全 文 ：第 源员 卷摇 第 缘 期
圆园员源 年 员园 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 缘
韵糟贼援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 国家自然科学基金渊猿员员苑员愿猿员冤
作者简介院 卢晓雪袁女袁员怨愿愿年生袁硕士研究生袁研究方向为植物抗病基因工程袁 耘鄄皂葬蚤造院 圆园员员员园圆园员圆岳 灶躁葬怎援 藻凿怎援 糟灶
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 凿凿燥怎岳 灶躁葬怎援 藻凿怎援 糟灶袁 栽藻造院 园圆缘 原 愿源猿怨远怨苑猿
收稿日期院 圆园员源 原 园员 原 园愿
晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟与疫霉菌互作中
的功能分析
卢晓雪摇 卢摇 珊摇 马丽娜摇 张美祥摇 窦道龙鄢
渊南京农业大学植物保护学院袁 南京 圆员园园怨缘冤
摘要院 活性氧渊葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽袁 粤韵杂冤在植物抗病中发挥着重要作用袁主要由 晕粤阅孕匀 氧化酶
渊灶蚤糟燥贼蚤灶葬皂蚤凿藻 葬凿藻灶蚤灶藻 凿蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 燥曾蚤凿葬泽藻冤系统产生遥 为明确 晕粤阅孕匀氧化酶 晕遭砸遭燥澡月基
因在本氏烟与疫霉菌亲和与非亲和性互作中的功能袁采用荧光定量 孕悦砸技术以及病毒诱导的基因
沉默方法探究了 晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟中对 圆 种疫霉菌抗性中的作用袁并利用 晕粤阅孕匀 氧化酶抑
制剂对辣椒疫霉的抗性进行了检测遥 结果发现院圆 种疫霉菌均能诱导本氏烟发生氧迸发袁且
晕遭砸遭燥澡月基因可能参与了疫霉菌诱导本氏烟发生的氧迸发过程遥 该基因沉默后降低了本氏烟对亲
和互作辣椒疫霉菌的抗性袁但对非亲和互作疫霉菌的抗性没有肉眼可见的影响曰晕粤阅孕匀 氧化酶抑
制剂处理本氏烟后也能降低其对辣椒疫霉的抗性遥 表明该基因通过介导 粤韵杂 产生袁参与植物对亲
和性与非亲和性互作疫霉的抗病反应袁在亲和互作中尤为重要遥
关键词院 活性氧曰 晕粤阅孕匀氧化酶曰 晕遭砸遭燥澡月曰 病毒诱导的基因沉默曰 植物抗病性
晕遭砸遭燥澡月 蚤泽 则藻择怎蚤则藻凿 枣燥则 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 责葬贼澡燥早藻灶泽 蚤灶
晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬遭藻灶 贼澡葬皂蚤葬灶葬
蕴怎 载蚤葬燥曾怎藻摇 蕴怎 杂澡葬灶摇 酝葬 蕴蚤灶葬摇 在澡葬灶早 酝藻蚤曾蚤葬灶早摇 阅燥怎 阅葬燥造燥灶早鄢
渊悦燥造造藻早藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 晕葬灶躁蚤灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园怨缘袁 允蚤葬灶早泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 粤糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 渊粤韵杂冤 责造葬赠 葬 噪藻赠 则燥造藻 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻 则藻泽责燥灶泽藻泽袁 憎澡藻则藻葬泽 晕粤阅孕匀
燥曾蚤凿葬泽藻 蚤泽 葬 皂葬躁燥则 糟燥皂责燥灶藻灶贼 蚤灶 粤韵杂 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶援 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻 贼澡藻 则燥造藻泽 燥枣 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬
遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 晕遭砸遭燥澡月 早藻灶藻 蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽责责援 袁 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 渊孕援 糟葬责泽蚤糟蚤冤 葬灶凿
蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 渊孕援 泽燥躁葬藻冤 责葬贼澡燥早藻灶泽袁 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸袁 增蚤则怎泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻 泽蚤造藻灶糟蚤灶早 葬灶凿 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 憎藻则藻 怎泽藻凿 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 则燥造藻泽 燥枣 晕遭砸遭燥澡月 早藻灶藻 葬灶凿 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻援 韵遭增蚤燥怎泽 燥曾蚤凿葬贼蚤增藻
遭怎则泽贼 憎葬泽 燥遭泽藻则增藻凿 蚤灶 晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 造藻葬增藻泽 凿怎则蚤灶早 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 燥枣 遭燥贼澡 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 责葬贼澡燥早藻灶泽援 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻
