全 文 ：水稻瘤矮病毒 孕员圆蛋白抗血清制备及其应用
孟摇 媛员袁 猿 摇 辛摇 星圆袁 猿 摇 羊摇 健猿 摇 张恒木猿鄢摇 王建明圆 摇 陈剑平猿鄢
渊员援浙江师范大学化学与生命科学学院袁 金华 猿圆员园园源曰 圆援山西农业大学农学院植物病理系袁 太谷 园猿园愿园员曰
猿援浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所袁 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地袁
农业部植物保护与生物技术重点开放实验室袁 浙江省植物病毒重点开放实验室袁 杭州 猿员园园圆员冤
摘要院 为了进一步研究水稻瘤矮病毒渊砸蚤糟藻 早葬造造 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 砸郧阅灾冤孕员圆 的功能袁将 砸郧阅灾鄄郧载 孕员圆
编码区亚克隆至原核表达载体袁并导入大肠杆菌诱导表达曰重组的 孕员圆 融合蛋白经 晕蚤鄄晕栽粤 匀蚤泽窑
月蚤灶凿 砸藻泽蚤灶泽纯化后用于免疫小鼠制备抗血清袁并进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早分析遥 结果显示袁约 源员 噪阅大
小的 砸郧阅灾 孕员圆 融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达曰利用该重组蛋白所制备的抗血清可特异地与
融合表达和非融合的 孕员圆 蛋白发生强烈的免疫学反应遥 利用该特异性抗血清在病毒粒子样品中检
测不到 孕员圆 蛋白袁而在病株总蛋白样品中可检测到 员 条与预期大小一致的明显条带袁表明 砸郧阅灾
孕员圆 是一种非结构蛋白遥
关键词院 水稻瘤矮病毒曰 孕员圆曰 原核表达曰 抗血清
孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 葬早葬蚤灶泽贼 孕员圆
责则燥贼藻蚤灶 燥枣 砸蚤糟藻 早葬造造 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽
酝藻灶早 再怎葬灶员袁 猿 摇 载蚤灶 载蚤灶早圆袁 猿 摇 再葬灶早 允蚤葬灶猿 摇 在澡葬灶早 匀藻灶早皂怎猿鄢摇 宰葬灶早 允蚤葬灶皂蚤灶早圆 摇 悦澡藻灶 允蚤葬灶责蚤灶早猿鄢
渊员援 悦燥造造藻早藻 燥枣 悦澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 在澡藻躁蚤葬灶早 晕燥则皂葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 允蚤灶澡怎葬 猿圆员园园源袁 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 杂澡葬灶曾蚤 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 栽葬蚤早怎 园猿园愿园员袁 杂澡葬灶曾蚤
孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 猿援 杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 月则藻藻凿蚤灶早 月葬泽藻 枣燥则 在澡藻躁蚤葬灶早 杂怎泽贼葬蚤灶葬遭造藻 孕藻泽贼 葬灶凿 阅蚤泽藻葬泽藻 悦燥灶贼则燥造袁
运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟蚤葬造 运藻赠
蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 孕造葬灶贼 灾蚤则燥造燥早赠袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 灾蚤则燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 在澡藻躁蚤葬灶早 粤糟葬凿藻皂赠
燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 匀葬灶早扎澡燥怎 猿员园园圆员袁 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 枣怎则贼澡藻则 泽贼怎凿赠 贼澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 砸蚤糟藻 早葬造造 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽 渊砸郧阅灾冤 孕员圆袁 贼澡藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 则藻早蚤燥灶 燥枣
砸郧阅灾 孕员圆 憎葬泽 泽怎遭糟造燥灶藻凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 责则燥噪葬则赠燥贼蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责造葬泽皂蚤凿 增藻糟贼燥则 葬灶凿 贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 蚤灶贼燥 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬
糟燥造蚤 枣燥则 蚤灶凿怎糟蚤遭造藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶援 栽澡藻 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 孕员圆 枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶 憎葬泽 责怎则蚤枣蚤藻凿 憎蚤贼澡 晕蚤鄄晕栽粤 匀蚤泽窑月蚤灶凿
砸藻泽蚤灶泽 葬灶凿 贼澡藻灶 怎泽藻凿 枣燥则 责则藻责葬则蚤灶早 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 憎蚤贼澡 蚤皂皂怎灶蚤扎藻凿 皂燥怎泽藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼葬灶贼 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 憎葬泽 怎泽藻凿
枣燥则 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 葬泽泽葬赠援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 砸郧阅灾 孕员圆 枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶 憎蚤贼澡 贼澡藻 泽蚤扎藻 燥枣 葬责责则燥曾蚤鄄
皂葬贼藻造赠 源员 噪阅 糟燥怎造凿 遭藻 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 耘援 糟燥造蚤援 栽澡藻 责则藻责葬则藻凿 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 糟燥怎造凿 则藻葬糟贼 泽责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠
葬灶凿 泽贼则燥灶早造赠 憎蚤贼澡 遭燥贼澡 枣怎泽蚤燥灶 葬灶凿 灶葬贼蚤增藻 孕员圆 责则燥贼藻蚤灶泽援 砸郧阅灾 孕员圆 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼葬遭造藻 遭赠 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 憎蚤贼澡
贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 蚤灶 贼澡藻 藻曾责藻糟贼藻凿 泽蚤扎藻 枣则燥皂 贼澡藻 泽葬皂责造藻泽 燥枣 蚤灶枣藻糟贼藻凿 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽 遭怎贼 灶燥贼 枣则燥皂 泽葬皂责造藻泽 燥枣
增蚤则怎泽 责葬则贼蚤糟造藻泽袁 蚤灶凿蚤糟葬贼蚤灶早 贼澡葬贼 砸郧阅灾 孕员圆 憎葬泽 葬 增蚤则葬造 灶燥灶泽贼则怎糟贼怎则葬造 责则燥贼藻蚤灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院 砸蚤糟藻 早葬造造 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽曰 孕员圆曰 责则燥噪葬则赠燥贼蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶曰 葬灶贼蚤泽藻则怎皂
