全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（１）： ４０ － ４７ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０１􀆰 ００６
基金项目：国家自然科学基金（３１１０１６７４），山东省“泰山学者”建设工程专项
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒｓ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｗａｎｆａｎｇｈａｏ＠ ｃａａｓ． ｃｎ， ｄｆｃｈｅｎｇ＠ ｉｐｐｃａａｓ． ｃｎ
收稿日期： ２０１５ － ０６ － ０８
烟粉虱 ＭＥＤ隐种蜕皮激素受体基因 ｃＤＮＡ克隆、
转录与组织表达
杨春红１ 　 龙楚云１ 　 郭建洋１ 　 程登发１∗　 万方浩１，２∗
（１．中国农业科学院植物保护研究所， 植物病虫害生物学国家重点研究室， 北京 １００１９３；
２．青岛农业大学农学与植物保护学院， 青岛 ２６６１０９）
摘要： 蜕皮激素受体（ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥｃＲ）是调控昆虫蜕皮、变态和生殖等过程中基因表达的重
要调控因子。 为研究 ＥｃＲ在烟粉虱 Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ生长发育中的作用，利用 ＲＴ⁃ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ 等技
术扩增了烟粉虱 ＭＥＤ 隐种 ＥｃＲ 基因的 ｃＤＮＡ 全长序列，并利用实时荧光定量 ＰＣＲ 技术检测其在
烟粉虱不同发育时期相对表达量的变化。 ＢｔＥｃＲ ｃＤＮＡ 序列全长２ ８４４ ｂｐ，含有一个１ ５１８ ｂｐ的开
放阅读框，共编码 ５０５ 个氨基酸，预测蛋白分子量为 ５６ ｋＤ，等电点为 ６􀆰 ４３，含有特殊结构功能域：
ＤＮＡ结合域（ＤＢＤ＿ＥｃＲ）和配体结合域（ＬＢＤ＿ＥｃＲ），该序列编码的蛋白质序列与其它已报道的昆
虫 ＥｃＲ蛋白序列具有很高的相似性，命名为 ＢｔＥｃＲ（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号： ＫＲ５３４７７４）。 ＢｔＥｃＲ 在 ＭＥＤ
隐种若虫、雌成虫各发育时期均有表达，若虫期在伪蛹前期达到最高值，成虫期呈现先升高后降低
的趋势，且在羽化后第 ７ 天达到最高值，约为羽化第 １ 天的 ２３ 倍。 研究结果为揭示 ＢｔＥｃＲ 在烟粉
虱整个生长发育过程中的作用提供了重要依据。
关键词： 烟粉虱； 蜕皮激素受体； 核受体； 表达谱； 荧光定量 ＰＣＲ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ，ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ
ｆｒｏｍ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ （Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ： Ａｌｅｙｒｏｄｉｄａｅ）
Ｙａｎｇ Ｃｈｕｎｈｏｎｇ１ 　 Ｌｏｎｇ Ｃｈｕｙｕｎ１ 　 Ｇｕｏ Ｊｉａｎｙａｎｇ１ 　 Ｃｈｅｎｇ Ｄｅｎｇｆａ１∗ 　 Ｗａｎ Ｆａｎｇｈａｏ１，２∗
（１． Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｑｉｎｇｄａｏ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６１０９， Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ ＥｃＲ） ｉｓ ａ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ｍｅｔａｍｏｒｐｈｏｓｉｓ ａｎｄ
ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｓｅｃｔｓ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｆｉｎｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥｃＲ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ
（ＭＥＤ）， ｔｈｅ ｆｕｌｌ⁃ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ＥｃＲ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｂｙ ｂｏｔｈ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ＲＴ⁃ＰＣＲ） ａｎｄ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ （ＲＡＣＥ） ｍｅｔｈｏｄｓ， ａｎｄ ｔｈｅ
ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ＭＥＤ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ （ｑＰＣＲ）． Ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｃＤＮＡ （２ ８４４ ｂｐ） ｏｆ ＥｃＲ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｂ． ｔａｂａｃｉ ＭＥＤ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａｎ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ （ ＯＲＦ） ｏｆ １ ５１８ ｂｐ， ｅｎｃｏｄｉｎｇ ５０５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ， ｗｉｔｈ ａ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ５６ ｋＤ ａｎｄ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ６􀆰 ４３． Ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｈａｄ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉａｌ ｄｏｍａｉｎｓ：
ｔｈｅ ＤＮＡ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＤＢＤ＿ＥｃＲ） ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｇａｎｄ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｅｃｄｙｓｏｎｅ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＬＢＤ＿ＥｃＲ）． Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｄ
ｈｉｇｈ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ＥｃＲ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｉｎｓｅｃｔ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｔｈｉｓ ｃＤＮＡ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ａｓ ＢｔＥｃＲ （ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
ｎｏ． ＫＲ５３４７７４）． ｑＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＢｔＥｃＲ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ａｌｌ ｉｎｓｔａｒｓ ｏｆ ｎｙｍｐｈ ａｎｄ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｆｅｍａｌｅ ａｄｕｌｔｓ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＥｃＲ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ
ｐｓｅｕｄｏ⁃ｐｕｐａｅ ｓｔａｇｅ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｓｔａｒ ｎｙｍｐｈｓ． Ｐｅａｋ ｌｅｖｅｌ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ７ ｄ ａｆｔｅｒ ｅｃｌｏｓｉｏｎ， ｗｈｉｃｈ
ｗａｓ ａｂｏｕｔ ２３ ｔｉｍｅｓ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ａｔ １ ｄ ａｆｔｅｒ ｅｃｌｏｓｉｏｎ． Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｖａｌｕａｂｌｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｒｅｖｅａｌｉｎｇ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＢｔＥｃＲ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｗｈｉｔｅｆｌｙ ｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ； ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ； ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ； ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ
　 　 蜕皮激素受体（ ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥｃＲ）是参与
调控蜕皮激素活性的重要蛋白（Ｔａｎ ＆ Ｐａｌｌｉ，２００８），
属于核受体（ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＮＲ）超级家族。 ＥｃＲ
只存在于无脊椎动物体内，是昆虫发育、变态和生殖
过程中关键基因转录调控的控制因子（Ｔｒｕｍａｎ ＆
Ｒｉｄｄｉｆｏｒｄ，２００２；Ｍａｒｃｈｌｅｒ⁃Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）。 ＥｃＲ
类属的核受体基因家族是一类依赖配位体的转录因
子（Ｅｓｃｒｉｖａ ｅｔ ａｌ． ，２００４），在昆虫体内，蜕皮激素通
过结合到由 ＥｃＲ 和超螺旋蛋白 （ ｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅ ｐｒｏ⁃
ｔｅｉｎ，ＵＳＰ）构成的异质二聚体上来发挥调控作用
（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ． ，１９９３；Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ． ，２００９）。 ＥｃＲ 和 ＵＳＰ
