全 文 ：小麦小 郧栽孕结合蛋白基因 栽葬砸燥责猿
克隆及其表达分析
霍摇 冲摇 安艳秋摇 王凤涛摇 冯摇 晶摇 蔺瑞明鄢摇 徐世昌
渊中国农业科学院植物保护研究所袁 植物病虫害生物学国家重点实验室袁 北京 员园园员怨猿冤
摘要院 利用同源克隆法从小麦抗条锈病基因 再则缘 近等基因系渊栽葬蚤糟澡怎灶早圆怨鄢远 辕 再则缘冤克隆到编码 砸燥责
蛋白基因的全长 糟阅晕粤 序列袁并将基因命名为 栽葬砸燥责猿渊栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂 砸燥责猿冤袁聚类分析其所在
砸燥责蛋白家族中的亚组袁并利用半定量 砸栽鄄孕悦砸 方法分析其组织表达特异性和不同诱导条件下表
达动态遥 序列分析表明袁栽葬砸燥责猿 开放阅读框为 远猿怨 遭责袁预测编码含 圆员猿 个氨基酸残基域型 砸燥责 蛋
白袁悦末端具有膜定位基序袁与大麦 匀增砸燥责源 和水稻 韵泽砸葬糟源 聚类在同一亚组遥 栽葬砸燥责猿 基因在小麦
幼苗和成株根尧茎尧叶片和茎节尧柱头及花药中均有表达袁其中在幼苗及成株茎部表达水平较高遥 非
亲和条锈菌小种 悦再砸员苑 侵染和水杨酸处理诱导 栽葬砸燥责猿 表达增强袁而干旱尧高温胁迫以及脱落酸尧
乙烯利和茉莉酸甲酯处理均降低该基因表达水平遥
关键词院 小麦曰 条锈菌曰 小 郧栽孕结合蛋白曰 表达谱分析
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽藻泽 燥枣 贼澡藻 憎澡藻葬贼 早藻灶藻 栽葬砸燥责猿
藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 泽皂葬造造 郧栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶
匀怎燥 悦澡燥灶早摇 粤灶 再葬灶择蚤怎摇 宰葬灶早 云藻灶早贼葬燥摇 云藻灶早 允蚤灶早摇 蕴蚤灶 砸怎蚤皂蚤灶早鄢摇 载怎 杂澡蚤糟澡葬灶早
渊杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 月蚤燥造燥早赠 燥枣 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻泽 葬灶凿 陨灶泽藻糟贼 孕藻泽贼泽袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁
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憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 葬 灶藻葬则鄄蚤泽燥早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 渊栽葬蚤糟澡怎灶早圆怨鄢远 辕 再则缘冤 燥枣 憎澡藻葬贼 泽贼则蚤责藻 则怎泽贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻 再则缘
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造赠 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 贼赠责藻 域 砸燥责 责则燥贼藻蚤灶 憎蚤贼澡 圆员猿 葬皂蚤灶燥鄄葬糟蚤凿泽援 栽葬砸燥责猿袁 匀增砸燥责源 葬灶凿 韵泽砸葬糟源 憎藻则藻 糟造怎泽贼藻则藻凿
贼燥早藻贼澡藻则 蚤灶贼燥 贼澡藻 泽葬皂藻 泽怎遭早则燥怎责援 栽澡藻则藻 蚤泽 葬 皂藻皂遭则葬灶藻 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 泽蚤早灶葬造 皂燥贼蚤枣 葬贼 蚤贼泽 悦鄄贼藻则皂蚤灶葬造援 栽葬砸燥责猿
藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 贼澡藻 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 则燥燥贼袁 泽贼藻皂 造藻葬枣 燥枣 泽藻藻凿造蚤灶早 葬灶凿 葬凿怎造贼 憎澡藻葬贼 责造葬灶贼泽袁 葬灶凿 蚤灶 贼澡燥泽藻 燥枣 憎澡藻葬贼
灶燥凿藻泽袁 泽贼蚤早皂葬泽 葬灶凿 葬灶贼澡藻则泽援 陨贼 藻泽责藻糟蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬贼 葬 则藻造葬贼蚤增藻造赠 澡蚤早澡藻则 造藻增藻造 蚤灶 泽贼藻皂泽 燥枣 泽藻藻凿造蚤灶早泽 葬灶凿
葬凿怎造贼 责造葬灶贼泽援 陨灶枣藻糟贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 则葬糟藻 悦再砸员苑 燥枣 孕怎糟糟蚤灶蚤葬 泽贼则蚤蚤枣燥则皂蚤泽 枣援 泽责援 贼则蚤贼蚤糟蚤 葬灶凿 泽葬造蚤糟赠造蚤糟 葬糟蚤凿
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葬灶凿 澡蚤早澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 泽贼则藻泽泽藻泽 葬灶凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 憎蚤贼澡 葬遭泽糟蚤泽蚤糟 葬糟蚤凿 渊粤月粤冤袁 藻贼澡藻责澡燥灶 渊耘栽冤 葬灶凿 皂藻贼澡赠造 躁葬泽鄄