孕悦砸 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 早藻灶藻 皂蚤早澡贼 责葬则贼蚤糟蚤责葬贼藻 蚤灶 贼澡藻 燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 遭怎则泽贼 责则燥糟藻泽泽援 栽澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣
晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 贼燥 孕援 糟葬责泽蚤糟蚤 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 蚤皂责葬蚤则藻凿 蚤灶 贼澡藻 晕遭砸遭燥澡月 早藻灶藻鄄泽蚤造藻灶糟藻凿 责造葬灶贼泽援 匀燥憎藻增藻则袁
贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 造藻增藻造 贼燥 贼澡藻 蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 孕援 泽燥躁葬藻 憎葬泽 灶燥贼 葬造贼藻则藻凿援 孕则藻鄄贼则藻葬贼皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻 晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬
造藻葬增藻泽 憎蚤贼澡 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 葬造泽燥 则藻凿怎糟藻凿 贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕援 糟葬责泽蚤糟蚤援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿
贼澡葬贼 晕遭砸遭燥澡月 憎葬泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽 燥枣 晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬鄄孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽责责援 袁 葬灶凿 藻泽泽藻灶贼蚤葬造 枣燥则 蚤贼泽
则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕援 糟葬责泽蚤糟蚤援
运藻赠 憎燥则凿泽院 葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 渊粤韵杂冤曰 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻曰 晕遭砸遭燥澡月曰 增蚤则怎泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻 泽蚤造藻灶糟蚤灶早
渊灾陨郧杂冤曰 责造葬灶贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻摇
摇 摇 疫霉 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 隶属于卵菌 韵燥皂赠糟燥贼葬袁可引
起多种毁灭性植物病害袁是农业生产上危害大尧防治
难的重要植物病原菌袁每年在世界范围造成巨大的
经济损失袁近年来卵菌已逐渐成为寄主与病原物互
作体系中的研究热点咱员暂 遥 卵菌在进化上与真菌相
差较大但与硅藻等相似袁是一类特殊真核微生物袁为
茸鞭生物界袁目前大部分针对真菌的杀菌剂对卵菌
均无效遥 在自然界中袁疫霉菌能通过变异快速逃脱
植物抗病基因的识别袁例如目前农业生产中针对马
铃薯晚疫病菌 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 蚤灶枣藻泽贼葬灶泽 的 员员 个抗病基
因全部被克服咱圆暂 袁因此认识植物与卵菌互作的机制
对开发疫霉菌的防控策略具有重要意义遥 在植物与
病原菌互作过程中袁植物在病原菌侵染早期能快速
积累活性氧袁促进氧迸发渊燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 遭怎则泽贼冤袁已有研究
表明该过程也参与了植物对卵菌的抗病反应遥
活性氧最初被人们认识的是它的毒性功能咱猿暂 袁
活性氧可通过使 阅晕粤断裂尧破环蛋白结构等对细胞
造成不可逆的伤害袁但是随着探索的不断深入袁大量
研究结果都肯定了活性氧在植物抗病反应中的积极
作用咱猿 原 缘暂 遥 例如活性氧可以诱导植物产生过敏反应
渊 澡赠责藻则泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻袁 匀砸冤袁抑制病原菌的侵
染咱猿袁远暂 曰同时还能作为信号传导的第二信使诱导植
物防卫反应咱苑暂 袁如植物胼胝质沉积等过程咱远暂 遥 植物
体内的活性氧可以由不同途径产生袁晕粤阅孕匀氧化酶
系统渊灶蚤糟燥贼蚤灶葬皂蚤凿藻 葬凿藻灶蚤灶藻 凿蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 燥曾鄄
蚤凿葬泽藻冤是活性氧的主要来源袁又称为还原型辅酶域袁
能通过产生活性氧来抑制病原物的入侵或扩展袁在
植物对生物与非生物胁迫的反应中起着重要
作用咱猿袁远暂 遥
晕粤阅孕匀氧化酶是植物细胞内产生活性氧的研
究最为深入的酶类袁它是一种酶复合体袁位于植物细
胞质膜上袁在植物细胞内负责提供电子袁催化细胞中
超氧阴离子的产生咱愿暂 遥 晕粤阅孕匀 氧化酶最先在哺乳
动物的吞噬细胞中被发现袁其最初的作用是激活人
体血液吞噬细胞来杀死病原菌袁研究发现 晕粤阅孕匀
氧化酶在脊椎动物尧无脊椎动物尧高等植物以及真菌
中都有广泛的分布咱怨暂 遥 晕粤阅孕匀 氧化酶也指呼吸爆
发氧化酶同系物 渊 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠 遭怎则泽贼 燥曾蚤凿葬泽藻 澡燥皂燥鄄
造燥早怎藻袁 砸遭燥澡冤袁 砸遭燥澡 是 晕粤阅孕匀 氧化酶催化亚基
早责怨员责澡燥曾的同源物袁该基因最早从水稻中被分离出
来咱员园暂 袁之后又陆续从很多植物中鉴定出来袁包括本
氏烟 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬咱员员暂 尧 马铃薯 杂燥造葬灶怎皂
贼怎遭藻则燥泽怎皂咱员圆暂和拟南芥 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬咱员猿 原 员源暂等重