基金项目院 国家科技支撑计划渊圆园员圆月粤阅员怨月园猿冤袁公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员园园猿园猿员冤袁浙江省自然科学基金渊再猿园怨园远缘苑冤
作者简介院 孟媛袁女袁员怨愿苑年生袁硕士研究生袁研究方向为病毒分子生物学袁 耘鄄皂葬蚤造院 赠皂藻灶早园远园源岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则泽 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 责澡赠贼燥增蚤则怎泽岳 员远猿援 糟燥皂袁 躁责糟澡藻灶圆园园员岳 员圆远援 糟燥皂袁 栽藻造院 园缘苑员 原 愿远源员远园缘远袁 园缘苑员 原
摇 摇 摇 摇 愿远源园源园园猿
收稿日期院 圆园员猿 原 园猿 原 员员
第 源园 卷摇 第 缘 期
圆园员猿 年摇 员园 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 缘
韵糟贼援 摇 圆园员猿
摇 摇 水稻瘤矮病毒渊砸蚤糟藻 早葬造造 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁 砸郧阅灾 冤隶
属于呼肠孤病毒科 砸藻燥增蚤则蚤凿葬藻 植物呼肠孤病毒属
孕澡赠贼燥则藻燥增蚤则怎泽袁最早于 圆园 世纪 愿园 年代初在泰国发
现咱员 原 圆暂 袁随后又在马来西亚等东南亚国家和地区发
现咱猿暂 遥 我国最早在广东省发现咱源暂 袁目前仍在福建尧
广东尧广西局部地区流行遥 砸郧阅灾 因感病的水稻植
株显著矮缩并在叶背和叶鞘上产生淡黄绿色近圆形
小瘤而得名袁病株叶色深绿袁后期不抽穗或抽穗较
少袁从而造成严重减产袁甚至绝收遥
砸郧阅灾粒子与水稻矮缩病毒渊砸蚤糟藻 凿憎葬则枣 增蚤则怎泽袁
砸阅灾冤相似袁外观呈球形袁直径约 远缘 耀 苑园 灶皂袁外有 苑
个结构蛋白组成的双层衣壳袁内有 员圆 条 凿泽砸晕粤 基
因组片段咱缘暂 袁根据这些基因组片段在凝胶电泳中的
迁移率由慢至快依次称为 杂员 耀 杂员圆遥 近年来袁砸郧阅灾
的研究取得了很大进展袁并已测定 圆 个分离物的基
因组全序列咱远 原 苑暂 遥 序列分析显示 砸郧阅灾广西分离物
渊砸郧阅灾鄄郧载冤基因组由 圆缘 缘远苑 个核苷酸渊灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁
灶贼冤组成袁员圆 条基因组片断大小在 愿缘猿 耀 源 缘园缘 灶贼 之
间咱愿 原 怨暂 袁其中 杂员圆 是其最小的基因组片段袁全长 愿缘猿
遭责袁编码 员 个由 圆园远葬葬 组成尧分子量约 圆源 噪阅 的蛋
白咱远袁 愿暂 遥 砸郧阅灾部分基因的功能已获得初步解析袁
其中 孕圆 病毒的次要结构蛋白与病毒侵染能力相
关咱员园暂 曰孕猿 和 孕愿 是主要的结构蛋白咱员员 原 员圆暂 曰孕缘 具有
郧栽孕 结合活性咱员猿暂 曰孕怨 是病毒基质的成份之一咱员源暂 曰
孕员员 和 孕员圆 是病毒编码的 砸晕粤 沉默抑制子咱员缘 原 员远暂 遥
尽管 砸郧阅灾 孕员圆 蛋白比同属病毒成员编码的对应蛋
白稍微长一点袁如伤瘤病毒 渊宰燥怎灶凿 贼怎皂燥则 增蚤则怎泽袁
宰栽灾冤 孕员圆咱员苑暂 尧砸阅灾 孕员员咱员愿暂 尧烟叶耳突病毒渊栽燥遭葬糟糟燥
造藻葬枣 藻灶葬贼蚤燥灶 增蚤则怎泽袁栽蕴耘灾冤 孕员圆咱员怨暂 尧玻璃翅叶蝉呼肠孤
病毒 郧造葬泽泽赠鄄憎蚤灶早藻凿 泽澡葬则责泽澡燥燥贼藻则 渊匀燥皂葬造燥凿蚤泽糟葬 增蚤贼则蚤责鄄
藻灶灶蚤泽冤 则藻燥增蚤则怎泽袁匀燥灾砸灾冤 孕员员咱圆园暂 袁但它们之间存在一
定的同源性袁尤其是在其 晕 端区域遥 除了与同属对
应蛋白存在同源性之外袁未发现 砸郧阅灾鄄郧载 孕员圆 与
其它病毒蛋白或已知的水稻蛋白具有同源性遥 特异
的抗体是深入研究蛋白功能的重要基础袁但尚未见
有关 砸郧阅灾特异抗体的报道遥 为了进一步分析 砸郧鄄
阅灾 孕员圆 的功能袁本研究表达和纯化 砸郧阅灾鄄郧载 孕员圆
重组蛋白尧免疫小鼠制备特异性抗血清并进行
宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早分析遥
员 材料与方法
员援 员 材料