皂燥灶葬贼藻 渊酝藻允粤冤援
运藻赠 憎燥则凿泽院 憎澡藻葬贼曰 孕怎糟糟蚤灶蚤葬 泽贼则蚤蚤枣燥则皂蚤泽 枣援 泽责援 贼则蚤贼蚤糟蚤曰 泽皂葬造造 郧栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶曰 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 葬灶葬造赠泽蚤泽
基金项目院 国家野怨苑猿冶计划渊圆园员猿悦月员圆苑苑园园冤袁国家自然科学基金渊猿员员苑员愿猿愿袁猿员圆远员员源园猿苑园冤
作者简介院 霍冲袁男袁员怨愿缘年生袁硕士研究生袁研究方向为分子植物病理学袁 耘鄄皂葬蚤造院 圆远圆怨园猿苑远远岳 择择援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 则皂造蚤灶岳 蚤责责糟葬葬泽援 糟灶曰 收稿日期院 圆园员猿 原 园缘 原 员园
第 源园 卷摇 第 远 期
圆园员猿 年摇 员圆 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 远
阅藻糟援 摇 圆园员猿
摇 摇 鸟嘌呤 原 缘忆 原 三磷酸 渊 早怎葬灶燥泽蚤灶藻鄄缘忆鄄贼则蚤责澡燥泽鄄
责澡葬贼藻袁郧栽孕冤结合蛋白渊郧栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽冤是一类
能结合并水解 郧栽孕的蛋白总称袁包括小 郧栽孕结合蛋
白尧异三聚体 郧栽孕结合蛋白和其它特殊 郧栽孕结合蛋
白咱员暂 遥 小 郧栽孕结合蛋白是一类分子量为 圆园 耀源园 噪阅
单体 郧栽孕结合蛋白袁包括 砸葬泽尧砸葬灶尧砸葬遭尧砸澡燥 和 粤则枣
等 缘 个家族咱圆暂 袁参与调控真核生物细胞增殖尧信号传
导和物质运输等过程遥 砸燥责家族蛋白是植物中特有
的一类小 郧栽孕 结合蛋白袁与 砸澡燥 家族成员高度同
源遥 宰蚤灶早藻等咱猿暂根据 悦端氨基酸序列差异将 砸燥责家
族蛋白分为两种类型袁即玉型和域型遥 玉型蛋白具
有保守的 悦葬葬蕴渊葬为脂肪族氨基酸冤基序袁域型蛋白
缺少该保守序列袁但具有 员 个含半胱氨酸残基的膜
锚定元件遥
砸燥责家族小 郧栽孕结合蛋白具有多种功能袁包括
调控植物细胞极性尧细胞生长尧形态发育尧胞质分裂尧
激素信号传导以及植物与病原菌互作尧抗逆反应等
过程咱源暂 遥 目前主要从植物外源激素胁迫尧缺氧胁迫
和过氧化物胁迫等方面研究 砸燥责 家族蛋白在调控
植物逆境胁迫反应中的功能遥 研究发现 砸燥责 蛋白
能诱导过氧化氢次级信号袁并通过增强缺氧胁迫相
关基因表达水平而提高对缺氧胁迫的耐受能力遥 另
外 砸燥责蛋白也可通过调控胞内钙离子信号途径袁增
强抗缺氧反应遥
水稻尧大麦尧紫花苜蓿和拟南芥等植物中 砸燥责
蛋白通过不同途径参与调控植物抗病原物侵染过
程袁如调控活性氧渊 则藻葬糟贼蚤增藻 燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽袁砸韵杂冤产
生尧木质素合成以及抗病相关基因表达等遥 砸燥责 家
族不同成员间在植物抗病过程中的作用也存在差
异袁如水稻 苑 个 砸燥责 蛋白中袁韵泽砸葬糟员 在抗稻瘟病过
程中起正调控作用袁韵泽砸葬糟源 和 韵泽砸葬糟缘 与增强水稻
感稻瘟性有关袁而 韵泽砸葬糟猿 和 韵泽砸葬糟苑 可能不参与该
过程咱缘暂 遥 砸燥责蛋白参与病原菌激发子引起寄主过敏
反应袁如在烟草中超量表达紫花苜蓿 酝泽砸葬糟员 基因袁
可以使病原菌激发子引发转基因烟草株系细胞死亡
并产生坏死斑咱远暂 遥 另外 砸燥责 蛋白还参与植物抗病
毒过程袁超量表达 在皂砸燥责员 基因的玉米株系能抑制
甘蔗花叶病毒繁殖咱苑暂 遥 但抑制 匀增砸葬糟月 表达则增强
了转基因大麦株系对白粉病菌抗性咱愿暂 袁说明该基因
在大麦抗白粉病反应过程中起负调控作用遥 因此袁
砸燥责蛋白在植物抗病反应过程中发挥重要调控作用遥
小麦条锈病是由小麦条锈菌 孕怎糟糟蚤灶蚤葬 泽贼则蚤蚤枣燥则皂蚤泽
枣援 泽责援 贼则蚤贼蚤糟蚤侵染引起的真菌病害袁该病害对我国小麦
安全生产构成严重威胁遥 我国是小麦条锈病独立的
流行生态区袁近年来已发生 源 次大规模流行遥 另外
高温尧干旱尧盐碱等非生物因子胁迫也对我国小麦生
产造成重大影响遥 筛选和利用小麦及其近缘属种抗
条锈病基因是拓宽抗病遗传资源和防治条锈病最有
效的途径咱怨暂 袁但有效抗病基因数量有限袁并常因条
锈病生理小种致病性改变而野丧失冶抗病功能遥 植
物特有的 砸燥责 家族蛋白部分成员参与调控植物抗
病反应或抗逆境胁迫过程袁并发挥重要作用遥 本研
究从小麦抗条锈病基因 再则缘 近等基因系分离获得编
码 砸燥责蛋白基因 栽葬砸燥责猿 全长 糟阅晕粤序列袁分析了该
基因编码的蛋白结构及其在小麦与条锈菌互作过程
中和在非生物胁迫反应中的表达模式袁以期为进一
步揭示 栽葬砸燥责猿 生物学功能提供线索遥
员 材料与方法
员援 员 材料
小麦试材 再则缘 近等基因系 栽葬蚤糟澡怎灶早圆怨鄢远 辕 再则缘袁
条锈菌非亲和小种 悦再砸员苑袁以及 再则缘 近等基因系全
长 糟阅晕粤文库袁均由中国农业科学院植物保护研究
所麦类病害组提供遥 总 砸晕粤 提取试剂 栽砸陨扎燥造 为英
杰公司产品曰反转录试剂盒 渊 栽则葬灶泽杂糟则蚤责贼 韵灶藻 杂贼藻责
