全 文 ：第 源员 卷摇 第 猿 期
圆园员源 年 远 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 猿
允怎灶藻 摇 圆园员源
摇
基金项目院 公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员猿园猿园圆员冤袁国家自然科学基金渊猿员员员员猿园冤袁江苏省农业科技自主创新资金渊糟曾咱员圆暂员园园猿冤袁江
苏省科技支撑计划渊月耘圆园员圆猿园猿冤袁江苏省农业三新工程渊杂载郧悦咱圆园员猿暂猿缘怨冤
作者简介院 杜琳琳袁女袁员怨愿源年生袁研究实习员袁研究方向为水稻病毒病袁 耘鄄皂葬蚤造院 凿怎造蚤灶造蚤灶员圆岳 员圆远援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 赠躁扎澡燥怎岳 躁葬葬泽援 葬糟援 糟灶袁 扎澡燥怎贼燥灶早岳 躁葬葬泽援 葬糟援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 园怨 原 员圆
南方水稻黑条矮缩病毒检测方法的比较
杜琳琳员 摇 王跞姣员袁圆 摇 周摇 彤员鄢摇 兰摇 莹员 摇 范永坚员 摇 周益军员鄢
渊员援江苏省农业科学院植物保护研究所袁 江苏省植物病毒病诊断检测技术中心袁
南京 圆员园园员源曰 圆援南京农业大学植物保护学院袁 南京 圆员园园怨缘冤
摘要院 为明确南方水稻黑条矮缩病毒渊杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 杂砸月杂阅灾冤检测方法的
最佳适用范围袁对其现有检测方法 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸尧砸栽鄄蕴粤酝孕尧砸栽鄄孕悦砸的灵敏性及特异性进行了
比较袁并分析了依据 杂砸月杂阅灾单克隆抗体 猿云员 建立的斑点免疫结合印迹渊凿燥贼 蚤皂皂怎灶燥遭蚤灶凿蚤灶早 葬泽泽葬赠袁
阅陨月粤冤方法对检测植物寄主和白背飞虱 杂燥早葬贼藻造造葬 枣怎则糟蚤枣藻则葬 匀燥则增觃贼澡 的特异性遥 结果表明袁灵敏性以
砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法最高袁其次为 砸栽鄄蕴粤酝孕方法袁而普通 砸栽鄄孕悦砸方法相对较低遥 这 猿 种方法均
可特异性检测 杂砸月杂阅灾 植物寄主和白背飞虱曰阅陨月粤 方法可以满足 杂砸月杂阅灾 和水稻黑条矮缩病毒
渊砸蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 砸月杂阅灾冤植物寄主和白背飞虱大量样品的检测袁但不能区分
杂砸月杂阅灾和 砸月杂阅灾遥 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法实现了短时间内对 杂砸月杂阅灾 砸晕粤 拷贝数的相对定量曰
砸栽鄄蕴粤酝孕方法全程恒温反应袁无需热循环仪遥
关键词院 南方水稻黑条矮缩病毒曰 检测方法曰 比较
悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽 枣燥则 杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽
阅怎 蕴蚤灶造蚤灶员 摇 宰葬灶早 蕴蚤躁蚤葬燥员袁圆 摇 在澡燥怎 栽燥灶早员鄢摇 蕴葬灶 再蚤灶早员 摇 云葬灶 再燥灶早躁蚤葬灶员 摇 在澡燥怎 再蚤躁怎灶员鄢
渊员援 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 允蚤葬灶早泽怎 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽曰 允蚤葬灶早泽怎 栽藻糟澡灶蚤糟葬造 杂藻则增蚤糟藻
悦藻灶贼藻则 燥枣 阅蚤葬早灶燥泽蚤泽 葬灶凿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 枣燥则 孕造葬灶贼 灾蚤则怎泽 阅蚤泽藻葬泽藻袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园员源袁 允蚤葬灶早泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 悦燥造造藻早藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 晕葬灶躁蚤灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园怨缘袁 允蚤葬灶早泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 藻增葬造怎葬贼藻 贼澡藻 燥责贼蚤皂葬造 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 则葬灶早藻 燥枣 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽 枣燥则 杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿
凿憎葬则枣 增蚤则怎泽 渊 杂砸月杂阅灾冤袁 贼澡藻 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼蚤藻泽 葬灶凿 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼蚤藻泽 燥枣 藻曾蚤泽贼蚤灶早 杂砸月杂阅灾 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽袁
蚤灶糟造怎凿蚤灶早 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸袁 砸栽鄄蕴粤酝孕 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸袁 憎藻则藻 糟燥皂责葬则藻凿援 粤灶凿 贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼蚤藻泽 燥枣 凿燥贼
蚤皂皂怎灶燥遭蚤灶凿蚤灶早 葬泽泽葬赠 渊 阅陨月粤冤 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 猿云员 贼燥 杂砸月杂阅灾 怎泽藻凿 枣燥则 凿藻贼藻糟贼蚤灶早
责造葬灶贼泽 葬灶凿 憎澡蚤贼藻 遭葬糟噪 责造葬灶贼澡燥责责藻则袁 杂燥早葬贼藻造造葬 枣怎则糟蚤枣藻则葬袁 憎葬泽 葬灶葬造赠扎藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 砸藻葬造鄄
贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 蚤泽 贼澡藻 皂燥泽贼 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻袁 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 贼澡藻 砸栽鄄蕴粤酝孕 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 砸栽鄄孕悦砸援 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻
砸栽鄄孕悦砸袁 砸栽鄄蕴粤酝孕 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸 憎藻则藻 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 泽责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠 凿藻贼藻糟贼蚤灶早 杂砸月杂阅灾 蚤灶 责造葬灶贼泽 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼
增藻糟贼燥则泽援 阅陨月粤 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 猿云员 皂藻贼 贼澡藻 则藻择怎蚤则藻皂藻灶贼 枣燥则 造葬则早藻鄄泽糟葬造藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣
杂砸月杂阅灾 葬灶凿 砸蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽 渊 砸月杂阅灾冤 蚤灶 责造葬灶贼泽 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则泽袁 遭怎贼 糟燥怎造凿 灶燥贼
凿蚤泽贼蚤灶早怎蚤泽澡 杂砸月杂阅灾 枣则燥皂 砸月杂阅灾援 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 糟燥怎造凿 则藻造葬贼蚤增藻造赠 择怎葬灶贼蚤枣赠 贼澡藻 糟燥责赠 灶怎皂遭藻则 燥枣
杂砸月杂阅灾 砸晕粤 蚤灶 葬 泽澡燥则贼 贼蚤皂藻援 砸栽鄄蕴粤酝孕 皂藻贼澡燥凿 蚤泽 葬 则藻葬糟贼蚤燥灶 葬贼 糟燥灶泽贼葬灶贼 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻袁 憎澡蚤糟澡 蚤泽 枣藻葬泽蚤遭造藻
憎蚤贼澡燥怎贼 葬 贼澡藻则皂葬造 糟赠糟造藻则援
运藻赠 憎燥则凿泽院 杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽曰 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿曰 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶
摇 摇 南方水稻黑条矮缩病毒 渊 杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄
泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 杂砸月杂阅灾冤是近年在中国南部稻
区新发现的一种病毒袁经鉴定为呼肠孤病毒科 砸藻燥鄄
增蚤则蚤凿葬藻斐济病毒属 云蚤躁蚤增蚤则怎泽第 圆 组的一个新种咱员 原 猿暂 遥
近几年袁由 杂砸月杂阅灾侵染引起的水稻南方黑条矮缩
病和玉米粗缩病在我国南方和越南北部大面积发
生咱源暂 袁严重威胁着水稻和玉米的安全生产曰另外袁
杂砸月杂阅灾还能侵染危害薏米尧稗草尧水莎草及白草等
作物和杂草咱员袁缘暂 遥 自然条件下袁杂砸月杂阅灾主要由白背
飞虱 杂燥早葬贼藻造造葬 枣怎则糟蚤枣藻则葬 匀葬则增觃贼澡以持久性不经卵方式
传播咱员 原 圆暂 遥 在我国广大稻区袁杂砸月杂阅灾 的初侵染源
主要为春季带毒迁入的白背飞虱袁初侵染源在早稻
或其它寄主植物上扩繁后袁再经白背飞虱传播至中
稻或晚稻秧田造成严重危害咱缘暂 袁而该病毒病害的流
行与白背飞虱的数量并没有直接关系袁而是与其带
毒率直接相关遥 因此袁早春寄主植物的感病率及越
冬白背飞虱的带毒率是我国单季稻及晚季稻病害发
生程度预测的重要依据咱远暂 袁可靠的检测结果对于
杂砸月杂阅灾的预测预报及有效防治等具有重要的现实
意义遥
迄今用于检测 杂砸月杂阅灾 的方法有限袁已报道的
有生物学方法咱员暂和免疫方法咱苑 原 愿暂 袁分子检测方法包
括巢 式 砸栽鄄孕悦砸咱员暂 尧 一 步 双 重 砸栽鄄孕悦砸咱怨暂 尧 砸栽鄄
孕悦砸咱员园鄄员员暂 尧砸栽鄄蕴粤酝孕咱员圆暂和 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸咱员猿暂 遥 但
