全 文 ：第 源员 卷摇 第 源 期
圆园员源 年 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 国家野十二五冶科技支撑计划渊圆园员圆月粤阅员怨月园愿冤
作者简介院 杨蕾袁女袁员怨愿缘年生袁博士研究生袁研究方向为森林有害生物的生物防治袁 耘鄄皂葬蚤造院 造藻蚤则愿缘员圆岳 员圆远援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 造蚤葬灶早躁怎灶岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 员员 原 园源
防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定
杨摇 蕾员袁圆 摇 周国英员 摇 梁摇 军员袁圆鄢摇 倪摇 杨圆 摇 吕摇 全圆 摇 张星耀圆
渊员援中南林业科技大学袁 经济林培育与保护教育部重点实验室袁 长沙 源员园园园源曰 圆援中国林业科学研究院
森林生态环境与保护研究所袁 国家林业局森林保护重点实验室袁 北京 员园园园怨员冤
摘要院 为筛选到对杨树溃疡病有良好生防效果的拮抗菌袁采用平板对峙法初筛尧发酵液野三明治冶
法和改良琼脂扩散法复筛袁以及离体组织试验对杨树不同部位组织的内生菌进行了分离筛选袁并对
目的菌株进行了防治效果测定曰采用形态学观察和 陨栽杂 序列及其系统发育树分析对其进行初步鉴
定遥 结果表明从 员员缘 株杨树内生菌中筛选出有拮抗效果的菌株 圆源 株袁并复筛出拮抗效果良好的菌
株 缘 株袁最终从杨树内生菌中筛选出 员 株杨树溃疡病拮抗真菌袁编号为 再郧云怨袁其对杨树离体组织溃
疡病防治效果可达 苑远援 源苑豫 袁初步鉴定该菌株为黄绿木霉 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻遥 表明菌株 再郧云怨
可有效抑制杨树溃疡病病原菌的生长袁是防治杨树溃疡病的潜在生防菌株遥
关键词院 内生生防菌曰 杨树溃疡病曰 黄绿木霉曰 拮抗活性
陨泽燥造葬贼蚤燥灶袁 泽糟则藻藻灶蚤灶早 葬灶凿 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽
皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽 葬灶贼葬早燥灶蚤扎蚤灶早 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则
再葬灶早 蕴藻蚤员袁圆 摇 在澡燥怎 郧怎燥赠蚤灶早员 摇 蕴蚤葬灶早 允怎灶员袁圆鄢摇 晕蚤 再葬灶早圆 摇 蕴俟 匝怎葬灶圆 摇 在澡葬灶早 载蚤灶早赠葬燥圆
渊员援 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 晕燥灶鄄憎燥燥凿 云燥则藻泽贼 晕怎则贼怎则蚤灶早 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶曰 悦藻灶贼则葬造 杂燥怎贼澡 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠
燥枣 云燥则藻泽贼则赠 驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡葬灶早泽澡葬 源员园园园源袁 匀怎灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 云燥则藻泽贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶
燥枣 悦澡蚤灶葬 杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早蚤糟葬造 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿
孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 枣蚤灶凿 葬灶凿 蚤泽燥造葬贼藻 贼澡藻 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽 憎蚤贼澡 早燥燥凿 遭蚤燥鄄糟燥灶贼则燥造