早阅晕粤 砸藻皂燥增葬造 葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 杂怎责藻则酝蚤曾冤为北京
全式金生物技术有限公司生产曰构建 糟阅晕粤 文库试
剂盒渊在粤孕 耘曾责则藻泽泽 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼冤为美国 杂贼则葬贼鄄
葬早藻灶藻公司产品遥
将 再则缘 近等基因系播种在直径 员园 糟皂 花盆中袁
在 员缘 耀 员愿益温室中培养袁出苗 苑 凿 后袁分别进行以下
不同处理遥 淤取 猿 叶期小麦幼苗根尧茎和叶片组织
及成株期根尧茎尧叶尧茎节尧花药和柱头组织 原 愿园 益
保存备用遥 于待小麦第 员 片叶完全展开时渊约为出
苗后 苑 凿冤袁采用扫抹法接种非亲和条锈菌小种
悦再砸员苑袁在 员园 耀 员圆 益条件下保湿 圆源 澡袁然后置于低
温室渊员缘 耀 员愿 益冤中继续培养袁在接种后 园尧源尧愿尧员圆尧
圆源 和 源愿 澡 后取样遥 盂用浓度为 员园园 滋皂燥造 辕 蕴 的脱落
酸渊葬遭泽糟蚤泽蚤糟 葬糟蚤凿袁粤月粤冤溶液对小麦幼苗进行喷雾处
理袁并在处理 园尧员尧圆尧源尧愿尧员圆 和 圆源 澡 后取样曰乙烯利
渊藻贼澡藻责澡燥灶袁耘栽冤尧水杨酸渊泽葬造蚤糟赠造蚤糟 葬糟蚤凿袁杂粤冤和茉莉酸
甲酯渊皂藻贼澡赠造 躁葬泽皂燥灶葬贼藻袁酝藻允粤冤溶液浓度为 缘园 滋皂燥造 辕
蕴袁处理和取材方法同 粤月粤遥 榆将小麦幼苗从土壤
中取出袁用水轻轻冲洗干净袁然后用吸水纸吸出多余
水分并置于滤纸上袁模拟干旱处理袁放置 园尧 员尧圆尧源尧
愿尧 员圆尧 圆源 和 源愿 澡后取样遥 虞将小麦幼苗置于 猿愿 益
怨愿源远 期 霍摇 冲等院小麦小 郧栽孕结合蛋白基因 栽葬砸燥责猿 克隆及其表达分析
的培养箱中进行高温处理袁并分别在 园尧员尧圆尧源尧愿 和
员圆 澡后取样遥 愚用牙签刺伤小麦幼苗叶片进行伤害
处理袁并在 园尧员尧圆尧源尧愿 和 员圆 澡 后取样遥 各时间点或
不同组织部位材料在液氮中速冻袁并保存于 原 愿园 益
冰箱袁用于目的基因表达分析遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 基因克隆
分析 晕悦月陨 数据库中 怨 个与抗病尧抗逆性相关
的 砸燥责家族蛋白序列袁根据氨基酸序列保守性和密
码子简并性袁共设计 圆远 个简并引物遥 提取小麦抗条
锈病基因 再则缘 近等基因系 栽葬蚤糟澡怎灶早圆怨鄢远 辕 再则缘 文库 姿
阅晕粤作为模板袁用简并引物分别与文库载体多克隆
位点上游和下游的 栽猿 和 栽苑 引物组合袁进行 孕悦砸扩
增袁获得目的 糟阅晕粤 片段测序并经 晕悦月陨 数据库
月蕴粤杂栽比对分析袁获得目的基因部分片段袁根据该
核苷酸序列设计特异引物袁再分别与文库中多克隆
位点下游和上游的 栽苑 辕 栽猿 引物组合进行序列全长
扩增袁获得目的基因完整 糟阅晕粤序列遥
员援 圆援 圆 序列分析
利用 阅晕粤酝粤晕 软件尧杂皂葬则贼 网站渊 澡贼贼责院 辕辕 泽皂葬则贼援
藻皂遭造鄄澡藻蚤凿藻造遭藻则早援 凿藻 辕 冤和 晕悦月陨 网站 月造粤杂栽 在线服务
工具对 栽葬砸燥责猿 渊郧藻灶月葬灶噪 序列号院郧哉源缘圆苑员苑冤核苷
酸序列以及预测编码的氨基酸序列进行预测和分
析袁明确 栽葬砸燥责猿 的各功能效应区遥
员援 圆援 猿 聚类分析
通过 晕悦月陨 网站 郧藻灶月葬灶噪 数据库获得拟南芥尧
大麦尧水稻尧苜蓿尧烟草尧枇杷和玉米 苑 种植物中功能
已知 砸燥责家族蛋白的序列信息遥 通过 悦造怎泽贼葬造载圆 软
件对小麦 栽葬砸燥责猿 以及其它植物 砸燥责 蛋白进行聚类
分析袁利用 酝耘郧粤 源援 员 构建聚类分析图并预测 栽葬砸鄄
燥责猿 功能遥 聚类分析中所用 砸燥责 蛋白分别是小麦
栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂 栽葬砸燥责猿渊粤阅阅圆猿猿源缘冤曰拟南芥 粤则葬遭蚤鄄
凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 粤贼砸燥责员渊晕孕赃员怨园远怨愿援 员冤尧粤贼砸燥责圆渊晕孕赃
员苑猿源猿苑援 员冤尧粤贼砸燥责源 渊 晕孕赃员苑苑苑员圆援 员冤尧粤贼砸燥责缘 渊 晕孕 赃
员怨缘猿圆园援 员 冤尧 粤贼砸燥责远 渊 晕孕 赃 园园员员怨园怨员苑援 员 冤尧 粤贼砸燥责员园
渊晕孕赃缘远远愿怨苑援 员冤和 粤贼砸燥责员员 渊晕孕赃圆园员园怨猿援 员冤曰大麦
匀燥则凿藻怎皂 增怎造早葬则藻 匀增砸葬糟员 渊 悦粤阅缘苑苑源猿援 员 冤尧 匀增砸葬糟猿
渊悦粤阅缘苑苑源圆援 员冤尧匀增砸葬糟月渊悦粤悦愿猿园源猿援 圆冤和 匀增砸燥责源
渊悦粤阅圆苑愿怨远援 员 冤曰水稻 韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 韵泽砸葬糟员 渊 晕孕 赃
园园员园源圆源愿远援 员冤尧韵泽砸葬糟猿渊月粤粤愿源源怨源援 员冤尧韵泽砸葬糟源渊晕孕赃
园园员园缘苑圆猿远援 员冤尧韵泽砸葬糟缘渊月粤郧怨园源缘圆冤和 韵泽砸葬糟远渊晕孕赃
园园员园源缘苑员圆援 员 冤曰 苜 蓿 酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 酝泽砸葬糟员
渊悦粤月远圆园苑缘 冤尧 酝泽砸燥责猿 渊 粤粤酝员愿员猿猿援 员 冤 和 酝泽砸葬糟源