砸郧阅灾水稻病株采自广西省岑溪市遥 大肠杆菌
耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 月蕴圆员 渊 阅耘猿 冤 责蕴赠泽杂尧 表 达 载 体
责耘栽猿圆葬尧晕蚤鄄晕栽粤 匀蚤泽窑月蚤灶凿 砸藻泽蚤灶袁美国 晕燥增葬早藻灶 公
司曰责郧耘酝鄄栽载体尧限制性内切酶等工具酶尧蛋白分
子量标准袁美国 孕则燥皂藻早葬 公司曰 栽葬择 责造怎泽 聚合酶尧
凿晕栽孕泽袁上海生工生物工程有限公司曰琼脂糖尧核酸
分子量标准等袁美国 酝月陨 公司曰晕蚤鄄晕栽粤 匀蚤泽窑月蚤灶凿
砸藻泽蚤灶泽亲和层析柱及硝酸纤维素膜袁英国 粤皂藻则泽澡葬皂
孕澡葬则皂葬糟蚤葬 公司曰匝陨粤匝哉陨悦运 郧藻造 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 运蚤贼尧匝陨粤鄄
匝哉陨悦运 孕悦砸 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼尧匝陨粤责则藻责 杂责蚤灶 酝蚤灶蚤 孕则藻责
运蚤贼袁德国 匝陨粤郧耘晕公司曰缘猿猿员 梯度 孕悦砸仪袁德国 耘责鄄
责藻灶凿燥则枣 公司曰美国癌症研究所渊 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦葬灶糟藻则
砸藻泽藻葬则糟澡袁陨悦砸冤小鼠袁浙江医学科学院遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 原核表达载体 责耘栽圆责愿 的构建与鉴定
根据已发表的 砸郧阅灾 基因组序列设计引物用
于 孕员圆 全长编码区的扩增袁以含 砸郧阅灾鄄郧载 杂员圆 全长
的质粒 责砸郧杂员圆 为模板袁按照 孕悦砸 试剂盒说明配制
总体积为 缘园 滋蕴 的反应体系遥 孕悦砸 反应条件为 怨源
益 猿园 泽袁远园 益 猿园 泽袁苑圆 益 源园 泽袁共 圆缘 耀 猿园 个循环遥 扩
增产物经 员豫 渊 憎 辕 增冤琼脂糖凝胶电泳分离后袁按
匝陨粤择怎蚤糟噪 郧藻造 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 试剂盒说明书进行回收纯
化遥 酶切尧连接尧转化及阳性克隆筛选尧鉴定等常规
分子生物学方法参照分子克隆实验指南咱圆员暂进行遥
员援 圆援 圆 孕员圆 重组蛋白的诱导表达及检测
将含有目的基因的表达载体 责耘栽鄄孕员圆 转化至大
肠杆菌 月蕴圆员 渊阅耘猿冤 责蕴赠泽杂菌株中袁挑取单菌落接种
于加氨卞青霉素的 蕴月培养基袁于 猿苑益培养过夜袁次
日按 员豫接种量转接到加 粤皂责 垣的新鲜 蕴月 培养基
中袁继续培养至 韵阅远园园值在 园援 缘 耀 园援 愿 之间时袁加入终
浓度为 员 皂皂燥造 辕 蕴 诱导剂异丙基鄄茁鄄凿鄄硫代吡喃半乳
糖苷 渊 蚤泽燥责则燥责赠造 茁鄄凿鄄员鄄贼澡蚤燥早葬造葬糟贼燥责赠则葬灶燥泽蚤凿藻袁 陨孕栽郧冤袁
在设定的温度下继续振荡培养 猿 耀 缘 澡 后袁以 员圆 园园园
则 辕 皂蚤灶速度离心 员 皂蚤灶 收集菌体袁并以未诱导的空白
载体的细菌培养物为对照遥 将收集菌体分别重悬于
员 伊 杂阅杂 凝胶加样缓冲液袁员园园 益水浴加热 猿 皂蚤灶遥 取
员缘 滋蕴 进行 员缘豫 杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳袁考马斯亮蓝 郧鄄圆缘园
染色观察凝胶电泳结果遥
员援 圆援 猿 重组蛋白纯化及抗体制备
参照说明书使用 晕蚤鄄晕栽粤 匀蚤泽窑月蚤灶凿 砸藻泽蚤灶 进行
亲和层析纯化 孕员圆 重组蛋白袁纯化的蛋白用 孕月杂 溶
液溶解后袁加入等体积福氏不完全佐剂袁经完全乳化
后作为免疫抗原遥 然后采用腹腔多点皮下注射的方
法免疫小鼠袁每只小鼠每次注射 园援 缘 皂蕴袁每隔 苑 凿免
源员源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
疫 员 次袁第 猿 次免疫后 猿 凿袁取血袁源益放置 愿 澡后离心
收集上层血清遥
员援 圆援 源 耘蕴陨杂粤和 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早检测
参照羊健等咱圆圆暂方法用间接 耘蕴陨杂粤 方法分析抗
血清与细菌裂解液尧病汁液等样品之间的免疫反应遥
参照 哉赠藻凿葬等咱圆猿暂 尧羊健等咱圆圆暂方法提取病毒粒子尧水