形成的二聚体通过核酸结合位点结合调控靶向基因
转录并影响下游基因表达（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ． ，１９９３）。 ＥｃＲ
基因主要含有 ＤＮＡ 结合域（ＤＮＡ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ
ｅｃｄｙｓｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＤＢＤ＿ＥｃＲ）和配体结合域（ ｌｉｇａｎｄ
ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＬＢＤ＿ＥｃＲ）２ 个
功能结构域，每个结构域含有核酸、锌、功能肽等结
合位点。 这些蜕皮激素受体基因通常编码不同的同
型异构体，如在黑腹果蝇 Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ中，
ＥｃＲ编码 ３ 个异构体（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９７），而在西
方蜜蜂 Ａｐｉｓ ｍｅｌｌｉｆｅｒａ中则编码 ２ 个异构体（Ｍｅｌｌｏ ｅｔ
ａｌ． ，２０１４），且都含有 ＤＮＡ 结合域和配体结合域
（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９７）。 目前，已克隆获得多种昆虫
的蜕皮激素受体基因并对基因的转录表达动态进行
了分析，如德国小蠊 Ｂｌａｔｔｅｌｌａｇｅｒ ｍａｎｉｃａ（Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ． ，
２００６）、赤拟谷盗 Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍｃａ ｓｔａｎｅｕｍ（ Ｔａｎ ＆ Ｐａｌｌｉ，
２００８）、褐飞虱 Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ ｌｕｇｅｎｓ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１２）、
黑腹果蝇（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９７）、太平洋折翅蠊 Ｄｉｐ⁃
ｌｏｐｔｅｒａ ｐｕｎｃｔｕａｔａ（Ｈｕｌｔ ｅｔ ａｌ． ，２０１５），ＥｃＲ 被证实与
上述昆虫的胚胎发育、幼虫蜕皮、蛹的形成、组织的
分化、翅的形成和生殖等密切相关。 昆虫生长发育
过程中，蜕皮和变态等生理过程都受到蜕皮激素的
严格调控，ＥｃＲ是蜕皮激素的作用靶标，在调控昆虫
变态、蜕皮以及繁殖等生命过程中处于关键启动位
置，对于完成昆虫生长发育及繁殖过程具有非常重
要的作用。 当昆虫的大脑细胞分泌促前胸腺素后，
促使前胸腺合成分泌蜕皮激素，蜕皮激素被释放到
血淋巴中，之后蜕皮激素受体与之结合，引发蜕皮过
程中转录因子和效应基因一系列级联反应，最终完
成蜕皮过程（Ｐａｌｌｉ ＆ Ｒｅｔｎａｋａｒａｎ，２００１）。 蜕皮激素
受体是昆虫变态发育等生命活动中重要的调控因
子，具有高度的灵敏性和种类特异性，因此被认为是
开发环境友好型杀虫剂的重要靶标 （ Ｙｕ ｅｔ ａｌ． ，
２０１４），深入了解 ＥｃＲ 的功能及其对上下游分子级
联反应的调控，对于揭示蜕皮激素转录调控机制和
开发新的害虫防控产品具有重要意义。
烟粉虱 Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ （Ｇｅｎｎａｄｉｕｓ）ＭＥＤ 隐种是
入侵我国的重要农业害虫，因其取食的寄主植物范围
广、能传播多种植物病毒病，已经对农业生产造成了
严重威胁（万方浩等，２００９；Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１２）。 且其体
型小、主要在植物叶片背部取食植物汁液，物理防控
方法难以达到理想的控制效果，而化学杀虫剂的大量
使用使烟粉虱产生了很强的抗药性，同时，传统的化
学杀虫剂因环境污染和对人类健康的影响也备受争
议，因此挖掘环境友好的新型杀虫剂迫在眉睫。 昆虫
蜕皮激素是一类只作用于昆虫的转录调控因子，为了
揭示烟粉虱蜕皮激素受体的功能，本试验克隆获得了
烟粉虱蜕皮激素受体基因并对其转录表达进行了分
析，以期为明确烟粉虱激素调控机理奠定基础。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试植物：番茄 Ｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．品种
中杂 ９号种子，购自北京中蔬园艺良种研究开发中
心。 于温室用育苗钵育苗，幼苗长到 ２ ～ ３ 片真叶时
移栽到花盆，长到 ５ ～７片真叶时用于饲养烟粉虱。
供试昆虫：试验所用烟粉虱 ＭＥＤ隐种为本实验
室长期饲养种群。 在温度 ２７ ± １℃、ＲＨ（６０ ± ５）％ 、
光周期 １４ Ｌ ∶ １０ Ｄ的智能人工气候箱内养虫笼（４０
ｃｍ ×６０ ｃｍ × ７０ ｃｍ）中用番茄苗饲养，分别取不同
龄期的若虫和成虫作为试验材料。
试剂：ＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔｓ，德国 Ｑｉａｎｇｅｎ 公司；
１４１ 期 杨春红等： 烟粉虱 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因 ｃＤＮＡ克隆、转录与组织表达
ＳＭＡＲＴＴＭ ＲＡＣＥ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ，美国 Ｃｌｏｎｔｅｃｈ 公
司；琼脂糖凝胶 ＤＮＡ 回收试剂盒，天根生化科技
