全 文 ：第 25卷　第 2期　　　　　　　　　　　　　植　　　物　　　研　　　究 2005年　4月
Vo .l 25　No. 2　　　　　　　　　　　　BULLETIN OF BOTAN ICAL RESEARCH April, 　2005
基金项目:哈尔滨市科技攻关计划项目(2004AA3CS172 - 2)和东北林业大学科研启动基金
第一作者简介:付玉杰(1967— ),女 ,博士 ,副教授,从事植物药基础研究与新药开发工作。
*　通讯作者 Au th or for correspondence　E-m ail:zygorl@pub lic. hr. h .l cn
收稿日期:2005 - 01 - 07
超声提取—高效液相色谱法测定甘草中甘草酸含量
付玉杰　赵文灏　侯春莲　刘晓娜　施晓光　祖元刚*
(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室 , 哈尔滨　150040)
摘　要　确定了制备甘草酸分析样品的超声波提取条件 , 0. 3%稀氨水为溶剂 ,液固比 50:1,提取
时间5 h;确定了高效液相色谱法检测甘草酸含量的条件为 ODS色谱柱 (4. 6mm ×25 cm , 5 μm),
检测波长254 nm ,检测温度为室温 ,流动相 CH3OH /3% HOA c(V /V)为 75 /25 ,流速 1mL /m in,进
样量10 μL,平均加样回收率100. 20%,相对标准偏差为1. 77%。结果表明超声提取—高效液相色
谱法是一种准确度高 ,速度快的测定甘草中甘草酸含量的检测方法。
关键词　甘草;甘草酸含量;超声波提取法;高效液相色谱法 (HPLC)
Determ ination of the G lycyrrhizic acid content from
Glycyrrhiza ura lensis by HPLC
FU Yu-Jie　ZHAO W en-H ao　HOU Chun-Lian　LIU X iao-N a　SH IX iao-Guang　ZU Yuan-G ang*
(Key Labo ra to ry o f Forest P lan t Eco lo ry, M inistry o f Educa tion, Northeast Fore stry University, H arbin　150040)
Abstract　Extracted G lycy rrh izic acid (GA) from Glycyrrhiza ura lensis F isch by U ltrasonic extrac tion
me thod, the conditions w ith higherGA were 0. 3% ammonia so lution as so lven t, ratio o f liquid to solid
as 50:1(mL /g), extrac tion time five hours. The HPLC ana ly sis conditions we re as fo llow s, chrom ato-
graphic co lumn ODS, detecting w ave leng th 254 nm , room temperature, mobile phase CH3OH /3%
HOA c(V /V)which ratio w as 75 /25, flow ing ra te 1mL /m in, in jected sample volume 10 μL. The resu lt
of pe rcent recovery is 100. 20%, the rela tive standard devia tion is 1. 77%. U ltrasonic ex traction-HPLC
is a fast detecting GA me thod w ith higher accuracy from Glycyrrhiza uralensis.
Key words　Glycyrrh iza ura lensis Fisch;g lycy rrhizic acid content;ultrasonic extrac tion;high pe rform-
ance liquid ch romag raphy
目前甘草中主要化学成分测定采用薄层扫描
法 (TLCS)、比色法 、紫外分光光度法 (UV)、气相色
谱法(GC)和高效液相色谱法 (HPLC)[ 1, 2] ,其中以
HPLC法占多数 。。甘草中主要有效成分是甘草
酸 ,所以研究甘草酸的分析方法很多 , 主要的
HPLC流动相是甲醇 —冰醋酸—水体系 、乙睛 —冰
醋酸—水体系 ,前者为常用 [ 3 ～ 5] 。
本研究在前人工作基础上以0. 3%稀氨水为溶
剂 ,液固比 50:1,提取时间 5 h,室温超声波提取甘
草中甘草酸制备了分析样品 ,采用 HPLC法测定了
分析样品中的甘草酸含量 。
1　仪器和材料
JASCO高效液相色谱仪 , 975型紫外检测器 ,
ODS色谱柱 (4. 6 mm ×25 cm , 5 μm ), DK— 98— I
电子恒温水浴锅 , 22R型高速离心机 , AB104型电
子天平 , KQ— 250DB型超声波清洗仪。
无水甲醇为色谱纯和分析纯二种试剂;无水乙
图 1　甘草酸铵标准品 HPLC图
F ig. 1　The ch rom a tog ram of monoamm onium
g ly cy rrhzinate standa rd