渊 悦粤陨愿源愿怨园 冤曰 烟 草 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 晕贼砸葬糟员
渊悦粤阅源圆苑圆远援 员冤尧晕贼砸葬糟缘 渊 悦粤月缘苑愿员愿援 员冤和 晕贼砸燥责员
渊 悦粤阅员猿员苑远援 员 冤曰枇杷 耘则蚤燥遭燥贼则赠葬 躁葬责燥灶蚤糟葬 耘躁砸燥责猿
渊粤悦酝远愿怨源怨援 员冤曰玉米 在藻葬 皂葬赠泽 在皂砸燥责员渊粤粤阅猿源猿缘缘冤遥
员援 圆援 源 表达谱分析
利用 栽砸陨扎燥造 法提取接种条锈菌或不同处理的
小麦幼苗叶片总 砸晕粤袁经质量检测合格后进行反转
录获得 糟阅晕粤 第 员 条链袁以该链为模板进行半定量
砸栽鄄孕悦砸扩增遥 内参基因 粤糟贼蚤灶 及目的基因 栽葬砸燥责猿
引物序列为 粤糟贼蚤灶鄄云院郧粤粤悦悦栽悦悦粤悦栽郧粤郧粤粤悦粤粤悦鄄
粤栽栽粤悦悦 和 粤糟贼蚤灶鄄砸院 郧栽栽悦悦粤粤栽悦栽粤栽郧粤郧郧郧粤栽粤悦鄄
粤悦郧悦袁以及 栽葬砸燥责猿鄄砸栽鄄云院 栽栽郧郧悦郧悦粤粤悦悦栽郧悦栽粤悦鄄
郧栽悦和 栽葬砸燥责猿鄄砸栽鄄砸院悦悦悦郧郧悦粤栽栽郧悦栽悦粤粤郧悦栽郧栽遥
圆 结果与分析
圆援 员 栽葬砸燥责猿 基因全长 糟阅晕粤序列克隆
利用 砸燥责缘砸 与 栽猿 引物组合扩增获得大小为
猿愿怨 遭责 糟阅晕粤片段袁具有起始密码子袁与预期目的条
带大小相符遥 经序列比对分析袁发现该基因片段与
郧藻灶月葬灶噪数据库中其它植物小 郧栽孕 结合蛋白超家
族中 砸燥责家族基因序列具有高度相似性袁因此推断
该小麦 糟阅晕粤 片段编码 砸燥责 蛋白基因袁并命名为
栽葬砸燥责猿渊栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂 砸燥责猿冤遥 在该基因片段 缘忆
端设计正向特异性引物 栽葬砸燥责猿云院缘忆鄄粤郧栽悦郧郧悦栽栽悦鄄
悦悦栽栽悦悦栽栽郧栽 鄄猿忆袁与文库载体多克隆位点下游通用
引物 栽苑 组合进行目的基因全长 糟阅晕粤序列扩增袁获
得 怨园园 耀 员 圆园园 遭责 片段袁经克隆尧测序以及 月蕴粤杂栽 比
对分析 袁获得目的基因 栽葬砸燥责 猿全长 糟阅晕粤序列
渊员 园园源 遭责冤袁包含完整阅读框袁已提交 郧藻灶月葬灶噪 数据
库袁序列号为 郧哉源缘圆苑员苑遥
圆援 圆 栽葬砸燥责猿 基因序列分析
栽葬砸燥责猿 基因 糟阅晕粤 序列包含 员 个 远猿怨 遭责 开放
阅读框袁即第 源园 核苷酸至第 远苑愿 核苷酸之间袁缘忆端
非编码区为 猿怨 遭责袁猿忆端非编码区为 猿圆远 遭责袁推测其编
码含 圆员猿 个氨基酸残基的 砸燥责 蛋白遥 栽葬砸燥责猿 分子
量为 圆猿援 缘愿远 噪阅袁理论等电点为 怨援 苑怨袁为碱性蛋白曰
含有 缘 个效应结构区 郧玉 耀 郧吁袁圆 个开关区域
杂憎蚤糟澡玉和 杂憎蚤糟澡域袁其中 杂憎蚤糟澡域由 郧匝尧砸蕴孕蕴 和
粤阅灾三部分组成 渊图 员 冤 遥 砸燥责家族插入序列在
郧郁区后袁包含 阅运匝再蕴蕴阅匀孕郧 员园 个氨基酸遥 在
栽葬砸燥责猿 高度变异区渊澡赠责藻则增葬则蚤葬遭造藻 则藻早蚤燥灶袁 匀灾砸冤发
现其氨基酸序列 悦 末端 悦云运 序列符合膜定位信号
悦载载基序特征咱员园暂 遥
园怨源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 员 栽葬砸燥责猿 功能结构域分析
云蚤早援 员 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 凿燥皂葬蚤灶泽 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 蚤灶 栽葬砸燥责猿 责则燥贼藻蚤灶
摇 摇 框内序列为 砸燥责家族蛋白效应结构区 郧玉 耀 郧吁尧砸燥责插入序列及 悦末端高度变异区渊匀灾砸冤袁黑体部分指 杂憎蚤糟澡玉袁黑体并斜体部
分指 杂憎蚤糟澡域袁阴影黑体部分指多碱价区渊孕月砸冤袁仅用阴影部分指膜定位信号区遥 郧玉 原 郧吁 凿燥皂葬蚤灶泽袁 砸燥责 蚤灶泽藻则贼 则藻早蚤燥灶 葬灶凿 澡赠责藻则增葬则蚤葬遭造藻
则藻早蚤燥灶 渊匀灾砸冤 葬则藻 遭燥曾藻凿袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 杂憎蚤糟澡玉 蚤泽 泽澡燥憎灶 蚤灶 遭燥造凿袁 葬灶凿 泽憎蚤贼糟澡域 遭燥造凿 葬灶凿 蚤贼葬造蚤糟援 孕燥造赠遭葬泽蚤糟 则藻早蚤燥灶 渊孕月砸冤 蚤泽 遭燥造凿 葬灶凿 澡蚤早澡造蚤早澡贼鄄
藻凿 蚤灶 早则葬赠袁 葬灶凿 皂藻皂遭藻则葬灶藻 造燥糟葬贼蚤燥灶 泽蚤早灶葬造 蚤泽 燥灶造赠 澡蚤早澡造蚤早澡贼藻凿 蚤灶 早则葬赠援
圆援 猿 栽葬砸燥责猿 聚类分析
将小麦 栽葬砸燥责猿 与来自拟南芥尧大麦尧水稻尧玉
米尧枇杷尧苜蓿和烟草 苑 种植物功能已知 砸燥责家族小
郧栽孕 结合蛋白进行聚类分析遥 栽葬砸燥责猿 属于域型
砸燥责蛋白袁与大麦 匀增砸燥责源 和水稻 韵泽砸葬糟源 聚类在同
一亚组渊图 圆冤袁氨基酸序列相似性分别为 怨远援 圆源豫
和 怨员援 愿猿豫 遥 研究表明袁玉型 砸燥责 蛋白在调控植物
生长发育渊如 粤贼砸燥责员尧粤贼砸燥责圆 和 粤贼砸燥责源冤尧抗逆反应
渊如 晕贼砸葬糟员尧晕贼砸燥责员尧粤贼砸燥责圆 和 粤贼砸燥责缘 等冤以及抗
病性渊如 酝泽砸葬糟员尧粤贼砸燥责员 和 韵泽砸葬糟缘 等冤等方面均发
挥作用袁而域型 砸燥责 蛋白主要参与植物抗逆或抗病
