全 文 ：抗烟草青枯病菌的芽胞杆菌筛选和鉴定
杂糟则藻藻灶蚤灶早袁 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 则澡蚤扎燥泽责澡藻则蚤糟 月葬糟蚤造造怎泽 泽责援
蕴宰鄄远 葬早葬蚤灶泽贼 贼燥遭葬糟糟燥 遭葬糟贼藻则蚤葬造 憎蚤造贼
刘摇 伟摇 沈小英摇 段军娜摇 牛小义摇 宋摇 双摇 安德荣鄢
渊西北农林科技大学植物保护学院袁 旱区作物逆境生物学国家重点实验室袁 陕西 杨凌 苑员圆员园园冤
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晕燥则贼澡憎藻泽贼 粤 驭 云 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 再葬灶早造蚤灶早 苑员圆员园园袁 杂澡葬灶灶曾蚤 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
摇 摇 烟草青枯病是由青枯劳尔氏菌 砸葬造葬贼燥灶蚤葬 泽燥鄄
造葬灶葬糟藻葬则怎皂引起的一种土传病害咱员暂 遥 此病是热带尧
亚热带地区烟草的主要病害之一袁在我国长江流域
及其以南烟区普遍发生袁其中以广东尧福建尧湖南尧四
川及贵州烟区危害较重咱圆暂 遥
烟草青枯病自发现以来袁引起了国内外学者的
广泛关注遥 目前袁在生产中主要采用化学农药防治袁
但是仍无法有效防止该病发生袁而且容易产生抗药
性和造成环境污染遥 生物防治具有无污染尧无公害
和长效性等优点袁在植物病害的防治中占据越来越
重要的位置遥 李清飞等咱猿暂从福建烟田根际土壤中
分离出 缘 株对烟草青枯病有明显抑制作用的细菌遥
蕴藻皂藻泽泽葬 驭 在藻造造藻则咱源暂从埃塞俄比亚烟田根际土壤中筛
选出 远 株对烟草青枯病有明显拮抗作用的细菌遥 本
研究对烟草种植区根际土壤进行拮抗细菌的分离筛
选和鉴定袁以期为防治烟草青枯病提供生防资源遥
员 材料与方法
员援 员 材料院土样院从福建龙岩尧四川德昌尧陕西汉中
等地的健康烟草土壤中采集土样 猿园 份遥 培养基院
栽栽悦培养基袁牛肉膏蛋白胨培养基袁蕴月 液体培养基袁
月孕粤固体培养基袁晕粤 固体培养基袁晕粤 拮抗菌突变
株回收培养基院对应 晕粤 培养基中加入 园援 园员豫氯化
三苯基四氮唑遥 供试菌株院烟草青枯病菌 砸援 泽燥鄄
造葬灶葬糟藻葬则怎皂由西北农林科技大学植物病害综合治理
实验室提供遥
员援 圆 拮抗芽胞杆菌的分离院称取烟草根际土壤 员园 早袁
倒入装有 怨园 皂蕴灭菌水的锥形瓶中袁员远园 则 辕 皂蚤灶 振荡
圆园 皂蚤灶袁愿园 益水浴 猿园 皂蚤灶袁员园 倍稀释袁涂布分离遥 纯
化的细菌经革兰氏染色和芽孢染色袁显示菌体呈杆
状尧产芽孢尧革兰氏染色阳性的分离物为芽胞杆
菌咱缘暂 遥 拮抗芽胞杆菌的筛选院用 栽栽悦 培养基选择具
有活性的烟草青枯病菌作为指示菌袁将烟草青枯病
菌配成 圆 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴浓度的菌悬液袁转接到 月孕粤
培养基上袁制成青枯病菌含菌培养基遥 在平板中央
接上述己分离纯化的芽胞杆菌菌株袁猿园 益培养 圆 耀 猿
天袁测定抑菌圈直径和抑菌带的大小遥