有限的几种检测方法大都单一使用袁缺少相应的综
合评价袁造成应用上的盲目性袁降低了技术措施的有
效性遥 因此袁本试验对 杂砸月杂阅灾 现有的检测方法进
行比较袁探讨其适用范围袁以期为南方水稻黑条矮缩
病的诊断和预测预报提供技术支持遥
员 材料与方法
员援 员 材料
水稻及昆虫院杂砸月杂阅灾 水稻病株标样采集于海
南崖城梅山重病区曰水稻黑条矮缩病毒渊砸蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄
泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 砸月杂阅灾冤水稻病株标样采集于
江苏建湖重病区遥 参照 在澡燥怎 等咱员圆暂和周彤等咱员源暂室
内人工饲毒方法分别获得携带病毒的白背飞虱和灰
飞虱 蕴葬燥凿藻造责澡葬曾 泽贼则蚤葬贼藻造造怎泽渊云葬造造佴灶冤袁 原 苑园 益冻存备
用遥 饲虫水稻品种为武育粳 猿 号遥
试剂院杂砸月杂阅灾 单克隆抗体 猿云员 由浙江大学农
业与生物技术学院生物技术研究所吴建祥教授提
供曰辣根过氧化物酶渊澡燥则泽藻 则葬凿蚤泽澡 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻袁 匀砸孕冤
标记的羊抗鼠二抗和碱性磷酸酯酶渊葬造噪葬造蚤灶藻 责澡燥泽鄄
责澡葬贼葬泽藻袁 粤孕冤标记的羊抗鼠二抗购自美国 杂蚤早皂葬 公
司曰硝酸纤维素膜渊灶蚤贼则燥糟藻造造怎造燥泽藻 皂藻皂遭则葬灶藻袁 晕悦 膜冤
购自美国 粤皂藻则泽糟燥 公司曰栽砸陨扎燥造襆 砸藻葬早藻灶贼 购自美国
陨增蚤贼则燥早藻灶公司曰酝鄄酝怎蕴灾 反转录酶尧砸晕葬泽藻 抑制剂购
自加拿大 云藻则皂藻灶贼葬泽 公司曰栽葬择 责造怎泽 阅晕粤 聚合酶尧
凿晕栽孕等均购自上海申能博采有限公司遥
仪器院耘责责藻灶凿燥则枣 月蚤燥孕澡燥贼燥皂藻贼藻则 孕造怎泽 核酸蛋白测
定仪袁艾本德渊上海冤国际贸易有限公司曰月蚤燥鄄砸葬凿
陨匝栽酝 缘 实时荧光定量 孕悦砸 检测系统袁南京润亚生物
科技发展有限公司曰伯乐 酝赠悦赠糟造藻则栽酝 孕悦砸 仪袁南京
润亚生物科技发展有限公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 提取总 砸晕粤
参照 栽砸陨扎燥造襆 砸藻葬早藻灶贼使用说明书袁从 员园园 皂早水
稻标样茎杆渊加 员 园园园 滋蕴 栽砸陨扎燥造冤或室内饲养尧饲毒
后度过循回期的单头飞虱渊加 猿园园 滋蕴 栽砸陨扎燥造冤体内
提取总 砸晕粤袁参照季英华等咱员园暂方法进行 砸栽鄄孕悦砸 检
测袁 原 苑园 益保存备用遥
员援 圆援 圆 灵敏性检测
用核酸蛋白测定仪测定所提取水稻标样茎杆总
砸晕粤的 韵阅 值和浓度袁韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园为 员援 怨圆袁浓度为源援 猿 滋早 辕 滋蕴袁用 园援 员豫 阅耘孕悦水进行 员园 倍梯度稀释为
源援 猿 伊 员园园尧源援 猿 伊 员园 原员尧源援 猿 伊 员园 原圆尧源援 猿 伊 员园 原猿尧源援 猿 伊
员园 原源尧源援 猿 伊 员园 原缘尧源援 猿 伊 员园 原远尧源援 猿 伊 员园 原苑尧源援 猿 伊
员园 原愿尧源援 猿 伊 员园 原怨 滋早 辕 滋蕴袁取 圆 滋蕴 作为模板遥 分别用
砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸尧砸栽鄄蕴粤酝孕 及 砸栽鄄孕悦砸 方法进行
扩增反应遥
砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法咱员猿暂 院取荧光定量 孕悦砸专
用管袁依次加入 圆 伊 杂再月砸 郧则藻藻灶 砸栽鄄孕悦砸 则藻葬糟贼蚤燥灶 皂蚤曾
员园 滋蕴袁杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄云院郧粤郧粤悦悦悦粤悦悦栽悦悦粤悦栽郧粤栽栽袁
杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄砸院郧粤郧粤悦悦悦粤悦悦栽悦悦粤悦栽郧粤栽栽 各 园援 远 滋蕴
渊员园 皂燥造 辕 蕴冤袁水稻标样茎杆总 砸晕粤 圆援 园 滋蕴袁 蚤杂糟则蚤责贼
则藻增藻则泽藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻 枣燥则 燥灶藻鄄泽贼藻责 砸栽鄄孕悦砸 园援 源 滋蕴袁无
核酸酶超纯水 远援 源 滋蕴袁轻轻混匀曰封好透光膜袁用刮
板将膜压紧曰在实时荧光定量 孕悦砸检测系统上进行
扩增反应院缘园 益 员园 皂蚤灶合成 糟阅晕粤袁怨缘 益 缘 皂蚤灶 灭活
反转录酶活性曰怨缘 益 员园 泽袁远园 益 员园 泽渊此时收集信
号冤袁源园 个循环曰怨缘 益 员 皂蚤灶袁缘缘 益 员 皂蚤灶曰缘缘 耀 怨缘 益袁
愿园 个循环袁每间隔 园援 缘 益 员 个循环袁员 个循环时间为
员园 泽遥 反应完成后袁通过软件 陨匝栽酝 缘 韵责贼蚤糟葬造 杂赠泽贼藻皂
杂燥枣贼憎葬则藻 圆援 园 分析数据遥
砸栽鄄蕴粤酝孕方法咱员圆暂 院取 孕悦砸 管袁依次加入 员园 伊
栽澡藻则皂燥孕燥造 反应缓冲液 圆援 缘 滋蕴尧员园 皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕泽
圆援 缘 滋蕴尧员园 滋皂燥造 辕 蕴 云猿 辕 月猿 园援 缘 滋蕴尧员园 滋皂燥造 辕 蕴 云陨孕 辕
月陨孕 源援 园 滋蕴尧缘 皂燥造 辕 蕴 甜菜碱 源援 园 滋蕴尧源园 哉 辕 滋蕴 砸晕葬泽藻
猿缘猿猿 期 杜琳琳等院 南方水稻黑条矮缩病毒检测方法的比较
抑制剂 园援 缘 滋蕴尧圆园园 哉 辕 滋蕴 酝鄄酝怎蕴灾反转录酶 园援 缘 滋蕴尧
月泽贼 阅晕粤聚合酶尧愿 哉 辕 滋蕴大片段 员援 园 滋蕴尧水稻标样茎