要的作物以及模式植物遥
尽管关于 砸遭燥澡基因家族的功能注释较少袁但仍
有研究表明 砸遭燥澡 基因在植物的形态发生和发展进
程以及生物尧非生物胁迫下活性氧的产生中有着重
要作用遥 有研究表明袁砸遭燥澡基因能够调控植物生长
以及防卫反应袁如番茄的 砸遭燥澡基因被敲除后导致番
茄生长异常咱员缘暂 曰拟南芥的 砸遭燥澡悦基因能够在根毛形
成过程中调控细胞的伸长咱员远暂 曰本氏烟 早责怨员 责澡燥曾同源
物 晕遭砸遭燥澡粤和 晕遭砸遭燥澡月 基因在植物过氧化氢的积
累以及其对致病疫霉的抗性中均发挥了重要作
用咱员员暂 袁这 圆 个基因也能够影响由激发子引起的气孔
关闭现象咱员苑暂 遥 为进一步探究这 圆 个基因在植物氧
迸发过程及其与亲和性和非亲和性疫霉菌互作中的
功能袁本试验分析了其在 圆 种疫霉菌诱导本氏烟的
氧迸发过程中的作用袁并检测了 晕遭砸遭燥澡月 基因沉默
后本氏烟对 圆 种疫霉菌抗性的变化袁以期为深入了
解 晕粤阅孕匀氧化酶系统在植物抗卵菌反应中的作用
奠定基础遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试植物及菌株院植物材料本氏烟种子为本实
验室 源 益冰箱保存袁在 圆缘 益尧员源 蕴 颐 员园 阅光暗交替温
室培养 员 个月后待用遥 疫霉菌材料辣椒疫霉 孕澡赠贼燥鄄
责澡贼澡燥则葬 糟葬责泽蚤糟蚤 菌株 孕糟猿缘 和大豆疫霉 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬
泽燥躁葬藻菌株 孕远源怨苑 为美国 灾蚤则早蚤灶蚤葬 生物信息研究所
月则藻贼贼 酝援 栽赠造藻则教授馈赠袁由本实验室 员圆 益冰箱斜面
保存遥 细菌材料为大肠杆菌 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅匀缘琢尧
农杆菌 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 郧灾猿员园员袁由本实验
室 原苑园 益冰箱保存遥 本试验所用病毒诱导的基因
沉默渊增蚤则怎泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻 泽蚤造藻灶糟蚤灶早袁 灾陨郧杂冤体系载体
为烟草脆裂病毒渊栽燥遭葬糟糟燥 则葬贼贼造藻 增蚤则怎泽袁 栽砸灾冤袁其相关
载体 责栽砸灾员尧责栽砸灾圆 和 责栽砸灾圆宜孕阅杂 由南京农业大
学陶小荣教授赠送遥
试剂院试验所用的限制性内切酶尧栽源 连接酶尧
则栽葬择酶尧孕则蚤皂藻则 泽贼葬则 高保真酶尧砸晕粤 反转录试剂盒尧
荧光定量 孕悦砸 试剂盒均购自日本 栽葬运葬砸葬 公司曰
砸晕粤提取试剂盒购自北京天根生物公司曰引物合
成尧质粒提取试剂盒尧阅晕粤 回收试剂盒购自上海捷
瑞生物公司曰晕粤阅孕匀氧化酶抑制剂二亚苯基碘渊凿蚤鄄
责澡藻灶赠造藻灶藻 蚤燥凿燥灶蚤怎皂袁 阅孕陨冤购自美国 杂蚤早皂葬 公司曰过
氧化氢含量测定试剂盒购自南京建成生物公司遥
培养基院员园豫 灾愿 液体培养基院每 员园园 皂蕴 灾愿 汁
猿圆远缘 期 卢晓雪等院 晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟与疫霉菌互作中的功能分析
加入 员 早 悦葬悦韵猿袁猿 园园园 则 辕 皂蚤灶 离心 员缘 皂蚤灶袁取上清袁去
离子水稀释 员园 倍袁分装曰员园豫 灾愿 固体培养基院每
员 园园园 皂蕴 员园豫 灾愿 液体培养基加入 员缘 早 琼脂袁分装
后袁员圆员 益高压灭菌 圆园 皂蚤灶袁用于疫霉菌培养曰溶菌肉
汤渊造怎则蚤葬 遭藻则贼葬灶蚤袁 蕴月冤液体培养基院员园 早胰蛋白胨尧缘 早
酵母提取物尧员园 早 晕葬悦造袁去离子水定容至 员 园园园 皂蕴袁分
装曰蕴月固体培养基院每 员 园园园 皂蕴 蕴月液体培养基加入
员缘 早琼脂袁分装后袁员圆员 益高压灭菌 圆园 皂蚤灶袁用于大肠
杆菌和农杆菌的培养遥
仪器院 栽孕远园园 型 孕悦砸 仪袁日本 栽葬运葬砸葬 公司曰
缘源圆源砸离心机袁德国 耘责责藻灶凿燥则枣 公司曰粤月陨 苑缘园园 荧光
定量 孕悦砸仪袁美国 粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽 公司曰杂责藻糟贼则葬鄄
酝葬曾 酝缘 多功能酶标仪袁美国 酝燥造藻糟怎造葬则 阅藻增蚤糟藻泽 公
司曰陨载苑员 倒置式研究级显微镜袁日本 韵造赠皂责怎泽公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 过氧化氢含量检测
为了确定烟草叶片在疫霉菌侵染时组织内过氧
化氢含量的变化袁选用辣椒疫霉和大豆疫霉作为研
究材料遥 采用游动孢子浸泡接种本氏烟草叶片的方
法袁检测不同时间点渊 孕糟猿缘院圆尧源尧远尧愿尧员园 和 员圆 澡曰
孕远源怨苑院远尧员圆尧圆源尧猿园 和 猿远 澡冤组织中的过氧化氢含
量袁并用 阅粤月染色方法进一步确定产生过氧化氢峰
值时间点遥 每次检测 猿 个平行叶片袁猿 次重复遥 烟
草叶片经辣椒疫霉尧大豆疫霉游动孢子侵染后袁生理
盐水研磨不同侵染时间点的样品袁研磨液 源 园园园 则 辕
皂蚤灶离心 员园 皂蚤灶袁收集上清袁取 员园园 滋蕴 上清液袁按试
剂盒提供方法测量混合液的吸光值袁根据公式计算
过氧化氢含量遥 组织中 匀圆韵圆 含量渊皂皂燥造 辕 早冤 越 渊测
定 韵阅值 原空白 韵阅 值冤 辕 渊标准 韵阅 值 原 空白 韵阅
值冤 伊标准品浓度渊员远猿 皂皂燥造 辕 蕴冤 辕待测样本蛋白浓
度渊早 辕 蕴冤遥
过氧化氢染色院用 责匀 猿援 愿 超纯水溶解 员 皂早 辕 皂蕴
的 阅粤月粉末袁将不同侵染时间点的本氏烟叶片置于
染液中袁圆缘 益黑暗放置 远 耀 愿 澡袁酒精脱色后观察遥
员援 圆援 圆 晕遭砸遭燥澡月基因诱导表达模式分析
剪下本氏烟植株生长一致的上数第 猿 叶片袁用
浓度为 员 伊 员园远 个 辕 皂蕴 的辣椒疫霉和大豆疫霉游动
孢子分别浸泡接种上述叶片袁检测不同时间点本氏
烟 晕遭砸遭燥澡粤 与 晕遭砸遭燥澡月 基因受 圆 种疫霉菌诱导表
达情况遥 辣椒疫霉侵染本氏烟叶片的取样时间点为
园尧源尧愿 和 员圆 澡曰大豆疫霉侵染本氏烟叶片的取样时
间点为 园尧愿尧员圆尧圆源 和 猿圆 澡遥 将不同时间点取样的本
氏烟叶片置于 原苑园 益冰箱保存遥
将待测材料用 砸晕粤 提取试剂盒 砸晕藻葬泽赠 运蚤贼 提
取总 砸晕粤遥 用 蚤杂糟则蚤责贼糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼 反转录为
糟阅晕粤袁并定量到 员园园 灶早 辕 滋蕴遥 以本氏烟的 耘云员琢渊基
