全 文 ：植物保护学报 !"#$%&"()&%*)$"*+,*-"%! ./01! 2."2#$ 153 413: 678$ 0/90:3/.;<=,%>-=?@ABCA=./019/29/01
基金项目$ 江苏检验检疫局科技计划"./0.f!1E#!山西农业大学育种基金"./02c_.K5#!山西省青年科技研究基金"./0./.0/.1K.#
!通讯作者"F#*B"$("$,"$+GH"%I+%,+#! JKL&-$ _B&%MA收稿日期$ ./02 400 401
检疫性杂草毒莴苣 GNMHNN!标记的开发及应用
梁照文
0O童明龙0O高振峰.O张宝俊.!O伏建国:O范晓虹2
"0=宜兴出入境检验检疫局! 江苏 宜兴 .02./E .=山西农业大学农学院! 太谷 /:/3/0
:=江苏出入境检验检疫局! 南京 .0//D1 2=中国检验检疫科学研究院! 北京 0//0.:#
摘要! 为明确毒莴苣J[Y序列中 [[Z的特点!并开发J[YK[[Z分子标记用于毒莴苣及其近似种的
分类鉴定及遗传多样性分析!以筛选的 5 2:3 条毒莴苣J[Y序列为基础!利用 [[Z8Y软件结合人工
搜索查找 [[Z位点!并采用 )$-L+$)$+L-+$19/ 软件设计J[YK[[Z引物!以毒莴苣及其近似种为材
料对所合成引物进行多态性检测!应用U)RaF法构建 00 个毒莴苣及其近似种的系统发育树" 结
果表明!共搜索到 [[Z位点 0 2E1 个!发现重复基元 1D3 种!其中二三六核苷酸重复是主要的重
复类型" 合成的 .2 对引物中有 D 对表现出多态性!利用这 D 对J[YK[[Z引物分析毒莴苣等 00 份
材料的亲缘关系!其相似性系数在 /92:. 0^9/// 之间#于 /910: 处可被划分为 : 大类%#类包括翅
果菊和北山莴苣!$类只有宿根莴苣 0 种!类包括毒莴苣和莴苣"
关键词! 毒莴苣# 近似种# J[YK[[Z# 遗传多样性
Z")"B.0-"*,$*(:,+B+,4 ./GNMHNN!-$%V"%+*T:$%$*,+*"5""(/#-01-# $.++(&"#
P-&%M_B&"@+%0OY"%Ma-%M"%M0OR&"_B+%(+%M.O_B&%MW&"<#%.!O\# !-&%M#":O\&% Q-&"B"%M2
"0=c-C-%MJ%*$SKJC-*8%GH+,*-"% &%I d#&$&%*-%+W#$+&#! c-C-%M.02./E! !-&%MG# )$"V-%,+! TB-%&
.=T"+M+"(FM$-,#*#$+! [B&%C-FM$-,#*#$&U%-V+$G-*S! Y&-M# /:/3/0! [B&%C-)$"V-%,+! TB-%&
:=!-&%MG# J%*$SKJC-*8%GH+,*-"% &%I d#&$&%*-%+W#$+&#! b&%<-%M.0//D1! !-&%MG# )$"V-%,+! TB-%&
2=TB-%+G+F,&I+LS"(8%GH+,*-"% &%I d#&$&%*-%+! W+-<-%M0//0.:! TB-%&#
12#,%$&,$ 8% "$I+$*"$+V+&*B+,B&$&,*+$-G*-,G"([[ZGI+$-V+I ($"LH$-,>S+*#,+J[YG&%I I+V+"H
J[YK[[ZL"+,#&$L&$>+$G("$M+%+*-,I-V+$G-*SG*#IS&%I -I+%*-(-,&*-"% "(8&4$#4& *%./)"& &%I $+&*+I
GH+,-+G! [[ZG"(H$-,>S+*#,+@+$+&%&S?+I ASA-"-%("$L&*-,GL+*B"I A&G+I "% 5 2:3 %"%K$+I#%I&%*
J[YG@B-,B "A*&-%+I ($"LbTW8I&*&A&G+=YB+J[YK[[ZH$-L+$G@+$+I+G-M%+I "% )$-L+$)$+L-+$19/!