藻枣枣藻糟贼泽 燥灶 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则袁 贼澡藻 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责葬则贼泽 燥枣 贼澡藻 责燥责造葬则 怎泽蚤灶早 责造葬贼藻
糟燥灶枣则燥灶贼葬贼蚤燥灶 蚤灶蚤贼蚤葬造 泽糟则藻藻灶蚤灶早袁 皂怎造贼蚤责造藻 泽糟则藻藻灶蚤灶早 燥枣 野泽葬灶凿憎蚤糟澡冶 皂藻贼澡燥凿 蚤皂责则燥增藻凿 葬早葬则 凿蚤枣枣怎泽蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿袁
葬灶凿 贼蚤泽泽怎藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 蚤灶 增蚤贼则燥援 栽澡藻 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 贼葬则早藻贼 泽贼则葬蚤灶 憎葬泽 葬造泽燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿援 栽澡藻 贼葬则早藻贼
泽贼则葬蚤灶 憎葬泽 责则藻造蚤皂蚤灶葬则蚤造赠 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 遭赠 蚤贼泽 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽袁 陨栽杂 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟
葬灶葬造赠泽蚤泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 圆源 泽贼则葬蚤灶泽 泽藻造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 员员缘 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 泽贼则葬蚤灶泽 糟燥怎造凿 蚤灶澡蚤遭蚤贼 皂赠糟藻造蚤怎皂
早则燥憎贼澡 燥枣 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则 责葬贼澡燥早藻灶 月燥贼则赠燥泽责澡葬藻则蚤葬 凿燥贼澡蚤凿藻葬袁 葬皂燥灶早 憎澡蚤糟澡 缘 泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 泽藻造藻糟贼藻凿 枣燥则 早燥燥凿
糟燥灶贼则燥造 藻枣枣藻糟贼 燥灶 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则袁 葬灶凿 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 憎葬泽 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 葬泽 贼澡藻 皂燥泽贼 藻枣枣藻糟贼蚤增藻 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼
葬早葬蚤灶泽贼 月援 凿燥贼澡蚤凿藻葬援 栽澡藻 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣藻糟贼 燥枣 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 燥灶 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则 糟燥怎造凿 则藻葬糟澡 苑远援 源苑豫 援 月葬泽藻凿 燥灶
蚤贼泽 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 葬灶凿 陨栽杂 泽藻择怎藻灶糟藻袁 贼澡藻 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬泽
栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻援 陨贼 蚤泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 糟燥怎造凿 藻枣枣藻糟贼蚤增藻造赠 蚤灶澡蚤遭蚤贼 贼澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 责燥责造葬则
糟葬灶噪藻则 责葬贼澡燥早藻灶泽袁 憎蚤贼澡 葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造 增葬造怎藻 蚤灶 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 贼澡藻 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则援
运藻赠 憎燥则凿泽院 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 遭蚤燥鄄糟燥灶贼则燥造 皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽曰 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则曰 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻曰
葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 葬糟贼蚤增蚤贼赠
摇 摇 杨树是人造板及纤维用材的重要加工原料袁各
品种杨树及其杂交品种在世界范围内都有广泛的分
布咱员暂 遥 此外袁杨树对植树造林尧生态恢复尧风景绿化
和防风固沙都有着重要的作用遥 但多种病害的发生
制约了杨树人工林产业的健康发展咱圆 原 猿暂 袁杨树溃疡
病就是其中一种为害较为严重的寄主主导性病
害咱源暂 遥 该病害主要是由葡萄座腔菌属 月燥贼则赠燥泽责澡葬藻则蚤葬
泽责责援等病原真菌引起咱缘暂 袁在我国东北尧华北尧华东和
西北等地普遍发生袁严重地区林木的发病率高达
怨远援 员豫 耀 员园园豫 袁感病指数达 远援 苑豫 耀 怨缘援 愿豫 咱远暂 袁造
成育苗和造林的失败袁给杨树产业带来巨大的经济
和生态损失咱苑暂 遥
目前对杨树溃疡病的防治主要采取营林措施防
治和化学防治遥 营林措施防治的周期长尧见效慢袁一
旦病害大规模发生很难及时解决遥 而化学防治对于
环境的污染和破坏已成为不容忽视的问题遥 随着社
会经济的发展和人们环境保护意识的增强袁人们对
病虫害防治的环境友好性和安全性提出了越来越高
的要求遥 用生物防治的方法治理杨树溃疡病极有可
能成为取代现有化学杀菌剂的有效方法遥 目前袁利
用植物内生菌防治植物病害的研究日益增多袁如何
劲等咱愿暂研究发现石斛内生细菌 阅耘月鄄圆 菌株对贵州
辣椒的 缘 种病原真菌有很强的毒力袁可抑制病原菌
的生长曰卢丽俐等咱怨暂从健康的油茶叶片中分离筛选
得到对油茶炭疽病病原菌有良好抑制作用的 猿 株拮
抗真菌遥 但目前关于防治杨树溃疡病内生真菌的研
究较少袁相关报道仅见袁秀英等咱员园暂从健康杨树植株
的叶渊芽冤尧皮尧枝中分离筛选到一株对溃疡病有拮
抗活性的青霉属真菌等遥
本课题组前期对杨树溃疡病的研究主要集中在
从调整杨树林的林分结构来减少病害的发生咱员员 原 员圆暂 袁
本研究以微生物种群生态调控技术为出发点袁旨在
从杨树组织中分离筛选到对杨树溃疡病有良好抑制
作用的生防菌株袁为杨树溃疡病的生物防治提供新
的原材料及对后续生物农药的开发和应用奠定
基础遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试病原菌院葡萄座腔菌 月燥贼则赠燥泽责澡葬藻则蚤葬 凿燥贼澡蚤凿藻葬
由中国林业科学研究院森林保护重点实验室菌种保
藏中心提供袁编号为 苑圆于月遥
杨树扦插苗院离体组织试验中选用的杨树扦插
苗品种为毛白杨遥 在温室内采用枝接顶端封蜡的方
法进行扦插袁扦插时间为 圆园员圆 年 猿 月袁使用时间为
圆园员圆 年 愿 月遥 使用时苗高 怨园 耀 员圆园 糟皂袁主干枝条直
径为 缘 耀 员园 皂皂遥 扦插苗生长状况良好袁无病虫害遥
培养基院牛肉膏蛋白胨培养基又称营养琼脂培
养基渊灶怎贼则蚤藻灶贼 葬早葬则袁 晕粤冤院牛肉膏 猿援 园 早尧蛋白胨 员园援 园 早尧