员援 猿 拮抗芽胞杆菌的鉴定院菌体形态尧培养特征观
察及生理生化指标测定参照柳凤等咱远暂方法遥 员远杂
则阅晕粤基因序列测定及其系统进化树的构建参照
栽燥凿燥则燥增等咱苑暂 遥 提取细菌基因组 阅晕粤 为模板袁以 苑枣
渊缘忆鄄悦粤郧粤郧栽栽栽郧粤栽悦悦栽郧郧悦栽鄄猿忆冤 和 员缘源园则 渊缘忆鄄粤郧鄄
郧粤郧郧栽郧粤栽悦悦粤郧悦悦郧悦粤鄄猿忆冤为上尧下游引物扩增菌
株的 员远杂 则阅晕粤遥 孕悦砸 产物经 员豫琼脂糖凝胶电泳
检测后送往上海生工生物工程有限公司进行序列测
定袁测序结果用 月蕴粤杂栽软件在 郧藻灶月葬灶噪进行同源性
比较 遥以 悦造怎泽贼葬造 载进行多序列比对后 袁用酝耘郧粤
缘援 园 的 晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早 法构建系统发育树袁并进行
员 园园园 次 月燥燥贼泽贼则葬责泽检测遥
圆 结果与分析
圆援 员 拮抗细菌的筛选结果
从采集的 猿园 份土壤样品中袁分离得到 苑愿园 株芽
胞杆菌遥 通过对所分离的芽胞杆菌进行拮抗初筛袁
得到抗烟草青枯病菌活性较好的菌株 蕴宰鄄远袁抑菌圈
直径为 圆员援 园缘 皂皂袁抑菌带宽为 愿援 猿苑 皂皂遥
圆援 圆 蕴宰鄄远 菌株鉴定
培养性状尧形态学特征及生理生化特征院在 晕粤
基金项目院 高等学校学科创新引智计划渊晕燥援 月园苑园源怨冤袁国家野愿远猿冶计划渊圆园园苑粤粤园圆员缘园猿冤
作者简介院 刘伟袁女袁员怨愿苑年生袁硕士研究生袁研究方向为微生物资源利用袁 耘鄄皂葬蚤造院 憎藻蚤憎藻蚤责藻灶早援 猿愿园园园园远岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 葬灶凿藻则燥灶早猿圆猿岳 员远猿援 糟燥皂曰 收稿日期院 圆园员圆 原 园怨 原 员园
第 源园 卷摇 第 员 期
圆园员猿 年摇 圆 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 员
云藻遭援 摇 圆园员猿
固体培养基上 蕴宰鄄远 菌落呈现奶白色袁菌落表面粗
糙袁边缘呈现锯齿状袁透射电镜显示 蕴宰鄄远 呈杆状袁
革兰氏阳性袁周生鞭毛袁单个细胞大小为 园援 缘 耀 园援 远
滋皂 伊圆援 园 耀 圆援 缘 滋皂 渊图 员冤遥 菌株 蕴宰鄄远 可以使明胶
液化曰 能水解淀粉和还原硝酸盐曰葡萄糖尧阿拉伯
糖尧木糖尧甘露糖尧接触酶尧脂肪酶尧脲酶及氧化酶均
呈阳性曰灾鄄孕 试验为阳性曰 不利用柠檬酸盐遥 生长
温度为 员园 耀 远园 益袁最适生长温度为 猿园 益曰 责匀 值为
猿援 园 耀 员员援 园袁最适为 苑援 园曰具有耐盐性袁可以在 员缘豫
的 晕葬悦造 培养基中生长遥
图 员 透射电镜和扫描电镜下 蕴宰鄄远 菌株形态
云蚤早援 员 栽澡藻 贼则葬灶泽皂蚤泽泽蚤燥灶 葬灶凿 泽糟葬灶灶蚤灶早 藻造藻糟贼则燥灶 皂蚤糟则燥泽糟燥责赠 蚤皂葬早藻泽 燥枣 蕴宰鄄远 泽贼则葬蚤灶
摇 摇 员远杂 则阅晕粤序列分析与系统进化树构建院以 蕴宰鄄
远 基因组 阅晕粤为模板袁用引物 苑枣和 员缘源园则进行 孕悦砸
扩增袁测得该菌株的 员远杂 则阅晕粤核苷酸序列长度为 员
源缘源 遭责袁郧藻灶月葬灶噪登录号为 允载圆圆园怨愿园遥 通过与 晕悦月陨