因编号 粤云员圆园园怨猿援 员冤做为内参基因袁在荧光定量仪
上采用 杂再月砸 早则藻藻灶玉荧光染料法进行荧光定量
孕悦砸分析袁采用相对定量 圆 原吟吟悦贼法咱员愿暂分析基因的转
录水平表达情况遥 本试验中用到的上下游引物序列
如下院晕遭砸遭燥澡粤渊砸栽冤鄄云渊粤栽悦郧栽粤栽悦粤郧郧悦粤悦悦粤郧郧冤尧
晕遭砸遭燥澡粤渊砸栽冤鄄砸渊悦郧悦悦粤悦粤郧栽粤郧粤粤粤粤悦悦悦冤尧晕遭砸遭燥澡月
渊砸栽冤鄄云渊粤粤悦栽栽栽粤粤栽粤悦粤粤郧郧粤郧郧郧悦冤尧晕遭砸遭燥澡月渊砸栽冤鄄
砸渊粤粤郧粤郧悦粤郧粤粤悦郧粤郧悦粤栽冤尧晕遭耘云员琢鄄云渊粤郧粤郧郧悦悦悦栽鄄
悦粤郧粤悦粤粤粤悦冤尧晕遭耘云员琢鄄砸渊栽粤郧郧栽悦悦粤粤粤郧郧栽悦粤悦粤粤冤遥
员援 圆援 猿 载体构建以及农杆菌介导的 灾陨郧杂
从 晕遭砸遭燥澡月渊基因编号为 粤月园苑怨源怨怨冤中选取了
源缘园 遭责左右的片段袁用 杂皂葬玉和 载遭葬玉构建到 责栽砸灾圆
载体上遥 上下游引物序列为院晕遭砸遭燥澡月鄄云渊郧郧郧郧栽栽鄄
栽郧悦栽栽悦悦栽悦郧栽郧悦悦粤冤尧 晕遭砸遭燥澡月鄄砸 渊 郧悦栽悦栽粤郧粤栽鄄
栽悦悦郧粤悦栽栽栽悦郧悦悦栽悦悦冤遥 以本氏烟 糟阅晕粤 作为模
板袁将克隆到的 晕遭砸遭燥澡月片段用 载遭葬玉酶切并回收袁
回收产物与 责栽砸灾圆渊杂皂葬玉和 载遭葬玉酶切后的回收
产物冤连接后用热击转化的方法转入大肠杆菌
阅匀缘琢菌株中袁菌落 孕悦砸 鉴定阳性克隆后送到南京
金斯瑞公司测序遥
将 责栽砸灾员尧责栽砸灾圆尧责栽砸灾圆宜孕阅杂尧责栽砸灾圆宜晕遭砸遭燥澡月
质粒通过电转化技术转入 郧灾猿员园员 农杆菌菌株中袁
在 源 皂蕴含有 缘园 滋早 辕 皂蕴 卡那霉素的 蕴月 培养基中培
养 源愿 澡渊圆圆园 则 辕 皂蚤灶尧圆愿 益冤袁源 园园园 则 辕 皂蚤灶离心 源 皂蚤灶袁收
集菌体袁用 员园园 滋酝 责匀 缘援 远 乙酰丁香酮尧员园 皂酝 酝耘杂
以及 员园 皂酝 酝早悦造圆 混合溶液悬浮菌体 猿 次袁稀释菌
液至 韵阅远园园 越 员遥 等体积混合 渊 责栽砸灾员 垣 责栽砸灾圆尧
责栽砸灾员 垣 责栽砸灾圆宜孕阅杂尧责栽砸灾员 垣 责栽砸灾圆宜晕遭砸遭燥澡月冤袁
圆愿 益放置 圆 耀 猿 澡 后注射烟草叶片遥 圆 周左右待
责栽砸灾圆宜 孕阅杂 的植株长出白化叶片时袁从接种
责栽砸灾圆 空载体和 责栽砸灾圆宜晕遭砸遭燥澡月 的烟草植株上
取与白化叶片相同位置的叶片进行后续试验遥
员援 圆援 源 晕遭砸遭燥澡月基因沉默植株的抗病性检测
分别挑取辣椒疫霉和大豆疫霉菌丝块于 员园豫
灾愿 固体培养基上 圆缘益培养 猿 耀 源 凿袁用 员园豫 灾愿 液体
培养基培养 圆 凿遥 无菌自来水清洗菌丝后加入少量
无菌水袁圆缘 益黑暗放置 员圆 澡 时释放游动孢子袁接种
浓度为 员 伊 员园远 个 辕 皂蕴 的游动孢子遥 约 猿远 澡 后在手
持紫外灯下拍照并测量病斑直径袁计算病斑面积遥
每个处理接种 远 个平行叶片袁猿 次重复遥
源圆远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
侵染菌丝染色院取侵染初期的烟草叶片袁加入适
量台盼蓝染液渊浸没叶片冤袁沸水中煮沸 猿 耀 缘 皂蚤灶 脱
去叶绿素袁室温静置 源 耀 缘 澡袁用水合三氯乙醛脱色袁
纯水轻轻漂洗后观察遥 台盼蓝母液院苯酚 员园 早尧甘油
员园 皂蕴尧乳酸 员园 皂蕴尧水 员园 皂蕴尧台盼蓝 园援 园圆 早袁用 怨远豫
乙醇按照 员 颐 圆体积比稀释母液遥 脱色液院员 噪早 水合
三氯乙醛溶解于 源园园 皂蕴水中使用遥
胼胝质染色院取侵染初期的烟草叶片袁加入适量
脱色液袁缘缘 耀 远园 益水浴 圆园 耀 猿园 皂蚤灶 至叶片变白袁纯
水轻轻漂洗袁加入苯胺蓝染液袁圆缘益黑暗放置 圆 耀 源 澡
染色袁纯水轻轻漂洗后观察遥 苯胺蓝染液院员缘园 皂酝
运圆匀孕韵源 责匀 怨援 缘袁溶解 园援 圆豫苯胺蓝粉末遥 脱色液院
苯酚 员园 早尧甘油 员园 皂蕴尧乳酸 员园 皂蕴尧水 员园 皂蕴尧乙醇
愿园 皂蕴遥
员援 圆援 缘 阅孕陨预处理本氏烟叶片及其抗病性检测
用 员 皂蕴 无菌注射器吸取不同浓度梯度的 阅孕陨
溶液注入本氏烟叶片袁每株植物注射第 猿尧源尧缘 片叶
片袁置于温室放置 圆源 澡袁以抑制依赖于 晕粤阅孕匀 氧化
酶的 匀圆韵圆 的产生遥 阅孕陨 溶液的处理浓度为 员园尧圆园
和 源园 滋酝袁以 匀圆韵和 阅孕陨 粉末的溶剂 阅酝杂韵 作为阴
性对照渊阅酝杂韵 处理浓度与 阅孕陨 处理中所含 阅酝杂韵
最大浓度一致冤遥 经过预处理的叶片接种辣椒疫霉
游动孢子袁猿远 澡后统计发病情况遥
取经过 阅孕陨预处理 圆源 澡 的本氏烟叶片袁接种盆
中并放置滤纸袁加入少量无菌水保湿遥 接种浓度为
员 伊 员园远 个 辕 皂蕴的辣椒疫霉游动孢子袁约 猿远 澡 后在手
持紫外灯下拍照并测量病斑直径袁计算病斑面积遥
接种结束后袁用保鲜膜密封接种盘保湿袁置于 圆缘 益
黑暗培养箱袁观察 阅孕陨预处理 圆源 澡 后的本氏烟叶片
经辣椒疫霉菌侵染 猿远 澡 后的发病情况袁并统计病斑
面积大小遥 每个处理接种 远 个平行叶片袁猿 次重复遥
员援 猿 数据分析
采用 阅孕杂 苑援 园缘 数据处理软件进行数据统计分
析袁阅怎灶糟葬灶氏新复极差法果进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 疫霉接种不同时间点过氧化氢产量的确定
用辣椒疫霉和大豆疫霉分别接种本氏烟叶片袁
结果发现院与对照水处理相比袁本氏烟在其亲和互作
辣椒疫霉侵染 愿 澡 时过氧化氢含量达到最大值
渊图 员鄄粤袁月冤曰员圆 澡左右辣椒疫霉侵染进入死体营养阶
段袁叶片腐烂曰而对于非亲和互作的大豆疫霉袁接种本
氏烟叶片 圆源 澡过氧化氢含量达到最大值渊图 员鄄悦袁阅冤遥
说明 圆 种疫霉菌均能诱导本氏烟发生氧迸发现象袁
且在检测的时间范围内大豆疫霉诱导本氏烟发生氧
迸发的时间点明显晚于辣椒疫霉遥
图 员 本氏烟叶片接种疫霉菌不同时间点过氧化氢含量
云蚤早援 员 匀圆韵圆 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 造藻葬增藻泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽责责援
摇 摇 粤 耀 月院 分别为本氏烟叶片接种辣椒疫霉后不同时间点叶片中 匀圆韵圆 含量以及 阅粤月染色结果曰 悦 耀 阅院 分别为本氏烟叶片接种大豆
疫霉后不同时间点叶片中匀圆韵圆 含量以及 阅粤月染色结果遥 图中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示不同处理数据间经阅怎灶糟葬灶
