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Species identification of indigenous Bemisia tabaci in agricultural areas in China

中国部分农区作物上本地烟粉虱隐种的鉴定



全 文 :植物保护学报 Journal of Plant Protection, 2016, 43(1): 84 - 90 DOI: 10􀆰 13802 / j. cnki. zwbhxb. 2016􀆰 01􀆰 012
基金项目:国家科技支撑计划(2012BAD19B06),山东省泰山学者建设工程专项,青岛农业大学研究生创新计划(QYC201508)
∗通讯作者(Author for correspondence), E⁃mail: chinachudong@ qau. edu. cn
收稿日期: 2015 - 08 - 10
中国部分农区作物上本地烟粉虱隐种的鉴定
李洪冉1   潘慧鹏2   陶云荔1   姜德锋1   张友军2   褚  栋1∗
(1.青岛农业大学农学与植物保护学院, 山东省植物病虫害综合防控重点实验室, 青岛 266109;
2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所, 北京 100081)
摘要: 烟粉虱 Bemisia tabaci是一个至少包括 36 个不同隐种的物种复合体,为明确中国本地烟粉虱
隐种的分布,采用线粒体COI基因(mt COI)分子标记法对 2011—2012 年在中国 27 个省(市)61 个
烟粉虱种群中获得的 45 个非 B / Q隐种烟粉虱个体进行了隐种鉴定和分析,并利用邻接法基于 mt
COI序列构建了本地烟粉虱隐种的系统发育树。 结果显示:45 个非 B / Q 隐种烟粉虱对应的 45 条
线粒体 COI序列中共有 10 个单倍型,所有单倍型分别属于烟粉虱 Asia II 2、Asia II 6、Asia II 7、Asia
I与 China1 隐种,均为我国本地隐种。 其中,在安徽省发现烟粉虱 Asia II 2 和 China1 隐种,在福建
省发现 Asia II 6 和 China1 隐种,在海南省发现 Asia II 和 Asia I隐种,在广东省发现 Asia II 7 隐种,
在江西省发现 China1 隐种。 表明中国部分农区作物上仍然存在少量的本地烟粉虱。
关键词: 烟粉虱; 本地种; 农区; mt COI; 系统发育
Species identification of indigenous Bemisia tabaci in agricultural areas in China
Li Hongran1   Pan Huipeng2   Tao Yunli1   Jiang Defeng1   Zhang Youjun2   Chu Dong1∗
(1. Key Laboratory of Integrated Crop Pest Management of Shandong Province, College of Agronomy and
Plant Protection, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, Shandong Province, China;
2. Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China)
Abstract: The name of tobacco whitefly Bemisia tabaci ( Gennadius ) reprents a species complex
containing at least 36 cryptic species. To determine the species of 45 non⁃B / Q B. tabaci individuals
obtained from 61 collections in 27 provinces from 2011 to 2012, these individuals were analyzed based on
the mitochondrial cytochrome oxidase I (mt COI) gene. In addition, a phylogenetic tree of indigenous B.
tabaci species was constructed by using neighbor⁃joining method based on mt COI sequences. The results
showed ten haplotypes in these 45 non⁃B / Q B. tabaci individuals. Phylogenetic analysis revealed five
indigenous species, including B. tabaci Asia II 2, Asia II 6, Asia II 7, Asia I, and China1 species. In
this analysis, B. tabaci Asia II 2 were distributed in Anhui and Hainan provinces; Asia II 6, Asia II 7,
and Asia I were respectively distributed in Fujian, Guangdong, and Hainan provinces; China1 was
distributed in Fujian, Jiangxi, and Anhui provinces. The research demonstrated that the indigenous B.
tabaci species remained with low prevalence in agricultural areas of China.
