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Molecular identification of begomovirus species of tomato yellow leaf curl disease from greenhouse in southern Xinjiang

南疆温室番茄黄化曲叶病病毒种类的分子鉴定



全 文 :南疆温室番茄黄化曲叶病病毒种类的分子鉴定
王喜刚摇 黄家风鄢摇 都业娟鄢
渊石河子大学农学院袁 新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用自治区普通高校重点实验室袁 石河子 愿猿圆园园猿冤
摘要院 为明确南疆温室番茄黄化曲叶病的病毒种类袁利用双生病毒的兼并引物通过 孕悦砸 扩增袁对
采集的 圆园 个番茄病株进行了分子检测遥 从 圆园 个病株中均扩增到约 缘园园 遭责 的目标片段袁对其中 源
株进行克隆和测序袁其相互间序列同源性为 怨苑援 员豫 耀 怨怨援 猿豫 袁与番茄黄化曲叶病毒渊栽燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎
造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽袁 栽再蕴悦灾冤的同源性较高袁为 怨愿援 远豫 耀 怨怨援 缘豫 遥 随机选取莎车分离物 运杂圆鄄缘 进行全基
因组的克隆和测序袁运杂圆鄄缘 阅晕粤全长为 圆苑愿员 灶贼渊序列号院允匝愿园苑苑猿缘冤袁具有典型的双生病毒基因组特
征袁与 栽再蕴悦灾其它分离物同源性达到 怨愿援 怨豫 耀怨怨援 缘豫 袁而与其它粉虱传双生病毒的序列同源性较
低袁为 远愿援 猿豫 耀苑缘援 缘豫 袁表明危害南疆温室番茄的病毒种类为番茄黄化曲叶病毒 栽再蕴悦灾遥
关键词院 番茄曰 番茄黄化曲叶病毒曰 粉虱传双生病毒曰 阅晕粤
酝燥造藻糟怎造葬则 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽 泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 贼燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎
造藻葬枣 糟怎则造 凿蚤泽藻葬泽藻 枣则燥皂 早则藻藻灶澡燥怎泽藻 蚤灶 泽燥怎贼澡藻则灶 载蚤灶躁蚤葬灶早
宰葬灶早 载蚤早葬灶早摇 匀怎葬灶早 允蚤葬枣藻灶早鄢摇 阅怎 再藻躁怎葬灶鄢
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 哉灶蚤增藻则泽蚤贼蚤藻泽 燥枣 载蚤灶躁蚤葬灶早 哉赠早怎则 粤怎贼燥灶燥皂燥怎泽 砸藻早蚤燥灶 枣燥则 韵葬泽蚤泽 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 孕藻泽贼
酝葬灶葬早藻皂藻灶贼 葬灶凿 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶 砸藻泽燥怎则糟藻 哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 杂澡蚤澡藻扎蚤
哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 杂澡蚤澡藻扎蚤 愿猿圆园园猿袁 哉赠早怎则 粤怎贼燥灶燥皂燥怎泽 砸藻早蚤燥灶 燥枣 载蚤灶躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 葬泽糟藻则贼葬蚤灶 贼澡藻 增蚤则怎泽 泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 贼燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎 造藻葬枣 糟怎则造 凿蚤泽藻葬泽藻 燥糟糟怎则则蚤灶早 蚤灶 早则藻藻灶鄄
澡燥怎泽藻 蚤灶 泽燥怎贼澡藻则灶 载蚤灶躁蚤葬灶早袁 圆园 早则藻藻灶澡燥怎泽藻鄄早则燥憎灶 贼燥皂葬贼燥 责造葬灶贼泽 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 造藻葬枣 糟怎则造 泽赠皂责贼燥皂泽 憎藻则藻 泽怎遭鄄
躁藻糟贼藻凿 贼燥 孕悦砸鄄遭葬泽藻凿 凿蚤葬早灶燥泽蚤泽 燥枣 遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援 哉泽蚤灶早 怎灶蚤增藻则泽葬造 责则蚤皂藻则泽 燥枣 遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽藻泽袁 枣则葬早鄄
皂藻灶贼泽 燥枣 葬遭燥怎贼 缘园园 遭责 憎藻则藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 枣则燥皂 葬造造 泽葬皂责造藻泽 葬灶凿 源 枣则葬早皂藻灶贼泽 憎藻则藻 糟澡燥泽藻灶 贼燥 糟造燥灶藻 葬灶凿 泽藻鄄
择怎藻灶糟藻援 栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 源 枣则葬早皂藻灶贼泽 泽澡葬则藻凿 怨苑援 员豫 原 怨怨援 猿豫 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 蚤凿藻灶贼蚤贼蚤藻泽 藻葬糟澡
燥贼澡藻则 葬灶凿 澡葬凿 澡蚤早澡 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 蚤凿藻灶贼蚤贼蚤藻泽 渊怨愿援 远豫 原 怨怨援 缘豫 冤 憎蚤贼澡 阅晕粤 燥枣 栽燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎 造藻葬枣
糟怎则造 增蚤则怎泽 渊栽再蕴悦灾冤援 陨泽燥造葬贼藻 运杂圆鄄缘 枣则燥皂 杂澡葬糟澡藻 憎葬泽 糟澡燥泽藻灶 贼燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻 糟燥皂责造藻贼藻 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 阅晕粤援
栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 蚤贼 憎葬泽 糟燥皂责则蚤泽藻凿 燥枣 圆 苑愿员 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽 葬灶凿 澡葬凿 贼赠责蚤糟葬造 早藻灶燥皂蚤糟 燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 遭藻鄄
早燥皂燥增蚤则怎泽藻泽渊允匝愿园苑苑猿缘冤援 阅晕粤 燥枣 运杂圆鄄缘 澡葬凿 怨愿援 怨豫 原怨怨援 缘豫 泽藻择怎藻灶糟藻 蚤凿藻灶贼蚤贼蚤藻泽 憎蚤贼澡 贼澡燥泽藻 燥枣 栽再蕴悦灾