氏新复极差法检验差异显著渊孕 约园援 园缘冤遥 粤 原 月院 酝藻葬泽怎则藻皂藻灶贼 燥枣 匀圆韵圆 糟燥灶贼藻灶贼泽 葬灶凿 阅粤月鄄泽贼葬蚤灶蚤灶早 葬贼 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 孕援
糟葬责泽蚤糟蚤曰 悦 原 阅院 皂藻葬泽怎则藻皂藻灶贼 燥枣 匀圆韵圆 糟燥灶贼藻灶贼泽 葬灶凿 阅粤月鄄泽贼葬蚤灶蚤灶早 葬贼 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 孕援 泽燥躁葬藻援 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼
造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 葬遭燥增藻 贼澡藻 造蚤灶藻泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
缘圆远缘 期 卢晓雪等院 晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟与疫霉菌互作中的功能分析
圆援 圆 晕遭砸遭燥澡粤和 晕遭砸遭燥澡月基因的诱导表达
选择本氏烟 晕遭砸遭燥澡粤 和 晕遭砸遭燥澡月 基因袁检测了
其诱导表达模式遥 结果表明院晕遭砸遭燥澡粤 基因在辣椒
疫霉或大豆疫霉侵染时不表现上调表达曰晕遭砸遭燥澡月
基因在这 圆 种霉诱导下均发生上调表达遥 其中辣椒
疫霉侵染 愿 澡 后 晕遭砸遭燥澡月 基因相对表达量最高
渊图 圆冤曰大豆疫霉接种 愿 澡 相对表达量有所增加袁
圆源 澡时其相对表达量达到最高渊图 圆冤曰且 晕遭砸遭燥澡月
基因受非亲和互作大豆疫霉诱导上调表达倍数明显
高于亲和互作病原菌辣椒疫霉遥 与 圆援 员 结果比较袁
发现 圆种疫霉菌诱导 晕遭砸遭燥澡月 基因相对表达量最高
时间点与诱导本氏烟发生氧迸发的时间点基本一致袁
表明该基因参与了 圆 种疫霉菌诱导本氏烟发生的氧
迸发过程遥
图 圆 两种疫霉菌接种本氏烟不同时间点 晕遭砸遭燥澡粤与 晕遭砸遭燥澡月基因的相对表达量
云蚤早援 圆 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造泽 燥枣 晕遭砸遭燥澡粤 葬灶凿 晕遭砸遭燥澡月 早藻灶藻泽 怎责燥灶 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽责责援
摇 摇 图中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示不同处理间经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 葬遭燥增藻 贼澡藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻
则葬灶早藻 贼藻泽贼援
圆援 猿 晕遭砸遭燥澡月基因沉默本氏烟植株的抗性检测
如图 猿鄄粤所示袁晕遭砸遭燥澡月 基因沉默的本氏烟植
株表型和注射空载体的对照相比没有明显差异遥 选
取与失绿新叶相同生长部位的本氏烟叶片袁提取总
砸晕粤袁检测 晕遭砸遭燥澡月 基因的沉默效率袁获得了沉默
效率约为 苑园豫基因沉默的植株渊图 猿鄄月冤遥
与对照相比袁辣椒疫霉侵染 猿远 澡后袁晕遭砸遭燥澡月基
因沉默的烟草叶片病斑面积较大渊图 源鄄粤冤袁菌丝的
扩展也相对较密集渊图 源鄄月上冤曰从 阅粤月和苯胺蓝的
染色结果中可以看出袁晕遭砸遭燥澡月 基因沉默的烟草叶
片过氧化氢积累和胼胝质沉积显著降低渊图 源鄄月冤遥
表明 晕遭砸遭燥澡月基因沉默后降低了本氏烟对辣椒疫
霉的抗性遥
与对照相比袁晕遭砸遭燥澡月 基因沉默叶片中过氧化
氢积累和胼胝质沉积均降低渊图 缘冤遥 但用大豆疫霉
接种基因沉默的本氏烟叶片袁观察不到肉眼可见的
病斑表型和菌丝扩展的差异遥 表明虽然 晕遭砸遭燥澡月
基因沉默后降低了本氏烟中过氧化氢含量和胼胝质
的沉积袁但是并不能影响本氏烟对大豆疫霉的抗性遥
圆援 源 阅孕陨对辣椒疫霉的抗性检测
与对照 匀圆韵 和 阅酝杂韵 处理相比袁不同浓度的阅孕陨 溶液处理过的本氏烟草叶片抗病性有所降低袁
而且降低程度随着 阅孕陨 处理浓度的升高而增大
渊图 远冤遥 表明当 晕粤阅孕匀 氧化酶活性被抑制时袁植
物对辣椒疫霉的抗性下降遥
猿 讨论
本研究发现本氏烟的亲和与非亲和互作疫霉菌
均能诱导其发生氧迸发袁且大豆疫霉诱导氧迸发发
生时间点明显晚于辣椒疫霉袁这与 酝藻造蚤造造燥 等咱圆园暂在
其它病害系统中的报道一致遥 进一步检测 晕遭砸遭燥澡月
基因的表达模式袁发现其在 圆 种疫霉菌侵染时均上
调表达袁说明该基因参与了本氏烟的氧迸发过程遥
此外袁本研究发现 晕遭砸遭燥澡月 基因沉默后降低了
本氏烟对辣椒疫霉菌的抗性袁但不能影响对大豆疫
霉的非寄主抗性曰晕粤阅孕匀氧化酶抑制剂 阅孕陨处理本
氏烟后袁在酶活性及 匀圆韵圆 产生被抑制的情况下其
对辣椒疫霉的抗病性降低袁进一步证明 晕粤阅孕匀 氧
化酶及 晕遭砸遭燥澡月基因在植物抗病中的作用遥
本研究采用的沉默植物内源基因技术为病毒诱
导的基因沉默渊灾陨郧杂冤袁属于转录后的基因沉默咱圆员暂 袁
研究所用的烟草脆裂病毒载体渊栽砸灾冤诱导基因沉
默的效率以及持久性都高于大部分病毒沉默载体袁
且病毒本身的症状也较轻咱圆圆暂 袁这都为本研究的基因
远圆远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 猿 获得 晕遭砸遭燥澡月基因沉默的本氏烟植株
云蚤早援 猿 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 责造葬灶贼泽 憎蚤贼澡 晕遭砸遭燥澡月 泽蚤造藻灶糟藻凿
摇 摇 粤院 本氏烟叶片接种病毒 圆园 凿后的叶片表型曰 月院 晕遭砸遭燥澡月基因的相对表达量遥 图中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示
不同处理间经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 悦燥灶贼则燥造 越 责栽砸灾员 垣 责栽砸灾圆曰 晕遭砸遭燥澡月渊鄄冤 越 责栽砸灾员 垣 责栽砸灾圆宜晕遭砸遭燥澡月援