&%I *B+HBS"M+%+*-,*$++"(8=*%./)"& &%I $+&*+I GH+,-+G@&G+G*&A-GB+I ASU)RaF=F*"*&"(0 2E1
[[ZG",-@+$+G,$++%+I &%I 1D3 *SH+G"(L"*-(G@+$+-I+%*-(-+I -% J[YG"(H$-,>S+*#,+=YB+I"L-%&%*
L"*-(G*SH+G@+$+I-%#,+"*-I+! *$-%#,+"*-I+&%I B+C&%#,+"*-I+$+H+&*G=b-%+H"SL"$HB-,H$-L+$H&-$G
@+$+#G+I *"&%&S?+M+%+*-,I-V+$G-*S"(00 *+G*+I L&*+$-&G=YB+M+%+*-,G-L-&$-*S"(H&-$+I ,#*-V&$G
V&$-+I ($"L/92:. *"09///=YB+00 L&*+$-&G,"#I A+I-V-I+I -%*"*B$++M$"#HG@-*B &G-L-&$-*S
,"+(-,-+%*"(/910:=R$"#H# -%,#I+I *@",#*-V&$G! !$%.)4(,*%"& /3-/4& &%I 8=*/A/./4& 8=,%.%33/*
@&G*B+"%S,#*-V&$-% M$"#H$! &%I M$"#H -%,#I+I *@",#*-V&$G! 8=*%./)"& &%I 8=*&$/B&=
3"4 5.%(#$ 8&4$#4& *%./)"& ,"G+S$+&*+I GH+,-+G J[YK[[Z M+%+*-,I-V+$G-*S
OO毒莴苣 8&4$#4& *%./)"& 隶属菊科莴苣属!是我
国一种重要的进境检疫性有害杂草) 毒莴苣全株有
毒!极易混杂在农产品中随粮谷(油料作物及纺织原
料的调运而传播!降低作物品质(引起人畜中毒!我
国进出境口岸曾多次截获该杂草种子"吴海荣等!
.//D黄益燕和李新芳!./00#) 毒莴苣结实量大(
适应能力强!在我国有广泛的潜在分布区"郭水良
等!./00#) 毒莴苣种子细小!与莴苣种子在形态上
非常相似!且莴苣属杂草种类繁多!常因部分种子发
生磨损!破坏其形态特征而增加了检疫鉴定工作的
难度) 因此!开发和利用分子标记!建立快速(有效
的毒莴苣分子检测方法!能提高毒莴苣检验检疫的
效率及准确度)
目前限制性内切酶片段长度多态性"$+G*$-,*-"%
($&ML+%*+%M*B H"SL"$HB-GL!Z\P)#(扩增片段长度
多态性 "&LH-(-+I ($&ML+%*+%M*B H"SL"$HB-GL!
F\P)#(单核苷酸多态性"G-%M+%#,+"*-I+H"SL"$K
HB-GL![b)#(简单重复序列"G-LH+G+h#+%,+$+H+&*!