蚤泽燥造葬贼藻泽袁 憎澡蚤造藻 造藻泽泽 贼澡葬灶 苑缘援 缘豫 蚤凿藻灶贼蚤贼蚤藻泽 憎蚤贼澡 燥贼澡藻则 憎澡蚤贼藻枣造赠鄄贼则葬灶泽皂蚤贼贼藻凿 遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽藻泽援 陨贼 憎葬泽 糟燥灶糟造怎鄄
凿藻凿 贼澡葬贼 贼燥皂葬贼燥 责造葬灶贼泽 憎蚤贼澡 增蚤则葬造 泽赠皂责贼燥皂泽 憎藻则藻 糟葬怎泽藻凿 遭赠 栽再蕴悦灾 蚤灶 泽燥怎贼澡藻则灶 载蚤灶躁蚤葬灶早援
运藻赠 憎燥则凿泽院 贼燥皂葬贼燥曰 栽燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎 造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽曰 憎澡蚤贼藻枣造赠鄄贼则葬灶泽皂蚤贼贼藻凿 早藻皂蚤灶蚤增蚤则怎泽曰 阅晕粤
摇 摇 由双生病毒渊早藻皂蚤灶蚤增蚤则怎泽藻泽冤引起的番茄黄化曲
叶病是影响番茄生产的重要因素之一遥 该病最早于
圆园 世纪 猿园 年代在以色列发现袁随着传播介体烟粉
虱 月藻皂蚤泽蚤葬 贼葬遭葬糟蚤 的全球蔓延尧温室番茄周年栽培袁
以及全球气候变暖尧国际贸易加强等因素的影响袁到
苑园 年代末袁中东地区几乎所有的番茄品种都感染了
基金项目院 国家自然科学基金渊猿员圆远园源圆园冤袁石河子大学自然科学创新团队项目渊圆园员员在砸运载栽阅鄄园圆冤
作者简介院 王喜刚袁男袁员怨愿苑年生袁硕士研究生袁研究方向为植物病毒学袁 耘鄄皂葬蚤造院 源员远源员园猿圆远岳 择择援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则泽 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 躁蚤葬枣藻灶早赃澡怎葬灶早岳 员远猿援 糟燥皂袁 凿赠躁赃葬早则岳 泽澡扎怎援 藻凿怎援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 园员 原 员园
第 源园 卷摇 第 猿 期
圆园员猿 年摇 远 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 猿
允怎灶藻 摇 圆园员猿
该病咱员 原 圆暂 遥 在我国袁该病最初仅在海南尧云南尧广东
和广西等省发生袁自 圆园园远 年上海和浙江先后发现双
生病毒危害番茄以来袁该病害在华东地区迅速扩
展咱猿暂 袁不到 苑 年的时间已传播至全国 圆园 个省尧直辖
市咱源暂 袁在华南尧西南尧华东 员园 余个省份暴发成灾袁每
年造成的经济损失超过 圆园 亿人民币袁并且正以年增
员缘豫的速度蔓延咱缘暂 遥 因此袁密切关注该病害在我国
的发生尧分布及危害具有重要意义遥
双生病毒是一类基因组为单链环状的 阅晕粤 植
物病毒遥 其中袁具有经济重要性的双生病毒大多数
为菜豆金色花叶病毒属病毒渊遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽藻泽冤袁自然
条件下由烟粉虱传播袁因而也称作粉虱传双生病毒
渊憎澡蚤贼藻枣造赠鄄贼则葬灶泽皂蚤贼贼藻凿 早藻皂蚤灶蚤增蚤则怎泽袁 宰栽郧冤 咱远暂 遥 大部分
宰栽郧含有 圆 条 阅晕粤 分子袁即 阅晕粤鄄粤 和 阅晕粤鄄月袁每
条 阅晕粤分子大小约 圆援 缘 耀 猿援 园 噪遭袁共编码 远 耀 苑 个开
放阅读框渊韵砸云冤遥 少数 宰栽郧 为单组分病毒袁如番
茄黄化曲叶病毒渊栽燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎 造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽袁栽再蕴鄄