Key words: Bemisia tabaci; indigenous species; agricultural area; mt COI; phylogenetics
    烟粉虱 Bemisia tabaci (Gennadius)是一种刺吸
式昆虫,广泛分布于 90 多个国家和地区。 该虫主要
通过刺吸植物汁液造成植物生理异常、分泌蜜露诱
发煤污病、传播植物病毒等方式为害蔬菜、花卉、棉
花、烟草等植物,给农业生产造成巨大的经济损失
(Jones,2003;de Barro et al. ,2011;Liu et al. ,2015)。
烟粉虱不仅分布广泛,而且遗传结构极其复杂(Boy⁃
kin et al. ,2007;de Barro,2012)。 近年来,一些学者
认为烟粉虱是一个至少由 36 个隐种组成的物种复
合体(Hu et al. ,2011;刘银泉和刘树生,2012),不同
隐种在寄主适应性和传播植物病毒能力等生物学特
性方面存在着显著差异(Boykin et al. ,2013;Lee et
al. ,2013;Boykin,2014)。
根据烟粉虱在全球不同地理区域的分布情况,
将其定义为各地理区域内的本地隐种 ( Boykin et
al. ,2007;Dinsdale et al. ,2010)。 烟粉虱在我国最
早记载于 20 世纪 40 年代,但一直都是非重要农业
害虫,直到 20 世纪 90 年代中后期 B 隐种烟粉虱
(即 B生物型)在部分地区大暴发,造成严重的经济
损失,此后逐渐成为我国重要的农业害虫(罗晨等,
2002)。 2003 年在云南昆明发现 Q 隐种烟粉虱(即
Q生物型)传入我国(褚栋等,2005),随后该虫在许
多省为害严重 (沈媛等, 2010; 2011;任顺祥等,
2011)。 随着 Q 隐种烟粉虱的传入与扩散,B 隐种
烟粉虱的地理分布及数量呈现降低趋势(Teng et
al. ,2010)。 目前,我国境内还存在着一些非 B / Q
隐种烟粉虱(Ahmed et al. ,2009;刘国霞等,2009;
Pan et al. ,2011)。 如 Qiu et al. (2003)报道,湖南、
湖北、广东、海南等地存在本地烟粉虱;臧连生等
(2005)在浙江省发现非 B / Q 隐种烟粉虱。 由于我
国农区本地烟粉虱的分布范围尚不清楚,且烟粉虱
不同隐种的种群更替及其生物学特性存在较大差
异,因此本地种的调查研究对于烟粉虱的防控具有
重要意义与指导价值。
在本课题组前期研究中,利用线粒体 COI(mt
COI)基因对 2011—2012 年在中国 27 个省(市)采
集的 61 个烟粉虱种群进行隐种鉴定,在部分农区作
物上获得了 45 个非 B / Q隐种烟粉虱的个体。 基于
此,本研究进一步对这 45 个非 B / Q 隐种烟粉虱个
体进行分子水平的鉴定,以期揭示这些烟粉虱的种
类及其分布,为农区烟粉虱的防控提供依据。
1 材料与方法
1􀆰 1 材料
供试昆虫:于 2011—2012 年在我国部分农区不
同作物上采集了1 119头烟粉虱成虫(图 1),将采集
样品直接置于 95%乙醇中带回实验室进行隐种鉴
定,其中获得的非 B / Q隐种烟粉虱的采集地点及时
间、寄主植物、个体数量和 GenBank登录号如表 1 所
示。 样品于 - 20℃低温保存备用。
图 1 本研究中于 2011—2012 年在全国采集烟粉虱的省份分布情况
Fig. 1 Distribution of Bemisia tabaci collected from different provinces of China in 2011 - 2012
红色: 非 B / Q隐种采集省份; 蓝色: B / Q隐种采集省份; 白色: 未进行采集省份。 XJ: 新疆; XZ: 西藏; QH: 青海;
GS: 甘肃; NX: 宁夏; SC: 四川; YN: 云南; NMG: 内蒙古; SX: 山西; ShX: 陕西; CQ: 重庆; GZ: 贵州; GX: 广西;
HuN: 湖南; HuB: 湖北; HeN: 河南; HB: 河北; LN: 辽宁; JL: 吉林; HLJ: 黑龙江; BJ: 北京; TJ: 天津; SD: 山东; JS:
江苏; SH: 上海; AH: 安徽; ZJ: 浙江; JX: 江西; FJ: 福建; GD: 广东; HN: 海南; TW: 台湾。 Red: Non⁃B / Q collected
province; Blue: B / Q collected province; white: no samples. XJ: Xinjiang; XZ: Xizang; QH: Qinghai; GS: Gansu; NX: Ningx⁃
ia; SC: Sichuan; YN: Yunnan; NMG: Inner Mongolia; SX: Shanxi; ShX: Shaanxi; CQ: Chongqing; GZ: Guizhou; GX: Guan⁃
gxi; HuN: Hunan; HuB: Hubei; HeN: Henan; HB: Hebei; LN: Liaoning; JL: Jilin; HLJ: Heilongjiang; BJ: Beijing; TJ: Tian⁃
jin; SD: Shandong; JS: Jiangsu; SH: Shanghai; AH: Anhui; ZJ: Zhejiang; JX: Jiangxi; FJ: Fujian; GD: Guangdong; HN:
Hainan; TW: Taiwan.  