稻叶片总蛋白袁并进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早分析遥
圆 结果与分析
圆援 员 原核表达载体 责耘栽鄄孕员圆 的构建
为了表达 砸郧阅灾鄄郧载 孕员圆 蛋白袁根据 砸郧阅灾 广
西分离物基因组片段 杂员圆 的序列 渊登录号为
阅匝猿猿猿怨源远冤设计了 圆 条引物用于 孕员圆 全长编码区的
扩增遥 引物 耘责员圆鄄员院缘忆鄄郧郧粤 栽悦悦 粤栽郧 粤悦郧 粤郧悦
粤粤悦 郧粤郧 郧粤粤 粤粤悦 悦悦粤鄄猿忆袁划线部分的核苷酸是
月葬皂匀玉酶切位点冤曰耘责员圆鄄圆院缘忆鄄粤粤郧 悦栽栽 栽栽粤 悦悦栽
悦郧郧 栽悦栽 栽悦郧 栽栽栽 粤悦栽 栽栽栽鄄猿忆袁划线部分的核苷酸
是 匀蚤灶凿 芋酶切位点遥 应用这对引物以质粒 责砸郧杂员圆
渊含 砸郧阅灾鄄郧载 杂员圆 全长冤为模板可以特异地扩增到
长约 远园园 遭责的预期片段遥 切胶回收纯化后袁先连接
至 责郧耘酝鄄栽载体上袁再转化大肠杆菌 栽郧员袁经蓝白斑
筛选尧孕悦砸 鉴定尧月葬皂匀玉和 匀蚤灶凿 芋双酶切鉴定和
序列测定袁均表明目的片段已经连接到责郧耘酝鄄栽
载体上袁 命名为 责郧耘酝鄄孕员圆遥 切胶纯化 月葬皂匀玉和
匀蚤灶凿 芋双酶切 责郧耘酝鄄孕员圆 获得约 远园园 遭责 的目的片
断袁并连接至同样用 月葬皂匀玉和 匀蚤灶凿 芋双酶切的表
达载体 责耘栽鄄猿圆葬 上袁然后先转化 栽郧员 菌株袁挑选的
克隆经孕悦砸鉴定尧 月葬皂匀玉和匀蚤灶凿芋双酶切鉴定
渊图 员冤袁再进行测序验证遥 构建的表达质粒 责耘栽鄄
孕员圆 含有完整的 孕员圆 基因袁并且有正确的开放阅读
框遥 最后将重组质粒 责耘栽鄄孕员圆 导入表达菌株 月蕴圆员
渊阅耘猿冤 责蕴赠泽杂进行原核表达遥
图 员 重组载体质粒 责郧耘酝鄄孕员圆 和 责耘栽鄄孕员圆 鉴定
云蚤早援 员 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿泽
责郧耘酝鄄孕员圆 葬灶凿 责耘栽鄄孕员圆
摇 摇 员院阅蕴圆园园园 皂葬则噪藻则曰圆院孕悦砸扩增产物曰猿院月葬皂匀玉和 匀蚤灶凿 芋双
酶切 责郧耘酝鄄孕员圆曰源院月葬皂匀玉和 匀蚤灶凿 芋双酶切 责耘栽鄄猿圆葬曰缘院月葬皂匀
玉和 匀蚤灶凿 芋双酶切 责耘栽鄄孕员圆遥 员院 阅蕴圆园园园 皂葬则噪藻则曰 圆院 孕悦砸 责则燥凿鄄
怎糟贼泽 燥枣 贼澡藻 责造葬泽皂蚤凿 责耘栽鄄孕员圆曰 猿院 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 责郧耘酝鄄孕员圆 憎蚤贼澡 月葬皂匀
玉葬灶凿 匀蚤灶凿 芋曰 源院 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 责耘栽鄄猿圆葬 憎蚤贼澡 月葬皂匀玉葬灶凿 匀蚤灶凿 芋曰
缘院 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 责耘栽鄄孕员圆 憎蚤贼澡 月葬皂匀玉葬灶凿 匀蚤灶凿 芋援
圆援 圆 陨孕栽郧诱导时间和温度对 孕员圆 原核表达的影响
杂阅杂鄄孕粤郧耘结果显示袁猿 种温度条件下袁均在大
小约 源员 噪阅处出现 员 条高浓度的诱导表达条带渊图
圆鄄葬冤 袁这与预测的分子量大小基本一致袁在对照菌
株样品中不存在这一条带曰加入终浓度为 员 皂皂燥造 辕 蕴
的 陨孕栽郧在 猿苑 益诱导培养 猿 澡袁孕员圆 表达量较高渊图
圆鄄遭冤遥 因此袁后续的试验均在此优化条件下进行
孕员圆 的诱导表达遥
图 圆 诱导温度渊葬冤和时间渊遭冤对 孕员圆 蛋白表达的影响
云蚤早援 圆 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 糟怎造贼怎则藻 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 渊葬冤 葬灶凿 贼蚤皂藻 渊遭冤 燥灶 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕员圆 责则燥贼藻蚤灶
摇 摇 员尧远为蛋白分子量标准曰 圆 耀 源是分别在 圆缘尧猿园尧猿苑 益诱导 猿 澡含 责耘栽鄄孕员圆的菌株曰 缘尧苑 为不含有重组质粒的菌株曰 愿 耀 员圆 分别是诱