[[Z#等多种分子标记被应用于检疫性杂草的辅助
鉴定中!为杂草的遗传多样性研究及其分类鉴定提
供了便利"陈景堂等!.//0魏霜等!./02#) 表达序
列标签"+CH$+GG+I G+h#+%,+*&M!J[Y#作为表达基因
所在区域的分子标签因编码 6bF序列高度保守而
具有自身的特殊性质!其中 J[YK[[Z是基于物种相
对保守的转录区域开发的一类分子标记!除具有
[[Z标记的多态性丰富(共显性好(重复性高等特点
外"李成云等!.//1冯彦霞等!./0:#!在近缘种间
具有更高的通用性和保守性) J[YK[[Z标记已广泛
应用于多种植物(病原菌等的遗传图谱构建(遗传多
样性分析(群体遗传学研究(物种鉴定等多个领域
"李新凤等!./02#) 随着毒莴苣J[Y数据资源的不
断丰富!为开发和利用毒莴苣 J[YK[[Z标记提供了
基础!本研究通过对毒莴苣J[Y中 [[Z信息进行分
析!明确其 J[YK[[Z的发生频率和分布特点!并以
00 份毒莴苣及其近似种对 J[YK[[ZG标记进行验
证!以期探讨毒莴苣 J[YK[[Z标记跨种属的通用
性!为毒莴苣物种特异性引物的开发及其快速分子
检测方法的建立提供理论依据)
6 材料与方法
686 材料
供试植株$购自法国的宿根莴苣 8&4$#4& ,%.%33/*
及莴苣 8&4$#4& *&$/B& 品种6-&%&和Y&%M"!国内有采
自江苏连云港的毒莴苣 8=*&$/B&和翅果菊!$%.)4(,*%7
"& /3-/4&!山西左权的翅果菊!江苏泰州的 . 株翅果
菊!一种叶缘有锯齿记为#号!一种叶缘无锯齿记为$
号!以及中国检验检疫科学研究院赠送的毒莴苣 8=
*%./)"&"简称中国检科院毒莴苣#(北山莴苣 8=*/A/./7
4&和翅果菊"简称中国检科院翅果菊#)
试剂$植物基因组 6bF快速提取试剂盒(0//
AH 6bFP&II+$(H&M6bF聚合酶(IbY)(琼脂糖等
购自宝生物工程"大连#有限公司!J[YK[[Z引物由
北京六合华大基因科技股份有限公司合成丙烯酰
胺(甲叉双丙烯酰胺等试剂和药品购自生工生物工
程"上海#股份有限公司)
仪器$YTKDE;R;X"A#F)TZ扩增仪!杭州博日
科技有限公司6ccK00 型电泳仪!北京六一仪器
厂R+6",QZl凝胶成像分析系统!美国伯乐公司)
687 方法
68786 毒莴苣J[Y序列的筛选和预处理
从R+%W&%> 数据库中以 \F[YF格式下载到毒
莴苣J[Y序列 11 2D/ 条"截止 ./0. 年 0. 月 5 日#)
应用JaW7[[ 软件包中的 YZaJ[Y工具!采用默认
参数去除 J[Y尾部的 )"SKF;Y序列! 并利用
TZ7[[KaFYTX软件去除毒莴苣J[Y中包含的载体
序列!随后运用ZJ)JFYaF[fJZ程序屏蔽序列中
的重复序列!再通过 TF): 软件进行重叠群分析和
聚类拼接!获得无冗余序列)
68787 毒莴苣J[Y序列中 [[Z信息分析
利用 [[Z8Y"G-LH+G+h#+%,+$+H+&*-I+%*-(-,&*-"%
*""#在线软件并结合人工搜索对无冗余序列进行
[[Z搜索!并对搜索结果在 JC,+./0/ 中进行统计
分析) 搜索标准$单聚物重复次数&0.二聚物重复
次数&5三聚物重复次数&E四聚物重复次数&2
五(六聚物重复次数&:)
68789 J[YK[[Z引物的设计与合成
利用 )$-L+$)$+L-+$19/ 软件对筛选出的 J[Y
序列进行引物设计) 引物设计的主要参数$J[Y序
列中含有较多 [[Z位点引物长度为 03 .^2 AHRT
含量为 2/e 5^/e!YL为 21 E^/p预期扩增产物
控制在 0// 1^// AH!由北京六合华大基因科技股份
有限公司合成)
6878; )TZ反应体系的建立及扩增产物的检测
毒莴苣及其近似种基因组 6bF的提取采用
TYFW法"Z"M+$G` W+%I-,B!0D31#) )TZ反应体系
为 ./ "P$含6bF模板约 ./ %M(0/ "a;P正反引物
各 0 "P(.91 La;PIbY)09E "P(0/ uW#(+$"含
aM.l#. "P(1 U;"PH&M酶 /9. "P(IIX.7补足 ./
"P) 扩增程序$D1p预变性 1 L-%!D2p变性 :1 G!