悦灾冤袁基因组类似双组分的 阅晕粤鄄粤袁单个 阅晕粤 就能
侵染致病咱苑暂 遥 有些单组分 宰栽郧 伴随一种新型卫星
分子要要要阅晕粤茁袁如中国番茄黄化曲叶病毒渊栽燥皂葬贼燥
赠藻造造燥憎 造藻葬枣 糟怎则造 悦澡蚤灶葬 增蚤则怎泽袁栽再蕴悦悦晕灾冤尧穆耳坦棉花
曲叶病毒渊悦燥贼贼燥灶 造藻葬枣 糟怎则造 酝怎造贼葬灶 增蚤则怎泽袁悦燥蕴悦酝灾冤的
阅晕粤需要与 阅晕粤茁 共同侵染才能引起典型的病害
症状咱愿 原 怨暂 遥
世界各地双生病毒引起的番茄病害症状类似袁
主要表现为曲叶尧斑驳尧节间缩短尧黄化等袁然而这类
病害并不是由一种病毒引起的袁其病原较复杂袁而且
同一地区的番茄上往往有多种病毒遥 云葬怎择怎藻贼 等咱员园暂
报道番茄至少受到 远园 多种双生病毒的侵染袁其中既
有单组分双生病毒袁也有双组分双生病毒遥 我国发
生的番茄双生病毒至少有 员园 种袁如番茄黄化曲叶病
毒咱猿暂 尧泰国番茄黄化曲叶病毒渊 栽燥皂葬贼燥 赠藻造造燥憎 造藻葬枣
糟怎则造 栽澡葬蚤造葬灶凿 增蚤则怎泽袁 栽再蕴悦栽匀灾冤咱员员暂 尧中国番茄曲叶病
毒渊栽燥皂葬贼燥 造藻葬枣 糟怎则造 悦澡蚤灶葬 增蚤则怎泽袁栽燥蕴悦悦晕灾冤 咱员圆暂 尧海南
番茄曲叶病毒 渊 栽燥皂葬贼燥 造藻葬枣 糟怎则造 匀葬蚤灶葬灶 增蚤则怎泽袁
栽蕴悦匀灾冤咱员猿暂 尧台湾番茄曲叶病毒 渊 栽燥皂葬贼燥 造藻葬枣 糟怎则造
栽葬蚤憎葬灶 增蚤则怎泽袁栽燥蕴悦栽宰灾冤咱员源 原 员缘暂 尧中国番木瓜曲叶病
毒渊孕葬责葬赠葬 造藻葬枣 糟怎则造 悦澡蚤灶葬 增蚤则怎泽袁孕葬蕴悦悦晕灾冤 咱员远暂 尧中国
胜红蓟黄脉病毒渊粤早藻则葬贼怎皂 赠藻造造燥憎 增藻蚤灶 悦澡蚤灶葬 增蚤则怎泽袁
粤再灾悦晕灾冤尧中国番茄黄化曲叶病毒尧云南烟草曲叶
病毒渊栽葬遭葬糟糟燥 造藻葬枣 糟怎则造 再怎灶灶葬灶 增蚤则怎泽袁栽遭蕴悦再晕灾冤和烟
草曲茎病毒渊栽燥遭葬糟糟燥 糟怎则造赠 泽澡燥燥贼 增蚤则怎泽袁栽遭悦杂灾冤 咱员苑暂 遥
其中 栽再蕴悦悦晕灾尧栽再蕴悦栽匀灾尧粤再灾悦晕灾是以病害复合
体渊阅晕粤 辕 阅晕粤茁冤形式致病袁而 栽再蕴悦灾尧栽燥蕴悦栽宰灾 和
孕葬蕴悦悦晕灾基因组 阅晕粤可以单独致病遥
新疆地处欧亚大陆腹地袁气候干燥少雨袁属于典
型的温带大陆型干旱气候袁近年来烟粉虱发生普遍袁
但是仅在石河子地区陆地栽培的加工番茄上发现
栽再蕴悦悦晕灾袁且零星发生咱员愿暂 遥 圆园员圆 年春袁新疆喀什尧
和田地区温室番茄发生严重的黄化尧卷叶尧矮化症
状袁已对当地番茄造成毁灭性危害遥 为此袁本试验对
危害南疆温室番茄的双生病毒种类进行了分子
鉴定遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试病株院运杂圆鄄员 耀 运杂圆鄄缘 于 圆园员圆 年 员 月 圆猿 日
采自喀什地区莎车县温室曰运再鄄员 耀 运再鄄缘 于 圆园员圆 年
源 月 愿 日采自喀什地区叶城县温室曰运酝鄄员 耀 运酝鄄缘 于
圆园员圆年 愿月 源日采自喀什地区麦盖提县温室曰匀再鄄员 耀
匀再鄄缘于 圆园员圆 年 怨 月 圆 日采自和田地区于田县温
室遥 圆园 个病株表现明显黄化尧曲叶症状遥
供试菌株及载体院栽再蕴悦悦晕灾的侵染性克隆由浙
江大学周雪平教授惠赠曰 责酝阅员愿鄄栽袁购自 栽葬运葬砸葬 公
司曰大肠杆菌 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅匀缘琢 菌株袁为本实验
室保存遥
试剂和仪器院琼脂糖凝胶 阅晕粤 回收试剂盒尧高
纯度质粒小提试剂盒及 圆 伊 耘杂 栽葬择 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾袁购自