（北京）有限公司；Ｓｕｐｅｒ Ｓｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ⁃Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
Ｓｙｓｔｅｍ和 ＰＣＲ相关试剂，北京全式金生物技术有限
公司；Ｑｕａｎｔｉｔｙ ＰＣＲ Ｋｉｔ，美国 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ 公司。 引物由
生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
仪器：ＶｅｒｉｔｉＴＭ９６⁃ｗｅｌｌ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅ ９９０２ 型 ＰＣＲ
仪、ＡＢＩ７５００ 荧光定量 ＰＣＲ 仪，美国 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ⁃
ｔｅｍｓ公司；ＳＩＧＭＡ１⁃１４ 型常温离心机，德国 Ｓｉｇｍａ 公
司；Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５４２４Ｒ 高速冷冻离心机，德国 Ｅｐｐｅｎ⁃
ｄｏｒｆ公司；Ｇｅｌ ＤｏｃＴＭＸＲ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｈｏｏｄ ＩＩ 型凝胶成
像系统，美国 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 烟粉虱 ＭＥＤ隐种 ＥｃＲ基因的克隆
随机取 ２００ 头同一日龄的烟粉虱 ＭＥＤ 隐种成
虫，在 － ３０℃冰箱低温麻醉后放入研磨器中，按照
ＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔｓ 说明书进行 ＲＮＡ 提取，并按照
Ｓｕｐｅｒ Ｓｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ⁃Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ 的说明反转
录获得 ｃＤＮＡ。 利用 ＧｅｎＢａｎｋ 烟粉虱转录组信息
（登录号 ＳＲＸ４２３２８８）和昆虫 ＥｃＲ 的保守区域设计
扩增引物 ＥｃＲ ＭＦ 和 ＥｃＲ ＭＲ，引物序列如表 １ 所
示， 进行中间片段 ＰＣＲ 扩增。 ＰＣＲ 反应条件为：
９４℃ ３ ｍｉｎ，９４℃ ３０ ｓ，５６℃ ３０ ｓ，７２℃ ３０ ｓ，３５ 个循
环，７２℃ １０ ｍｉｎ。 ３′端和 ５′端的 ＲＡＣＥ 反应按照
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ的 ＳＭＡＲＴＴＭＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ
试剂盒说明书进行。 ３′端以 ３′⁃ＲＡＣＥ ＣＤＳ Ｐｒｉｍｅｒ Ａ
为反转录引物，５′端以 ５′⁃ＲＡＣＥ ＣＤＳ Ｐｒｉｍｅｒ Ａ 和
ＳＭＡＲＴＩＩＴＭ Ａ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ为反转录引物，在 ＳＭ⁃
ＡＲＴＳｃｒｉｂｅ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ作用下分别合成 ３′⁃
ＲＡＣＥ和 ５′⁃ＲＡＣＥ的 ｃＤＮＡ第一链。
表 １ 本研究所用基因克隆及 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ引物
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｑＲＴ⁃ＰＣＲ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
基因
Ｇｅｎｅ
引物用途　 　 　 　 　
Ｕｓｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ　 　 　 　
引物序列
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ （５′⁃３′）
ＢｔＥｃＲ 扩增引物 ＥｃＲ⁃ＭＦ ＴＣＣＡＧＴＧＴＧＣＴＧＴＧＡＡＧＣＧＡＡ
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｉｍｅｒ ＥｃＲ⁃ＭＲ ＡＡＣＡＡＣＡＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＣ
３′ＲＡＣＥ ＥｃＲ⁃３′ＲＡＣＥ ｏｕｔｅｒ ｐｒｉｍｅｒ ＡＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＧＡＡＧＧＴＴＧＡＧＡＡＧ
ＥｃＲ⁃３′ＲＡＣＥ ｉｎｎｅｒ ｐｒｉｍｅｒ ＴＡＧＡＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＴＣＧ
５′ＲＡＣＥ ＥｃＲ⁃５′ＲＡＣＥ ｏｕｔｅｒ ｐｒｉｍｅｒ ＣＴＣＴＴＣＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＧＴＡＡＴＧＧＧ
ＥｃＲ⁃５′ＲＡＣＥ ｉｎｎｅｒ ｐｒｉｍｅｒ ＣＣＡＴＣＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＣＧＴＣＧＴ
ｑＲＴ⁃ＰＣＲ ＥｃＲ⁃Ｆ ＣＡＣＣＴＴＴＣＴＡＴＴＣＴＴＣＡＧＣＴＴＣ
ＥｃＲ⁃Ｒ ＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＣＣＡＴＴＧＴＡＡ
β⁃ａｃｔｉｎ ｑＲＴ⁃ＰＣＲ β⁃ａｃｔｉｎ Ｆ ＴＣＡＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＴＧＡＧＡＧＡ
β⁃ａｃｔｉｎ Ｒ ＣＴＣＧＴＧＧＡＴＡＣＣＧＣＡＡＧＡＴＴ
　 　 根据已获得的 ＥｃＲ 中间片段设计 ３′ＧＳＰ 引物
和 ５′ＧＳＰ 引物。 以 ＵＰＭ 和 ３′ＧＳＰ 为引物扩增基因
的 ３′端，３′ＲＡＣＥ反应程序如下：９５℃ ５ ｍｉｎ；９４℃ ３０
ｓ，６５℃ ３０ ｓ，７２℃ ２ ｍｉｎ，３５ 个循环；７２℃ １０ ｍｉｎ，
４℃保存。 以 ＵＰＭ 和 ５′ＧＳＰ 为引物扩增基因的 ５′
端，５′ＲＡＣＥ反应程序：９５℃ ５ ｍｉｎ，９４℃ ５ ｓ，６７℃ １０
ｓ，７２℃ １５０ ｓ，５ 个循环；９４℃ ５ ｓ，６４℃ １０ ｓ，７２℃１５０
ｓ，５ 个循环；９４℃ ５ ｓ，６２℃ １０ ｓ，７２℃ １５０ ｓ，３０ 个循
环；７２℃ １０ ｍｉｎ，４℃保存。 再将 ５′ＲＡＣＥ 的 ＰＣＲ 产
物用 ｄｄＨ２Ｏ稀释 １００ 倍后，取 １ μＬ 稀释产物作为
二次 ＰＣＲ 反应的模板，以 ５′ＧＳＰ 与 ＮＵＰ 为引物进
行二次 ＰＣＲ 扩增。 反应程序为：９４℃ ５ｍｉｎ；９４℃ ４５
ｓ，６２℃ ３０ ｓ，７２℃ １６０ ｓ，３０ 个循环；７２℃ １０ ｍｉｎ，４℃
保存。 ＰＣＲ 扩增产物以 １􀆰 ０％琼脂糖凝胶电泳检测
后，将目的条带按照 ＴＩＡＮｇｅｌ Ｍｉｄｉ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ 说
明书进行纯化回收，纯化后的 ＰＣＲ 产物连接到
ｐＥＡＳＹ⁃Ｔ３ 载体中，转化 Ｔｒａｎｓ⁃Ｔ１ 感受态细胞，蓝白
斑筛选，挑取阳性克隆送北京三博远志生物技术有
限责任公司测序。
１􀆰 ２􀆰 ２ 序列分析与分子进化树构建
采用 ＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒ （ ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｎｃｂｉ． ｎｌｍ． ｎｉｈ．
ｇｏｖ ／ ｇｏｒｆ ／ ｇｏｒｆ． ｈｔｍｌ）预测开放阅读框；用 ＮＣＢＩ 的
ＢＬＡＳＴＰ进行蛋白同源性比较分析；使用 Ｃｏｍｐｕｔｅ ｐＩ ／
ＭＷ（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｅｘｐａｓｙ． ｏｒｇ ／ ｔｏｏｌｓ ／ ｐｉ＿ｔｏｏｌ． ｈｔｍｌ）计算
蛋白质的等电点及分子量；利用 ＳＯＳＵＩ（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｂｐ．
ｎｕａｐ． ｎａｇｏｙａ⁃ｕ． ａｃ． ｊｐ ／ ｓｏｓｕｉ ／ ）进行亲水性和跨膜分
析；利用 ＴａｒｇｅｔＰ （ ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ． ｃｂｓ． ｄｔｕ． ｄｋ ／ ｓｅｒｖｉｃｅｓ ／
ＳｉｇｎａｌＰ ／ ）预测蛋白质信号肽；利用 ＳＭＡＲＴ（ｈｔｔｐ： ／ ／
ｓｍａｒｔ． ｅｍｂｌ⁃ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ． ｄｅ ／ ）分析蛋白结构域；使用
ＤＮＡＭＡＮ ６􀆰 ０进行多重序列比对；利用 ＭＥＧＡ ６􀆰 ０ 软
２４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
件以邻接法构建系统进化树（Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）。
１􀆰 ２􀆰 ３ 荧光定量 ＰＣＲ
图 １ 烟粉虱ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因（ＢｔＥｃＲ）ｃＤＮＡ全长及推导氨基酸序列
Ｆｉｇ． １ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＢｔＥｃＲ ｃＤＮＡ ｏｆ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ＭＥＤ　
将 ４ ～ ８ 株清洁后的番茄苗放入干净的养虫笼
内，接入２ ０００ ～ ３ ０００头 ＭＥＤ 成虫，产卵 ２４ ｈ 后移
除成虫，获得带卵株，置于新的养虫笼中，开始准备
收集不同发育时期的样品。 共设置以下几个时间
点：１、２、３ 龄若虫，伪蛹前、后期，羽化后 １、３、５、７、９、
１１、１３ ｄ。 每一时间点分别取 ２００ ～ ３００ 头若虫或 ５０
头雌成虫提取总 ＲＮＡ，并反转录获得 ｃＤＮＡ，作为荧
光定量 ＰＣＲ 模板。 不同时期样品均重复 ３ 次。 以
β⁃ａｃｔｉｎ为内参基因，采用比较 ＣＴ 值的相对定量方
法对 ＥｃＲ 在不同时间不同组织的转录水平表达进
行分析。 ＥｃＲ和 β⁃ａｃｔｉｎ两个基因检测的引物如表 １
所示。 荧光定量 ＰＣＲ 反应采用 Ｑｕａｎｔｉｔｙ ＰＣＲ Ｋｉｔ
（Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ）试剂盒，反应体系为 ２０ μＬ。 ＰＣＲ 反应用
两步法标准程序：９４℃ ３ ｍｉｎ；９４℃ ３０ ｓ，５６℃ ３０ ｓ，
７２℃ ３２ ｓ，３８ 个循环。 每个样品设 ３ 次重复。 ＥｃＲ
在各阶段的相对表达量，以 １ 龄若虫中的表达量作
为 １，选取 β⁃ａｃｔｉｎ 作为标准化内参基因，用 ２ － ΔΔＣｔ法
计算相对表达量。
１􀆰 ３ 数据分析
采用 ＳＡＳ ８􀆰 ０１ 软件进行数据的统计分析，
ＡＮＯＶＡ方法进行方差分析，最小显著差异（ＬＳＤ）法
进行显著性检验。 相对表达量的计算采用 ２ － ΔΔｃｔ方
法，根据所得数据作柱形图。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 烟粉虱ＭＥＤ隐种 ＥｃＲ基因的克隆
根据 ＭＥＤ转录组数据库中的序列设计引物，采
用反转录 ＰＣＲ扩增得到目的中间片段，进一步进行
