全 文 ：第 25卷　第 4期　　　　　　　　　　　　　植　　　物　　　研　　　究 2005年　10月
Vo .l 25　No. 4　　　　　　　　　　　　BULLETIN OF BOTAN ICAL RESEARCH Oc.t , 　2005
基金项目:科技部科研条件升级改造项目(JG-2004-09);新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-04-0316)
第一作者简介:李春英(1976— ),女 ,博士研究生,从事天然产物研究工作。
*　通讯作者 Au th or for correspondence　E-m ail:zygorl@vip. h.l cn
收稿日期:2005 - 01 - 17
沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较
李春英　王　微　赵春建　刘晓娜　王延兵　赵　博　祖元刚*
(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室 , 哈尔滨　150040)
摘　要　考察了引种于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的差异 。用超声提取作为沙棘总
黄酮的制备方法;以芦丁为对照品 ,采用分光光度法作为沙棘总黄酮的测定方法 。实验结果表明 ,
沙棘叶 、果肉和果皮中总黄酮含量分别为 1. 71%、0. 76%和 0. 55%,叶中总黄酮含量分别是果肉
和果皮的 2. 3倍和 3. 1倍 ,因此引种于俄罗斯的大果沙棘叶具有较大的开发价值和应用前景。
关键词　沙棘;总黄酮;超声提取;分光光度法
Comparison and determ ination of total flavonoids in d ifferent parts of
Hippophae rhamnoides
LIChun-Ying　WANGW ei　ZHAO Chun-Jian　LIU X iao-Na　WANG Yan-B ing
ZHAO Bo　ZU Yuan-Gang*
(Key Labo ra to ry of Fo restry P lant E co logy, M inistry of Educa tion, Northeast Forestry University, H arb in　150040)
Abstract　The con tent distribution of to ta l f lavono ids in different parts o fHippophae rhamnoides L. from
Russiaw as investigated. The sample pre treatment proce ss involved u ltrason ic ex traction. The to tal fla-
vonoids w ere de te rm ined by spec trophotome try, rutin as contro l sample. The expe rim ent results showed
that the con tents of to tal flavonoids in leaf, pu lp and pe ricarp w ere respec tive ly 1. 71%, 0. 76% and
0. 55%, that the means con tent of tota l flavonoids in leaf is 2. 3 and 3. 1 times higher than that in pulp
and pericarp. Thereby the leaf ofHippophae rhamnoides L. from Russia has va lue to be deve loped and
used.
Key words　H ippophae rhamnoides L. ;total flavonoids;u ltrason ic ex traction;spectrophotome try
沙棘 (Hippophae rhamnoides L. )为胡颓子科
(E laeagnaceae)植物 ,落叶灌木 ,产于欧亚两洲[ 1] 。
沙棘不仅是我国西部生态治理的优选植物 ,而且具
有很高的食用价值 。随着人们认识到沙棘的神奇
疗效 ,以及它 “绿色 ”、天然的属性 ,开发沙棘资源