性反应袁仅 粤贼砸燥责员员 参与生长发育调控袁耘躁砸燥责猿 和
粤贼砸燥责员园 参与调控植物抗逆反应渊图 圆冤遥 与 栽葬砸燥责猿
聚类在同一亚组的大麦 匀增砸燥责源 和水稻 韵泽砸葬糟源 在
调控植物抗病反应过程中均起负调控作用遥
圆援 源 栽葬砸燥责猿 表达特征分析
基因 栽葬砸燥责猿 在 猿 叶期小麦幼苗根尧茎尧叶片和
成株期的根尧茎尧叶片尧茎节尧柱头及花药中均有表
达袁其中在幼苗及成株期茎部表达水平较高袁其次是
在叶片和根中表达袁而在花药中表达水平较低渊图
猿鄄葬冤遥 接种小麦条锈菌 悦再砸员苑 非亲和小种之前
栽葬砸燥责猿 已有表达袁接种后 园 耀 愿 澡 期间袁栽葬砸燥责猿 表达
水平逐渐降低袁接种 员圆 澡 后逐渐升高袁并持续保持
较高的表达水平渊图 猿鄄遭冤遥 高温和干旱逆境胁迫处
理影响 栽葬砸燥责猿 表达渊图 猿鄄糟冤遥 在 猿愿 益高温胁迫处
理 员 澡后 栽葬砸燥责猿 表达水平明显降低袁直至高温胁迫
处理 员圆 澡后略有增加曰而干旱处理 圆 澡后 栽葬砸燥责猿 的
表达水平开始逐渐下降袁在处理 员圆 澡 后降至最低袁
而机械伤害胁迫下基因的表达没有发生明显变化
渊图 猿鄄糟冤遥 另外袁外源激素处理影响 栽葬砸燥责猿 表达水
平遥 在幼苗叶片喷施 杂粤处理后 员 澡和 圆源 澡时 栽葬砸鄄
燥责猿 表达水平形成 圆 个高峰袁处理 圆 澡后目的基因表
达水平接近 园 澡袁而在其它取样时间点基因表达水平
低于初始处理时渊园澡冤表达水平渊图猿 鄄凿冤 曰粤月粤和
员怨源远 期 霍摇 冲等院小麦小 郧栽孕结合蛋白基因 栽葬砸燥责猿 克隆及其表达分析
图 圆 小麦 栽葬砸燥责猿 与其它植物 砸燥责蛋白聚类分析
云蚤早援 圆 悦造怎泽贼藻则 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽葬砸燥责猿 枣则燥皂 憎澡藻葬贼 葬灶凿 贼澡藻 皂藻皂遭藻则泽 燥枣 砸燥责 枣葬皂蚤造赠 枣则燥皂 燥贼澡藻则 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
摇 摇 图左侧部分为 砸燥责蛋白聚类分析袁图右侧部分为 砸燥责蛋白的生物学功能统计结果遥 粤院参与调控植物生长发育曰月院参与调控植物
抗逆反应曰悦院参与调控植物抗病性反应遥 实心圆表示基因正向调控功能袁空心圆表示基因负调控功能遥 蕴藻枣贼 责葬则贼 蚤泽 贼澡藻 则藻泽怎造贼 燥枣 糟造怎泽贼藻则
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 砸燥责 责则燥贼藻蚤灶泽袁 葬灶凿 贼澡藻 则蚤早澡贼 责葬则贼 泽澡燥憎泽 贼澡藻 泽贼葬泽贼蚤泽贼蚤糟 则藻泽怎造贼泽 燥枣 贼澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶鄄噪灶燥憎灶 砸燥责 责则燥贼藻蚤灶泽 造蚤泽贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻援 栽澡藻 砸燥责 早藻灶藻泽 蚤灶鄄
增燥造增藻凿 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼袁 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽藻 葬灶凿 辕 燥则 凿蚤泽藻葬泽藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 葬则藻 皂葬则噪藻凿 憎蚤贼澡 粤袁 月 葬灶凿 悦袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 蚤灶 贼澡藻 则蚤早澡贼 责葬则贼 燥枣 贼澡藻 枣蚤早怎则藻援
栽澡藻 枣蚤造造藻凿 葬灶凿 藻皂责贼赠 糟蚤则糟造藻 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡藻 早藻灶藻爷泽 责燥泽蚤贼蚤增藻 葬灶凿 灶藻早葬贼蚤增藻 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
耘栽处理后均能在一定程度上抑制目的基因表达渊图
猿鄄藻冤遥 耘栽处理 园 耀 员圆 澡 期间 栽葬砸燥责猿 表达水平缓慢
降低袁员圆 澡 后表达水平明显下降袁处理 圆源 澡 后表达
量很微弱曰外源 粤月粤 处理后 栽葬砸燥责猿 表达水平下降
缓慢袁直到处理 圆源 澡 后才表现出明显降低曰酝藻允粤 处
理 圆 澡后基因表达水平下降袁直到 员圆 澡 后才恢复到
处理前的水平遥 综上所述袁 栽葬砸燥责猿 在植物各主要
器官中均有表达袁病原菌侵染尧外源水杨酸处理能诱
导增强 栽葬砸燥责猿 表达水平袁而外源乙烯尧脱落酸和茉
莉酸甲酯以及干旱尧高温胁迫处理能抑制该基因表
达袁机械伤害对 栽葬砸燥责猿 基因的表达影响不明显遥
猿 讨论
植物中功能已知的 砸燥责 蛋白绝大多数分布在
细胞膜上袁但在细胞质和细胞核内也存在少量 砸燥责
蛋白遥 水稻 韵泽砸葬糟猿 和 韵泽砸葬糟源 分布定位于细胞膜
上袁并且多碱价区域渊 澡赠责藻则增葬则蚤葬遭造藻 则藻早蚤燥灶袁匀月砸冤中
运砸残基的数量与膜定位成正相关咱缘暂 遥 根据聚类分
析结果袁栽葬砸燥责猿尧韵泽砸葬糟猿渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 砸葬糟猿冤和 韵泽鄄