３４１ 期 杨春红等： 烟粉虱 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因 ｃＤＮＡ克隆、转录与组织表达
５′ＲＡＣＥ和 ３′ＲＡＣＥ 扩增，得到两端序列后拼接，再
图 ２ 烟粉虱ＭＥＤ 隐种 ＢｔＥｃＲ基因推导氨基酸序列与其它昆虫 ＢｔＥｃＲ比对分析
Ｆｉｇ． ２ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＢｔＥｃＲ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ＭＥＤ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｉｎｓｅｃｔｓ
红色方框表示 ＤＮＡ结合域，绿色方框表示配体结合域，黑色背景表示序列同源性为 １００％ ，红色背景表示序列同源性
大于 ７５％ ，蓝色背景表示序列同源性大于 ５０％ 。 ＥｃＲ 来源及 Ｇｅｎｅ ＩＤ 分别为：大猿叶甲 （５７２４５５８１０）、普通草蛉
（３１３５０７４８３）、太平洋折翅蠊（３７４７１１６８５）、东亚飞蝗（４４０５７９９）、松墨天牛（３７３１５９２６１）、稻绿蝽 （３１２１９０９４３）、人体虱
（２１２５１５３２４）、赤拟谷盗（１２１３０８１４６）、黄脸油葫芦（３２３３８１０５４）。 Ｒｅｄ ｆｒａｍｅ ｉｓ ｔｈｅ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎ ｆｒａｍｅ ｉｓ
ｔｈｅ ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ， ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｅｑｕａｌｅｄ ｔｏ １００％ ａｒｅ ｓｈａｄｅｄ ｉｎ ｂｌａｃｋ， ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ７５％ ａｒｅ ｓｈａｄｅｄ ｉｎ ｒｅｄ， ｉｄｅｎｔｉｔｙ
ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ５０％ ａｒｅ ｓｈａｄｅｄ ｉｎ ｂｌｕｅ． Ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ＥｃＲｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｇｅｎｅ ＩＤ ｎｕｍｂｅｒｓ： Ｃｏｌａｐｈｅｌｌｕｓ ｂｏｗｒｉｎｇｉ （５７２４５５８１０）， Ｃｈｒｙｓｏｐｅｒｌａ
ｃａｒｎｅａ （３１３５０７４８３）， Ｄｉｐｌｏｐｔｅｒａ ｐｕｎｃｔａｔａ （３７４７１１６８５）， Ｌｏｃｕｓｔａ ｍｉｇｒａｔｏｒｉａ （４４０５７９９）， Ｍｏｎｏｃｈａｍｕｓ ａｌｔｅｒｎａｔｕｓ （３７３１５９２６１），
Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ （３１２１９０９４３）， Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ ｈｕｍａｎｕｓ ｃｏｒｐｏｒｉｓ （２１２５１５３２４）， Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍ （１２１３０８１４６）， Ｔｅｌｅｏｇｒｙｌｌｕｓ ｅｍｍａ
（３２３３８１０５４）． 　
设计引物，经反转录 ＰＣＲ 扩增，测序验证后成功克
隆到 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体 ｃＤＮＡ 序列，大小为
２ ８４４ ｂｐ，开放阅读框长１ ５１８ ｂｐ，其中 ５′端非编码
区长 ３２４ ｂｐ，３′端非编码区长 １ ００２ ｂｐ（图 １），共编
码 ５０５ 个氨基酸，预测蛋白分子量为 ５６ ｋＤ，等电点
为 ６􀆰 ４３。 利用在线工具 ＴａｒｇｅｔＩＰ 对 ＭＥＤ ＥｃＲ 蛋白
的信号肽进行分析，发现克隆到的序列没有明显的
信号肽结构（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号 ＫＲ５３４７７４，ＧｅｎＢａｎｋ
将于 ２０１９ 年 ５ 月 ４ 日之后开始释放该序列）。
２􀆰 ２ ＢｔＥｃＲ ｃＤＮＡ序列分析及系统进化树构建
在 ＮＣＢＩ上进行蛋白质比对后发现，ＭＥＤ 隐种
ＥｃＲ基因含有特殊结构功能域：ＤＮＡ 结合域（ＤＢＤ＿
ＥｃＲ）和配体结合域（ＬＢＤ＿ＥｃＲ）（图 ２）。 将克隆的
ＥｃＲ基因所推导的氨基酸序列与其它物种的同源序
列进行多重比对，发现 ＭＥＤ 隐种的 ＥｃＲ 包含的 ２
个功能域中囊括许多结合位点，如锌结合位点、多肽
结合位点、ＤＮＡ 结合位点以及配体结合位点等（图
２），经在线软件分析该类蛋白都不具备跨膜结构。
序列相似性比对发现，ＥｃＲ 基因推导的氨基酸序列
与其它物种同源基因编码的 ＥｃＲ 蛋白序列相似性
非常高，与半翅目的稻绿蝽 Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ，直翅目
的黄脸油葫芦 Ｔｅｌｅｏｇｒｙｌｌｕｓ ｅｍｍａ，鞘翅目的松墨天牛
Ｍｏｎｏｃｈａｍｕｓ ａｌｔｅｒｎａｔｕｓ、赤拟谷盗和大猿叶甲 Ｃｏｌａｐｈ⁃
ｅｌｌｕｓ ｂｏｗｒｉｎｇｉ等昆虫的相似率达到 ８０％以上。 系统
进化分析结果表明，ＢｔＥｃＲ 与稻绿蝽、绿盲蝽 Ａｐｏｌｙ⁃
４４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
图 ３ 基于邻接法构建的烟粉虱ＭＥＤ 隐种 ＢｔＥｃＲ基因与其相关种的系统发育树
Ｆｉｇ． ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ＢｔＥｃＲ ｉｎ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ＭＥＤ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｓｅｃｔｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ
　
ｇｕｓ ｌｕｃｏｒｕｍ、灰飞虱 Ｌａｏｄｅｌｐｈａｘ ｓｔｒｉａｔｅｌｌｕｓ、白背飞虱
Ｓｏｇａｔｅｌｌａ ｆｕｒｃｉｆｅｒａ 四种半翅目昆虫的 ＥｃＲ 聚为一大
支（图 ３），说明昆虫 ＥｃＲ 具有较好的保守性。 表明
此蛋白与其它物种的 ＥｃＲ 属于同一家族，将其命名
为 ＢｔＥｃＲ。
２􀆰 ３ ＢｔＥｃＲ在ＭＥＤ隐种不同发育阶段的表达特性
ＥｃＲ基因在 ＭＥＤ隐种若虫、雌成虫各发育时期
均有表达，在若虫各阶段的相对表达量随着龄期的
增长均呈先增高后降低趋势，在烟粉虱伪蛹前期
（未形成红眼）达到最高值，在伪蛹后期（红眼形成
后）基因转录水平降低（图 ４）。 在成虫期的相对表
达量随日龄的增长，总体上呈先增高后降低趋势。
ＥｃＲ基因转录水平在羽化后第 ７ 天达到成虫期的最
高值，约是第 １ 天表达量的 ２３ 倍，随后逐渐降低（图
４）；ＥｃＲ基因在烟粉虱不同发育阶段的总体表达趋
势为若虫期大于成虫初期，成虫中期大于若虫期。
３ 讨论
本研究首次克隆得到烟粉虱ＭＥＤ隐种 ＥｃＲ基因
ｃＤＮＡ全长序列。 通过对烟粉虱 ＭＥＤ隐种 ＥｃＲ蛋白
进行保守区域分析，发现该蛋白包含 ２ 个核受体蛋白
家族典型的结构域：ＤＮＡ 结合域和配体结合域，这 ２
个结构域是核受体中 ２个最保守的结构域，在研究中
常被作为受体基因鉴定的典型结构序列（Ｗｉｃｋｅｒｔ ＆
Ｓｅｌｂｉｇ，２００２）。 序列相似性比对分析发现，该蛋白序
列与其它昆虫的 ＥｃＲ 蛋白序列具有很高的相似性，
与同为半翅目的稻绿蝽等昆虫的相似性达 ８０％以
上，表明所克隆的基因属于 ＥｃＲ家族。
本试验结果发现，烟粉虱 ＥｃＲ 蛋白没有信号肽
和跨膜结构，说明该蛋白属于非分泌型蛋白，这一特
殊缺失可能与该类蛋白属于转录调控因子有关。 对
ＢｔＥｃＲ进行蛋白功能基序分析，发现其具有多个功
能位点，例如锌结合位点、多肽结合位点等，其结构
特征与其具有特异的识别功能有关，该结果与在其
它昆虫中的研究结果相同（Ｍａｒｅｋ ｅｔ ａｌ． ，２００４）。 这
些化学修饰位点均具有重要的生物学意义，将为进
一步研究烟粉虱 ＭＥＤ隐种 ＢｔＥｃＲ基因的定位、基因
表达调控以及生理功能研究等多方面的工作提供
５４１ 期 杨春红等： 烟粉虱 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因 ｃＤＮＡ克隆、转录与组织表达
图 ４ 烟粉虱ＭＥＤ 隐种各发育时期 ＢｔＥｃＲ ｍＲＮＡ
转录水平的定量分析
Ｆｉｇ． ４ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＢｔＥｃＲ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ
ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ｉｎ Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ ＭＥＤ
１Ｌ： １ 龄若虫； ２Ｌ： ２ 龄若虫； ３Ｌ： ３ 龄若虫； ４⁃１：
伪蛹前期（未形成红眼）； ４⁃２： 伪蛹后期（具红眼）。 １、
３、５、７、９、１１、１３ 分别表示羽化后的天数。 图中数据为平
均数 ±标准误。 柱上不同字母表示基因表达量经 ＬＳＤ
法检验在不同龄期差异显著（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 １Ｌ： １ｓｔ ｉｎｓｔａｒ
ｎｙｍｐｈ； ２Ｌ： ２ｎｄ ｉｎｓｔａｒ ｎｙｍｐｈ； ３Ｌ： ３ｒｄ ｉｎｓｔａｒ ｎｙｍｐｈ； ４⁃１：
４ｔｈ ｉｎｓｔａｒ ｎｙｍｐｈ ｗｉｔｈｏｕｔ ｒｅｄ ｅｙｅ； ４⁃２： ｐｓｅｕｄｏ⁃ｐｕｐａ ｗｉｔｈ
ｒｅｄ ｅｙｅ． １， ３， ５， ７， ９， １１， １３： ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｅｃｌｏｓｉｏｎ． Ｄａｔａ
ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＥ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ａｂｏｖｅ ｂａｒｓ ｉｎ⁃
ｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ
ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ．
　
基础。
根据选取的各种昆虫 ＥｃＲ 氨基酸序列构建的
系统进化树较正确地反映了昆虫中该基因的进化关
系，系统进化分析显示 ＢｔＥｃＲ 与其它半翅目昆虫的
ＥｃＲ聚为一大支，这预示着 ＥｃＲ 在物种进化过程中
非常保守，尤其是它的 ＤＮＡ结合域，序列决定结构，
结构决定功能，ＥｃＲ 蛋白在序列的保守性上说明它
们在结构和功能上可能具有一定的相关性，从而也
进一步说明获得的 ＥｃＲ 基因属于核受体蛋白家族，
所编码的蛋白是 ＥｃＲ蛋白。
蜕皮激素受体基因编码多个异构体，如在黑腹
果蝇中编码 ３ 个异构体（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９７），而在
西方蜜蜂中编码 ２ 个异构体（Ｍｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１４），不
同异构体功能不同。 Ｍｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ． （２０１４）发现异构体
Ａ主要在蜜蜂幼虫和蛹发育过程中高表达，而异构
体 Ｂ 主要在胚胎发育过程中高表达，暗示在不同发
育时期可能存在不同的调控作用。 本试验克隆的烟