粤院 孕造葬灶贼 造藻葬枣 责澡藻灶燥贼赠责藻 圆园 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 月院 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 晕遭砸遭燥澡月 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬造 造藻增藻造泽援 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣鄄
枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 葬遭燥增藻 贼澡藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 孕 约园援园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
图 源 晕遭砸遭燥澡月基因沉默的植株对辣椒疫霉抗病性的影响
云蚤早援 源 杂蚤造藻灶糟蚤灶早 晕遭砸遭燥澡月 凿藻责则藻泽泽藻凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 贼燥 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 糟葬责泽蚤糟蚤
摇 摇 粤院 阴性对照与 晕遭砸遭燥澡月基因沉默叶片的病斑面积曰 月院 叶片中的菌丝量尧过氧化氢积累量与胼胝质沉积情况遥 图中数据为平均
数 依标准误遥 不同小写字母表示不同处理间经 阅怎灶糟葬灶 氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 粤院 蕴藻泽蚤燥灶 葬则藻葬 蚤灶 晕遭砸遭燥澡月鄄泽蚤造藻灶糟藻凿
渊晕遭砸遭燥澡月渊鄄冤冤 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 造藻葬增藻泽曰 月院 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 澡赠责澡葬造 凿藻灶泽蚤贼赠袁 匀圆韵圆 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟葬造造燥泽藻 凿藻责燥泽蚤贼蚤燥灶 蚤灶 晕遭砸遭燥澡月鄄
泽蚤造藻灶糟藻凿 渊晕遭砸遭燥澡月渊鄄冤冤 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 晕援 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 造藻葬增藻泽援 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 葬遭燥增藻 贼澡藻 遭葬则泽
蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
沉默体系提供了有效的技术支撑遥 氧迸发属于植物
与微生物互作过程中的普遍反应过程咱员怨暂 袁参与氧迸
发过程的 砸遭燥澡基因在很多研究中均被证明能够影
响植物形态发生和发展进程等过程遥 如 月则蚤早澡贼
等咱圆猿暂报道拟南芥 砸遭燥澡阅 辕 云 的双突变体用脱落酸处
理对气孔的关闭具有显著抑制作用遥 基因沉默技术
也提供了关于植物与微生物互作中 砸遭燥澡 基因功能
的证据袁在澡葬灶早 等咱员苑暂研究表明 晕遭砸遭燥澡粤 与 晕遭砸遭燥澡月
基因能影响激发子引起的气孔关闭现象袁但对其引
起的过敏性细胞死亡过程没有影响袁说明 砸遭燥澡基因
在依赖活性氧的诸多植物功能中起着重要作用袁这
也为继续探究 砸遭燥澡 基因在植物生长及抗病进程中
的其它作用提供了思路遥
本研究证明了晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟抗亲和
苑圆远缘 期 卢晓雪等院 晕遭砸遭燥澡月基因在本氏烟与疫霉菌互作中的功能分析
图 缘 大豆疫霉接种 晕遭砸遭燥澡月基因沉默叶片的 匀圆韵圆 积累与胼胝质染色的检测
云蚤早援 缘 匀圆韵圆 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟葬造造燥泽藻 凿藻责燥泽蚤贼蚤燥灶 增蚤泽怎葬造蚤扎藻凿 遭赠 阅粤月 葬灶凿 葬灶蚤造蚤灶藻 遭造怎藻
泽贼葬蚤灶蚤灶早 葬枣贼藻则 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽燥躁葬藻
图 远 经 阅孕陨预处理的本氏烟叶片对辣椒疫霉的抗病性降低
云蚤早援 远 孕则藻鄄贼则藻葬贼皂藻灶贼 燥枣 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬 造藻葬增藻泽 憎蚤贼澡 阅孕陨 则藻凿怎糟藻凿 贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 糟葬责泽蚤糟蚤
摇 摇 图中数据为平均数 依标准误遥 不同小写字母表示不同处理间经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻
葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 葬遭燥增藻 贼澡藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎
皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
互作病原菌辣椒疫霉的过程中起着重要作用遥 辣椒
疫霉属于半活体寄生菌袁在活体寄生阶段病原菌抑
制寄主的免疫反应过程袁侵染的菌丝能够扩展到植
物组织中袁随后向植物分泌毒素导致寄主细胞死亡袁
进入死体营养阶段咱圆源暂 袁因此袁提高植物对半活体寄
生菌的抗性袁在侵染初期阶段尤为重要遥 活性氧是
植物应对外界刺激产生的初级防卫反应产物袁其在
植物对半活体病原菌的抗寄生阶段起着至关重要的
作用遥 对于本氏烟非亲和互作的大豆疫霉菌袁可以
激发本氏烟强烈的抗性反应袁虽然本研究的 晕遭砸遭燥鄄
澡月基因能够影响植物抗性指标的改变袁但却不足以
影响植物对大豆疫霉的非寄主抗性遥 表明虽然活性
氧是植物产生基础抗性的重要指标袁然而其对非亲
和互作的大豆疫霉的抗性可能受多种因素共同调
控袁其调控机理还需进一步深入研究遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 栽赠造藻则 月 酝援 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 泽燥躁葬藻院 则燥燥贼 则燥贼 责葬贼澡燥早藻灶 燥枣 泽燥赠遭藻葬灶