康为世纪生物科技有限公司曰月陨韵酝耘栽砸粤鄄园苑园鄄愿缘员
栽责则燥枣藻泽泽蚤燥灶葬造 怨远 孔梯度 孕悦砸 仪袁购自德国耶拿分析
仪器股份公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 田间番茄病株双生病毒的 孕悦砸检测
根据 载蚤藻 等咱员怨暂的方法提取所有番茄病株的总
阅晕粤遥 利用双生病毒兼并引物 孕粤渊缘忆鄄栽粤粤栽粤栽栽粤悦鄄
悦运郧宰运郧灾悦悦杂悦鄄猿忆冤和 孕月 渊缘忆鄄栽郧郧粤悦再栽栽砸悦粤宰郧鄄
郧月悦悦栽栽悦粤悦粤鄄猿忆冤袁对病株进行双生病毒基因组
阅晕粤片段的扩增咱员怨暂 遥 孕悦砸 反应条件院怨源 益变性 源
皂蚤灶曰怨源益变性 猿园 泽袁缘园益退火 猿园 泽袁苑圆益延伸 源缘 泽袁猿缘
个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 扩增到目标片段后袁从
中选取代表病株 运杂圆鄄缘尧运再鄄员尧运酝鄄员 和 匀再鄄圆袁以病
株编号作为病毒分离物编号袁对其 孕悦砸产物进行克
隆尧测序遥
员援 圆援 圆 运杂圆鄄缘 基因组 阅晕粤的克隆和测序
选取 运杂圆鄄缘 病株袁对其病毒分离物进行基因组
全序列的克隆与测序遥根据运杂圆鄄缘的已测序列袁设
愿猿圆 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
计特异引物 栽运杂鄄云渊缘忆鄄栽粤悦悦郧郧粤粤郧悦悦悦粤郧粤粤栽粤栽鄄
粤悦粤郧粤粤鄄猿忆冤 和 栽运杂鄄砸 渊 缘忆鄄栽郧郧郧郧粤悦悦粤悦粤栽粤鄄
粤粤粤粤郧粤粤粤粤郧郧悦鄄猿忆冤袁扩增近全长的 阅晕粤遥 孕悦砸
反应条件院怨源益变性 源 皂蚤灶曰怨源益变性 猿园 泽袁源园益退火
猿园 泽袁苑圆 益延伸 猿 皂蚤灶袁猿圆 个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥
然后将 孕悦砸产物进行克隆尧测序遥 测序所用引物为
再远云圆渊缘忆鄄悦悦栽栽栽粤粤栽栽栽郧粤粤栽郧郧郧晕栽栽悦悦鄄猿忆冤和 再远砸圆
渊缘忆鄄郧郧粤粤砸悦悦悦粤栽栽悦粤粤粤栽栽粤粤粤郧郧鄄猿忆冤遥 将 圆 次测
序结果进行序列拼接以获得 运杂圆鄄缘 基因组全序列遥
员援 圆援 猿 序列比对及系统关系树的构建
利用 晕悦月陨 的 月蕴粤杂栽 程序进行序列同源性检
索曰利用软件 阅晕粤杂贼葬则 缘援 园圆 进行序列分析曰系统进
化树使用 酝耘郧粤缘援 园 程序进行构建曰用于 阅晕粤 序列
比较和进化分析的病毒有中国胜红蓟黄脉病毒渊序
列号院粤允缘缘愿员圆园冤尧台湾胜红蓟黄脉病毒渊粤早藻则葬贼怎皂
赠藻造造燥憎 增藻蚤灶 栽葬蚤憎葬灶 增蚤则怎泽袁粤云猿园苑愿远员冤尧辣椒曲叶病毒
渊悦澡蚤造造蚤 造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽袁悦澡蚤蕴悦怎灾袁粤云猿猿远愿园远冤尧阿拉巴
达棉花曲叶病毒 渊 悦燥贼贼燥灶 造藻葬枣 糟怎则造 粤造葬遭葬凿 增蚤则怎泽袁
悦蕴悦怎粤灾袁粤允园园圆源缘圆冤尧一品红曲叶病毒 渊 耘怎责澡燥则遭蚤葬
造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽袁 耘蕴悦灾袁 粤允缘缘愿员圆员 冤尧赛葵黄脉病毒
渊酝葬造增葬泽贼则怎皂 赠藻造造燥憎 增藻蚤灶 增蚤则怎泽袁酝再灾灾袁粤允源缘苑愿圆源冤尧中
国番木瓜曲叶病毒 渊孕葬责葬赠葬 造藻葬枣 糟怎则造 悦澡蚤灶葬 增蚤则怎泽袁
孕葬蕴悦怎悦晕灾袁粤允缘缘愿员圆猿冤尧孟加拉辣椒曲叶病毒渊孕藻责鄄
责藻则 造藻葬枣 糟怎则造 月葬灶早造葬凿藻泽澡 增蚤则怎泽袁孕藻责蕴悦月灾袁粤云猿员源缘猿员冤尧
