全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（１）： ３２ － ３９ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０１􀆰 ００５
基金项目：国家自然科学基金（３１４７１７７３），北京市叶类蔬菜创新团队建设（ＢＬＶＴ⁃１３），国家科技支撑计划（２０１２ＢＡＤ１９Ｂ００）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｌｕｏｃｈｅｎ１０１０＠ １２６． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１５ － ０８ － １２
烟粉虱 ＭＥＤ隐种气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 的克隆、
原核表达及与植物挥发物的结合特性
王　 然１ 　 张晓曼１ 　 李峰奇１ 　 吴　 帆２ 　 李红亮２ 　 罗　 晨１∗
（１．北京市农林科学院植物保护环境保护研究所， 北京 １０００９７； ２．中国计量学院生命科学学院， 浙江 杭州 ３１００１８）
摘要： 烟粉虱为重要的入侵性经济作物害虫，对入侵地寄主植物存在选择性和偏好性。 为明确烟
粉虱气味结合蛋白（ｏｄｏｒａｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＢＰｓ） 的相关特性，通过克隆其 ＯＢＰ８ 基因 ＢｔａｂＯＢＰ８，
进行同源基因进化关系分析，构建原核表达载体诱导表达重组蛋白，并利用基于荧光探针 Ｎ⁃苯基⁃
１⁃萘胺（Ｎ⁃ｐｈｅｎｙｌ⁃１⁃ｎａｐｈｔｈｙｌａｍｉｎｅ，１⁃ＮＰＮ）的荧光竞争结合试验测试了 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与不同寄主植物
挥发物的结合功能。 结果表明，ＢｔａｂＯＢＰ８ 基因的开放阅读框全长 ４８０ ｂｐ，编码 １５９ 个氨基酸，与半
翅目其它害虫的 ＯＢＰ８ 基因进化关系较远。 ＢｔａｂＯＢＰ８ 蛋白重组后，４ 种化合物即 β⁃紫罗兰酮、月桂
烯、柠檬烯和 Ｐ⁃伞花烃将 １⁃ＮＰＮ 的相对荧光强度降低到 ５０％以下，其中 β⁃紫罗兰酮和月桂烯与
ＢｔａｂＯＢＰ８ 的结合能力最强，解离常数分别为 １３􀆰 ３２ μｍｏｌ ／ Ｌ 和 ２１􀆰 ５３ μｍｏｌ ／ Ｌ。 表明 β⁃紫罗兰酮和
月桂烯与 ＢｔａｂＯＢＰ８ 具有良好的亲和力，推测 ＢｔａｂＯＢＰ８ 对 β⁃紫罗兰酮和月桂烯的识别可能参与了
烟粉虱对绿色开花植物的吸引和选择作用。
关键词： 烟粉虱； 气味结合蛋白 ８； 基因克隆； 原核表达； 植物挥发物竞争结合
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｄｏｒａｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＯＢＰ８
ｉｎ ＭＥＤ ｃｒｙｐｔｉｃ ｓｐｅｃｉｅｓ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｉｔｈ ｐｌａｎｔ ｖｏｌａｔｉｌｅｓ
Ｗａｎｇ Ｒａｎ１ 　 Ｚｈａｎｇ Ｘｉａｏｍａｎ１ 　 Ｌｉ Ｆｅｎｇｑｉ１ 　 Ｗｕ Ｆａｎ２ 　 Ｌｉ Ｈｏｎｇｌｉａｎｇ２ 　 Ｌｕｏ Ｃｈｅｎ１∗
（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈｉｎａ Ｊｉｌｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１８， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ （Ｇｅｎｎａｄｉｕｓ） ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐｅｓｔｓ ｏｎ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｃｒｏｐｓ
ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｏｂｖｉｏｕｓ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ． Ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｏｄｏｒａｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
（ＯＢＰｓ）， ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ， ｏｎｅ ｎｏｖｅｌ ＯＢＰ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｂ． ｔａｂａｃｉ， ｎａｍｅｄ ＢｔａｂＯＢＰ８， ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ
ａｎａｌｙｚｅｄ． Ａｆｔｅｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ， ａ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ． Ｔｈｅ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｓｓａｙ ｕｓｉｎｇ Ｎ⁃
ｐｈｅｎｙｌ⁃１⁃ｎａｐｈｔｈｙｌａｍｉｎｅ （１⁃ＮＰＮ） ａｓ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｂｅ ｗａｓ ａｌｓｏ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ
ＢｔａｂＯＢＰ８ ｂｉｎｄｉｎｇ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖｏｌａｔｉｌｅｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｕｌｌ⁃ｌｅｎｇｔｈ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ
（ＯＲＦ） ｏｆ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｗａｓ ４８０ ｂｐ， ｅｎｃｏｄｉｎｇ １５９ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． ＢｔａｂＯＢＰ８ ｗａｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ
ｏｔｈｅｒ ｋｎｏｗｎ ＯＢＰ８ ｉｎ ｈｅｍｉｐｔｅｒａｎ ｐｅｓｔｓ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｆｏｕｒ ｐｌａｎｔ ｖｏｌａｔｉｌｅｓ
ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｔｏ ｂｉｎｄ ｗｉｔｈ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｗｉｔｈ ｈａｌｆ ａｆｆｉｎｉｔｙ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ β⁃ｉｏｎｏｎｅ， ｍｙｒｃｅｎｅ， （ ＋ ／ － ）⁃ｌｉｍｏｎｅｎｅ ａｎｄ
４⁃ｃｙｍｅｎｅ， ａｎｄ β⁃ｉｏｎｏｎｅ ａｎｄ ｍｙｒｃｅｎｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｗｉｔｈ ＢｔａｂＯＢＰ８， ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ １３􀆰 ３２ μｍｏｌ ／ Ｌ ａｎｄ ２１􀆰 ５３ μｍｏｌ ／ Ｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｉｔ ｗａｓ ａｓｓｕｍｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ
ＢｔａｂＯＢＰ８ ｔｏ β⁃ｉｏｎｏｎｅ ａｎｄ ｍｙｒｃｅｎｅ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｏｓｔ⁃ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｂ． ｔａｂａｃｉ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ； ｏｄｏｒａｎｔ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ８ （ＯＢＰ８）； ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ； ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｖｏｌａｔｉｌｅｓ
　 　 昆虫触角及其身体上多种复杂的化学感受器官
在通讯过程中起着关键的作用，这些重要的化学感
受器官能够使得昆虫成功地完成觅食、交配、产卵、
识别与趋避等一系列重要行为，在环境中正常存活
（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ，２００３；Ｓｗａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ，２００９）。 昆虫
嗅觉感受器中的相关蛋白主要包括气味结合蛋白
（ｏｄｏｒａｎｔ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ， ＯＢＰｓ）、化学感受蛋白
（ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＳＰｓ）、嗅觉受体 （ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ
ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＯＲｓ）、气味降解酶（ ｏｄｏｒａｎｔ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎ⁃
ｚｙｍｅｓ，ＯＤＥｓ）和嗅觉神经元膜蛋白（ ｓｅｎｓｏｒｙ ｎｅｕｒｏｎ
ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＳＮＭＰｓ），其中对 ＯＢＰ 的研究最
为深入。 上世纪 ８０ 年代，ＯＢＰ 在多音天蚕蛾 Ａｎ⁃
ｔｈｅｒａｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓ的雄蛾触角中被首次发现（Ｖｏｇｔ
＆ Ｒｉｄｄｉｆｏｒｄ，１９８１），之后逐渐开始了对 ＯＢＰ 的研
究。 ＯＢＰ在昆虫的嗅觉器官及味觉器官中大量表
达（Ｖｏｇｔ ｅｔ ａｌ． ，１９９１；ＭｃＫｅｎｎａ ｅｔ ａｌ． ，１９９４），其主要
作用是结合和运输气味较小的气味分子 （ Ｓｔｅｉｎ⁃
ｂｒｅｃｈｔ，１９９８）。 ＯＢＰ作为昆虫专一识别外界气味的
第一步化学反应，对昆虫与外界进行化学信息交流
具有重要的意义（Ｋｏ ＆ Ｐａｒｋ，２００８）。 近年来国内对
ＯＢＰ的研究也日益增加，如甜菜夜蛾 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘ⁃
ｉｇｕａ的 ＧＯＢＰ２ 基因（王桂荣等，２００１）、烟实夜蛾
Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｓｓｕｌｔａ触角普通气味结合蛋白（巩中军
等，２００５）、苜蓿盲蝽 Ａｄｅｌｐｈｏｃｏｒｉｓ ｌｉｎｅｏｌａｔｕｓ 气味结合
蛋白（谷少华等，２０１０）、橘小实蝇 Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｄｏｒｓａｌｉｓ
气味结合蛋白 ＢｄｏｒＯＢＰ２（陈玲等，２０１３）及中华蜜
蜂 Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ 普通气味结合蛋白（李红亮等，２００８；
２０１３）等。
烟粉虱 Ｂｅｍｉｓａ ｔａｂａｃｉ （Ｇｅｎｎａｄｉｕｓ）属半翅目粉
虱科小粉虱属，至少有 ２８ 个隐种（Ｇｎａｎｋｉｎｅ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３），其寄主广泛，在我国多个地区均有分布。 烟
粉虱主要通过取食植物汁液、分泌蜜露和传播病毒
危害植物生长，致植物停止发育，其中烟粉虱隐种
Ｍｉｄｄｌｅ Ｅａｓｔ⁃Ａｓｉａ Ｍｉｎｏｒ １ （ＭＥＡＭ １）和Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ
（ＭＥＤ）是入侵性最强和危害农作物最严重的 ２ 种
烟粉虱隐种。 近年来，烟粉虱隐种 ＭＥＤ在部分地区
逐步成为优势种群 （ Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１０；Ｈｕ ｅｔ ａｌ． ，
２０１１；Ｒａｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１１）。 烟粉虱在不同寄主植物上
的相对适合度不同，导致其对不同寄主植物有不同
的偏好性（Ｃｏｓｔａ ｅｔ ａｌ． ，１９９１；张永军等，２００３；郭建
英等，２０１１）。 这种偏好主要是通过寄主植物的挥
发物及物理识别，如已有研究表明 １，８⁃桉树脑对烟
粉虱有引诱作用，丁子香酚、苎烯、里那醇和月桂烯
分别在 １０ － ４ ～ １０ － ６、１０ － １ ～ １０ － ４、 １０ － １ ～ １０ － ４ 和
１０ － １ ～ １０ － ４倍时有引诱作用（曹凤勤等，２００８），在
烟粉虱对这些植物挥发物的识别过程中，ＯＢＰ 起到
了重要的作用。 目前，对烟粉虱 ＯＢＰ的相关研究较
少，仅见对烟粉虱 ＯＢＰ 基因的预测（张岚，２０１１）。
而研究烟粉虱 ＯＢＰ与寄主植物挥发物的结合特性，
有助于更清楚地了解烟粉虱寄主选择机制。 本试验
通过对烟粉虱的转录组测序结果进行分析，获得一
条 ＯＢＰｓ家族基因，序列比对结果表明其与多种昆
虫 ＯＢＰ８ 基因序列具有较高相似性，命名为 ＯＢＰ８，
对其进行了基因克隆和原核表达，并利用配基结合
试验对其结合功能进行了验证，以期为烟粉虱嗅觉
感受功能的机理研究及制定合理的绿色防控措施奠
定理论基础。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试昆虫：烟粉虱隐种 ＭＥＤ采自中国农业科学