导 猿尧猿援 缘尧源尧源援 缘尧缘 澡含 责耘栽鄄孕员圆的菌株遥 员 葬灶凿 远院 孕则燥贼藻蚤灶 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 皂葬则噪藻则曰 圆 原 源院 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆 蚤灶凿怎糟藻凿 葬贼 圆缘袁 猿园 葬灶凿
猿苑 益袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠曰 缘 葬灶凿 苑院 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 灶燥 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿曰 愿 原 员圆院 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆 蚤灶凿怎糟藻凿 枣燥则 猿袁 猿援 缘袁 源袁 源援 缘 葬灶凿 缘
澡袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
缘员源缘 期 孟摇 媛等院水稻瘤矮病毒 孕员圆 蛋白抗血清制备及其应用
圆援 猿 孕员圆 蛋白的纯化
在优化条件下袁由重组质粒 责耘栽鄄孕员圆 表达的
孕员圆重组蛋白含有 远载匀蚤泽标记渊栽葬早冤袁因此袁采用 晕蚤鄄
晕栽粤 匀蚤泽窑月蚤灶凿 砸藻泽蚤灶泽 亲和层析方法对重组的 孕员圆
融合蛋白进行纯化遥 杂阅杂鄄孕粤郧耘 检测结果显示袁纯
化的蛋白为单一的条带袁大小约为 源员 噪阅袁与预期大
小一致渊图 猿冤遥
圆援 源 砸郧阅灾 孕员圆 蛋白抗血清特异性及其应用
利用纯化的重组表达的 孕员圆 蛋白免疫小鼠袁在
第 猿 次免疫 猿 凿 后收集抗血清遥 耘蕴陨杂粤 分析表明袁
所制备的抗血清可与 砸郧阅灾 病汁液尧表达 孕员圆 重组
蛋白的细菌裂解液发生强烈的血清反应遥 宰藻泽贼藻则灶
遭造燥贼贼蚤灶早分析表明袁该抗血清与 陨孕栽郧 诱导的空载体
转化的细菌裂解物无任何可检测信号袁但与相应原
核表达的蛋白呈现出强烈的信号袁且无其它杂带和
背景渊图 源鄄葬冤遥 进一步利用该抗血清对病尧健水稻
叶蛋白提取物和纯化的 砸郧阅灾 粒子进行 宰藻泽贼藻则灶
遭造燥贼贼蚤灶早分析袁孕员圆的抗血清能与感病水稻叶片总蛋白
提取物发生强烈的免疫反应袁但是与砸郧阅灾粒子总
图 猿 孕员圆 融合蛋白的纯化
云蚤早援 猿 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 孕员圆鄄枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶
摇 摇 员院蛋白质分子量标准曰圆院由含 责耘栽鄄猿圆葬的宿主菌纯化的融合
蛋白标记曰猿院由含 责耘栽鄄孕员圆宿主菌纯化的 孕员圆 融合蛋白曰源院诱导
猿 澡后含 责耘栽鄄猿圆葬 的菌株曰缘院诱导 猿 澡 后含 责耘栽鄄孕员圆 的菌株遥 员院
孕则燥贼藻蚤灶 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 皂葬则噪藻则曰 圆院 责怎则蚤枣蚤藻凿 匀蚤泽鄄枣怎泽蚤燥灶 贼葬早 枣则燥皂 耘援
糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄猿圆葬曰 猿院 责怎则蚤枣蚤藻凿 孕员圆 枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶 枣则燥皂 耘援 糟燥造蚤
糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆曰 源院 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄猿圆葬曰 缘院 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶鄄
贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆援
蛋白尧健康植株总蛋白提取物一样均无反应信号
渊图 源鄄遭冤袁表明 砸郧阅灾 孕员圆 蛋白是一种非结构蛋白遥
图 源 砸郧阅灾 孕员圆 蛋白抗血清特异性分析渊葬冤及其检测应用渊遭冤