大豆曲叶病毒 渊 杂燥赠遭藻葬灶 糟则蚤灶噪造藻 造藻葬枣 增蚤则怎泽袁 杂遭悦蕴灾袁
粤月园缘园苑愿员冤尧云南南瓜曲叶病毒 渊 杂择怎葬泽澡 造藻葬枣 糟怎则造
再怎灶灶葬灶 增蚤则怎泽袁杂蕴悦再灾袁粤允源圆园猿员怨冤尧假马鞭曲叶病毒
渊杂贼葬糟澡赠贼葬则责澡藻贼葬 造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽袁杂贼葬蕴悦灾袁粤允源怨缘愿员源冤尧云
南烟草曲叶病毒渊粤云圆源园远苑源冤尧中国番茄曲叶病毒
渊 粤允缘缘愿员员愿 冤尧 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 渊 云允远园怨远缘缘尧
粤月员怨圆怨远远尧 匀酝远圆苑愿愿缘尧 允晕怨怨园怨圆圆尧 云晕圆缘远圆缘愿尧
郧哉怨愿猿愿缘怨冤尧老挝番茄曲叶病毒渊栽燥皂葬贼燥 造藻葬枣 糟怎则造 蕴葬燥泽
增蚤则怎泽袁栽燥蕴悦蕴灾袁粤云员怨缘苑愿圆冤尧中国番茄黄化曲叶病毒
渊云晕怨愿缘员远猿冤尧番茄伪曲顶病毒渊栽燥皂燥葬贼燥 责泽藻怎凿燥鄄糟怎则造赠
贼燥责 增蚤则怎泽袁栽孕悦栽灾袁载愿源苑猿缘冤遥
圆 结果与分析
圆援 员 田间番茄病株宰栽郧的 孕悦砸检测结果
孕悦砸检测结果显示袁圆园 个病株均扩增到约 缘园园
遭责预期大小的 阅晕粤片段袁与阳性对照 栽再蕴悦悦晕灾 大
小一致袁健康番茄植株中未扩增到相应条带渊图 员冤遥
对 运杂圆鄄缘尧运再鄄员尧运酝鄄员 和 匀再鄄圆 进行克隆及测序袁均
获得核酸序列为 缘源园 个核苷酸渊灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁灶贼冤袁序列
号 分 别 为 允匝愿园苑苑猿缘尧 运悦圆园苑怨源员尧 运悦圆园苑怨源园 和
运悦源远员圆员缘遥 序列比较显示袁它们之间的序列同源性
为 怨苑援 员豫 耀怨怨援 猿豫 袁并与 郧藻灶月葬灶噪 中番茄黄化曲叶
病毒的同源性较高袁为 怨愿援 远豫 耀 怨怨援 缘豫 遥 表明 源 个
病株均受到 栽再蕴悦灾 的侵染袁同时也说明袁采自南疆
温室的 圆园 个番茄病株均受到双生病毒 栽再蕴悦灾 的
侵染遥
图 员 感病番茄样品双生病毒的 孕悦砸检测结果
云蚤早援 员 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 宰栽郧 遭赠 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 贼燥皂葬贼燥 泽葬皂责造藻泽
摇 摇 注院酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰孕院阳性对照 栽再蕴悦悦晕灾曰匀院健康植物对照曰晕院阴性对照曰员 耀缘院运杂圆鄄员 耀 运杂圆鄄缘曰远 耀员园院运再鄄员 耀 运再鄄缘曰员员 耀员缘院运酝鄄员 耀
运酝鄄缘曰员远 耀 圆园院匀再鄄员 耀 匀再鄄缘遥 晕燥贼藻院 酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 孕院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 栽再蕴悦悦晕灾曰 匀院 澡藻葬造贼澡赠 责造葬灶贼曰 晕院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 员 原 缘院 运杂圆鄄员 原
运杂圆鄄缘曰 远 原 员园院 运再鄄员 原 运再鄄缘曰 员员 原 员缘院 运酝鄄员 原 运酝鄄缘曰 员远 原 圆园院 匀再鄄员 原 匀再鄄缘援