葬灶凿 皂燥凿藻造 燥燥皂赠糟藻贼藻援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 愿渊员冤院
员 原 愿
咱圆暂 云则赠 宰援 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 蚤灶枣藻泽贼葬灶泽院 贼澡藻 责造葬灶贼 渊 葬灶凿 砸 早藻灶藻冤 凿藻鄄
泽贼则燥赠藻则援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 怨渊猿冤院 猿愿缘 原 源园圆
咱猿暂 韵忆月则蚤藻灶 允 粤袁 阅葬怎凿蚤 粤袁 月怎贼贼 灾 杂袁 藻贼 葬造援 砸藻葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻鄄
糟蚤藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 则燥造藻 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶糟藻 葬灶凿 糟藻造造 憎葬造造 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂援
孕造葬灶贼葬袁 圆园员圆袁 圆猿远渊猿冤院 苑远缘 原 苑苑怨
愿圆远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
咱源暂 匝蚤怎 载袁 蕴藻蚤 悦袁 匀怎葬灶早 蕴袁 藻贼 葬造援 耘灶凿燥早藻灶燥怎泽 澡赠凿则燥早藻灶 责藻则燥曾蚤凿藻
蚤泽 葬 噪藻赠 枣葬糟贼燥则 蚤灶 贼澡藻 赠藻葬泽贼 藻曾贼则葬糟贼鄄蚤灶凿怎糟藻凿 葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 遭蚤责澡藻灶赠造
遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 蚤灶 糟藻造造 糟怎造贼怎则藻泽 燥枣 杂燥则遭怎泽 葬怎糟怎责葬则蚤葬援 孕造葬灶贼葬袁 圆园员圆袁
圆猿缘渊员冤院 圆员苑 原 圆圆猿
咱缘暂 阅葬怎凿蚤 粤袁 悦澡藻灶早 在袁 韵忆月则蚤藻灶 允 粤袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 葬责燥责造葬泽贼蚤糟 燥曾蚤凿葬鄄
贼蚤增藻 遭怎则泽贼 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 蚤泽 葬 皂葬躁燥则 糟燥皂责燥灶藻灶贼 燥枣 责葬贼鄄
贼藻则灶鄄贼则蚤早早藻则藻凿 蚤皂皂怎灶蚤贼赠援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园员圆袁 圆源 渊 员 冤院
圆苑缘 原 圆愿苑
咱远暂 在澡燥怎 再袁 再葬灶 匀袁 郧怎燥 酝袁 藻贼 葬造援 砸藻葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 蚤灶 增葬泽鄄
糟怎造葬则 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼援 韵曾蚤凿葬贼蚤增藻 酝藻凿蚤糟蚤灶藻 葬灶凿 悦藻造鄄
造怎造葬则 蕴燥灶早藻增蚤贼赠袁 圆园员圆袁 圆园员猿院 员 原 员源
咱苑暂 阅藻泽蚤噪葬灶 砸袁 晕藻蚤造造 杂 允袁 匀葬灶糟燥糟噪 允 栽援 匀赠凿则燥早藻灶 责藻则燥曾蚤凿藻鄄蚤灶鄄
凿怎糟藻凿 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬援 云则藻藻 砸葬凿蚤糟葬造 月蚤鄄
燥造燥早赠 葬灶凿 酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁 圆园园园袁 圆愿渊缘冤院 苑苑猿 原 苑苑愿
咱愿暂 阅藻 酝蚤灶蚤糟蚤泽 杂袁 月则藻灶灶藻则 阅 粤援 晕韵载 蚤灶 造蚤增藻则 枣蚤遭则燥泽蚤泽援 粤则糟澡蚤增藻泽 燥枣
月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 月蚤燥责澡赠泽蚤糟泽袁 圆园园苑袁 源远圆渊圆冤院 圆远远 原 圆苑圆
咱怨暂 运葬怎则 郧袁 杂澡葬则皂葬 粤袁 郧怎则怎责则葬泽葬凿 运袁 藻贼 葬造援 灾藻则泽葬贼蚤造藻 则燥造藻泽 燥枣
责造葬灶贼 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻泽 葬灶凿 藻皂藻则早蚤灶早 糟燥灶糟藻责贼泽援 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠
粤凿增葬灶糟藻泽袁 圆园员源袁 猿圆渊猿冤院 缘缘员 原 缘远猿
咱员园暂 郧则燥燥皂 匝 允袁 栽燥则则藻泽 酝 粤袁 云燥则凿澡葬皂鄄杂噪藻造贼燥灶 粤 孕袁 藻贼 葬造援 则遭燥澡粤袁
葬 则蚤糟藻 澡燥皂燥造燥早怎藻 燥枣 贼澡藻 皂葬皂皂葬造蚤葬灶 早责怨员 责澡燥曾 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠 遭怎则泽贼
燥曾蚤凿葬泽藻 早藻灶藻援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 员怨怨远袁 员园渊猿冤院 缘员缘 原 缘圆圆
咱员员暂 再燥泽澡蚤燥噪葬 匀袁 晕怎皂葬贼葬 晕袁 晕葬噪葬躁蚤皂葬 运袁 藻贼 葬造援 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬鄄
皂蚤葬灶葬 早责怨员责澡燥曾 澡燥皂燥造燥早泽 晕遭则遭燥澡粤 葬灶凿 晕遭则遭燥澡月 责葬则贼蚤糟蚤责葬贼藻 蚤灶
匀圆韵圆 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 蚤灶枣藻泽贼葬灶泽援
栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园猿袁 员缘渊猿冤院 苑园远 原 苑员愿
咱员圆暂 再燥泽澡蚤燥噪葬 匀袁 杂怎早蚤藻 运袁 孕葬则噪 匀 允袁 藻贼 葬造援 陨灶凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼
早责怨员 责澡燥曾 澡燥皂燥造燥早 遭赠 枣怎灶早葬造 糟藻造造 憎葬造造袁 葬则葬糟澡蚤凿燥灶蚤糟 葬糟蚤凿袁 葬灶凿