院蔬菜花卉研究所，在北京市农林科学院温室建立
种群，寄主植物为棉花 Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ． ，品种
石远 ３２１，繁衍 ３ 代后用于试验。 烟粉虱在 Ｌ ∶ Ｄ ＝
１６ ｈ ∶ ８ ｈ 光周期、温度 ２５ ～ ２８℃、相对湿度 ６０％ ～
８０％的条件下继代饲养。
试剂：总 ＲＮＡ提取所用 ＴＲＩｚｏｌ购于美国英杰生
命（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）技术有限公司；反转录试剂盒 Ｐｒｉｍｅｒ
ＳｃｒｉｐｔＴＭ １ ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、限制性核
酸内切酶、ｐＭＤ１８⁃Ｔ 载体和 Ｔ４ ＤＮＡ 连接酶，宝生物
工程 （大连） 有限公司；大肠杆菌 ＤＨ５α、 ＢＬ２１
（ＤＥ３）感受态细胞和 ｐＥＴ⁃３０ａ（ ＋ ）表达载体，本实
验室自备；Ｘ⁃Ｇａｌ、卡那霉素、ＩＰＴＧ、甲醇和层析柱，生
工生物工程（上海）股份有限公司；凝胶回收和质粒
３３１ 期 王　 然等： 烟粉虱 ＭＥＤ隐种气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 的克隆、原核表达及与植物挥发物的结合特性
提取试剂盒，美国 Ａｘｙｇｅｎ 公司；Ｎ⁃苯基⁃１⁃萘胺（Ｎ⁃
ｐｈｅｎｙｌ⁃１⁃ｎａｐｈｔｈｙｌａｍｉｎｅ，１⁃ＮＰＮ），梯希爱（上海）化成
工业发展有限公司。 β⁃紫罗兰酮（β⁃ｉｏｎｏｎｅ）、月桂烯
（ｍｙｒｃｅｎｅ）、Ｐ⁃伞花烃（４⁃ｃｙｍｅｎｅ）、柠檬烯（（ ＋ ／ － ）⁃
ｌｉｍｏｎｅｎｅ）、壬醛 （ ｎｏｎａｎａｌ）、顺⁃３⁃己烯⁃１⁃醇 （ ｃｉｓ⁃３⁃
ｈｅｘｅｎ⁃１⁃ｏｌ）、反⁃２⁃己烯醛（ ｔｒａｎｓ⁃２⁃ｈｅｘｅｎａｌ）、桉树脑
（１，８⁃ｃｉｎｅｄｅ），北京百灵威科技有限公司。 培养基：
ＬＢ（Ｌｕｒｉａ⁃Ｂｅｒｔａｎｉ）培养基 １０ ｍＬ：Ｋａｎ ５０ μｇ ／ ｍＬ、琼
脂粉 １０ ｇ ／ Ｌ、胰蛋白胨 １０ ｇ ／ Ｌ、酵母提取物 ５ ｇ ／ Ｌ、氯
化钠 １０ ｇ ／ Ｌ。
仪器：ＳＭＺ １５００ 显微镜，尼康仪器（上海）有限
公司；Ｐｏｗｅｒｃｙｃｌｅｒ ＰＣＲ仪，德国耶拿分析仪器（Ａｎａ⁃
ｌｙｔｉｋ Ｊｅｎａ）股份公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 烟粉虱头部解剖收集
将烟粉虱 ＭＥＤ隐种雌成虫收集在 １􀆰 ５ ｍＬ离心
管中，置于 ４℃下 １５ ｍｉｎ，取 １０ 头烟粉虱放到载玻片
上的 ＲＮＡｓｔｏｒｅ缓冲液中，在显微镜下解剖头部，将头
部转移到装有 ２００ μＬ 的 ＴＲＩｚｏｌ 离心管中。 如此重
复，直到样品数量积累到 ８００头左右用于 ＲＮＡ提取。
１􀆰 ２􀆰 ２ 烟粉虱头部总 ＲＮＡ的提取及 ｃＤＮＡ合成
ＲＮＡ的提取采用 ＴＲＩｚｏｌ 法（张亚楠，２０１４），取
已解剖好的 ８００ 头烟粉虱头部放入 ２００ μＬ 的 ＴＲ⁃
Ｉｚｏｌ中，用研磨器充分研磨后在 ２００ μＬ 的 ＴＲＩｚｏｌ 离
心管中加入 ８００ μＬ的 ＴＲＩｚｏｌ， － ８０℃保存备用。
ｃＤＮＡ的获得采用 Ｐｒｉｍｅｒ ＳｃｒｉｐｔＴＭ １ ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤ⁃
ＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ反转录试剂盒，在无核酶的 １􀆰 ５
ｍＬ离心管中加入 Ｏｌｉｇｏ ｄＴ Ｐｒｉｍｅｒ １ μＬ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘ １
μＬ、Ｔｅｍｐｌａｔｅ ＲＮＡ ２ μＬ、 Ｆｒｅｅ ｄｄＨ２Ｏ ６ μＬ，共 １０
μＬ，６５℃ ５ ｍｉｎ后急冷，在反应后的体系中加入 ５ ×
Ｐｒｉｍｅｓｃｒｉｐｔ Ｂｕｆｆｅｒ ４ μＬ、４０ Ｕ ／ μＬ ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ０􀆰 ５
μＬ、２００ Ｕ ／ μＬ Ｐｒｉｍｅｓｃｒｉｐｔ ＲＴａｓｅ １􀆰 ０ μＬ、ＲＮＡ Ｆｒｅｅ
ｄｄＨ２Ｏ ４􀆰 ５ μＬ，共 ２０ μＬ。 ＰＣＲ反应条件为：３０℃ １０
ｍｉｎ，４２℃ ５０ ｍｉｎ，９５℃ ５ ｍｉｎ。 即得到反转录 ｃＤ⁃
ＮＡ。 － ２０℃下保存备用。
１􀆰 ２􀆰 ３ 烟粉虱 ＯＢＰ８ 基因的克隆
引物设计与合成：通过对烟粉虱转录组测序结
果分析，获得一条 ＯＢＰｓ 家族基因，生物信息学分析
发现此嗅觉蛋白含有 ６ 个半胱氨酸，序列比对结果
表明其与多种昆虫 ＯＢＰ８ 基因序列具有较高相似
性，因此命名为烟粉虱 ＯＢＰ８ （ ＢｔａｂＯＢＰ８）。 利用
Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５􀆰 ０ 软件设计引物，由生工生物工程
（上海）股份有限公司合成，ＰＣＲ 扩增 ＢｔａｂＯＢＰ８ 全
长，为了便于后续原核表达，基因片段正反向引物分
别引入 ＢａｍＨ Ｉ 和 Ｈｉｎｄ Ⅲ 酶切位点 （下划线表
示），上下游引物为 ＢｔａｂＯＢＰ８ｅ⁃Ｆ： ５′⁃ＣＣＧＧＡＴＣ⁃
ＣＡＴＧＡＡＣＡＡＴＣＴＴＡＴＧＧＴＧＴＴＴＴＣＧ⁃３′； ＢｔａｂＯＢＰ８ｅ⁃
Ｒ： ５′⁃ＣＣＡＡＧＣＴＴＴＴＡＧＣＣＴＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＴＧＴＴＡＡＧ
Ｃ⁃３′。 ＢｔａｂＯＢＰ８ 基因扩增和重组表达载体的构建：
以 ｃＤＮＡ 第一链为模板，利用 ＢｔａｂＯＢＰ８ 引物进行
ＰＣＲ扩增，２０ μＬ扩增体系为：ｄｄＨ２Ｏ ９ μＬ、ｒＴａｑ Ｍｉｘ
８ μＬ、ｃＤＮＡ １ μＬ、上游引物 １ μＬ、下游引物 １ μＬ。
ＰＣＲ反应程序为 ９５℃ ３ ｍｉｎ，预变性 ９５℃ ４０ ｓ，６３℃
４０ ｓ，７２℃ ５０ ｓ，３２ 个循环，最后 ７２℃ １０ ｍｉｎ 延伸。
扩增产物经 １％琼脂糖凝胶电泳检测并回收纯化，
回收片段克隆于 ｐＭＤ１８⁃Ｔ载体，连接产物转化至大
肠杆菌，将菌液均匀涂布在 ＬＢ 固体培养基上培养，
形成单菌落，３７℃倒置培养 １２ ～ １６ ｈ 过夜。 经过蓝
白斑筛选后挑选白色单菌落，加入含有 １ ｍＬ ＬＢ 固
体培养基 １􀆰 ５ ｍＬ的离心管中，过夜培养，菌落 ＰＣＲ
鉴定为阳性后，由上海桑尼生物技术有限公司完成
序列测定。
１􀆰 ２􀆰 ４ ＢｔａｂＯＢＰ８ 的序列测定及分析
将测序结果在 ＮＣＢＩ 上利用 ＢＬＡＳＴ 进行序列相
似性搜索，并在 ＮＣＢＩ 上下载与其序列相似性高的
ＯＢＰ，分别为蚕豆蚜 Ａｐｈｉｓ ｆａｂａｅ（序列号：ＦＭ２４２５５６）、
大豆蚜 Ａｐｈｉｓ ｇｌｙｃｉｎｅｓ（序列号：ＫＦ９２３８４９）、棉蚜 Ａｐｈｉｓ
ｇｏｓｓｙｐｉｉ（序列号：ＫＣ１６１５６１）、灰飞虱 Ｌａｏｄｅｌｐｈａｘ ｓｔｒｉａ⁃
ｔｅｌｌａ（序列号：ＫＣ５１６７５２）、桃蚜 Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ（序列
号：ＦＭ２４２５４７）、褐飞虱 Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ ｌｕｇｅｎｓ（序列号：
ＫＣ５１６７２４）、麦长管蚜 Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ａｖｅｎａｅ （序 列 号：
ＧＱ８８８７０８）、白背飞虱 Ｓｏｇａｔｅｌｌａ ｆｕｒｃｉｆｅｒａ （序列号：
ＫＣ５１６７３３），进化树构建使用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ １􀆰 ８３和ＭＥＧＡ
４􀆰 ０软件中的邻接法，１ ０００次重复，ｃｕｔ⁃ｏｆｆ ｖａｌｕｅ的值
为 ５０％。 采用在线蛋白质分析软件（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｅｂ． ｅｘ⁃
ｐａｓｙ． ｏｒｇ ／ ｃｇｉ⁃ｂｉｎ ／ ｐｒｏｔｐａｒａｍ ／ ｐｒｏｔｐａｒａｍ）及 Ｓｉｇｎａ ＩＰ ３􀆰 ０
Ｓｅｒｖｅｒ 软件 （ ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｃｂｓ． ｄｔｕ． ｄｋ ／ ｓｅｒｖｉｃｅｓ ／ Ｓｉｇ⁃
ｎａｌＰ ／ ）进行分析。
１􀆰 ２􀆰 ５ ＢｔａｂＯＢＰ８ 重组蛋白的原核表达与纯化
提取阳性克隆质粒，经 ＢａｍＨ Ⅰ和 Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶
切后，与经过相同酶切的 ｐＥＴ⁃３０ａ（ ＋ ）载体在 ４℃用
Ｔ４ 连接酶进行连接，转化宿主大肠杆菌 Ｔｒａｎｓ ５α 感
受态细胞后，提取质粒进行酶切鉴定阳性克隆，将阳
性克隆转化到 ＢＬ２１（ＤＥ３）感受态细胞中。 诱导表
达蛋白并用 Ｂｒａｄｆｏｒｄ 方法测定重组蛋白的浓度（吴
帆等，２０１５）。
１􀆰 ２􀆰 ６ ＢｔａｂＯＢＰ８ 蛋白的配基结合
参考吴帆等（２０１５）方法，以 １⁃ＮＰＮ 作为 Ｂｔａ⁃
４３ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
ｂＯＢＰ８ 竞争性结合荧光探针，分别以 β⁃紫罗兰酮、
月桂烯、Ｐ⁃伞花烃、柠檬烯、壬醛、顺⁃３⁃己烯⁃１⁃醇、
反⁃２⁃己烯醛和桉树脑为配基，设置波长为 ２８２ ｎｍ，
逐渐加入 １⁃ＮＰＮ 并记录荧光发射光谱及最大发射
光谱处时的荧光强度，计算 Ｓｃａｔｃｈａｒｄ 方程线性化光
谱数据和候选配基解离常数（ＫＤ）： （［Ｄｔ］ － ［Ｄ］） ／
［Ｄ］ ＝ － Ｋ（［Ｄｔ］ － ［Ｄ］） ＋ ｎＫ［Ｐｔ］，ＫＤ ＝ ＩＣ５０ ／ （１ ＋