2E 1^1p退火 :/ 2^1 G!5.p延伸 2/ G!:/ 个循环后
5.p再延伸 5 L-%!0/p保存) )TZ扩增产物采用
0/e的)FRJ凝胶电泳!.// g恒压电泳 : B!电泳
D512 期 梁照文等$ 检疫性杂草毒莴苣J[YK[[Z标记的开发及应用
结束后用银染法染色!并拍照记录)
6878< 毒莴苣及其近似种的聚类分析
对毒莴苣(莴苣(宿根莴苣(北山莴苣等 00 份材
料的电泳图谱进行分析!以6bF某一片段在某样品
中出现赋值%0&和不出现赋值%/&为依据!在 JC,+
./0/ 中进行统计!利用bY[c[)T.90 软件基于b+-K
P-遗传相似系数的 U)RaF法对供试 00 份材料进
行聚类分析!绘制聚类树状图)
7 结果与分析
786 毒莴苣GNMHNN!出现的频率和特点
通过预处理获得 5 2:3 条无冗余序列!基因全
长为 E9E u0/E AH) 共搜索到 0 2E1 个 [[Z位点!分
布于 0 03/ 条J[Y序列中!平均每 2 1.D AH J[Y出
现一个 [[Z!检出率为 0D95e!其中 ./. 条 J[Y序
列上有 0 个以上 [[Z位点!占 0590e) 0 2E1 个
[[Z位点中!0 E^ 核苷酸重复均有分布!并且每种
重复类型的出现频率存在差异) 六聚物最多!共
:5: 个! 占 .191e 三聚物次之! 共 ::5 个! 占
.:9/e四聚物最少!仅占 E9.e单聚物有 .0D 个!
占 019/e二聚物有 .E1 个!占 0390e五聚物 03/
个!占 0.9:e"表 0#)
787 GNMHNN!#的基元种类及比例
在出现的 1D3 种重复基元中!单聚物重复基元
有 2 种!二聚物重复基元有 0. 种!三聚物重复基元
有 1/ 种!四聚物重复基元有 E/ 种!五聚物重复基元
有 0:3 种!六聚物重复基元有 ::2 种) 单聚物中主
要基元为F;Y二聚物中主要基元为FR;TY和YT;
RF三聚物中主要基元为 RFY;FYT和 FYR;TFY
四聚物中主要基元为 YYYT;RFFF和 YYFY;FYFF
五聚物中主要基元为 YYYYF;YFFFF六聚物中主
要基元类型为RFYRFF;YYTFYT"表 .#)
表 6 毒莴苣GNM中NN!的组成及频率分布
Y&A+0 6-G*$-A#*-"% &%I ($+h#+%,S"([[ZG-% &G+*"(8&4$#4& *%./)"& J[YG
重复类型
Z+H+&**SH+
基元种类数
b#LA+$"(L"*-(*SH+
[[Z数
[[Z%#LA+$
占全部 [[Z比例 "e#
)$"H"$*-"% -% &[[Z
出现频率 "e#
\$+h#+%,S
单核苷酸 a"%"%#,+"*-I+ 2 .0D 019/ .9D
二核苷酸 6-%#,+"*-I+ 0. .E1 0390 :92
三核苷酸 Y$-%#,+"*-I+ 1/ ::5 .:9/ 291
四核苷酸 Y+*$&%#,+"*-I+ E/ D0 E9. 09.