砸葬糟源渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 砸葬糟源冤都属于域型 砸燥责蛋白袁其氨
基酸序列与 韵泽砸葬糟源 相似性为 怨员援 愿猿豫 袁并聚类在同
一亚组遥 栽葬砸燥责猿 中 匀月砸区包含 远 个 运砸残基袁仅比
圆怨源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 猿 栽葬砸燥责猿 基因表达谱分析
云蚤早援 猿 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽葬砸燥责猿
摇 摇 葬院栽葬砸燥责猿组织特异性表达分析遥 杂砸尧杂杂和 杂蕴表示 猿叶期小麦幼苗根尧茎和叶曰砸尧杂和 蕴表示成株期小麦根尧茎和叶袁晕尧杂贼蚤和 粤表
示茎节尧柱头和花药遥 遭院非亲和条锈菌小种 悦再砸员苑接种遥 糟院高温尧干旱胁迫处理和机械伤害遥 凿院外源 杂粤处理遥 藻院 粤月粤尧耘栽和 酝藻允粤
处理遥 葬院 栽蚤泽泽怎藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽葬砸燥责猿援 杂砸袁 杂杂 葬灶凿 杂蕴 则藻责则藻泽藻灶贼 憎澡藻葬贼 泽藻藻凿造蚤灶早 则燥燥贼袁 泽贼藻皂 葬灶凿 造藻葬枣袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠曰 砸袁 杂 葬灶凿
蕴 则藻责则藻泽藻灶贼 则燥燥贼袁 泽贼藻皂 葬灶凿 造藻葬枣 燥枣 憎澡藻葬贼 葬凿怎造贼 责造葬灶贼袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠曰 晕袁 杂贼蚤 葬灶凿 粤 则藻责则藻泽藻灶贼 灶燥凿藻袁 泽贼蚤早皂葬 葬灶凿 葬灶贼澡藻则袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 遭院 陨灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶
憎蚤贼澡 蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 则葬糟藻 悦再砸员苑 燥枣 孕援 泽贼则蚤蚤枣燥则皂蚤泽援 糟院 匀蚤早澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻袁 凿则燥怎早澡贼 泽贼则藻泽泽 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽袁 葬灶凿 皂藻糟澡葬灶蚤糟葬造 憎燥怎灶凿蚤灶早援 凿院 栽则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡
藻曾燥早藻灶燥怎泽 杂粤援 藻院 栽则藻葬贼皂藻灶贼泽 憎蚤贼澡 粤月粤袁 耘栽 葬灶凿 酝藻允粤援
韵泽砸葬糟猿 和 韵泽砸葬糟源 少 员 个遥 另外在其 悦末端的 悦云运
符合膜定位信号 悦载载 基序特征遥 因此袁栽葬砸燥责猿 很
可能定位于细胞膜上遥
与 栽葬砸燥责猿 聚类在同一亚组的 匀增砸燥责源 及 韵泽鄄
砸葬糟源 在植物抗病性过程中起重要调控作用袁韵泽砸葬糟源
负调控水稻对稻瘟病的抗性反应咱缘暂 袁而 匀增砸燥责源 活
化形式增强了大麦对白粉病的感病性咱员员暂 袁其它域型
砸燥责蛋白主要参与植物抗逆或抗病防卫反应遥 植物
对病原物的防卫反应常发生在二者互作的初期咱员圆暂 袁
条锈菌穿透小麦叶片表皮及小麦识别条锈菌侵染都
发生在接种后 远 耀 员圆 澡 内咱员猿暂 遥 栽葬砸燥责猿 在接种
悦再砸员苑小种 员圆 澡后逐渐升高袁并持续保持较高的表
达水平袁表明该基因参与了小麦与条锈菌的早期互
作识别过程遥 砸燥责蛋白可以通过调控水杨酸信号途
径调控植物抗病性袁如 韵泽砸葬糟员 基因突变体渊 凿燥皂蚤鄄
灶葬灶糟藻 灶藻早葬贼蚤增藻 韵泽砸葬糟员袁 阅晕鄄韵泽砸葬糟员冤转基因烟草在
接种烟草花叶病毒渊栽酝灾冤后过敏反应渊澡赠责藻则泽藻灶泽蚤鄄
贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻袁匀砸冤过程延迟袁抑制 砸韵杂产生和 杂粤累
积咱员源暂 遥 本研究中水杨酸诱导处理后 员 澡 和 圆源 澡
栽葬砸燥责猿 表达量迅速增高袁出现 圆 个高峰值袁说明
栽葬砸燥责猿 对 杂粤诱导处理较敏感袁杂粤 信号传导途径可
能是 栽葬砸燥责猿 参与调控小麦抗病性反应途径之一袁但
其调控机制还有待进一步研究遥 外源 耘栽尧粤月粤 和
酝藻允粤以及干旱尧高温胁迫处理抑制 栽葬砸燥责猿 表达袁说
明 栽葬砸燥责猿 可能还参与调控小麦抗逆反应袁介导植物
抗逆境胁迫反应咱员缘 原 员苑暂 遥
栽葬砸燥责猿 在小麦幼苗期和成株期根尧茎尧叶片尧茎
节和柱头组织中均有表达袁与水稻 砸燥责 家族基因表
达相似袁表明 栽葬砸燥责猿 基因功能多样性遥 但有的 砸燥责
家族基因表达组织特异性较高袁仅在某些器官或组
织中表达袁如拟南芥 粤贼砸燥责员 基因仅在花粉管中表
达袁调控花粉管伸长咱员愿暂 遥
总之袁本研究通过对 栽葬砸燥责猿 基因表达谱及其编
码的蛋白中主要功能结构域分析袁以及与功能已知
猿怨源远 期 霍摇 冲等院小麦小 郧栽孕结合蛋白基因 栽葬砸燥责猿 克隆及其表达分析