杆总 砸晕粤 圆援 园 滋蕴袁园援 员豫 阅耘孕悦 水补足 圆园 滋蕴袁轻微
离心混匀曰远圆 益恒温反应 远园 皂蚤灶袁然后 愿园 益加热
缘 皂蚤灶袁终止反应曰取 圆 滋蕴反应产物袁于 圆豫琼脂糖凝
胶上电泳检测扩增结果遥
砸栽鄄孕悦砸方法咱员圆暂 院参照 酝鄄酝怎蕴灾 反转录酶使用
说明进行反转录合成 糟阅晕粤袁具体步骤院取无 砸晕粤
酶的 孕悦砸管袁加入 砸晕粤 圆援 园 滋蕴尧员园滋皂燥造 辕 蕴下游引物
月猿 员援 园 滋蕴袁并加 园援 员豫 阅耘孕悦水至终体积为 员员援 缘 滋蕴曰
怨园 益保温 员园 皂蚤灶袁迅速转移到冰上 圆 耀 猿 皂蚤灶袁稍离心
使溶液集中至管底袁依次加入 缘 伊 酝鄄酝怎蕴灾 遭怎枣枣藻则
猿援 园 滋蕴尧员园皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕泽 园援 缘 滋蕴尧圆园园哉 辕 滋蕴 酝鄄酝怎蕴灾
反转录酶 园援 缘 滋蕴尧源园 哉 辕 滋蕴 砸晕葬泽藻抑制剂 园援 缘 滋蕴袁混
匀曰置于 源圆 益保温 员 澡袁苑园 益保温 员园 皂蚤灶遥 以 圆援 园 滋蕴
总 砸晕粤 反转录所合成的全部 糟阅晕粤 为模板袁云猿 辕 月猿
各 园援 缘 滋蕴为引物进行 圆园 滋蕴体系普通 孕悦砸反应袁其
中退火温度为 缘苑益袁苑圆益延伸时间为 猿园 泽曰取圆援 园 滋蕴
孕悦砸产物在 圆豫琼脂糖凝胶中电泳袁耘月 染色后拍照
观察遥
员援 圆援 猿 特异性检测
砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 方法院分别提取 杂砸月杂阅灾 和
砸月杂阅灾水稻标样茎杆及携带 杂砸月杂阅灾 白背飞虱尧携
带 砸月杂阅灾灰飞虱的总 砸晕粤袁以健康水稻组织为阴
性对照袁用 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法咱员猿暂进行特异性检
测袁具体体系和条件同 员援 圆援 圆遥
砸栽鄄蕴粤酝孕方法院分别提取 杂砸月杂阅灾 和 砸月杂阅灾
水稻标样及携带 杂砸月杂阅灾 白背飞虱尧携带 砸月杂阅灾
灰飞虱的总 砸晕粤袁分别以健康水稻茎杆尧无毒飞虱
为阴性对照袁用 砸栽鄄蕴粤酝孕方法咱员圆暂进行特异性检测袁
具体体系和条件同 员援 圆援 圆遥
砸栽鄄孕悦砸方法院分别提取 杂砸月杂阅灾 和 砸月杂阅灾 水
稻标样总 砸晕粤袁以健康水稻茎杆为阴性对照袁分别
以引物 云猿 辕 月猿咱员圆暂及 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄云 辕 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄砸咱员猿暂
进行特异性检测袁反应体系和条件同 员援 圆援 圆袁扩增产
物经琼脂糖电泳初步检测后袁再送交上海生工生物
工程有限公司测序鉴定遥
斑点免疫结合印迹渊 凿燥贼 蚤皂皂怎灶燥遭蚤灶凿蚤灶早 葬泽泽葬赠袁
阅陨月粤冤方法检测寄主植物院以 杂砸月杂阅灾和 砸月杂阅灾水
稻标样组织研磨液为材料袁 杂砸月杂阅灾 单克隆抗体
猿云员 为一抗袁粤孕标记的羊抗鼠免疫球蛋白 郧渊蚤皂皂怎鄄
灶燥早造燥遭怎造蚤灶 郧袁 陨早郧冤为二抗袁采用 阅陨月粤 方法咱愿暂检测
寄主植物的特异性遥 取水稻病株组织用碳酸盐包被
液研磨袁包被液稀释 员园园 倍后取 圆援 园 滋蕴 点于硝酸纤
维素膜上的正方格内渊每方格 园援 缘 糟皂 伊 园援 缘 糟皂冤袁
室温自然干燥曰将干燥的膜浸入封闭缓冲液中
渊园郾 园员 皂燥造 辕 蕴 孕月杂栽配制的 员豫脱脂奶粉冤袁猿苑 益摇床
轻轻振荡 猿园 皂蚤灶袁以封闭非特异性蛋白结合位点曰将
杂砸月杂阅灾单抗 猿云员 与封闭缓冲液 员 颐 员 缘园园 稀释作为
一抗加入袁猿苑 益摇床上轻轻振荡孵育 员援 缘 澡曰取出膜
用洗涤缓冲液渊园援 园员 皂燥造 辕 蕴 孕月杂栽袁 责匀 苑援 缘冤洗涤 猿
次袁每次 缘 皂蚤灶曰取 粤孕 标记的羊抗鼠 陨早郧 二抗袁用封
闭缓冲液对二抗 员 颐 猿 园园园 稀释袁将硝酸纤维素膜浸
入袁猿苑 益保温摇床上轻轻振荡 员援 缘 澡曰取出膜用洗涤
缓冲液洗涤 猿 次袁每次 缘 皂蚤灶曰在室温避光条件下袁
晕月栽 辕 月悦陨孕显色底物中充分显色袁用双蒸水终止反
应袁室温晾干拍照袁用保鲜膜密封避光保存遥
阅陨月粤方法检测昆虫介体院从携带 杂砸月杂阅灾白背
飞虱群体和携带 砸月杂阅灾 灰飞虱群体中分别随机取
圆园 头袁加 圆园 耀 猿园 滋蕴 园援 员豫 阅耘孕悦 处理水于无 砸晕粤 辕
阅晕粤酶的 孕悦砸 管中袁用灭菌牙签将单头虫体挑入
孕悦砸管并捣碎袁离心袁经 砸栽鄄孕悦砸 方法咱员园暂检测袁获得
带毒白背飞虱和灰飞虱遥 以获得的单头阳性灰飞虱
和白背飞虱为材料袁单抗 猿云员 为一抗袁匀砸孕 标记羊
抗鼠 陨早郧 为二抗进行 阅陨月粤 检测袁无毒白背飞虱和
灰飞虱为阴性对照袁显色反应之前操作步骤同上袁显
色时将膜浸入新配制的 匀砸孕 四甲基联苯胺渊栽酝月冤
显色底物溶液中袁猿苑 益摇床平缓摇动显色至条带清
晰袁用双蒸水终止反应袁室温晾干拍照袁用保鲜膜密
封避光保存遥
圆 结果与分析
圆援 员 灵敏性检测
灵敏性检测结果显示袁砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 方法
对感染 杂砸月杂阅灾 水稻茎杆总 砸晕粤 的检测下限为
源郾 猿 伊 员园 原愿 滋早 辕 滋蕴渊图 员鄄葬冤袁砸栽鄄蕴粤酝孕 方法为 源援 猿 伊
员园 原远 滋早 辕 滋蕴渊图 员鄄遭冤袁而普通 砸栽鄄孕悦砸 方法为 源援 猿 伊
员园 原源 滋早 辕 滋蕴渊图 员鄄糟冤袁阴性对照均没有扩增产物出
现遥 表明 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸尧砸栽鄄蕴粤酝孕 和 砸栽鄄孕悦砸
均能检测 杂砸月杂阅灾袁以 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 方法灵敏