五核苷酸 )+%*&%#,+"*-I+ 0:3 03/ 0.9: .92
六核苷酸 X+C&%#,+"*-I+ ::2 :5: .191 19/
总计 Y"*& 1D3 0 2E1 0//9/ 0D92
表 7 毒莴苣GNMHNN!主要重复基元的出现频率
Y&A+. \$+h#+%,S"(*B+L&-% $+H+&*L"*-(G-% 8&4$#4& *%./)"&
重复类型
Z+H+&**SH+
基元种类数
b#LA+$"(L"*-(*SH+
主要重复基元
YB+L&-% $+H+&*L"*-(
出现次数
7,,#$+%,+%#LA+$
频率 "e#
\$+h#+%,S
单核苷酸 a"%"%#,+"*-I+ 2 F;Y .02 D595
二核苷酸 6-%#,+"*-I+ 0. FR;TY DD :592
YT;RF D0 :29:
三核苷酸 Y$-%#,+"*-I+ 1/ RFY;FYT 2. 0.91
FYR;TFY :. D91
RFF;YYT .D 39E
YRF;YTF .1 592
四核苷酸 Y+*$&%#,+"*-I+ E/ YYYT;RFFF 1 191
YYYF;YFFF 2 292
YYFY;FYFF 1 191
FYRT;RTFY 2 292
五核苷酸 )+%*&%#,+"*-I+ 0:3 YYYYF;YFFFF 3 292
FYFYR;TFYFY 2 .9.
YYYYR;TFFFF 2 .9.
六核苷酸 X+C&%#,+"*-I+ ::2 RFYRFF;YYTFYT E 09E
FRYTFF;YYRFTY : /93
TYTYTT;RRFRFR : /93
/31 植O物O保O护O学O报 2. 卷
789 GNMHNN!引物的有效性及多态性检测
试验共设计合成 J[YK[[Z引物 .2 对!其中有 5
对引物对 00份材料的扩增带数为 /!其余 05 对能够
实现有效扩增!有效扩增率为 5/93e) 经 0/e)FRJ
电泳检测其多态性!有 D 对引物对 00 个样品能扩增
出多态性明显(条带清晰且稳定的标记条带!占有效
扩增引物的 1.9De!呈现出较高的多态性"表 :#)
78; 毒莴苣及其近似种的遗传多样性分析
所选 D 对引物对 00 份材料的扩增条带数在
: 5^条之间!平均每对引物产生 1 个条带) D 对引
物共扩增出 21 条谱带!其中多态性条带 2/ 条!多态
性比例为 339De) 其中引物 2510 扩增出条带 1 条!
多态性条带 1 条!引物 2:/ 扩增条带 1 条!多态性条
带 2 条"图 0#)
表 9 部分微卫星标记的特征表
Y&A+: [#LL&$S"(H&$*-&L-,$"G&*+-*+L&$>+$G
引物
)$-L+$
重复基元
Z+H+&*L"*-(
上链引物"1m4:m#
\"$@&$I H$-L+$"1m4:m#
下链引物"1m4:m#
Z+V+$G+H$-L+$"1m4:m#
退火温度
YL
"p#
产物大小
)$"I#,*G-?+
"AH#
2:/ "FYRF#% "YFYRF#% TYFTYFFRRYRRFYRYRR RFYFFRTFRRFRRFYFFF 23 :2/ 1^/5
03.2 "YYT#% "YT#% FFRRTYYTRRYTYTRRYRRY YTFFFRYYRRTRYTRYYT 11 .// :^2/
2252 "FTTFFY#% "TTFFYT#% "FRF#% TFFYTYYTTRFFFTYRTT FRRRFFTTYTTYTYFYTF 1/ ./3 1^01
2510 "YRF#% RTFRTFFTFFRFFFTTTF YYTTTYRFYYTTYFTTFFRY 1/ ..: .^2D