圆援 圆 运杂圆鄄缘 基因组 阅晕粤的扩增与结构分析
对 运杂圆鄄缘 进行全基因组测序袁得到 阅晕粤全长为
圆 苑愿员 灶贼渊序列号院允匝愿园苑苑猿缘冤遥 序列分析表明袁运杂圆鄄缘
分离物具有典型的双生病毒基因组特征院闭合环状
的单链 阅晕粤袁共编码 远 个开放阅读框架渊韵砸云冤遥 病
毒链编码 圆 个 韵砸云袁分别是 粤灾员 和 粤灾圆遥 粤灾员 位于
核苷酸 猿园愿 耀 员 园愿源 位袁编码 悦孕蛋白曰粤灾圆 位于核苷
酸 员源愿 耀 源怨愿 位袁编码蛋白参与病毒移动遥 互补链编
码 源 个 韵砸云袁分别是 粤悦员尧粤悦圆尧粤悦猿 和 粤悦源遥 粤悦员
位于核苷酸 圆 远员缘 耀 员 缘源圆 位袁编码复制相关蛋白
砸藻责曰粤悦圆 位于核苷酸 员 远猿猿 耀 员 圆圆远 位袁编码转录激
活蛋白 栽则粤责曰粤悦猿 位于核苷酸 员 源愿缘 耀 员 园愿员 位袁编码
怨猿圆猿 期 王喜刚等院南疆温室番茄黄化曲叶病病毒种类的分子鉴定
复制增强蛋白 砸藻灶曰粤悦源 位于核苷酸 圆 源远源 耀 圆 员苑员
位袁编码蛋白参与病毒复制或转录调控遥在粤灾圆和
粤悦员 之间渊对应于核苷酸 圆 远员远 耀 员源苑 位冤含有 员 个
长 猿员猿 灶贼 的基因间隔区渊 蚤灶贼藻则早藻灶蚤糟 则藻早蚤燥灶袁陨砸冤遥 陨砸
区形成茎环结构袁茎序列富含 郧悦袁环序列由高度保
守的 怨 碱基野栽粤粤栽粤栽栽 辕 粤悦冶组成遥 陨砸 区含有双生
病毒滚环复制尧转录所需的必须元件袁包括 员 个 栽粤鄄
栽粤 月燥曾区袁位于 圆 远苑缘 耀 圆 远苑愿 灶贼袁参与转录调控曰圆 个
重复序列 郧郧栽郧栽悦袁分别位于核苷酸 圆远圆怨 耀 圆远猿源 位
和 圆 远远源 耀 圆 远远怨 位袁与 砸藻责蛋白结合有关遥
圆援 猿 运杂圆鄄缘 阅晕粤与其它双生病毒的同源性比较
将 运杂圆鄄缘 阅晕粤与其它 栽再蕴悦灾 的基因组进行比
对袁其同源性都在 怨愿援 怨豫以上袁其中与山东分离物
栽再蕴悦灾渊杂阅在月冤的同源性最高袁为 怨怨援 缘豫 袁而与其它
来自亚洲和非洲宰栽郧的序列同源性却很低 袁为
远愿援 猿豫 耀苑缘援 缘豫 遥 再将 运杂圆鄄缘 陨砸 区及 韵砸云 编码蛋
白的氨基酸与其它 栽再蕴悦灾分离物进行比较袁没有发
现明显的序列变异区袁即使在序列变异相对较大的
陨砸区仍然具有很高的序列同源性 渊表 员冤遥 基于
阅晕粤全序列构建系统关系树袁参与比较的 宰栽郧 形
成 圆 个大的进化分支袁所有 栽再蕴悦灾形成 员 个进化分
支袁其它 宰栽郧 形成 员 个分支曰在 栽再蕴悦灾 进化分支
上袁运杂圆鄄缘 与山东分离物形成 员 个亚分支袁表明 运杂圆鄄
缘 与其进化关系最近渊图 圆冤遥
表 员 运杂圆鄄缘 与其它双生病毒 阅晕粤核苷酸及氨基酸序列的同源性比较
栽葬遭造藻 员 孕藻则糟藻灶贼葬早藻 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 燥则 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 蚤凿藻灶贼蚤贼蚤藻泽 燥枣 阅晕粤 葬灶凿 藻灶糟燥凿藻凿
责则燥贼藻蚤灶泽 遭藻贼憎藻藻灶 运杂圆鄄缘 葬灶凿 燥贼澡藻则 遭藻早燥皂燥增蚤则怎泽藻泽 豫
病毒分离物摇
灾蚤则怎泽 蚤泽燥造葬贼藻摇
核苷酸序列
晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻
阅晕粤 陨砸
氨基酸序列
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻
粤灾员 粤灾圆 粤悦员 粤悦圆 粤悦猿 粤悦源