的砸燥责家族蛋白聚类分析袁揭示该基因可能参与调
控小麦抗条锈病及抗逆反应过程遥 下一步将利用转
基因小麦株系进一步明确 栽葬砸燥责猿 功能尧亚细胞定位
及其在水杨酸介导的信号传导途径中的作用袁为小
麦抗病和抗逆育种提供有效候选基因遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 粤泽泽皂葬灶灶 杂 酝援 匀藻贼藻则燥贼则蚤皂藻则蚤糟 葬灶凿 怎灶糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 郧栽孕 遭蚤灶凿蚤灶早
责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 责造葬灶贼 糟藻造造 泽蚤早灶葬造蚤灶早援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园圆袁 员源渊杂怎责鄄
责造冤院 泽猿缘缘 原 泽猿苑猿
咱圆暂 栽葬噪葬蚤 再袁 杂葬泽葬噪蚤 栽袁 酝葬贼燥扎葬噪蚤 栽援 杂皂葬造造 郧栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽援
孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 砸藻增蚤藻憎泽袁 圆园园员袁 愿员渊员冤院 员缘猿 原 圆园愿
咱猿暂 宰蚤灶早藻 孕袁 月则藻皂遭怎 栽袁 运则蚤泽贼藻灶泽藻灶 砸袁 藻贼 葬造援 郧藻灶藻贼蚤糟 泽贼则怎糟贼怎则藻
葬灶凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶 燥枣 砸粤悦鄄郧栽孕葬泽藻泽 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬援 郧藻灶藻贼鄄
蚤糟泽袁 圆园园园袁 员缘远院 员怨缘怨 原 员怨苑员
咱源暂 月藻则噪藻灶 粤袁 宰蚤贼贼蚤灶早澡燥枣藻则 粤援 杂贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 砸澡燥鄄贼赠责藻
皂燥造藻糟怎造葬则 泽憎蚤贼糟澡藻泽 蚤灶 责造葬灶贼泽援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽鄄
贼则赠袁 圆园园愿袁 源远院 猿愿园 原 猿怨猿
咱缘暂 悦澡藻灶 蕴袁 杂澡蚤燥贼葬灶蚤 运袁 栽燥早葬泽澡蚤 栽袁 藻贼 葬造援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 砸葬糟 辕 砸燥责
泽皂葬造造 郧栽孕葬泽藻 枣葬皂蚤造赠 蚤灶 则蚤糟藻院 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶袁 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
葬灶凿 则燥造藻 蚤灶 凿蚤泽藻葬泽藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻援 孕造葬灶贼 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园员园袁 缘员
渊源冤院 缘愿缘 原 缘怨缘
咱远暂 杂糟澡蚤藻灶藻 运袁 孕俟澡造藻则 粤袁 晕蚤藻澡葬怎泽 运援 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 责造葬灶贼泽
贼澡葬贼 藻曾责则藻泽泽 葬灶 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 葬 酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤鄄
增葬 糟阅晕粤 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 砸葬糟鄄则藻造葬贼藻凿 泽皂葬造造 郧栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 枣葬蚤造
贼燥 凿藻增藻造燥责 灶藻糟则燥贼蚤糟 造藻泽蚤燥灶泽 怎责燥灶 藻造蚤糟蚤贼燥则 蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤燥灶援 酝燥造藻糟怎造葬则
郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园园园袁 圆远猿院 苑远员 原 苑苑园
咱苑暂 悦葬燥 再 再袁 杂澡蚤 再袁 蕴蚤 再 匝袁 藻贼 葬造援 孕燥泽泽蚤遭造藻 蚤灶增燥造增藻皂藻灶贼 燥枣 皂葬蚤扎藻
砸燥责员 蚤灶 贼澡藻 凿藻枣藻灶糟藻 则藻泽责燥灶泽藻泽 燥枣 责造葬灶贼泽 贼燥 增蚤则葬造 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援 酝燥鄄
造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园员圆袁 员猿渊苑冤院 苑猿圆 原 苑源猿
咱愿暂 杂糟澡怎造贼澡藻蚤泽泽 匀袁 阅藻糟澡藻则贼 悦袁 运燥早藻造 运 匀袁 藻贼 葬造援 粤 泽皂葬造造 郧栽孕鄄