性最高袁其次为 砸栽鄄蕴粤酝孕 方法袁而普通 砸栽鄄孕悦砸 方
法相对较低遥
圆援 圆 特异性检测
圆援 圆援 员 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法
检测感染 杂砸月杂阅灾水稻及携带 杂砸月杂阅灾白背飞
虱时袁悦栽 值小且迅速达到平台期曰而检测感染 砸月杂鄄
阅灾水稻及携带 砸月杂阅灾灰飞虱时袁基本不起峰袁与阴
源缘猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 员 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸渊葬冤尧砸栽鄄蕴粤酝孕渊遭冤及 砸栽鄄孕悦砸渊糟冤检测方法灵敏性比较
云蚤早援 员 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 贼澡藻 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 渊葬冤袁 砸栽鄄蕴粤酝孕 渊遭冤 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸 渊糟冤 皂藻贼澡燥凿泽
摇 摇 酝院阅晕粤 酝葬则噪藻则曰员 耀 员园院源援 猿 伊 员园园尧源援 猿 伊 员园 原员尧源援 猿 伊 员园 原圆尧源援 猿 伊 员园 原猿尧源援 猿 伊 员园 原源尧源援 猿 伊 员园 原缘尧源援 猿 伊 员园 原远尧源援 猿 伊 员园 原苑尧源援 猿 伊 员园 原愿尧
源援 猿 伊 员园 原怨 滋早 辕 滋蕴 杂砸月杂阅灾水稻标样茎杆总 砸晕粤遥 酝院 阅晕粤 酝葬则噪藻则曰 员 原 员园院 源援 猿 伊 员园园袁 源援 猿 伊 员园 原员袁 源援 猿 伊 员园 原圆袁 源援 猿 伊 员园 原猿袁 源援 猿 伊 员园 原源袁
源援 猿 伊 员园 原缘袁 源援 猿 伊 员园 原远袁 源援 猿 伊 员园 原苑袁 源援 猿 伊 员园 原愿袁 源援 猿 伊 员园 原怨 滋早 辕 滋蕴 贼燥贼葬造 砸晕粤 燥枣 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 杂砸月杂阅灾袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
性对照结果类似渊图 圆冤遥 表明根据 杂砸月杂阅灾 杂怨 设
计的引物特异性好袁可以相对定量植物寄主和白背
飞虱体内 杂砸月杂阅灾含量袁能够排除 砸月杂阅灾 的干扰袁
特异性检测 杂砸月杂阅灾遥 本试验中扩增产物的熔点曲
线都为单一尖锐峰袁没有引物二聚体及非特异性扩
增产物出现袁扩增产物单一袁特异性强遥
缘缘猿猿 期 杜琳琳等院 南方水稻黑条矮缩病毒检测方法的比较
图 圆 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸特异性检测寄主植物和昆虫介体扩增曲线
云蚤早援 圆 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 糟怎则增藻 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 澡燥泽贼 责造葬灶贼 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸
摇 摇 葬院寄主植物院员院杂砸月杂阅灾水稻曰圆院砸月杂阅灾水稻标样曰猿院健康水稻遥 遭院昆虫介体院员院杂砸月杂阅灾水稻曰圆院携带 杂砸月杂阅灾白背飞虱 员园 头曰猿院
携带 杂砸月杂阅灾单头白背飞虱曰源院携带 砸月杂阅灾灰飞虱曰缘院无毒白背飞虱遥 葬院 匀燥泽贼 责造葬灶贼院 员院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 杂砸月杂阅灾曰 圆院 则蚤糟藻 泽葬皂鄄
责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 猿院 澡藻葬造贼澡赠 则蚤糟藻援 遭院 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则泽院 员院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 杂砸月杂阅灾曰 圆院 贼藻灶 憎澡蚤贼藻 遭葬糟噪 责造葬灶贼澡燥责责藻则泽 渊宰月孕匀泽冤
糟葬则则赠蚤灶早 杂砸月杂阅灾曰 猿院 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造 宰月孕匀 糟葬则则赠蚤灶早 杂砸月杂阅灾曰 源院 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造 泽皂葬造造 遭则燥憎灶 则蚤糟藻 责造葬灶贼澡燥责责藻则 渊杂月孕匀冤 糟葬则则赠蚤灶早 砸月杂阅灾曰 缘院 葬增蚤则怎造蚤枣藻则鄄
燥怎泽 宰月孕匀援
圆援 圆援 圆 砸栽鄄蕴粤酝孕方法
选择与 杂砸月杂阅灾 同属并同组的 砸月杂阅灾 验证
砸栽鄄蕴粤酝孕方法的特异性遥 仅以感染 杂砸月杂阅灾 水稻
标样总 砸晕粤 为模板时袁能够高效扩增出阶梯状条
带曰而以健康水稻和感染 砸月杂阅灾 水稻标样总 砸晕粤
为模板时袁得不到扩增产物 渊图 猿鄄葬冤遥 仅以携带
杂砸月杂阅灾的单头白背飞虱所提取总 砸晕粤 为模板时袁
才能高效扩增出 蕴粤酝孕 特有的梯状条带曰而以携带
砸月杂阅灾的灰飞虱尧无毒白背飞虱提取总 砸晕粤和 阅耘孕悦
处理水作为模板时袁则得不到扩增产物渊图 猿鄄遭冤遥
表明根据 杂砸月杂阅灾 杂怨 设计的 砸栽鄄蕴粤酝孕引物特异性
强袁能有效区分阳性样品和阴性样品袁排除 砸月杂阅灾
的干扰袁特异性地检测寄主植物或白背飞虱体内是
否携带 杂砸月杂阅灾遥
圆援 圆援 猿 砸栽鄄孕悦砸方法