1/1D "YT#% "TY#% TYTTRTTTFYYTFRRYYY FYYRRFTYTRYFRTFRRY 1/ :30 2^0:
13.3 "FR#% FYYRRYFYTFRFRTRFRRYY FFFTRFRTTRFFYTFFFR 23 05/ 2^5E
E512 "FTFRFF#% FYTTFTRFTFTTFFTFTY RTFTYTFTRFTYFFFTTT 1/ :32 E^.3
EE.1 "TFT#% "FYF#% "RFYRF#% RTRRFTFFRYRRYRRFYF RFFRFFYFRRYRRRYRRT 1/ O2:0 0^ .D:
E251 "YYFFTT#% "YYTTYT#% YRFFYRRYRTRFYYYRRT TFRRYTYRRFRTRRYYRF 1/ .51 2^3D
图 6 两对NN!引物对 66 份供试材料的扩增图谱
\-M=0 FLH-(-+I A&%IG"(*@"H"SL"$HB-,H$-L+$G-% 00 L&*+$-&G
F$ 引物 2510 W$ 引物 2:/ a$ 6bF分子标量 0$ 中国检科院翅果菊 .$ 莴苣6-&%& :$ 宿根莴苣 2$ 中国检科院毒莴
苣 1$ 莴苣Y&%M" E$ 江苏毒莴苣 5 3^$ 江苏泰州#($号翅果菊 D$ 江苏连云港翅果菊 0/$ 山西翅果菊 00$ 北山莴苣)
F$ )$-L+$2510 W$ H$-L+$2:/a$ 0// AH 6bFL&$>+$ 0$!=/3-/4&($"LTB-%+G+F,&I+LS"(8%GH+,*-"% &%I d#&$&%*-%+"TF8d#
.$ 8=*&$/B& 6-&%& :$ 8=,%.%33/* 2$ 8=*%./)"& ($"LTF8d 1$ 8=*&$/B& Y&%M" E$ 8=*%./)"& ($"L!-&%MG# )$"V-%,+ 5 43$ !=/37
-/4& # &%I $ ($"LY&-?B"#! !-&%MG# )$"V-%,+ D$ !=/3-/4& ($"LP-&%S#%M&%M! !-&%MG# )$"V-%,+ 0/$ !=/3-/4& ($"L[B&%C-)$"VK
-%,+ 00$ 8=*/A/./4&=
O
OO综合 D 对引物的扩增结果!所测 00 份材料间的
相似系数在 /92:. 0^9/// 之间) 其中翅果菊与毒
莴苣之间的相似系数较低!为 /92:.宿根莴苣与毒
莴苣间的相似系数为 /91.:法国莴苣6-&%&与毒莴
苣的相似系数为 /93E2) 系统发育树显示"图 .#!
在 /910: 处 00 份材料被划分为 : 大类!其中来自不
同地域的 1 种翅果菊与北山莴苣聚为#类$类仅
包含宿根莴苣 0 种!且与其它 0/ 份材料的遗传相似
性较低类包括 . 种毒莴苣和 . 种莴苣!表明这 .
个物种的遗传关系密切!在所分析的 J[Y序列中遗
传突变较少)
9 讨论
J[YK[[Z可对物种基因内部变异进行直接评价!
0312 期 梁照文等$ 检疫性杂草毒莴苣J[YK[[Z标记的开发及应用
图 7 基于NN!构建的毒莴苣及其近似种的系统发育树
\-M=. )BS"M+%+*-,*$++"(8&4$#4& *%./)"& &%I $+&*+I GH+,-+GAS[[Z
O
本研究初步探讨了J[YK[[Z分子标记在毒莴苣及其
近似种分类与鉴定研究中的可行性) 对毒莴苣 5 2:3
条无冗余序列的 [[Z位点进行了搜索!共搜索到
0 2E1个 [[Z位点!检出率为 0D95e!高于荔枝
"0E91:e#(小麦".9/0e#和辣椒"3922e#等物种的
检出率"b-,"*+*&=!.//2李晶晶等!.//3孙清明等!