晕葬悦造 缘援 园 早尧琼脂 员缘 耀 圆园 早尧匀圆韵 员 园园园 皂蕴袁责匀 苑援 源 耀苑援 远曰高氏 员 号培养基院可溶性淀粉 圆园 早尧晕葬悦造 园援 缘 早尧
运晕韵猿 员 早尧 运圆匀孕韵源 窑猿匀圆韵 园援 缘 早尧 酝早杂韵源 窑苑匀圆韵园援 缘 早尧云藻杂韵源 窑苑匀圆韵 园援 园员 早尧琼脂 员缘 耀 圆园 早尧 匀圆韵员 园园园 皂蕴袁责匀 苑援 圆 耀 苑援 源曰马铃薯葡萄糖琼脂培养基
渊责燥贼葬贼燥 凿藻曾贼则燥泽藻 葬早葬则袁 孕阅粤冤院马铃薯 圆园园 早尧葡萄糖
圆园 早尧琼脂 员缘 耀 圆园 早尧匀圆韵 员 园园园 皂蕴遥
试剂院牛肉膏尧蛋白胨尧葡萄糖尧琼脂袁北京福尔
彻科技有限公司曰可溶性淀粉尧晕葬悦造尧运晕韵猿尧运圆匀孕韵源窑猿匀圆韵尧酝早杂韵源窑苑匀圆韵尧云藻杂韵源窑苑匀圆韵袁北京千颗竹生
物科技有限公司曰茁鄄巯基乙醇尧氯仿尧异戊醇尧十六烷
基三乙酸溴化铵渊澡藻曾葬凿藻糟赠造 贼则蚤皂藻贼澡赠造 葬皂皂燥灶蚤怎皂 遭则燥鄄
皂蚤凿藻袁 悦栽粤月冤尧乙二胺四乙酸二钠渊藻贼澡赠造藻灶藻 凿蚤葬皂蚤灶藻
贼藻贼则葬葬糟藻贼蚤糟 葬糟蚤凿袁 耘阅栽粤冤尧凿凿匀圆韵尧圆 伊 栽葬择孕悦砸 酝葬泽贼藻则酝蚤曾尧蕴燥葬凿蚤灶早 月怎枣枣藻则尧植物基因组 阅晕粤 提取试剂盒袁
北京宝锐通生物科技有限公司遥
仪器院酝蕴杂鄄猿苑缘园 全自动高压蒸汽灭菌锅袁日本
杂粤晕再韵 公司曰全能台式高速冷冻离心机袁美国
栽澡藻则皂燥 云蚤泽澡藻则 杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟公司曰栽孕则燥枣藻泽泽蚤燥灶葬造 高性能梯
度 孕悦砸 仪袁德国 月蚤燥皂藻贼则葬 公司曰阅再再鄄源 型稳压稳流
电泳仪袁北京六一仪器厂曰粤造责澡葬 陨皂葬早藻则 匀孕 凝胶成
像分析系统袁美国 孕则燥贼藻蚤灶 杂蚤皂责造藻公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 采样方法
在河北廊坊市和河南原阳县 圆 个实验基地内各
选择 圆 块样地袁在每个样地根据杨树树势生长情况尧
病虫害是否发生以及东南西北中不同方位袁分别在
廊坊和原阳各选样树 员园 株袁共 圆园 株样树进行杨树
组织的采集遥 分别采取杨树的叶片尧枝条尧干部组织
以及因机械损伤后形成的愈伤组织袁装入无菌自封
袋内袁带回实验室置于 源 益冰箱中保存袁并尽快分离
内生菌遥
员援 圆援 圆 内生菌分离
采用原犇犇和曹支敏咱员猿暂的方法进行内生菌分
离遥 将杨树各组织先用流动的自来水冲洗去除表面
杂质袁再在超净工作台内进行表面消毒院用无菌水冲
洗表面袁无菌滤纸吸去水分袁将组织在 怨缘豫的乙醇
中浸泡 缘 耀 员园 泽袁晾干后浸入 园援 缘豫升汞溶液渊憎 辕 增冤
中表面消毒 缘 皂蚤灶袁无菌水冲洗 缘 次遥 将消毒后的组
怨猿源源 期 杨摇 蕾等院 防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定
织用解剖刀切割成约 缘 皂皂 伊 缘 皂皂 的小方块袁放置
在无菌的 孕阅粤尧牛肉膏蛋白胨及高氏 员 号培养基上袁
于 圆愿 益下倒置培养 源愿 耀 苑圆 澡遥 每天观察菌落生长
情况袁挑选出单菌落袁不断进行分离纯化袁直至得到
纯菌落为止遥
员援 圆援 猿 拮抗菌初筛
拮抗能力的测定选择平板对峙法院淤拮抗细菌
和放线菌院在 孕阅粤 平板中央接入直径为 缘 皂皂 的已
活化 缘 凿的病原菌菌块袁在距培养皿边缘 圆 糟皂 的同
心圆上每相距 员圆园毅的培养基上用接种针接入分离
的菌株袁圆愿 益下培养 猿 凿 后袁测得其抑菌圈大小遥 每
个菌株在一个培养皿内接 猿 个点并重复 猿 次遥 于拮
抗真菌院分别取 缘 皂皂的活化 缘 凿后的病原菌与内生
真菌菌饼袁接种于 孕阅粤平板培养基中线距边缘 员 糟皂
处袁每个皿内接种病原菌与内生真菌菌饼各 员 个袁每
株内生真菌 猿 次重复遥 置于 圆愿益下黑暗恒温培养 猿
凿袁每天记录相对横向生长长度袁并拍照遥 将对峙试
验中的竞争作用按以下标准进行等级分类院玉院内生
真菌菌丝占据平板 员园园豫 曰域院内生真菌菌丝占据平
板逸圆 辕 猿曰芋院员 辕 猿臆内生真菌菌丝占据平板 约 圆 辕 猿曰
郁院内生真菌菌丝占据平板 约 员 辕 猿曰灾院病原菌菌丝占
据平板 员园园豫 遥
员援 圆援 源 拮抗微生物的发酵液复筛
发酵培养液的制备院将初筛的拮抗菌株分别在