泽葬造蚤糟赠造蚤糟 葬糟蚤凿 蚤灶 责燥贼葬贼燥援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁
圆园园员袁 员源渊远冤院 苑圆缘 原 苑猿远
咱员猿暂 运藻造造藻则 栽袁 阅葬皂怎凿藻 匀 郧袁 宰藻则灶藻则 阅袁 藻贼 葬造援 粤 责造葬灶贼 澡燥皂燥造燥早 燥枣
贼澡藻 灶藻怎贼则燥责澡蚤造 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻 早责怨员 责澡燥曾 泽怎遭怎灶蚤贼 早藻灶藻 藻灶糟燥凿藻泽 葬
责造葬泽皂葬 皂藻皂遭则葬灶藻 责则燥贼藻蚤灶 憎蚤贼澡 悦葬圆 垣 遭蚤灶凿蚤灶早 皂燥贼蚤枣泽援 栽澡藻 孕造葬灶贼
悦藻造造袁 员怨怨愿袁 员园渊圆冤院 圆缘缘 原 圆远远
咱员源暂 栽燥则则藻泽 酝 粤袁 韵灶燥怎糟澡蚤 匀袁 匀葬皂葬凿葬 杂袁 藻贼 葬造援 杂蚤曾 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼澡葬造蚤葬灶葬 澡燥皂燥造燥早怎藻泽 燥枣 贼澡藻 澡怎皂葬灶 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠 遭怎则泽贼 燥曾蚤凿葬泽藻
渊早责怨员 责澡燥曾冤援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 员怨怨愿袁 员源渊猿冤院 猿远缘 原 猿苑园
咱员缘暂 杂葬早蚤 酝袁 阅葬增赠凿燥增 韵袁 韵则葬扎燥增葬 杂袁 藻贼 葬造援 孕造葬灶贼 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠 遭怎则泽贼
燥曾蚤凿葬泽藻 澡燥皂燥造燥早泽 蚤皂责蚤灶早藻 燥灶 憎燥怎灶凿 则藻泽责燥灶泽蚤增藻灶藻泽泽 葬灶凿 凿藻增藻造鄄
燥责皂藻灶贼 蚤灶 蕴赠糟燥责藻则泽蚤糟燥灶 藻泽糟怎造藻灶贼怎皂援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园源袁 员远
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咱员远暂 云燥则藻皂葬灶 允袁 阅藻皂蚤凿糟澡蚤噪 灾袁 月燥贼澡憎藻造造 允 匀 云袁 藻贼 葬造援 砸藻葬糟贼蚤增藻 燥曾鄄
赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 责则燥凿怎糟藻凿 遭赠 晕粤阅孕匀 燥曾蚤凿葬泽藻 则藻早怎造葬贼藻 责造葬灶贼 糟藻造造
早则燥憎贼澡援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园猿袁 源圆圆院 源源圆 原 源源远
咱员苑暂 在澡葬灶早 匀袁 云葬灶早 匝袁 在澡葬灶早 在袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 则燥造藻 燥枣 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠
遭怎则泽贼 燥曾蚤凿葬泽藻 澡燥皂燥造燥早怎藻泽 蚤灶 藻造蚤糟蚤贼燥则鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼燥皂葬贼葬造 糟造燥泽怎则藻
葬灶凿 澡赠责藻则泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻 蚤灶 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬援 允燥怎则灶葬造
燥枣 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 月燥贼葬灶赠袁 圆园园怨袁 远园渊员员冤院 猿员园怨 原 猿员圆圆
咱员愿暂 蕴蚤增葬噪 运 允袁 杂糟澡皂蚤贼贼早藻灶 栽 阅援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则藻造葬贼蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽鄄
泽蚤燥灶 凿葬贼葬 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸 葬灶凿 贼澡藻 圆 原吟吟悦栽
皂藻贼澡燥凿援 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园员袁 圆缘渊源冤院 源园圆 原 源园愿
咱员怨暂 杂糟澡蚤藻遭藻则 酝袁 悦澡葬灶凿藻造 晕 杂援 砸韵杂 枣怎灶糟贼蚤燥灶 蚤灶 则藻凿燥曾 泽蚤早灶葬造蚤灶早
葬灶凿 燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 泽贼则藻泽泽援 悦怎则则藻灶贼 月蚤燥造燥早赠袁 圆园员源袁 圆源渊员园冤院 源缘猿 原
源远圆
咱圆园暂 酝藻造蚤造造燥 酝 栽袁 蕴藻燥灶藻贼贼蚤 孕袁 月燥灶早蚤燥增葬灶灶蚤 酝袁 藻贼 葬造援 酝燥凿怎造葬贼蚤燥灶 燥枣
则藻葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 葬灶凿 匀圆韵圆 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 凿怎则鄄
蚤灶早 糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 葬灶凿 蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 贼燥皂葬贼燥鄄则燥燥贼鄄噪灶燥贼 灶藻皂葬贼燥凿藻 蚤灶鄄
贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽援 晕藻憎 孕澡赠贼燥造燥早蚤泽贼袁 圆园园远袁 员苑园渊猿冤院 缘园员 原 缘员圆
咱圆员暂 黄永红袁梅眉袁张吉祥袁等援 南方根结线虫 悦燥造基因分子克
隆及其 灾陨郧杂 效应分析援 植物保护学报袁 圆园员猿袁 源园 渊源冤院
猿猿猿 原 猿猿愿
咱圆圆暂 云怎 阅 匝袁 在澡怎 月 在袁 在澡怎 匀 蕴袁 藻贼 葬造援 灾蚤则怎泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻 泽蚤造藻灶鄄
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