ 5 d龄实生苗的胚轴和
幼叶分化产生不定芽和体细胞胚 ,但能诱导在无菌
水中浸泡 16 ～ 24 h的胚轴形成低频不定芽;诱导胚
叶产生高频体细胞胚 ,说明在花生组培中 ,外植体的
类型 、生理年龄和部位直接影响细胞的脱分化和再
分化 ,不同类型外植体的细胞虽然都具有全能性 ,但
要使其全能性得以表达 ,必须有合适的激素条件 ,只
有激素和细胞的生理状态相匹配 ,才能实现细胞的
脱分化和再分化。
缩写:MS:Murashige &Skoog(1962);1/ 2 MS(大量元素):
MS 培养基大量元素减半;TDZ:N-苯基 N-噻二唑-5-脲(简
化名 Thidiazuron , 噻重氮苯基脲);CPPU:N-(2-氯 4-吡啶)
N-苯基脲;NAA:α-萘乙酸;2 , 4-D:2 , 4-二氯苯氧乙酸;BA:
6-苄基腺嘌呤;ZT:玉米素;KT:激动素;IBA:吲哚丁酸。
参　考　文　献
1.庄东红 , 周敏 , 郑奕雄.花生幼叶芽诱导和植株再生研
究.中国油料作物学报 , 2001 , 23(3):13 ～ 15
2.庄振宏 ,朱锦懋 , 陈由强 , 等.花生再生和转化体系的初
步研究.福建师范大学学报(自然科学版), 2001 , 17
(4):88～ 92
3.Baker C M ,Wetzstein H Y.Leaflet development , induction
time , and medium influence somatic embryogenesis in
peanut.Plant Cell Repor ts , 1998 , 17:925～ 929
4.Gill R , Ozias-Akins P.Thidiazuron-induced highly mor-
phogenic callus and high frequency regeneration of fertile
peanut(Arachis hypogea L.)plant.I n-vitro Cell Dev Biol
P lant , 1999 , 35:445 ～ 450
5.Victor J M R,Murch S J , KrishnaRaj S , et al.Somatic embryo-
genesis and organogenesis in peanut:The role of thidiazuron and
N6-benzylaminopurine in the induction of plant morphogenesis.
Plant Growth Regulation , 1999 , 28:9～ 15
6.Murch S J , Victor J M R , Krishnaraj S , et al.The role of pro-
line in thidiazuron-induced somatic embryogenesis of peanut.
Society for In Vitro Biology , 1999 , 26:90～ 98
7.Chengalrayan K , Mhaske V B , Hazra S.High-frequency con-
version of abnormal peanut somatic embryos.Plant Cell Rep ,
1997 , 16:783 ～ 786.
8.Deng X Y, Wei Z M.Influence of length of immature embryos
excised for culture, concentration of 2 , 4-D light intensity and
other factors on somatic embryogenesis and establishment of a
high efficiency system of plant regeneration in peanut.Acta Phy-
tophysiologica Sinica, 2000 , 26:525～ 31
9.Little E L ,Magbanua Z V , Parrott W A.A protocol for repeti-
tive somatic embryogenesis from mature peanut epicotyls.Plant
Cell Reports , 2000 , 19:351～ 357
10.林荣双,王庆华 ,梁丽琨.TDZ诱导花生幼叶的不定芽和体
细胞胚发生的组织学观察 ,植物研究 , 2003 , 23(2):169～ 171
11.Gill R , Saxena P K.Direct somatic embryogenesis and regen-
eration of plants from seedling explants of peanut(Arachis hy-
pogaea L.):promotive role of thidiazuron.Can J Bot , 1992 , 70
(6):1186 ～ 1192
12.Mur thy B N S ,Murch S J , Saxena P K.Thidiazuron induced
somatic embryogenesis in intact seedling of peanut:endogenous
grow th regulator levels and significance of cotyledons.Physiolo-
gia Plantarum , 1995 , 94:268 ～ 276
13.王关林 ,方宏筠 ,那杰.高活性细胞激动素 TDZ在植物组
织培养中的应用.植物学通报 , 1997 , 14(3):47 ～ 53
图　版　说　明
Explanation of plate
图版 I:1.TDZ诱导胚轴产生的丛生芽;2.TDZ诱导幼叶
产生的丛生芽;3.不定芽(×27);4.由体细胞胚发育而来
的小植株(×3);5.二细胞原胚(×670);6.带胚柄的球形
胚(×27);7.丛生芽再生植株;8.扁化苗;9.2 , 4-D诱导
胚轴产生的不定芽(×4);10.2 , 4-D 诱导幼叶的体细胞胚
发生(×4);11.2 , 4-D诱导幼叶产生的体细胞胚:(A)双极
型;(B)单芽极;(C)单根极;12.双子叶胚(×4);13.多子
叶胚(×4);14～ 16.喇叭状子叶胚(×4);
Plate I:1.Multiple buds formed on embryonic axes induced by
TDZ;2.Multiple buds formed on leaflets induced by TDZ;3.
Adventious bud(×27);4.Regenerated plantlet developed from
embryoid(×3);5.Two-cell proembryo(×670);6.Globular
somatic embryo with suspensor(×27);7.Regenerated plantlet
from multiple bud;8.Multiple fused stem shoots;9.Adventious
bud on the embryonic axes induced by 2 , 4-D(×4);10.Direct
somatic embryogenesis from leaflet induced by 2 , 4-D;11.Somat-
ic embryos produced from leaflets induced by 2 , 4-D:(A)Double
polar embryo;(B) Embryo without shoot pole;(C) Embryo
without radicular pole;12.Two cotyledon embryo(×4);13.
Multiple coty ledon embryo(×4);14～ 16.Horn-shape cotyledon
embryos(×4)
1912 期　　　　　　　　　　　　　　　梁丽琨等:不同激素对花生离体分化的影响