晕粤或 孕阅粤培养基上活化遥 细菌用接菌环移取一环
置入装有 员园园 皂蕴 晕粤 液体培养基的 圆缘园 皂蕴 三角瓶
中袁在 猿缘 益尧员圆园 则 辕 皂蚤灶的摇床上振荡培养 源愿 澡袁拮抗
放线菌和真菌用打孔器取 源 皂皂 的菌饼袁接入液体
孕阅粤培养基即 孕阅 培养基中袁圆愿 益尧员源园 则 辕 皂蚤灶 的摇
床上振荡培养 怨远 澡遥 采用 圆 种方法进行发酵液复
筛院淤野三明治冶法院先在直径为 怨 糟皂 的培养皿中倒
入约 猿 皂蕴 孕阅粤培养基袁凝固后加入 员 皂蕴 分离菌株
的培养液和 猿 皂蕴冷却至 源缘 益左右的 孕阅粤 培养基袁
摇匀凝固后再加入约 员缘 皂蕴 孕阅粤 培养基渊要求倒好
的平板表面不长细菌冤袁以加 员 皂蕴 无菌水和 猿 皂蕴
孕阅粤为对照袁然后在平板上接入直径为 缘 皂皂 的病
原菌菌饼袁圆愿 益黑暗培养 缘 凿 后用十字交叉法测量
病菌菌落直径袁计算抑菌率遥 抑菌率 越 渊对照组病
原菌菌落直径 原处理组病原菌菌落直径冤 辕对照组
病原菌菌落直径 伊 员园园豫 遥 选出抑菌效果最好的菌
株袁保存备用遥 于改良琼脂扩散法院在凝固的 孕阅粤
琼脂平板距边缘 员援 缘 糟皂 处的圆周上等距离打 猿 个
孔袁孔洞直径为 源 皂皂曰将预先培养好的病原菌用打
孔器取 源皂皂的菌饼接在培养皿中央袁再将液体培养
源 凿的拮抗菌的上清液 圆园 滋蕴滴加到各孔中袁圆愿 益恒
温培养 源 凿后观察记录遥 以在孔洞中加入 圆园 滋蕴 无
菌水作为对照遥 每处理 猿 次重复遥
员援 圆援 缘 生防菌的离体组织复筛
杨树溃疡病菌孢子液的制备院杨树溃疡病菌在
孕阅粤平板上 圆愿 益培养 缘 凿袁待充分产孢后袁加灭菌的
员豫葡萄糖溶液 员园 皂蕴浸 员缘 皂蚤灶袁用无菌棉签洗下孢
子和菌丝体袁经无菌脱脂棉过滤袁除去菌丝体袁再用
灭菌的 员豫葡萄糖溶液配成悬浮液袁将孢子含量调
到 员园 伊 员园 倍视野 愿园 耀 员园园 个孢子遥
拮抗菌发酵液的制备院用 圆缘园 皂蕴的三角瓶装入
员园园 皂蕴培养基渊责匀 值 苑援 园冤袁细菌用 晕粤 培养基袁真
菌和放线菌用 孕阅培养基曰培养基灭菌冷却后袁接种
员园 皂蕴活化的拮抗菌菌液曰细菌于 猿缘 益尧员圆园 则 辕 皂蚤灶
振荡培养 源愿 澡袁放线菌和真菌于 圆愿 益尧员源园 则 辕 皂蚤灶 振
荡培养 怨远 澡遥
选取生长一致的当年生杨树扦插苗袁截取约
苑 糟皂长的干部枝条放入直径为 怨 糟皂的培养皿内袁皿
底铺一层约 圆 皂皂厚的脱脂棉并加入少量无菌水保
湿培养遥 每个培养皿中放置 猿 根枝条袁每处理设 猿
次重复袁即每个生防菌株处理 怨 根枝条遥 用已灭菌
的接种针蘸取拮抗菌发酵液在枝条上进行刺伤接
种袁蘸取的发酵液量以不从接种针上滴下为宜袁刺伤
接种的伤口大小约 员 皂皂袁将沾有预先制好的病原菌
孢子悬浮液的脱脂棉覆盖在刺伤接种的伤口上袁以
蘸取清水接种作为对照袁圆愿益保湿培养袁员园 凿后待对
照枝干充分发病后袁进行病情调查并计算病情指数
和防治效果遥 室内离体组织试验病级分类按病斑直
径 园尧员援 园园 耀 缘援 怨怨尧远援 园园 耀 员园援 怨怨尧员员援 园园 耀 员缘援 怨怨尧
员远郾 园园 耀 员怨援 怨怨 皂皂以及 跃 圆园援 园园 皂皂 依次分为 园 级尧
玉级尧域级尧芋级尧郁级尧吁级共 远 个级别袁各级代表
值分别为 园尧员尧圆尧猿尧源尧缘遥 病情指数 越 移 渊病级枝
数 伊该病级代表数值冤 辕 渊调查枝数 伊发病最高级代
表值冤 伊 员园园曰防治效果 越 渊对照组病情指数 原处理
组病情指数冤 辕对照组病情指数 伊员园园豫 遥
员援 圆援 远 内生生防菌的鉴定
形态培养特征观察院在 孕阅粤固体培养基上接种
观察生防菌株菌落形态曰用插片法观察菌株的菌丝
及孢子形态特征院灭菌的 孕阅粤 培养基倒成平板袁一
般每皿倒 员缘 皂蕴培养基袁凝固后用无菌盖玻片以 源缘毅
角插入培养基中尧盖玻片插入培养基的深度以 员 辕 圆
园源源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
为宜袁然后沿着盖玻片与培养基表面的钝角交界线
进行接种袁于 圆愿 益下培养袁分别于 苑尧员缘尧猿园 凿将盖玻
片取出袁在显微镜下观察基内菌丝尧气生菌丝形态以
及孢子的形态特征遥
陨栽杂 孕悦砸扩增纯化和序列测定院阅晕粤 的提取采
用冯小慧等咱员源暂方法院将致病菌转接到 孕阅粤 平板上袁