成为世界关注的研究课题 ,国内外对沙棘属植物中
富含的多种生物活性物质作了大量的研究 [ 2 ～ 4] ,以
沙棘为主要原料研制的产品有:沙棘饮料 、沙棘油 、
沙棘酒 、沙棘食品等。
黄酮类化合物是沙棘中非常重要的生物活性
成分 ,它对于沙棘的质量控制有重要的意义。沙棘
整株的各部位都含有黄酮类化合物 ,但各部位总黄
酮含量均存在较大的差异 [ 5] 。所以 ,测定沙棘不
同部位的总黄酮显得尤为重要 。目前 ,国内研究较
多的是中国沙棘 ,对从国外引进的沙棘品种研究的
较少 。近年来 ,超声技术在植物有效成分提取方面
已显示出巨大的优势[ 6, 7] 。本研究以引种于俄罗
斯的大果沙棘为原料 ,超声提取样品中的沙棘总黄
酮 ,分光光度法对沙棘不同部位 (叶 、果肉和果皮 )
中的总黄酮含量进行了比较分析 ,旨在为沙棘资源
的综合利用和国内引种俄罗斯大果沙棘提供科学
依据。
1　实验部分
1. 1　仪器 、试剂及原料
UV - 4060紫外 -可见分光光度计 (Amersham
Pharmacia B io tech,瑞典 ) BS210S型电子天平 (德
国 Sartorius公司 );KQ - 250DB型超声波清洗仪
(昆山市超声波仪器有限责任公司)。
95%乙醇(分析纯 );三氯化铝(分析纯 );芦丁
对照品 (98%,购于中国药品生物制品检定所)。
引种于俄罗斯的大果沙棘 2004年 8月中旬采
自黑龙江省孙吴县大河口林场 。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　样品溶液制备
沙棘叶 、果肉和果皮 60℃烘干 ,粉碎 ,过 60目
筛 。精确称取沙棘叶 、果肉和果皮粉 2. 0 g, 加
30 mL 85%乙醇静止浸泡 2 h后 ,按下面的超声方
法提取:超声时间 25 m in;超声温度 45℃;超声频
率 40KH z。提取液过滤 、定容 、待测。
1. 2. 2　对照品溶液及试剂的配制
芦丁对照品储备液配制:精密称取 105℃真空
干燥至恒重的芦丁对照品 0. 002 5 g,加无水乙醇
溶解后定容至 5mL容量瓶。
三氯化铝储备液配制:精密称取三氯化铝
5. 000 0 g,加无水乙醇溶解后定容至 100 mL容量
瓶 。
1. 2. 3　标准工作曲线的建立
吸取芦丁对照品储备液 100、 200、 300、 400、
500、600μL,分别置于 10 mL容量瓶中 ,向各容量
瓶中分别加三氯化铝储备液 1 mL,用无水乙醇定
容至刻度 ,摇匀 ,静置 8 m in,以相应浓度的未加三
氯化铝储备液的芦丁对照品溶液为空白 , 于
430 nm处测定吸光度。以芦丁浓度为横坐标 ,吸光
度为纵坐标进行拟合 ,得回归方程为:
y =39. 566x -0. 016 2
芦丁浓度在 0. 05 ～ 0. 30mg mL- 1范围内符
合朗伯—比尔定律 ,相关系数 r2 =0. 997 6。
2　结果与讨论
2. 1　分析方法的选择
2. 1. 1　测定波长的选择
精确称取芦丁对照品适量 ,用无水乙醇溶液制
成 0. 5mg mL -1的溶液。另精确称取沙棘叶总黄
酮样品适量 ,同法制成乙醇溶液 。取上述 2种溶
液 ,按 1. 2. 3项下的方法 ,分别在 200 ～ 600 nm波
长范围进行吸收光谱扫描 。光谱图表明 ,对照品溶
液及样品溶液与三氯化铝 —乙醇溶液反应生成的
螯合物在 277 nm和 430 nm处均有吸收峰。在 277
nm测定时 ,反应液吸光度测定值不稳定 ,因而选择
430 nm波长为沙棘叶总黄酮的测定波长。对照品
及样品的紫外—可见光谱扫描见图 1。
2. 1. 2　三氯化铝用量的选择
吸取芦丁对照品溶液 2. 0mL,分别加入 0. 40、
0. 60、0. 80、1. 00、1. 20、1. 40、1. 60 mL三氯化铝储
备液 , 8m in后按 1. 2. 3项下的方法分别测定其吸
光度 (A)值 。从 A值分析 ,三氯化铝溶液的用量在
1mL以上时 ,其值达到稳定 ,相对误差为 0. 9%。
图 1　对照品(A)和样品(B)的紫外—可见吸收光谱
F ig. 1　UV— V isib le absorb spec trum of contro l sam ple(A) and sam ple(B)
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图 2　反应时间对吸光度的影响
F ig. 2　Effe ct of reac tion time on abso rbency