以 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄云 辕 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄砸以及 云猿 辕 月猿 引
物分别进行 砸栽鄄孕悦砸 特异性检测遥 结果显示袁只有
感染 杂砸月杂阅灾 水稻标样总 砸晕粤 能够扩增出大小为
员源员 遭责渊图 源鄄葬冤和 圆园圆 遭责渊图 源鄄遭冤的目的产物袁且未
出现非特异性条带袁而以感染 砸月杂阅灾水稻标样以及
远缘猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 猿 砸栽鄄蕴粤酝孕特异性检测寄主植物和昆虫介体
云蚤早援 猿 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 澡燥泽贼 责造葬灶贼 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则 怎泽蚤灶早 砸栽鄄蕴粤酝孕
摇 摇 葬院寄主植物院酝院阅晕粤 酝葬则噪藻则芋曰员院杂砸月杂阅灾水稻标样曰圆院砸月杂阅灾 水稻标样曰猿院健康水稻遥 遭院昆虫介体院酝院阅晕粤 酝葬则噪藻则 芋曰员院携带
杂砸月杂阅灾的单头白背飞虱曰圆院携带 砸月杂阅灾的单头灰飞虱曰猿院单头无毒白背飞虱曰源院水对照遥 葬院 匀燥泽贼 澡燥泽贼 责造葬灶贼院 酝院 阅晕粤 酝葬则噪藻则芋曰 员院
则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 杂砸月杂阅灾曰 圆院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 猿院 澡藻葬造贼澡赠 则蚤糟藻援 遭院 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则泽院 酝院 阅晕粤 酝葬则噪藻则 芋曰 员院 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造
宰月孕匀 糟葬则则赠蚤灶早 杂砸月杂阅灾曰 圆院 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造 杂月孕匀 糟葬则则赠蚤灶早 砸月杂阅灾曰 猿院 葬增蚤则怎造蚤枣藻则燥怎泽 宰月孕匀曰 源院 憎葬贼藻则 糟燥灶贼则燥造援
图 源 砸栽鄄孕悦砸特异性检测水稻植株
云蚤早援 源 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 则蚤糟藻 责造葬灶贼 怎泽蚤灶早 砸栽鄄孕悦砸
摇 摇 葬院杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄云 辕 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄砸曰遭院云猿 辕 月猿遥 酝院阅晕粤 酝葬则噪藻则域曰员院杂砸月杂阅灾 水稻标样曰圆院砸月杂阅灾 水稻标样曰猿院健康水稻遥 酝院 阅晕粤
酝葬则噪藻则域曰 员院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 杂砸月杂阅灾曰 圆院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 猿院 澡藻葬造贼澡赠 则蚤糟藻援
健康水稻总 砸晕粤 均得不到扩增产物遥 阳性扩增产
物测序结果与基因库报道的 杂砸月杂阅灾鄄杂怨 上相应片
段的同源性为 怨怨豫 耀员园园豫 遥
砸栽鄄孕悦砸 方法检测昆虫介体的特异性结果显
示袁只有以携带 杂砸月杂阅灾白背飞虱总 砸晕粤为模板时
能分别扩增出大小为 员源员 遭责渊 杂砸月杂阅灾鄄杂怨鄄云 辕 杂砸月杂鄄
阅灾鄄杂怨鄄砸冤和 圆园圆 遭责渊云猿 辕 月猿冤的目的产物袁而以携带
砸月杂阅灾灰飞虱以及无毒白背飞虱总 砸晕粤 为模板进
行同样反应时袁均得不到扩增产物遥 表明这 圆 对引
物特异性好袁都可以排除 砸月杂阅灾 的干扰用来检测
杂砸月杂阅灾寄主植物和传毒介体带毒与否遥
圆援 圆援 源 阅陨月粤方法
利用 杂砸月杂阅灾单克隆抗体 猿云员 检测 杂砸月杂阅灾和
砸月杂阅灾植物寄主时袁感染 杂砸月杂阅灾 的水稻及感染
砸月杂阅灾的水稻尧小麦和玉米都发生显色反应袁健康
水稻样品则无显色反应渊图 缘鄄葬冤曰检测室内饲毒获
得的 杂砸月杂阅灾 白背飞虱和 砸月杂阅灾 灰飞虱群体时袁
带毒昆虫介体发生显色反应 渊图 缘鄄遭冤遥 表明以
杂砸月杂阅灾单克隆抗体 猿云员 建立的 阅陨月粤 方法可以用
来检测 杂砸月杂阅灾和 砸月杂阅灾的植物寄主及其传毒介
苑缘猿猿 期 杜琳琳等院 南方水稻黑条矮缩病毒检测方法的比较
图 缘 阅陨月粤方法特异性检测寄主植物和昆虫介体
云蚤早援 缘 杂责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 澡燥泽贼 责造葬灶贼 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则 怎泽蚤灶早 阅陨月粤
摇 摇 葬院寄主植物院员院杂砸月杂阅灾水稻标样曰圆院砸月杂阅灾水稻标样曰猿院砸月杂阅灾小麦标样曰源院砸月杂阅灾玉米标样曰缘院水稻健株遥 遭院昆虫介体院员 耀 猿院
携带 杂砸月杂阅灾白背飞虱群体曰源 耀 缘院携带 砸月杂阅灾 灰飞虱群体曰 垣 院阳性对照曰 原 院阴性对照遥 葬院 匀燥泽贼 责造葬灶贼院 员院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡
杂砸月杂阅灾曰 圆院 则蚤糟藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 猿院 憎澡藻葬贼 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 源院 皂葬蚤扎藻 泽葬皂责造藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 憎蚤贼澡 砸月杂阅灾曰 缘院 澡藻葬造贼澡赠