圆缘 益培养 猿 凿 后袁刮取约 圆园园 皂早 气生菌丝于灭菌后
的 员援 缘 皂蕴离心管中袁 原 圆园 益冰冻过夜袁用研磨棒研
磨遥 用 悦栽粤月 植物基因组 阅晕粤 提取试剂盒提取基
因组 阅晕粤遥 采用真菌 陨栽杂 区域通用引物 陨栽杂员 和
陨栽杂源 进行 孕悦砸 扩增袁其序列如下院 陨栽杂员 渊缘忆鄄栽悦悦郧鄄
栽粤郧郧栽郧粤粤悦悦栽郧悦郧郧鄄猿忆冤袁 陨栽杂源 渊 缘忆鄄栽悦悦栽悦悦郧悦栽栽鄄
粤栽栽郧粤栽粤栽郧悦鄄猿忆冤袁引物由北京宝锐通生物科技有
限公司合成遥 孕悦砸 反应体系总体积 圆缘 滋蕴袁包括
孕悦砸 皂蚤曾 员圆援 缘 滋蕴尧凿凿匀圆韵 怨援 缘 滋蕴尧引物 陨栽杂员 辕 陨栽杂源 各
员 滋蕴尧模板 员 滋蕴遥 反应程序为院怨源 益预变性 圆 皂蚤灶曰
怨源 益变性 猿园 泽袁缘苑援 猿 益退火 猿园 泽袁苑圆 益延伸 源园 泽袁猿园
个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 员援 缘豫琼脂糖凝胶电泳检
测 孕悦砸产物袁条带清晰的送往北京宝瑞通生物科技
有限公司进行双向测序遥 序列经 月蚤燥耘凿蚤贼 等软件分
析和手工校正后袁用 晕悦月陨 的 月蕴粤杂栽 程序将测出的
序列与在 郧藻灶月葬灶噪渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕
月蕴粤杂栽冤中下载的已知相似模式菌种的 陨栽杂 序列进
行同源性比较分析咱员缘暂 袁经 悦造怎泽贼葬造 宰 进行多重对比
并用 孕粤哉孕 源援 园 软件进行序列比对并绘制系统发育
树图遥
员援 猿 数据分析
采用 杂孕杂杂 员苑援 园 统计分析软件对数据进行单
因素方差分析渊韵灶藻鄄宰葬赠 粤晕韵灾粤冤尧贼 检验或相关分
析袁应用 阅怎灶糟葬灶 氏新复极差法进行差异显著性
检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 不同部位杨树组织内生菌分离规律
从杨树组织中共分离微生物菌株 员员缘 株袁其中
从河北廊坊杨树组织中分离到 源源 株袁从河南原阳杨
树组织中分离到 苑员 株遥 从不同微生物种类来说袁分
离到细菌 源员 株袁放线菌 猿 株袁真菌 苑员 株遥 就不同部
位组织而言袁从健康叶片中分离出的内生菌最多袁其
次为 圆 年生枝条袁再次为愈伤组织遥 从分离到的内
生菌多样性来说袁愈伤组织中分离到的微生物多样
性最为丰富遥
圆援 圆 杨树溃疡病内生拮抗菌的初筛
通过平板对峙试验袁从 员员缘 个菌株中共筛选得
到有抑菌效果的菌株 苑员 株袁其中细菌和放线菌 员愿
株袁真菌 缘猿 株遥 从细菌和放线菌中筛选出抑菌带直
径 跃源皂皂的菌株苑株袁真菌中生防菌菌落直径 跃猿愿皂皂
的菌株 员苑 株为后续研究对象遥 在细菌和放线菌中袁
菌株 再在员月猿 和 再再月员员 的抑菌直径可达到 苑援 猿猿 皂皂曰
在有效果的真菌中袁大部分的抗生等级处于芋级或
郁级袁而菌株 再在圆云缘尧再在圆云员源尧再郧云源尧再郧云远 和 再郧云怨
的抑菌等级为域级渊表 员冤遥 不同菌株间的菌落直径
存在极显著差异渊孕 约 园援 园员冤袁拮抗活性差异明显遥
通过初筛袁共挑选出 圆源 个拮抗菌株进行后续复筛
试验遥
圆援 猿 拮抗菌株发酵液复筛
圆援 猿援 员 野三明治冶法
通过野三明治冶法的筛选结果可以看出袁初筛出
的 圆源 株菌株袁除 再郧云猿尧再在圆云怨尧再郧云源 和 再郧云员 外袁
其余各株的抑菌率均可达 远园豫以上渊表 圆冤遥 各菌
株发酵液的拮抗活性存在极显著差异渊孕 约园援 园员冤遥
圆援 猿援 圆 改良琼脂扩散法
在改良琼脂扩散法中袁筛选出生防菌菌落直
径 跃猿愿 皂皂的菌株为后续研究对象遥 综合野三明治冶
法和改良琼脂扩散法的结果袁筛选出 缘 个菌株院
再在员月猿尧再再杂月员尧再在圆云员园尧再郧云怨 和 再再杂云愿 进行离体
组织复筛袁抑菌效果如表 猿 所示遥
圆援 源 内生生防菌离体组织复筛结果
在筛选出的 缘 株生防菌株中袁各菌株在离体组
织上表现出的拮抗活性各不相同袁单因素方差分析
显示袁不同菌株对杨树组织溃疡病的防治效果差异
极显著渊孕 约 园援 园员冤袁其中菌株 再郧云怨 的防治效果最
好袁可达 苑远援 源苑豫 渊表 源冤遥 综合初筛尧复筛和离体组
织试验结果袁最终确定菌株 再郧云怨 为最优杨树溃疡