遭蚤灶凿蚤灶早 澡燥泽贼 责则燥贼藻蚤灶 蚤泽 则藻择怎蚤则藻凿 枣燥则 藻灶贼则赠 燥枣 责燥憎凿藻则赠 皂蚤造凿藻憎 枣怎灶鄄
早怎泽 蚤灶贼燥 藻责蚤凿藻则皂葬造 糟藻造造泽 燥枣 遭葬则造藻赠援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁
员圆愿院 员源源苑 原 员源缘源
咱怨暂 蔺瑞明袁邱焯袁管秀娜袁等援 中国小麦条锈病菌鉴别寄主中 源
抗病基因的遗传组成分析援 植物保护学报袁 圆园园苑袁猿源渊远冤院
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圆园园猿袁 缘源远院 员苑猿 原 员愿园
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赠泽蚤泽 燥枣 遭葬则造藻赠 砸粤悦 辕 砸韵孕 郧鄄责则燥贼藻蚤灶 枣葬皂蚤造赠 皂藻皂遭藻则泽 蚤灶 泽怎泽糟藻责鄄
贼蚤遭蚤造蚤贼赠 贼燥 贼澡藻 责燥憎凿藻则赠 皂蚤造凿藻憎 枣怎灶早怎泽援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁
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贼蚤燥灶 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 枣燥则 葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻泽 葬早葬蚤灶泽贼 皂蚤糟则燥鄄
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咱员猿暂 宰葬灶早 悦 云袁 匀怎葬灶早 蕴 蕴袁 月怎糟澡藻灶葬怎藻则 匀袁 藻贼 葬造援 匀蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造
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葬灶凿 匀圆韵圆 冤 蚤灶 贼澡藻 蚤灶糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 葬灶凿 糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶 燥枣
憎澡藻葬贼– 孕怎糟糟蚤灶蚤葬 泽贼则蚤蚤枣燥则皂蚤泽 枣援 泽责援 贼则蚤贼蚤糟蚤援 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠 葬灶凿 酝燥鄄
造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 苑员院 圆猿园 原 圆猿怨
咱员源暂 酝燥藻凿藻则 宰袁 再燥泽澡蚤燥噪葬 运袁 运造藻泽泽蚤早 阅 云援 陨灶增燥造增藻皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻
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早藻灶泽援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁 圆园园缘袁 员愿 渊圆冤院
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凿蚤葬贼藻凿 澡赠责燥曾蚤葬 泽蚤早灶葬造蚤灶早援 孕造葬灶贼 杂蚤早灶葬造蚤灶早 葬灶凿 月藻澡葬增蚤燥则袁 圆园员园袁
缘渊源冤院 猿苑缘 原 猿苑愿
咱员远暂 月藻则噪藻灶 粤援 砸韵孕泽 蚤灶 贼澡藻 泽责燥贼造蚤早澡贼 燥枣 责造葬灶贼 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶援
悦藻造造怎造葬则 葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园远袁 远猿院 圆源源远 原 圆源缘怨
咱员苑暂 郧怎 再袁 宰葬灶早 在 匀袁 再葬灶早 在 月援 砸韵孕辕 砸粤悦 郧栽孕葬泽藻院 葬灶 燥造凿 灶藻憎
皂葬泽贼藻则 则藻早怎造葬贼燥则 枣燥则 责造葬灶贼 泽蚤早灶葬造蚤灶早援 悦怎则则藻灶贼 韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼
月蚤燥造燥早赠袁 圆园园源袁 苑院 缘圆苑 原 缘猿远
咱员愿暂 蕴蚤 匀袁 宰怎 郧袁 宰葬则藻 阅袁 藻贼 葬造援 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 砸澡燥鄄则藻造葬贼藻凿 郧栽孕葬泽鄄
藻泽院 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 责燥造造藻灶 葬灶凿 责燥造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
蚤灶 枣蚤泽泽蚤燥灶 赠藻葬泽贼援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨愿袁 员员愿院 源园苑 原 源员苑
渊责任编辑院谢小帆冤
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