［１⁃ＮＰＮ］ ／ Ｋ１⁃ＮＰＮ）
２ 结果与分析
２􀆰 １ ＢｔａｂＯＢＰ８ 基因克隆、载体构建及表达纯化
通过对烟粉虱 ＭＥＤ隐种头部的 ＲＮＡ提取、ｃＤ⁃
ＮＡ反转录、基因扩增及连接转化得到 ＯＢＰ８ 基因。
开放阅读框全长 ４８０ ｂｐ，编码 １５９ 个氨基酸，大小约
１７􀆰 ９４ ｋＤ，等电点为 ８􀆰 １６，含有 ６ 个保守的半胱氨
酸，为可溶性的酸性小分子蛋白。 信号肽预测结果
表明，５′端（Ｎ⁃末端疏水区）从起始位置开始共有 ２１
个氨基酸组成的信号肽（图 １），符合 ＯＢＰ 的保守特
性。 表明烟粉虱 ＢｔａｂＯＢＰ８ 具有气味结合蛋白的典
型特征。
经 ＩＰＴＧ 诱导目的蛋白的表达，分离纯化后得
到蛋白电泳图（图 ２），泳道 ４ 为纯化后的 ＯＢＰ８ 重
组蛋白。 将 ＢｔａｂＯＢＰ８ 洗脱液进行充分透析，稀释
浓度至 １􀆰 ５ μｍｏｌ ／ Ｌ保存备用。
图 １ 烟粉虱 ＢｔａｂＯＢＰ８ 的核苷酸及氨基酸序列
Ｆｉｇ． １ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
ＢｔａｂＯＢＰ８ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ
下划线部分为信号肽，方框为保守的半胱氨酸。
Ｕｎｄｅｒｌｉｎｅｄ ｉｓ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ， ａｎｄ ｓｑｕａｒｅ ｆｒａｍｅ ｉｓ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｃｙｓｔｅｉｎｅｓ．
　
２􀆰 ２ ＢｔａｂＯＢＰ８ 基因及编码蛋白分析
通过基因测序分析，烟粉虱 ＢｔａｂＯＢＰ８ 基因符
合 ＯＢＰ 的蛋白组成特征，利用 ＢＬＡＳＴ 对烟粉虱
图 ２ 重组 ＢｔａｂＯＢＰ８ 蛋白的诱导表达及纯化
Ｆｉｇ． ２ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ＢｔａｂＯＢＰ８ ｐｒｏｔｅｉｎ
１： 未诱导的 ｐＥＴ３０ａ⁃ＣＳＰ１ 的 ＢＬ２１ 菌体； ２： 诱导
后的 ｐＥＴ３０ａ⁃ＣＳＰ１ 的 ＢＬ２１ 菌体； ３： 第 １ 次上样过柱后
的洗脱液； ４： 纯化后的 ＯＢＰ８ 蛋白； Ｍ： 蛋白 ｍａｒｋｅｒ。
１： Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐＥＴ３０⁃ＣＳＰ１ ｗｉｔｈｏｕｔ ＩＰＴＧ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ２： ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐＥＴ３０⁃ＣＳＰ１
ｗｉｔｈ ＩＰＴＧ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ３： ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｄ⁃
ｕｃｔｓ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｅｄ ｂｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｏｌｕｍｎ； ４： ｓｅｐａｒａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕ⁃
ｒｉｆｉｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ＯＢＰ８； Ｍ： ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｗｅｉｇｈｔ ｍａｒｋｅｒ．
　
ＯＢＰ８ 进行同源检索，发现与其它同目昆虫的 ＯＢＰ８
相似性最高，在 ＮＣＢＩ 上对其它 ８ 种同目昆虫的
ＯＢＰ８ 进行应用序列进化分析，对包括烟粉虱 ＯＢＰ８
在内的 ９ 种半翅目昆虫气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 构建系
统进化树，发现 ＢｔａｂＯＢＰ８ 的进化分支较为独立（图
３），说明其与半翅目其它农业害虫 ＯＢＰ８ 的进化关
系较远。
２􀆰 ３ ＢｔａｂＯＢＰ８ 与候选配基结合
在 １􀆰 ５ μｍｏｌ ／ Ｌ ＢｔａｂＯＢＰ８ 中逐次加入 １⁃ＮＰＮ 溶
液，并在 ２８１ ｎｍ 激发波长下记录 ４１８ ｎｍ 处的荧光
峰值，ＢｔａｂＯＢＰ８ 和 １⁃ＮＰＮ 的相关系数为 ０􀆰 ９９８５，
Ｓｃａｔｃｈａｒｄ 方程线性化后的相关系数为 ０􀆰 ９８４３ （图
４），拟合相关性较高。 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与 １⁃ＮＰＮ 的解离
常数为 ３􀆰 ０８ μｍｏｌ ／ Ｌ，表明作用较强。 结合位点数 ｎ