病生防菌株遥
圆援 缘 拮抗菌 再郧云怨 的鉴定
圆援 缘援 员 形态学特征
在 孕阅粤平板上袁菌落初期为白色袁生长 圆 耀 猿 凿
后袁菌落中间是较为稀薄的白绿色菌丝袁外围菌丝较
为厚密袁为墨绿或深绿色遥 生长 苑 凿 后在菌落中间
形成一圈明显的产孢区袁颜色为深绿色尧浅绿或黄
绿袁菌落背面呈浅黄绿色渊图 员鄄葬冤遥 菌丝有隔袁每隔
大小约为 圆缘援 源苑 耀 源圆援 员猿 滋皂 伊 圆援 远员 耀 源援 园愿 滋皂袁分支
较少渊图 员鄄遭冤曰分生孢子梗呈树形分枝或单生袁孢子
较小袁球形或卵形袁经常附着在菌丝周围渊图员鄄糟冤 遥
员源源源 期 杨摇 蕾等院 防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定
表 员 拮抗真菌在平板对峙试验中的抑菌效果
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 枣怎灶早蚤 贼燥 责燥责造葬则 糟葬灶噪藻则 蚤灶 责造葬贼藻 糟燥灶枣则燥灶贼葬贼蚤燥灶 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽
菌株
杂贼则葬蚤灶
拮抗菌菌落直径 渊皂皂冤
悦燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则 燥枣 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 泽贼则葬蚤灶泽
所占比例 渊豫 冤
砸葬贼蚤燥
等级
郧则葬凿藻
蕴再员云怨 源缘援 园园 依 圆援 猿苑 凿 缘圆援 怨源 芋
再郧云猿 源猿援 缘园 依 员援 猿猿 藻 缘园援 缘怨 芋
再郧云苑 源苑援 缘园 依 圆援 园愿 凿 缘缘援 愿愿 芋
蕴再员云员员 源员援 园园 依 员援 源苑 藻 源愿援 圆源 芋
再再杂云缘 猿缘援 园园 依 员援 圆员 早 源员援 员愿 芋
再郧云怨 缘苑援 园园 依 圆援 缘怨 糟 远苑援 园远 域
再在圆云员源 远园援 园园 依 圆援 员源 遭 苑园援 缘怨 域
再在圆云源 猿怨援 园园 依 员援 远员 枣 源缘援 愿愿 芋
再再杂云远 猿愿援 园园 依 员援 圆缘 枣 源源援 苑员 芋
再郧云源 远缘援 园园 依 圆援 猿源 葬 苑远援 源苑 域
再在圆云员圆 猿怨援 缘园 依 员援 圆猿 枣 源远援 源苑 芋
再郧云员 源远援 园园 依 圆援 园员 凿 缘源援 员圆 芋
再再杂云愿 源缘援 园园 依 员援 愿怨 凿 缘圆援 怨源 芋
再在圆云愿 缘缘援 园园 依 圆援 猿源 糟 远源援 苑员 芋
蕴再员云员远 源员援 缘园 依 圆援 猿猿 藻 源愿援 愿圆 芋
再在圆云员缘 猿远援 园园 依 员援 愿源 早 源圆援 猿缘 芋
再在圆云缘 缘苑援 缘园 依 圆援 远苑 糟 远苑援 远缘 域
再郧云苑 猿愿援 园园 依 员援 远员 枣 源源援 苑员 芋
再再杂云员 源猿援 缘园 依 员援 远远 藻 缘员援 员愿 芋
悦运 愿缘援 园园 依 圆援 苑猿 澡 要 要
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约园援 园缘水平差异显著遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
表 圆 拮抗菌株发酵液野三明治冶法复筛结果
栽葬遭造藻 圆 栽澡藻 则藻泽糟则藻藻灶蚤灶早 则藻泽怎造贼泽 燥枣 枣藻则皂藻灶贼藻凿 造蚤择怎蚤凿 憎蚤贼澡 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 枣怎灶早蚤 怎泽蚤灶早 野泽葬灶凿憎蚤糟澡冶 皂藻贼澡燥凿
菌株
杂贼则葬蚤灶
病原菌菌落直径 渊皂皂冤
悦燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则 燥枣 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟 枣怎灶早蚤
抑菌率 渊豫 冤
陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 则葬贼藻
蕴再员云员远 远援 远苑 依 园援 缘愿 遭 怨圆援 圆缘
再郧云猿 猿远援 园园 依 员援 园园 早澡 缘苑援 缘源