栽再蕴悦灾渊杂阅在月冤 怨怨援 缘 怨怨援 苑 员园园援 园 怨苑援 源 怨怨援 圆 怨怨援 猿 怨苑援 愿 怨怨援 园
栽再蕴悦灾渊郧怎葬泽葬增藻冤 怨怨援 源 怨怨援 园 怨怨援 远 员园园援 园 怨愿援 怨 怨怨援 猿 怨苑援 愿 怨苑援 怨
栽再蕴悦灾渊栽燥泽葬匀冤 怨怨援 圆 怨愿援 源 怨怨援 远 员园园援 园 怨愿援 园 怨愿援 缘 怨苑援 愿 怨远援 怨
栽再蕴悦灾渊月藻蚤躁蚤灶早冤 怨怨援 员 怨苑援 源 员园园援 园 员园园援 园 怨愿援 猿 怨苑援 愿 怨远援 猿 怨远援 怨
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猿 讨论
本试验从新疆喀什尧和田 圆 个区 源 个县采集了
圆园 个番茄样品袁通过 孕悦砸检测和基因组测序表明危
害南疆温室番茄的病毒种类为 栽再蕴悦灾遥 同时袁利用
阅晕粤茁的特异性引物 茁园员 和 茁园圆 经过多次 孕悦砸 都
没有检测到 阅晕粤茁分子袁这与已报道的 栽再蕴悦灾基因
组 阅晕粤没有 阅晕粤茁分子伴随的结果一致咱圆园 原 圆员暂 遥
序列分析显示袁运杂圆鄄缘 的基因组与其它地区发
生的 栽再蕴悦灾相比袁序列变异非常小遥 在澡葬灶早等咱圆圆暂对
郧藻灶月葬灶噪上的所有 栽再蕴悦灾进行全序列比对时发现袁
来自不同地区的 栽再蕴悦灾具有很高的序列同源性袁在
园源圆 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 圆 运杂圆鄄缘 与其它粉虱传双生病毒基于 阅晕粤核苷酸序列构建的系统关系树
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进化上非常保守遥 基因组的保守性说明世界各地发
生的 栽再蕴悦灾可能具有相同的进化来源遥 目前新疆
邻近省区还没有该病毒的报道袁运杂圆鄄缘 基因组与其
它地区报道的 栽再蕴悦灾序列同源性极高袁在进化上具
有相同的进化来源袁表明它可能是从国内其它地区
传入的遥
基因组的保守性同时也说明 栽再蕴悦灾 具有较强
的环境适应性遥 由 栽再蕴悦灾 引起的番茄黄化曲叶病
一直是在热带和亚热带地区发生袁但自 圆园园圆 年传入
我国以后袁其发生分布呈自南向北尧自东向西的蔓延
趋势袁不断地由热带尧亚热带地区向温带地区推进袁
甚至在纬度较高的山东省也发现了 栽再蕴悦灾 对番茄
的危害咱圆猿暂 遥 环境的改变并没有使 栽再蕴悦灾基因组发
生大的改变袁说明 栽再蕴悦灾能适应新的环境而生存遥
新疆位于亚欧大陆中部袁属于典型的温带大陆
型气候遥 如果 栽再蕴悦灾能适应新疆的环境而生存袁极
有可能造成更大的危害遥 因为就 栽再蕴悦灾 流行因素
而言袁新疆具备一定的发病条件袁一是近年烟粉虱发
生逐年加剧袁已成为新疆农田的重要害虫之一曰二是
新疆是我国最大的加工番茄生产基地袁单一化的种
植结构及长期连作有利于病害的发生流行袁如果
栽再蕴悦灾能够适应温带气候条件袁从温室进入大田尧
从南疆传到北疆将会对全疆加工番茄造成严重危
害袁因此需要引起高度重视和加强防范遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
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员源圆猿 期 王喜刚等院南疆温室番茄黄化曲叶病病毒种类的分子鉴定
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咱圆猿暂 孙作文袁杨进绪袁张美珍袁等援 山东省番茄黄化曲叶病毒病
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