./00#!但低于柑橘".091Ee#和水稻".5e#"TB+% +*
&=!.//EY&%M+*&=!.//3#) 从 0 2E1个 [[Z位点分
析!0 E^核苷酸重复均有出现且没有明显的偏倚性!
其中五核苷酸重复和六核苷酸重复的基元类型分别
为 0:3和 :22种!与理论值较为接近"P&Z"*&+*&=!
.//1#!且 [[Z数量分别占所搜索 [[Z总数的 0.9:e
和 .191e!表明在毒莴苣物种中!J[YK[[Z出现的频
率较高!重复基元类型也较为丰富!这与一些栽培作
物的J[YK[[Z序列存在一定差异!也为毒莴苣 J[YK
[[Z标记的开发奠定了基础)
本研究将毒莴苣J[YK[[ZG标记用于毒莴苣及其
近似种的遗传多样性分析!其中 D 对引物能够扩增到
条带清晰(重复性好的谱带!表现出J[YK[[ZG较好的
通用性和有效性多态性位点比率分析表明!多态率
高达 339De) 通过对所测 00份材料间的遗传距离及
聚类分析表明!莴苣属不同物种及翅果菊在聚类图上
表现出较好的分离!这可能是由于毒莴苣与其近似种
基因组中的 [[Z基因序列存在较大差异!引起引物结
合位点之间的片段长度差异所致) 其中翅果菊与莴
苣(毒莴苣等莴苣属物种的遗传相似性系数较低!表
明其具有与莴苣属不同的系统发育背景!与其被重新
划分为翅果菊属的研究结果相符!但毒莴苣与莴苣相
似度在 /9D以上!说明二者具有较近的亲缘关系)
口岸检疫中!常由于杂草种子外部形态特征不
明显或植株难以区分而无法准确鉴定!分子检测技
术的应用可有效解决快速而准确鉴定的问题!特别
是建立检疫性杂草的特异性分子标记!可有效提高
检疫工作效率及检出率) 邵秀玲等".//D#从 03 对
[[Z引物中筛选到 0 对引物 Fa0!该引物对应的标
记在细茎野燕麦?B%3& A&.A&$&(法国野燕麦?="#-)B7
/4/&3&(不实野燕麦?=*$%./"/*等检疫性杂草中具有多
态性!以燕麦和野燕麦作为参照!可很好地实现对这
些燕麦属杂草的区分与鉴定!这为燕麦属检疫性杂
草的快速鉴定提供了一定的辅助作用张姮等
".//3#利用 )TZKZ\P)技术针对毒麦及其近似种
的$6bF8Y[区域进行分析!选取的 HF%2#限制性内切酶可实现对检疫性杂草毒麦与其
近似种亚麻毒麦 8)"/#9.%9)$#9(多花黑麦草 8=
9#"$/<").#9(瑞士黑麦草 8=./0/-#9的鉴别和区分
刘勇等"./00#依据茄科植物 O5++D基因序列差异!
设计了 0 对特异)TZ引物 [Z[\0;[Z[Z0!可用于刺
萼龙葵 +)"&3#9.)*$.&$#9的特异性检测) 本研究所
设计引物2510等对莴苣(宿根莴苣(毒莴苣(翅果菊
等物种的扩增片段差异明显!是否可通过毒莴苣及
其近似种J[Y序列的测定与分析!利用不同物种间
内含子长度多态性的差异设计 J[YK8H[ 特异性引
物"郭琼霞等!./0.#!用于毒莴苣或其近似种的快
速分子检测仍需进一步研究)
参 考 文 献 "Z+(+$+%,+G#
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:312 期 梁照文等$ 检疫性杂草毒莴苣J[YK[[Z标记的开发及应用