为 ０􀆰 ７０，表明 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与 １⁃ＮＰＮ基本能完全结合，
说明 １⁃ＮＰＮ适合作为 ＢｔａｂＯＢＰ８ 竞争性荧光结合试
验的报告子。
　 　 以 １⁃ＮＰＮ 作为报告子进行候选配基竞争性结
合试验，根据各个候选配基能替换 ５０％１⁃ＮＰＮ 时的
浓度、混合物中游离 １⁃ＮＰＮ 的浓度和解离常数
５３１ 期 王　 然等： 烟粉虱 ＭＥＤ隐种气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 的克隆、原核表达及与植物挥发物的结合特性
图 ３ 烟粉虱气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 与其相关昆虫 ＯＢＰ８ 的系统发育树
Ｆｉｇ． ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｏｄｏｒａｎｔ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ （ＯＢＰ８） ｏｆ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｓｅｃｔｓ
　
图 ４ ＢｔａｂＯＢＰ８ 重组蛋白与 １⁃ＮＰＮ的结合分析
Ｆｉｇ． ４ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｕｒｖｅ ｏｆ １⁃ＮＰＮ ｗｉｔｈ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｐｒｏｔｅｉｎ
　
Ｋ１⁃ＮＰＮ值，计算各个候选配基解离常数 ＫＤ值，结果显
图 ５ 候选配基与 １⁃ＮＰＮ竞争结合重组 ＢｔａｂＯＢＰ８ 蛋白
Ｆｉｇ． ５ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｌｉｇａｎｄｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ １⁃ＮＰＮ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｐｒｏｔｅｉｎ　
示，β⁃紫罗兰酮、月桂烯、柠檬烯和趋避化合物 Ｐ⁃伞
花烃能将 １⁃ＮＰＮ的相对荧光强度降低到 ５０％以下，
其中 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与 β⁃紫罗兰酮和月桂烯的竞争结合
能力更强，在 ２００ μｍｏｌ ／ Ｌ时将 １⁃ＮＰＮ报告子的相对
荧光值分别竞争到 ３５％以下（图 ５），解离常数分别
为 １３􀆰 ３２ μｍｏｌ ／ Ｌ和 ２１􀆰 ５３ μｍｏｌ ／ Ｌ（表 １），说明 β⁃紫
罗兰酮和月桂烯与 ＢｔａｂＯＢＰ８ 具有较强的结合
能力。
３ 讨论
植物挥发物在昆虫的化学通讯中具有非常重要
的功能，主要包括其对昆虫趋向行为、趋避行为、繁
殖行为的影响及对昆虫的致死作用 （张亚楠，
２０１４）。 植物对烟粉虱的趋避及引诱取决于烟粉虱
对植物挥发物的识别，烟粉虱对不同的寄主植物有
不同的偏好性，在这个过程中嗅觉蛋白 ＯＢＰｓ 起到
了重要的作用。 近些年，国内外许多学者对昆虫
ＯＢＰｓ 的表达特性进行了研究。 Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ． （２０１２）研
究表明蚜虫 ＯＢＰｓ 涉及解码气味和信息素的化学信
息，（Ｅ）⁃β⁃法尼烯能够与豌豆蚜 Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ
及桃蚜 ＯＢＰ３ 和 ／或 ＯＢＰ７ 结合，作为良好的驱虫剂。
此外，Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１４）发现，雄性榕小蜂 Ｃｅｒａｔｏｓｏ⁃
ｌｅｎ ｓｏｌｍｓｉ ＣｓｏｌＯＢＰ１ 和 ＣｓｏｌＯＢＰ２（或 ＣｓｏｌＯＢＰ５）在择
偶中发挥着重要作用，而雌性榕小蜂 ＣｓｏｌＯＢＰ４ 和
ＣｓｏｌＯＢＰ５ 可能主要通过识别无花果产生的挥发性
６３ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
　 　 　表 １ 候选配基与 １⁃ＮＰＮ 竞争结合重组 ＢｔａｂＯＢＰ８ 蛋白
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｌｉｇａｎｄｓ
ｗｉｔｈ １⁃ＮＰＮ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＢｔａｂＯＢＰ８ ｐｒｏｔｅｉｎ
化学配基
Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｎｄ
ＩＣ５０
（μｍｏｌ ／ Ｌ）
解离常数 ＫＤ（μｍｏｌ ／ Ｌ）
Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔ
β⁃紫罗兰酮
β⁃ｉｏｎｏｎｅ
２９􀆰 ７９ １３􀆰 ３２
月桂烯
Ｍｙｒｃｅｎｅ
４８􀆰 １５ ２１􀆰 ５３
Ｐ⁃伞花烃
４⁃ｃｙｍｅｎｅ
１１２􀆰 ４５ ５０􀆰 ２７
柠檬烯
（ ＋ ／ － ）⁃ｌｉｍｏｎｅｎｅ
１６０􀆰 ７８ ７１􀆰 ８８
壬醛
Ｎｏｎａｎａｌ
２９４􀆰 ５５ １３１􀆰 ６９
顺⁃３⁃己烯⁃１⁃醇
Ｃｉｓ⁃３⁃ｈｅｘｅｎ⁃１⁃ｏｌ
３６７􀆰 ３７ １６４􀆰 ２４
反⁃２⁃己烯醛
Ｔｒａｎｓ⁃２⁃ｈｅｘｅｎａｌ
３９０􀆰 ７５ １７４􀆰 ７０
桉树脑 １，８⁃ｃｉｎｅｄｅ ４３６􀆰 ２９ １９５􀆰 ０６
化合物而找到寄主。 烟粉虱对不同寄主植物存在明
显的偏好性（林克剑等，２００８），利用烟粉虱的这种
寄主偏好性，在目标植物附近种植引诱植物或驱避
植物，可有效地减少目标植物上烟粉虱的种群数量。
研究烟粉虱气味结合蛋白的功能，有助于揭示烟粉
虱对寄主植物的选择机理。
本研究通过分析烟粉虱气味结合蛋白 Ｂｔａ⁃
ｂＯＢＰ８ 与植物挥发性气味结合的特性发现， １⁃ＮＰＮ
是 ＢｔａｂＯＢＰ８ 适合的荧光报告子。 候选配基包括萜
类化合物质（月桂烯、柠檬烯、桉树脑），芳香类化合
物质（Ｐ⁃伞花烃）和脂类化合物质（β⁃紫罗兰酮、壬
醛、顺⁃３⁃己烯⁃１⁃酯、反⁃２⁃己烯醛）。 β⁃紫罗兰酮和月
桂烯的解离常数分别为 １３􀆰 ３２ μｍｏｌ ／ Ｌ 和 ２１􀆰 ５３
μｍｏｌ ／ Ｌ，均小于 １０ μｍｏｌ ／ Ｌ，表明 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与这 ２
种物质的结合能力较强，当 β⁃紫罗兰酮、月桂烯、柠
檬烯的浓度为 ２００ μｍｏｌ ／ Ｌ时，将 １⁃ＮＰＮ相对荧光值
分别竞争到 １５％ 、３５％ 、５０％左右，证明 ＢｔａｂＯＢＰ８
与 ３ 种物质均有较好的结合能力，其中 β⁃紫罗兰酮
的结合能力最强。 β⁃紫罗兰酮属于脂类的花香气味
物质，昆虫会利用一些花香类物质对植物进行定位
（Ｃｈｅｎｉｅｒ ＆ Ｐｈｉｌｏｇｅｎｅ，１９８９）。 本研究结果与以往研
究结果一致，行为学试验表明中红侧沟茧蜂 Ｍｉｃｒｏｐｌ⁃
ｉｔｉｓ ｍｅｄｉａｔｏｒ 对 β⁃紫罗兰酮选择性较高，β⁃紫罗兰酮
对其有正向的吸引作用（张康等，２０１１）。 二化螟
Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ气味结合蛋白 ＣｓｕｐＯＢＰ１（魏丹等，
２０１３）和中华蜜蜂气味结合蛋白 ＡｃｅｒＡＳＰ２（李红亮
等，２０１３）在试验候选物质中均与 β⁃紫罗兰酮结合
力较强，表明 β⁃紫罗兰酮与昆虫的气味结合蛋白具
有良好的亲和力。 同时，月桂烯也对昆虫有正向的
吸引作用（曹凤勤等，２００８）。 ＢｔａｂＯＢＰ８ 与 β⁃紫罗
兰酮和月桂烯与 ＢｔａｂＯＢＰ８ 的结合能力最强，并且
由于 β⁃紫罗兰酮和月桂烯均为花香气味物质，广泛
存在于绿色开花植物中，因此推测 ＢｔａｂＯＢＰ８ 对 β⁃
紫罗兰酮和月桂烯的识别可能参与了烟粉虱对绿色
开花植物的吸引和选择作用。
除此之外，昆虫趋避性挥发物 Ｐ⁃伞花烃（Ｂｌｅｅｋ⁃
ｅｒ ｅｔ ａｌ． ，２００９）也能将 １⁃ＮＰＮ 相对荧光值竞争到
５０％以下，说明 Ｐ⁃伞花烃也与 ＢｔａｂＯＢＰ８ 具有较好
的结合作用，推测 ＢｔａｂＯＢＰ８ 在烟粉虱的趋避行为
中也发挥一定的作用。 植物对昆虫的趋避与引诱，
并非由一种物质和昆虫的一种嗅觉蛋白决定，而是
多种嗅觉蛋白的协同作用参与对不同植物挥发物的
识别，如烟粉虱 ＣＳＰ１ 主要参与了对寄主植物趋避
性气味的识别（吴帆等，２０１５），ＯＢＰ 主要结合植物
挥发的引诱性气味，与昆虫的寄主定位有关（吴仲
南等，２００９；陈玲等，２０１３）。 本试验对 ＢｔａｂＯＢＰ８ 功
能性验证表明，与植物的挥发性气味结合较为广谱，
但主要参与了对引诱性气味的结合，推测其在烟粉
虱寄主定位中起主要作用。 对烟粉虱气味结合蛋白
功能的研究有助于揭示烟粉虱的寄主偏好机理，为
其绿色防控提供理论基础，促进“推拉策略”在生产
上的应用。 此外，植物与昆虫的关系是复杂易变且
相辅相成的，深入研究阐述植物挥发物对昆虫行为
和生理反应的调控机制，能够有助于科研工作者开
发出更多高效的生长发育、行为调节剂或杀虫剂，从
而达到对害虫进行绿色防控的目的。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
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８３ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
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（责任编辑：高　 峰）
９３１ 期 王　 然等： 烟粉虱 ＭＥＤ隐种气味结合蛋白 ＯＢＰ８ 的克隆、原核表达及与植物挥发物的结合特性