云蚤早援 源 粤灶贼蚤泽藻则怎皂 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 葬泽泽葬赠 渊葬冤 葬灶凿 蚤贼泽 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 渊遭冤 枣燥则 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 砸郧阅灾 孕员圆
摇 摇 员院诱导的不含重组质粒的宿主菌裂解物曰圆院诱导表达的含 责耘栽鄄孕员圆 的宿主菌裂解物曰猿院健康水稻蛋白提取物曰源院诱导表达的含
责耘栽鄄孕员圆菌株裂解物曰缘院纯化的 砸郧阅灾粒子曰远院砸郧阅灾水稻病株总蛋白提取物遥 员院 蕴赠泽葬贼藻 燥枣 耘援 糟燥造蚤袁 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 灶燥 责造葬泽皂蚤凿曰 圆院 造赠泽葬贼藻 燥枣 耘援
糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆曰 猿院 藻曾贼则葬糟贼泽 枣则燥皂 澡藻葬造贼澡赠 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽曰 源院 造赠泽葬贼藻 燥枣 耘援 糟燥造蚤 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责耘栽鄄孕员圆曰 缘院 责怎则蚤枣蚤藻凿 砸郧阅灾 责葬则贼蚤糟造藻泽曰 远院 藻曾贼则葬糟贼泽
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猿 讨论
外源目的基因在大肠杆菌中的表达受很多因素
影响袁如大肠杆菌菌株尧诱导时间和温度以及 陨孕栽郧
使用浓度等遥 本研究发现袁将原核表达载体 责耘栽鄄
孕员圆转入 月蕴圆员 渊阅耘猿冤 责蕴赠泽杂后袁不同温度下诱导出
蛋白量有一定差异遥 本研究中由于 猿苑 益表达效果
较好袁故选用 猿苑 益作为诱导 孕员圆 融合蛋白表达的温
度遥 陨孕栽郧是一种十分有效的诱导剂袁在一定浓度
下袁随着诱导时间的增加袁孕员圆 的表达量也逐渐增
加咱圆员暂 遥 但在本研究中袁诱导 猿 澡 时袁孕员圆 的表达量略
高袁随着时间的延长袁孕员圆 的表达量反而下降袁可能
是 陨孕栽郧存在时间过长在一定程度上影响大肠杆菌
的生长袁蛋白积累量也随之下降遥
吴建国等咱员远暂研究表明袁砸郧阅灾 孕员圆 是植物呼肠
孤病毒属病毒的一个基因沉默抑制子袁在本氏烟
晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 遭藻灶贼澡葬皂蚤葬灶葬中能够抑制正义链 砸晕粤 诱发
的局部沉默遥在昆虫细胞中袁砸郧阅灾 孕员圆蛋白位于
远员源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
病毒基质结构中咱员员暂 遥 砸阅灾 中其对应的同源蛋白
孕员员 具有核酸结合活性咱员愿暂 遥 这些研究结果及同源
性分析表明 砸郧阅灾 孕员圆 及其同源的病毒蛋白是一个
多功能蛋白袁在病毒的复制和增殖过程中起着重要
作用遥 本研究利用 孕员圆 重组蛋白所制备的抗血清具
有较高的特异性袁能够特异地检测病株体内的 孕员圆
蛋白袁这为进一步研究 孕员圆 在病株体内的定位及其
与水稻蛋白之间的相互作用提供了条件遥 作者之前
根据 砸郧阅灾 杂员圆 和 砸阅灾 杂员员 的序列相似性袁曾推测
其编码的蛋白即 孕员圆 可能是一个非结构蛋白咱远暂 袁本
研究结果再次支持这一推论袁同时也暗示了 砸郧阅灾
孕员圆 和 砸阅灾 孕员员 之间在功能上具有一定的相关性遥
此外袁本研究 砸郧阅灾 孕员圆在大肠杆菌中成功地表达及
其重组蛋白的纯化也为进一步研究 砸郧阅灾 孕员圆 核酸
结合活性等体外生化特性奠定了基础遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
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生的一种水稻病毒病援 植物病理学报袁 员怨愿猿袁 员猿渊源冤院 员 原 远
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咱圆圆暂 羊健袁张恒木袁陈剑平袁等援 水稻黑条矮缩病毒 责愿蛋白的原
核表达尧抗血清制备及其特性援 植物保护学报袁圆园园苑袁猿源
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