粉虱 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因 ＢｔＥｃＲ 是否也存
在其它异构体，还有待进一步证实。
本试验通过对不同发育时期的 ＥｃＲ 转录水平
比较发现，若虫期的转录水平高于成虫初期，成虫中
期的转录水平高于若虫期，该结果与马康生等
（２０１３）在麦红吸浆虫 Ｓｉｔｏｄｉｐｌｏｓｉｓ ｍｏｓｅｌｌａｎａ 中的研
究结果相似。 以往研究证明无论是雄虫求爱（Ｇａｎ⁃
ｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ，２００７；Ｄａｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ． ，２００９；Ｉｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ． ，
２００９）还是卵子发生（Ｃａｒｎｅｙ ＆ Ｂｅｎｄｅｒ，２０００）等繁
殖相关的活动发生时 ＥＣＲ 的表达都会升高，说明
ＥｃＲ在昆虫繁殖过程中发挥着重要作用。 而且，
Ａｂｌｅｓ ｅｔ ａｌ． （２０１５）最新研究表明，蜕皮激素受体家
族基因 Ｅ７８ 能调控果蝇成虫期卵母细胞的形成和
滤泡细胞的发育与凋亡，进一步说明了蜕皮激素受
体家族基因在昆虫发育和生殖过程中的关键调控
作用。
此外，蜕皮激素受体被认为是很有潜力的控制
害虫的靶标因子，Ｗｕ ｅｔ ａｌ． （２０１２）研究表明使用双
联 ＲＮＡ 沉默蜕皮激素受体基因影响了灰飞虱翅的
形成，而 Ｙｕ ｅｔ ａｌ． （２０１４）研究同样发现，沉默蜕皮
激素受体基因导致褐飞虱后代数量和存活率均显著
下降。 本试验结果将为后续继续研究烟粉虱体内蜕
皮激素的调控机理和筛选控制烟粉虱的新靶标奠定
基础。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ａｂｌｅｓ ＥＴ， Ｂｏｉｓ ＫＥ， Ｇａｒｃｉａ ＣＡ， Ｄｒｕｍｍｏｎｄ⁃Ｂａｒｂｏｓａ Ｄ． ２０１５．
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ｎｉｃｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ． Ｄｅｖｅｌｏｐ⁃
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ｔｙｐｅｓ ｓｕｐｐｏｒｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒｅ⁃
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６４ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
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［马康生， 李伯辽， 陈浩， 仵均祥． ２０１３． 麦红吸浆虫蜕皮
激素受体（ＥｃＲ）基因的克隆与分析表达． 昆虫学报， ５６
（６）： ６０５ － ６１１］
Ｍａｒｃｈｌｅｒ⁃Ｂａｕｅｒ Ａ， Ｚｈｅｎｇ ＣＪ， Ｃｈｉｔｓａｚ Ｆ， Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ ＭＫ， Ｇｅｅｒ ＬＹ，
Ｇｅｅｒ ＲＣ， Ｇｏｎｚａｌｅｓ ＮＲ， Ｇｗａｄｚ Ｍ， Ｈｕｒｗｉｔｚ ＤＩ， Ｌａｎｃｚｙｃｋｉ ＣＪ，
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ｓｉｏｎａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ４１： ３４８ － ３５２
Ｍａｒｅｋ Ｏ， Ｍｏｎｉｋａ Ｓ， Ａｇｎｉｅｓｚｋａ Ｋ， Ｉｗｏｎａ Ｇ， Ａｎｎａ Ｚ， Ｇｒｚｅｇｏｒｚ Ｒ，
Ｐｉｏｔｒ Ｄ， Ｄａｎｉｅｌ Ｋ， Ｆｒａｙｄｏｏｎ Ｒ， Ｍａｒｉａｎ Ｋ， ｅｔ ａｌ． ２００４． Ｐｌａｓ⁃
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Ｍｅｌｌｏ ＴＲ， Ａｌｅｉｘｏ ＡＣ， Ｐｉｎｈｅｉｒｏ ＤＧ， Ｎｕｎｅｓ ＦＭ， Ｂｉｔｏｎｄｉ ＭＭ， Ｈａｒｔ⁃
ｆｅｌｄｅｒ Ｋ， Ｂａｒｃｈｕｋ ＡＲ， Ｓｉｍõｅｓ ＺＬ． ２０１４． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｒｅｇｕ⁃
ｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｃｄｙｓｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＥｃＲ） ａｎｄ ＥｃＲ⁃ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘ⁃
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｐｈａｒａｔｅ⁃ａｄｕｌｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈｏｎｅｙｂｅｅｓ （ Ａｐｉｓ
ｍｅｌｌｉｆｅｒａ）． Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ５： ４４５
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ｒｅｃｅｐｔｏｒ： ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｎｏｖｅｌ ｉｎｓｅｃｔｉ⁃
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（责任编辑：高　 峰）
７４１ 期 杨春红等： 烟粉虱 ＭＥＤ 隐种蜕皮激素受体基因 ｃＤＮＡ克隆、转录与组织表达