581 期 李洪冉等: 中国部分农区作物上本地烟粉虱隐种的鉴定
    试剂:乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraace⁃
tic acid,EDTA),北京 Biosharp 公司;三羟甲基氨基
甲烷(Tris),北京索莱宝科技有限公司;蛋白酶 K,
天根生物科技(北京)有限公司;Taq 酶、dNTPs,宝
生物工程(大连)有限公司。 PCR 引物由生工生物
工程(上海)股份有限公司合成。
仪器:TP600 型 PCR 仪,宝生物工程(大连)有
限公司;JY300 电泳仪、JY02S 型紫外分析仪,北京
君意东方电泳设备有限公司。
1􀆰 2 方法
1􀆰 2􀆰 1 单头烟粉虱 DNA的提取
用解剖针挑取单头烟粉虱成虫,超纯水充分洗
涤后置于 0􀆰 2 mL离心管中,加入 10 μL提取裂解液
(500 mmol / L Tris、1􀆰 0% SDS、1􀆰 0 mmol / L EDTA、20
mmol / L NaCl、200 mg / mL 蛋白酶 K 溶液),用封口
枪头充分研磨成匀浆,再吸取 20 μL 裂解液冲洗封
口枪头 1 次,最后定容到 50 μL。 用微型涡旋混合
仪将匀浆充分混匀,然后将提取液放于 PCR 仪中
65℃ 15 min,95℃ 10 min,即得到烟粉虱 DNA,并于
- 20℃保存备用。
1􀆰 2􀆰 2 PCR扩增及电泳检测
采用通用引物 C1⁃J⁃2195(5′⁃TTGATTTTTTGGT⁃
CATCCAGAAGT⁃3′) 和 L2⁃N⁃3014 ( 5′⁃TCCAATGC⁃
ACTAATCTGCCATATTA⁃3′)对烟粉虱的 mt COI 基
因进行扩增,扩增目的产物大小为 840 bp 左右。 25
μL PCR 反应体系:10 mmol / L 缓冲液 2􀆰 5 μL、10
mmol / L dNTPs 0􀆰 5 μL、10 μmol / L 上下游引物各
0􀆰 5 μL、DNA模板 3 μL、rTaq 酶 0􀆰 25 μL,用 ddH2O
补足至 25 μL。 PCR 反应程序:95℃预变性 5 min;
95℃变性 1 min,50℃退火 1 min,72℃延伸 1 min,进
行 35 次循环;最后 72℃延伸 10 min。 取 5 μL 扩增
产物用 1%琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙锭染色后
置于凝胶成像系统中观察结果并拍照记录,剩余
PCR反应产物保存于 4℃备用。
1􀆰 2􀆰 3 序列测定及系统进化树构建
将 PCR产物纯化后直接进行测序,测序工作由
生工生物工程(上海)股份有限公司完成,为确保测
序结果的准确性,均进行双向测序。 使用软件
MEGA 5􀆰 05 中的 Clustal W 多序列对位排列程序对
测序获得的非 B / Q隐种烟粉虱序列进行对位排列,
并截取共同的 433 bp 大小的片段。 根据序列比对
分析结果,当同一地理种群存在序列碱基完全相同
时,则选取其中 1 条作为 1 个单倍型。 参考许丽丽
等(2014)方法,以温室白粉虱 Trialeurodes vaporario⁃
rum 线 粒 体 COI 基 因 ( GenBank 登 陆 号 为
AF418672)为外群,用 MEGA 5􀆰 05 软件将中国部分
农区非 B / Q隐种烟粉虱序列和已知 11 个烟粉虱隐