所以选择三氯化铝溶液的最佳用量为 1mL。
2. 1. 3　显色稳定时间的选择
为了考察沙棘叶总黄酮与三氯化铝形成有色
螯合物反应完全 、达到稳定时所需的时间 , 在
14 m in内 ,每间隔 2m in对芦丁对照品及样品的吸
光度值进行测定 ,结果见图 2。
从图 2可以看出 ,在反应 8 m in后 ,芦丁和沙
棘叶总黄酮与铝盐生成的螯合物的吸光度趋于稳
定 ,完全可以用作定量分析 ,所以选择 8m in为显色
稳定时间。
2. 2　回收率和精密度试验
精密称取已测含量的沙棘叶 、果肉和果皮的提
取液若干份 ,每份 100 mL,加入一定量芦丁对照
品 ,混匀后 ,分光光度法测定含量 ,计算回收率 ,结
果表明 ,叶 、果肉和果皮提取液样品中黄酮的平均
回收率分别为 98. 17%、99. 83%和 100. 28%,相对
标准偏差分别为 1. 08、1. 27和 2. 85%。本方法所
测沙棘不同部位总黄酮的含量 ,相对标准偏差较
小 ,结果准确度高。
2. 3　提取方法对沙棘总黄酮提取率的影响
以叶为原料 ,应用不同提取方法对沙棘叶总黄
酮进行了提取 ,根据回归方程计算出总黄酮的提取
率 ,结果见表 1。
表 1　不同样品制备方法对沙棘叶总黄酮提取率的影响(n=3)
Tab le 1　E ffec t o f different sam ple p repa ra tion me thods on y ie ld of to ta l flavono ids in the H. rham noides leave s(n=3)
萃取方法 Extractionm ethod 萃取时间 Extraction tim e(m in) 液固比 L iquid-so lid rat io(mL g -1) 萃取率 Extract ion yield(%)
回流提取 Reflux 120 30:1 0. 95
索氏提取 S oxh let extraction 360 45:1 1. 71
超声提取 U ltrason ic extract ion 30 15:1 1. 69
表 2　沙棘不同部位总黄酮含量的测定结果 (n=3)
Table 2　De term ination of tota l flavono ids in d iffe rent pa rts o f
H. rhamnoides L. (n=3)
部位 Part 含量
Conten t(%)
平均含量
C on tent(%)
相对标准偏差
RSD(%)
叶
Leaf
1. 72
1. 71
1. 69
1. 71 0. 90
果肉
Pu lp
0. 76
0. 75
0. 78
0. 76 2. 00
果皮
Pericarp
0. 58
0. 56
0. 55
0. 56 2. 71
从表 1可以看出 ,应用回流提取法对沙棘叶总
黄酮的提取率明显偏低 ,超声提取法与索氏提取法
对沙棘叶总黄酮的提取率均较高 ,考虑到超声提取
所用时间短 ,溶剂用量少 ,操作步骤简单 ,故选择超
声法作为样品溶液的制备方法 。
2. 4　样品的测定
取沙棘叶 、果肉和果皮若干份 ,按 1. 2. 1项下
的方法提取总黄酮 ,按 1. 2. 3项下的方法测定提取
液的吸光度 ,根据回归方程计算出总黄酮的含量 ,
每个样品重复 3次测定 ,结果见表 2。
从表 2的结果可以看出 ,叶中总黄酮含量最
高 ,分别是果肉 、果皮的 2. 3倍和 3. 1倍 ,沙棘叶 、
果肉和果皮中总黄酮的相对标准偏差均较小 ,测定
结果可靠。
3　结论
目前我国对沙棘的研究主要集中在对果的开
4554期 李春英等:沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较
发和利用 ,而对叶的利用率很低 ,本文通过对引种
于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的检测 ,
结果表明 ,引种于俄罗斯的大果沙棘叶中总黄酮含
量较高 ,如果能利用叶作为原料 ,进行化工及保健
品的开发 ,沙棘的应用前景将更加广泛。
本研究的结果不但为俄罗斯大果沙棘叶的综
合利用开创了新思路而且为我国引种俄罗斯大果
沙棘提供了科学依据 。
致谢　实验中使用的沙棘原料由黑龙江省孙吴县林业
局提供 , 本实验室聂绍荃教授在鉴定方面给予了帮助 , 在此
深表谢意 
参　考　文　献
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