醇 、浓氨水和冰醋酸均为分析纯试剂 ,甘草酸铵标
准品购自美国 Sigma公司 ,甘草根茎饮片购于哈尔
滨市太平药材市场 ,经本室聂绍荃教授鉴定为乌拉
尔甘草 。
2　方法与结果
2. 1　甘草酸提取率计算公式
R =(C ×V)÷(1000×W )×100%
R:甘草酸提取率 (%);C:根据甘草酸标准曲
线公 式计 算出 的所 测样 品甘 草酸 的 浓度
(mg mL- 1);V:样品体积 (mL);W:甘草粉末重
量 (g)。
2. 2　色谱条件
ODS色谱柱(4. 6 mm ×25 cm , 5 μm),检测波
长 254 nm ,流动相为 CH3OH /3%HOA c(V /V)为
75 /25,检测温度为室温 ,流速 1mL m in-1 ,进样量
10 μL。
2. 3　标准曲线的建立
精密称取甘草酸铵标准品 ,用无水甲醇配制成
浓 度 为 0. 02、 0. 04、 0. 08、 0. 16、 0. 32 和
1. 00mg mL- 1的标准系列。按照上述条件测定
以上标准浓度系列样品 ,标准品谱图见图 1,测定
峰面积 ,重复三次 ,取平均值 ,用 Exce l做峰面积
(Y)与甘草酸浓度(X , mg mL- 1)的线性回归方程
为:
Y =4 283 443. 83X +38 681. 83
相关系数 R2 =1. 00
2. 4　分析样品的制备
2. 4. 1　提取方法和溶剂的选择
精密称取每份甘草粉 0. 5 g左右 ,分别选用
图 2　不同溶剂和提取方法对甘草酸提取率的影响
F ig. 2　The effect of diffe rent so lvents and ex traction m e thods
on the y ield o f GA
0. 3%氨水 (A)、蒸馏水 (B)、甲醇 (C)和 95%乙醇
(D)为溶剂 ,以液固比 50:1的比例分别进行索氏
提取 5 h、超声提取 5 h,每种溶剂做 3次平行样 ,所
得溶液容量瓶定容后在选定条件下 HPLC分析甘
草酸含量 ,取平均值计算在原料中的提取率 (图
2)。
2. 4. 2　最佳提取时间的筛选
精密称取 3份甘草粉各 0. 5 g左右 ,以 0. 3%稀
氨水为溶剂 ,液固比 50:1,超声波提取 6 h,每 1 h取
样一次 ,测定提取液中甘草酸的浓度 ,取平均值计
算甘草酸的提取率(图 3)。
由图 3可以看出 ,随着时间延长 ,提取液中甘
草酸的提取率逐渐增高 ,提取时间超过 5 h后 ,浓
度基本稳定 ,所以最佳提取时间定为 5 h。
2. 5　分析样品的检测
精密称取甘草粉样品 0. 5 g,按以上方法提取
甘草酸 ,用上述色谱条件检测 (图 4)。
图 3　超声时间对甘草酸提取率的影响
F ig. 3　The effe ct of u ltrason ic ex traction tim e on
the y ie ld of GA
2112期 付玉杰等:超声提取—高效液相色谱法测定甘草中甘草酸含量
图 4　样品色谱图
F ig. 4　The chrom atog ram of sam ple
2. 6　精密度和稳定性试验
对同一浓度的样品和对照品 ,连续进样 5次 ,
以甘草酸的峰面积计算 ,精密度分别为 0. 5%和
0. 3%。每隔 2 h进样 ,峰面积基本不变 ,常温下样
品在 48 h内稳定。
2. 6　重复性试验
精密称取甘草粉样品 5份 ,各0. 5 g,用上述最
佳方法提取 、检测 。测得甘草酸的平均提取率为
1. 955 8%, RSD为 0. 13%。
2. 7　回收率的测定
精密称取已测含量的甘草粉样品 3份 ,分别加
入一定量甘草酸铵标准品 ,按前面所确定的方法提
取有效成分 , HPLC测定含量 ,甘草酸加样回收率
为 100. 20%,相对标准偏差为 1. 77%。以上试验结
果回收率较高 ,且相对标准偏差较小 ,表明以上分
析样品制备方法准确度高 ,可靠性强 。
3　讨论
从图 2可以看出0. 3%氨水的超声波提取率最
高 ,蒸馏水 、甲醇和 95%乙醇的提取率次之 ,这是
因为甘草酸的极性较大 ,根据相似互溶的原理 ,极
性较大的溶剂提取率较高 ,同时氨水中的氨与甘草
酸生成盐增加它的溶解度;索氏提取中甲醇 、95%
乙醇提取率高于 0. 3%氨水和水的提取率 ,这是因
为 0. 3%氨水和水沸点较高 ,索氏提取的效果较差 ,
所以我们以 0. 3%氨水为溶剂的超声波提取方法为
分析甘草酸含量的样品制备方法 , 同时我们选择
在室温下超声提取 ,以减少其他杂质的含量 ,提高
分析样品中甘草酸的准确度 。甘草酸分析样品的
制备方法以 0. 3%稀氨水为溶剂 ,液固比 50:1,超
声波提取 5 h。在选择流动相体系时 ,我们选择
CH3OH /3%HOA c体系 ,以使甘草酸的出峰时间适
中 ,且与其他物质色谱峰分离较好 ,同时 HOAc的
加入避免了甘草酸色谱峰的拖尾现象。采用此方
法测得甘草中甘草酸含量 1. 957%,平均加样回收
率100. 20%,相对标准偏差为1. 77%。可见该方法
测定甘草中甘草酸具有简便 、快速 、精密度高和重
现性好的特点 ,适于测定甘草及其制剂产品中的甘
草酸含量。
参　考　文　献
1. 吕欣 , 付玉杰 , 王微 , 等. 紫外分光光度法测定甘草黄酮
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法测定甘草中甘草次酸的含量. 分析化学 , 2003, 31
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