种保守序列(Asia I、Asia II 1、Asia II 2、Asia II 3、
Asia II 4、Asia II 5、Asia II 6、Asia II 7、Asia II 8、Chi⁃
na1 与 China2)进行分析并辅以人工校对。 11 个烟
粉虱隐种序列参考 de Barro (2012)的报道,根据
Kimura 2⁃parameter 模型计算出非 B / Q 隐种烟粉虱
单倍型与已知隐种进化分歧矩阵;以最大似然法
(maximum likelihood,ML)及邻接法( neighbor⁃join⁃
ing,NJ)构建系统树,各分支置信度均进行 1 000 次
重复检验。
2 结果与分析
2􀆰 1 不同地理种群非 B / Q隐种烟粉虱的单倍型
从 45 个非 B / Q隐种烟粉虱对应的 45 条非 B /
Q烟粉虱序列中,共获得并鉴定到 10 条单倍型序
列,编号为 Hap1 ~ Hap10,其对应 GenBank 登陆号
为 KT972692 ~ KT972701(表 1)。
2􀆰 2 非 B / Q隐种单倍型与本地种序列的遗传距离
用 Kimura⁃2⁃parameter距离模型计算本研究不
同烟粉虱地理种群及外群温室白粉虱的进化分歧,
得到进化分歧矩阵(表 2)。 发现外群温室白粉虱与
不同地理种群烟粉虱的遗传距离均在 25%以上,首
先可以将其与烟粉虱种群区分。 在烟粉虱种群内,
Hap1 ~ Hap5 和 Asia II 2 隐种的遗传距离最小,在
0 ~ 0􀆰 5%之间。 Hap9、Hap10 与 China1 隐种的遗传
距离分别为 0 和 1􀆰 0% ;Hap6 与 Asia II 7 隐种、
Hap7 与 Asia II 6 隐种、Hap8 与 Asia I 隐种的遗传
距离分别为 1􀆰 5% 、2􀆰 9%和 0􀆰 5% ,均小于已知隐种
间的遗传距离(2􀆰 9% ~17􀆰 7% )。
2􀆰 3 基于 mt COI序列构建系统发育树
与已知烟粉虱隐种序列使用邻接法构建系统树
(图 2),本研究获得的 10 个单倍型与 Asia II 2、Asia
II 6、Asia II 7、Asia I、China1 这 5 个非 B / Q 隐种烟
粉虱聚为一支。 其中,Hap8 与 Asia I 隐种、Hap9 和
Hap10 与 China1隐种、Hap6与Asia II 7隐种以100%
置信度聚为一支;Hap2 ~ Hap5 首先与 Asia II 2 隐种
以 68%置信度聚为一分支,然后 Hap1 与此分支以
100%置信度聚在一起;Hap7 与 Asia II 7 隐种以
99%的置信度聚为一支。 使用最大似然法构建的系
统树与邻接法所得结果相同。
3 讨论
烟粉虱大多数隐种往往分布于特定的地理区域
68 植  物  保  护  学  报 43 卷
      表 1 中国部分农区不同地理种群的非 B / Q隐种烟粉虱的单倍型(2011—2012)
Table 1 Samples of non⁃B / Q Bemisia tabaci collected from different agricultural regions in China (2011 - 2012)
采集地点
Sampling
location
  寄主
Host plant
单倍型
Haplotype
GenBank登录号
GenBank
accession No.