中模式菌株的 员远杂 则阅晕粤 序列比对分析和系统发育
树的构建袁蕴宰鄄远 菌株与甲基营养型芽胞杆菌 月葬糟蚤造鄄
造怎泽 皂藻贼澡赠造燥贼则燥责澡蚤糟怎泽 悦月酝月圆园缘渊栽冤 渊郧藻灶月葬灶噪 登录号
为 耘哉员怨源愿怨苑冤同源性最近袁相似性为 员园园豫 遥 综合
菌株的培养特征尧形态和生理生化特征及 员远杂 则阅晕粤
序列分析结果袁蕴宰鄄远 菌株为甲基营养型芽胞杆菌
月援 皂藻贼澡赠造燥贼则燥责澡蚤糟怎泽渊图 圆冤遥
图 圆 菌株 蕴宰鄄远 的系统进化树
云蚤早援 圆 栽澡藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶葬造 贼则藻藻 燥枣 泽贼则葬蚤灶 蕴宰鄄远
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 彭细桥袁刘红艳袁罗宽袁等援 烟草内生青枯病拮抗细菌的筛选
和初步鉴定援 中国烟草科学袁圆园园苑袁圆愿渊圆冤院 猿愿 原 源园
咱圆暂 陈瑞泰袁朱贤朝袁王智发袁等援 全国 员远个主产烟省渊区冤 烟草
侵染性病害调研报告援 中国烟草科学袁员怨怨苑渊源冤院员 原 苑
咱猿暂 李清飞袁李红丽袁王岩袁等援 烟草青枯病病原菌的分离及其拮
抗菌的筛选援 河南农业科学袁圆园园远渊员冤院缘员 原 缘猿袁苑怨
咱源暂 蕴藻皂藻泽泽葬 云袁 在藻造造藻则 宰援 杂糟则藻藻灶蚤灶早 则澡蚤扎燥遭葬糟贼藻则蚤葬 枣燥则 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造
糟燥灶贼则燥造 燥枣 砸葬造泽贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂 蚤灶 耘贼澡蚤燥责蚤葬援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦燥灶鄄
摇 摇 贼则燥造袁 圆园园苑袁 源圆渊猿冤院猿猿远 原 猿源源
咱缘暂 马志远袁李金岭袁冯志珍袁等援 一株烟草赤星病拮抗芽胞杆菌
的鉴定与活性研究援 西北农林科技大学渊自然科学版冤袁
圆园员圆袁源园渊猿冤院员员苑 原 员圆缘
咱远暂 柳凤袁欧雄常袁何红袁等援 红树内生细菌 粤皂杂圆 菌株对芒果炭
疽病的抑制作用援 植物保护学报袁圆园员园袁猿苑渊缘冤院源缘猿 原 源缘愿
咱苑暂 栽燥凿燥则燥增 杂 阅袁 酝藻蚤灶糟噪藻灶 酝袁 阅蚤糟噪泽 蕴 酝 栽援 云葬糟贼燥则泽 葬枣枣藻糟贼蚤灶早 贼澡藻
葬凿泽燥则责贼蚤燥灶 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤燥糟蚤灶泽 杂栽员怨源月在 葬灶凿 杂栽圆猿蕴阅 贼燥 蕴葬糟贼燥遭葬糟蚤造造怎泽
泽葬噪藻蚤 葬灶凿 耘灶贼藻则燥糟燥糟糟灶泽 泽责援 允燥怎则灶葬造 燥枣 郧藻灶藻则葬造 葬灶凿 粤责责造蚤藻凿 酝蚤鄄
糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁 缘圆院 员缘怨 原 员远苑
渊责任编辑院谢小帆冤
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