则蚤糟藻援 遭院 蚤灶泽藻糟贼 增藻糟贼燥则泽院 员 原 猿院 宰月孕匀 早则燥怎责 糟葬则则赠蚤灶早 杂砸月杂阅灾曰 源 原缘院 杂月孕匀 早则燥怎责 糟葬则则赠蚤灶早 砸月杂阅灾曰 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 原 院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
体的带毒率袁但是不能将这 圆 种病毒区分开遥
猿 讨论
本研究中各检测方法的灵敏性评价发现袁砸藻葬造
贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸方法灵敏性相对较高袁检测染病植物
寄主总 砸晕粤的下限为 源援 猿 伊员园 原愿 滋早 辕 滋蕴袁是 砸栽鄄蕴粤酝孕
方法的 员园园 倍袁而 砸栽鄄蕴粤酝孕方法的灵敏性又是 砸栽鄄
孕悦砸方法的 员园园 倍遥 特异性比较发现袁检测 杂砸月杂阅灾
的 砸栽鄄蕴粤酝孕 方法咱员员暂和 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 方法咱员猿暂
能够排除 砸月杂阅灾的干扰而特异性检测 杂砸月杂阅灾袁后
者扩增产物的熔解温度都在 苑愿 益袁扩增产物的熔点
曲线为单一尖锐峰袁说明扩增产物特异袁无引物二聚
体及非特异性扩增产物遥 以 杂砸月杂阅灾 单克隆抗体
猿云员 建立的 阅陨月粤方法实现了大量样品的快速检测袁
但不能区分 杂砸月杂阅灾与 砸月杂阅灾袁因这 圆 个病毒的传
毒介体不同袁所以该单克隆抗体适用于白背飞虱和
灰飞虱大量样品带毒率的测定曰由于感染 杂砸月杂阅灾
和 砸月杂阅灾后植物寄主的症状相似袁因此单独使用
该抗体不适用于 杂砸月杂阅灾 和 砸月杂阅灾 寄主植物的检
测袁但 宰怎 等咱员缘暂报道 砸月杂阅灾 单克隆抗体 缘郧缘 可用
来特异性检测 砸月杂阅灾 寄主植物和灰飞虱的带毒情
况袁圆 个单克隆抗体配合使用可以实现 杂砸月杂阅灾 和
砸月杂阅灾植物寄主大量样品测定的目标遥
砸栽鄄孕悦砸 方法和 砸栽鄄蕴粤酝孕 方法不能定量袁而
砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 方法可以实现相对定量的测定遥
砸栽鄄孕悦砸扩增产物电泳后可以直接观察到目的产物
的大小袁而 砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸和 砸栽鄄蕴粤酝孕方法不能
直接观察扩增产物的大小袁但通过分析 砸藻葬造 贼蚤皂藻
砸栽鄄孕悦砸扩增产物的熔解曲线可确定是否有引物二
聚体及非特异性扩增产物袁砸栽鄄蕴粤酝孕扩增产物可以
通过酶切尧电泳检测来确定是否为目的条带遥 砸藻葬造
贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸尧砸栽鄄蕴粤酝孕 方法与 砸栽鄄孕悦砸 方法相比袁
省时简便袁扩增和检测在同一反应管内完成袁无需开
盖进行电泳检测袁减少了操作步骤袁避免了污染袁缩
短了时间遥 砸栽鄄蕴粤酝孕方法全程恒温反应渊远园 耀远圆益冤袁
无需热循环仪袁对技术和设备要求相对较低袁短时间
内可实现核酸的高效率扩增袁结果易于观察袁是一种
适合基层快速诊断的新手段遥
就检测时间而言袁生物学方法所需时间长袁首先
要筛选尧饲养传毒介体袁其次袁由于 杂砸月杂阅灾 不经卵
传播袁需对白背飞虱进行饲毒尧并待其度过循回期曰
植物寄主显症也需要特定环境条件袁还受季节限制袁
但该方法优点是直观袁除能检测病毒的存在外袁还能
了解病毒的侵染能力遥 在澡燥怎 等咱员暂报道了 杂砸月杂阅灾
的生物学检测方法袁除去筛选传毒介体的时间袁完成
一次检测大约需要 猿园 凿遥 而分子和免疫测定方法都
在室内完成袁不受季节等条件限制袁与生物学方法相
比极大地缩短了时间袁即使是巢式 砸栽鄄孕悦砸尧一步双
重 砸栽鄄孕悦砸及 阅陨月粤等步骤较多尧操作复杂的方法袁
也可在 员 凿内完成曰砸栽鄄蕴粤酝孕方法全程恒温袁不会因
温度变化而造成时间上的损失袁检测 砸晕粤样品时无
需先进行反转录来合成 糟阅晕粤 后再进行 孕悦砸 扩增袁
可以通过肉眼直接观察扩增产物的有无来判断检测
结果袁提取完 阅晕粤或 砸晕粤后袁远园 皂蚤灶 左右就可以完
成样品的检测遥
愿缘猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 在澡燥怎 郧 匀袁 宰藻灶 允 允袁 悦葬蚤 阅 允袁 藻贼 葬造援 杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄
泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽院 葬 灶藻憎 责则燥责燥泽藻凿 云蚤躁蚤增蚤则怎泽 泽责藻糟蚤藻泽 蚤灶 贼澡藻
枣葬皂蚤造赠 砸藻燥增蚤则蚤凿葬藻援 悦澡蚤灶藻泽藻 杂糟蚤藻灶糟藻 月怎造造藻贼蚤灶袁 圆园园愿袁 缘猿渊圆猿冤院
猿远苑苑 原 猿远愿缘
咱圆暂 在澡葬灶早 匀 酝袁 再葬灶早 允袁 悦澡藻灶 允 孕袁 藻贼 葬造援 粤 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣
凿蚤泽藻葬泽藻 燥灶 则蚤糟藻 蚤灶 悦澡蚤灶葬 蚤泽 糟葬怎泽藻凿 遭赠 葬 灶燥增藻造 枣蚤躁蚤增蚤则怎泽援 粤则糟澡蚤增藻泽
燥枣 灾蚤则燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员缘猿渊员园冤院 员愿怨猿 原 员愿怨愿
咱猿暂 宰葬灶早 匝袁 再葬灶早 允袁 在澡燥怎 郧 匀袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 糟燥皂责造藻贼藻 早藻灶燥皂藻
泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 贼憎燥 蚤泽燥造葬贼藻泽 燥枣 泽燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣
增蚤则怎泽袁 葬 灶藻憎 皂藻皂遭藻则 燥枣 贼澡藻 早藻灶怎泽 云蚤躁蚤增蚤则怎泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕澡赠贼燥责葬鄄
贼澡燥造燥早赠袁 圆园员园袁 员缘愿渊员员 辕 员圆冤院 苑猿猿 原 苑猿苑
咱源暂 郭荣袁周国辉袁张曙光援 水稻南方黑条矮缩病发生规律及防
控对策初探援 中国植保导刊袁 圆园员园袁 猿园渊愿冤院 员苑 原 圆园
咱缘暂 周国辉袁 张曙光袁 邹寿发袁 等援 水稻新病害南方水稻黑条矮
缩病发生特点及危害趋势分析援 植物保护袁 圆园员园袁 猿远渊圆冤院
员源源 原 员源远
咱远暂 周倩袁 朱俊子袁 梁晋刚袁 等援 南方水稻黑条矮缩病毒快速检
测援 基因组学与应用生物学袁 圆园员园袁 圆怨渊缘冤院 员园园怨 原 员园员圆
咱苑暂 宰葬灶早 在 悦袁 再怎 阅 阅袁 蕴蚤 载 再袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 葬责鄄
责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 阅燥贼鄄耘蕴陨杂粤 葬泽泽葬赠 枣燥则 凿蚤葬早灶燥泽蚤泽 燥枣 泽燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻
遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 凿蚤泽藻葬泽藻 蚤灶 贼澡藻 枣蚤藻造凿援 灾蚤则怎泽藻泽袁 圆园员圆袁 源
渊员冤院 员远苑 原 员愿猿
咱愿暂 刘欢袁 倪跃群袁 饶黎霞袁 等援 南方水稻黑条矮缩病毒和水稻
黑条矮缩病毒的单抗制备及其检测应用援 植物病理学报袁
圆园员猿袁 源猿渊员冤院 圆苑 原 猿源
咱怨暂 王强袁 周国辉袁 张曙光援 南方水稻黑条矮缩病毒一步双重
砸栽鄄孕悦砸检测技术及其应用援 植物病理学报袁 圆园员圆袁 源圆渊员冤院
愿源 原 愿苑
咱员园暂 季英华袁 高瑞珍袁 张野袁 等援 一种快速同步检测水稻黑条
矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的方法援 中国水稻科
学袁 圆园员员袁 圆缘渊员冤院 怨员 原 怨源
咱员员暂 杨迎青袁周国辉袁蒲玲玲袁等援 圆种水稻矮缩病毒一步检测
方法的建立援 华中农业大学学报袁 圆园员圆袁 猿员渊猿冤院 猿猿苑 原 猿源园
咱员圆暂 在澡燥怎 栽袁 阅怎 蕴 蕴袁 云葬灶 再 允袁 藻贼 葬造援 砸藻增藻则泽藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 造燥燥责鄄
皂藻凿蚤葬贼藻凿 蚤泽燥贼澡藻则皂葬造 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 砸晕粤 枣燥则 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬灶凿
则葬责蚤凿 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 泽燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽援
允燥怎则灶葬造 燥枣 灾蚤则燥造燥早蚤糟葬造 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园员圆袁 员愿园渊员 辕 圆冤院 怨员 原 怨缘
咱员猿暂 在澡燥怎 栽袁 阅怎 蕴 蕴袁 蕴葬灶 再袁 藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 杂再月砸 早则藻藻灶
陨鄄遭葬泽藻凿 燥灶藻鄄泽贼藻责 砸藻葬造 栽蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸 葬泽泽葬赠 枣燥则 择怎葬灶贼蚤枣赠蚤灶早
杂燥怎贼澡藻则灶 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽 蚤灶 则蚤糟藻援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕澡赠鄄
贼燥责葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园员源袁 员远圆渊员冤院 圆远 原 猿圆
咱员源暂 周彤袁 杜琳琳袁 范永坚袁 等援 水稻黑条矮缩病毒 砸栽鄄蕴粤酝孕
快速检测方法的建立援 中国农业科学袁 圆园员圆袁 源缘 渊苑冤院
员圆愿缘 原 员圆怨圆
咱员缘暂 宰怎 允 载袁 晕蚤 再 匝袁 蕴蚤怎 匀袁 藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 怎泽藻 燥枣 贼澡则藻藻
皂燥灶燥糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽 枣燥则 贼澡藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 则蚤糟藻 遭造葬糟噪鄄泽贼则藻葬噪藻凿
凿憎葬则枣 增蚤则怎泽 蚤灶 枣蚤藻造凿 责造葬灶贼泽 葬灶凿 责造葬灶贼澡燥责责藻则 增藻糟贼燥则泽援 灾蚤则燥造燥早赠
允燥怎则灶葬造袁 圆园员猿袁 员园院 员员源裕
渊责任编辑院李美娟冤
怨缘猿猿 期 杜琳琳等院 南方水稻黑条矮缩病毒检测方法的比较