试验个体
No. of
individuals tested
采集时间
Sampling time
安徽 Anhui 棉花 Cotton Hap1、Hap4、Hap5 KT972692、KT972695、
KT972696
15 2011 - 08
茄子 Eggplant Hap2、Hap3、
Hap5、Hap10
KT972693、KT972694、
KT972696、KT972701
14 2011 - 08
海南 Hainan 茄子 Eggplant Hap5、Hap8 KT972696、KT972699 3 2011 - 08
福建 Fujian 茄子 Eggplant Hap7、Hap9 KT972698、KT972700 5 2011 - 08
毛豆 Green soybean Hap9 KT972700 1 2011 - 08
广东 Guangdong 辣椒 Pepper Hap6 KT972697 2 2012 - 08
杂草 Weeds Hap6 KT972697 3 2012 - 08
江西 Jiangxi 茄子 Eggplant Hap9 KT972700 1 2012 - 08
番茄 Tomato Hap9 KT972700 1 2012 - 08
图 2 利用邻接法基于 mt COI基因构建的烟粉虱隐种系统发育树
Fig. 2 Molecular phylogenetic tree of Bemisia tabaci using neighbor⁃joining method based on mt COI sequences
 
内,而烟粉虱 B 隐种和 Q 隐种依靠其抗药性高、寄
主适应性强等特性将一些本地隐种逐渐取代,成为
田间优势种群(Liu et al. ,2007)。 全国范围内多次
调查发现,除了 B 和 Q 隐种这 2 个全球入侵种之
外,我国当前烟粉虱本地隐种数量已达 13 个(Qiu et
al. ,2007;Hu et al. ,2011;刘银泉和刘树生,2012),
且不同省份内隐种种类不尽相同(臧连生等,2006;
Rao et al. ,2011;Guo et al. ,2012)。 本研究结果表
明,2011—2012 年调查中发现的少量非 B / Q隐种烟
粉虱属于 Asia II 2、Asia II 6、Asia II 7、Asia I与 Chi⁃
na1 这 5 个隐种,均为我国本地烟粉虱;其中,在安
徽省和海南省首次发现了 Asia II 2 隐种,在广东省
781 期 李洪冉等: 中国部分农区作物上本地烟粉虱隐种的鉴定
88 植  物  保  护  学  报 43 卷
首次发现了 Asia II 7 隐种,并在福建省首次了发现
China1 隐种。 表明本地烟粉虱在中国部分农区作
物上仍然以较低比例存在。
通过与前人对我国烟粉虱隐种的研究结果比较
可知,本研究在安徽、海南及广东省部分农区鉴定出
的烟粉虱 Asia II 2、Asia II 6 和 Asia II 7 隐种在许丽
丽等(2014)调查研究中 (2010—2011 年)未检测
到,China1 隐种在 Hu et al. ( 2011 )、许丽丽等
(2014)以及本次研究中均有检测到,且其在国内的
分布情况存在一定差异。 许丽丽等(2014)的调查
结果中检测到烟粉虱 Asia II 1 和 Asia II 3 隐种,本
研究调查中则未发现。 另外,本研究发现我国烟粉
虱本地隐种主要分布在中国南部及东南沿海区域,
这与 Hu et al. (2011)的结论一致;但在本调查中发
现烟粉虱本地隐种的分布省份与其有所不同,可能
与采样地点及寄主植物有关。
当前,我国部分农区本地烟粉虱没有被完全取
代的原因尚不清楚。 前人研究发现寄主植物、气候
因子、越冬场所等生态因子以及杀虫剂使用、蔬菜花
卉调运等人类活动均能够影响烟粉虱隐种间的竞争
取代(Reitz & Trumble,2002;褚栋等,2012;Sun et
al. ,2013)。 本研究推测本地烟粉虱仍然存在的原
因可能是由于其对我国农区种植的某些寄主植物具
有偏好性,而烟粉虱入侵种可能对这些植物的适应
性较差。 另外,我国南方农区地形复杂以及气候条
件温和等也可能影响烟粉虱本地种与入侵种的竞争
取代。 随着国际贸易和经济全球化的进一步发展,
其它外来烟粉虱隐种也有可能借助花卉苗木的运输
等途径传入我国,今后仍需继续加强我国农区烟粉
虱隐种尤其是非 B / Q隐种烟粉虱的监测,这对于发
现潜在的烟粉虱入侵种具有重要意义。 如罗晨等
(2002)首次报道在我国普遍暴发成灾的烟粉虱是
入侵的外来烟粉虱 B隐种;褚栋等(2005)在云南首
次监测到 Q隐种烟粉虱传入我国,并随后逐渐取代
B隐种成为田间优势种群(Chu et al. ,2010)。 由于
烟粉虱不同隐种在寄主范围、传毒能力及抗药性等
方面存在着显著差异,例如 Q 隐种对新烟碱类杀虫
剂往往具有很强的抗药性(Nauen et al. ,2002),所
以烟粉虱不同隐种的防治策略不同。 因此,烟粉虱
隐种的监测对于烟粉虱的综合控制具有重要的指导
价值。
参 考 文 献 (References)
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(责任编辑:李美娟)
09 植  物  保  护  学  报 43 卷