蕴在圆云猿 猿园援 园园 依 圆援 园园 枣 远源援 苑园
再在圆云怨 源缘援 园园 依 源援 园源 蚤 源苑援 园缘
再再杂云员 圆缘援 园园 依 源援 猿远 藻 苑园援 缘怨
再郧云怨 园援 园园 依 园援 园园 葬 员园园援 园园
再在圆云缘 圆员援 园园 依 员援 员缘 凿 苑缘援 圆怨
再郧云源 猿怨援 圆园 依 缘援 员猿 澡 缘猿援 愿愿
再在圆云员猿 园援 园园 依 园援 园园 葬 员园园援 园园
蕴再员云怨 园援 园园 依 园援 园园 葬 员园园援 园园
再在圆云员源 苑援 猿猿 依 园援 缘愿 遭 怨员援 猿愿
再在圆云愿 员员援 猿猿 依 员援 员缘 糟 愿缘援 源怨
再郧云员 猿苑援 园园 依 圆援 缘圆 澡 缘远援 苑园
再在圆云源 员源援 猿猿 依 园援 缘愿 糟 愿猿援 园圆
再郧云圆 员怨援 园园 依 圆援 远缘 凿 苑愿援 苑园
再再杂云远 圆员援 猿猿 依 猿援 苑怨 凿藻 苑源援 苑怨
再再云远 猿圆援 园园 依 圆援 缘圆 枣早 远圆援 猿缘
再再杂云愿 园援 园园 依 园援 园园 葬 员园园援 园园
悦运 愿缘援 园园 依 圆援 园园 躁 要
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约园援 园缘水平差异显著遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
圆源源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
表 猿 拮抗菌株发酵液改良琼脂扩散法复筛结果
栽葬遭造藻 猿 栽澡藻 则藻泽糟则藻藻灶蚤灶早 则藻泽怎造贼泽 燥枣 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 枣怎灶早蚤 枣藻则皂藻灶贼藻凿 造蚤择怎蚤凿 怎泽蚤灶早 蚤皂责则燥增藻凿 葬早葬则 凿蚤枣枣怎泽蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿
菌株
杂贼则葬蚤灶
拮抗菌菌落直径 渊皂皂冤
悦燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则 燥枣 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 泽贼则葬蚤灶泽
抑菌率 渊豫 冤
陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 则葬贼藻
再在员月猿 缘猿援 员园 依 员援 愿苑 葬 远圆援 源苑 葬
再再杂月员 源员援 圆缘 依 员援 员远 遭 源愿援 缘猿 遭
再在圆云员园 源员援 园园 依 员援 圆苑 遭 源愿援 圆源 遭
再在圆云怨 源源援 缘园 依 员援 远猿 糟 缘圆援 猿缘 糟
再郧云怨 缘猿援 园园 依 员援 源缘 葬 远圆援 猿缘 葬
悦运 愿缘援 园园 依 员援 怨愿 凿 要
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约园援 园缘水平差异显著遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
表 源 生防菌株在离体组织中的防治效果
栽葬遭造藻 源 栽澡藻 糟燥灶贼则燥造 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 泽贼则葬蚤灶泽 蚤灶 蚤泽燥造葬贼藻凿 责燥责造葬则 贼蚤泽泽怎藻泽
菌株
杂贼则葬蚤灶
病斑直径 渊皂皂冤
杂糟葬遭 凿蚤葬皂藻贼藻则
等级
郧则葬凿藻
病情指数
阅蚤泽藻葬泽藻 蚤灶凿藻曾
防治效果 渊豫 冤
悦燥灶贼则燥造 藻枣枣藻糟贼
再在员月猿 员猿援 源猿 依 园援 员远 凿 芋 源园援 园园 凿 圆源援 缘员 凿
再再杂月员 员远援 员缘 依 园援 圆源 糟 郁 远猿援 远猿 糟 猿员援 猿愿 糟
再在圆云员园 怨援 苑猿 依 园援 员员 遭 域 猿远援 缘缘 遭 远园援 缘愿 遭
再郧云怨 源援 源远 依 园援 员缘 葬 陨 圆员援 愿圆 葬 苑远援 源苑 葬
再再杂云愿 怨援 圆源 依 园援 圆园 遭 域 猿远援 缘缘 遭 远园援 缘愿 遭
悦运 圆员援 猿源 依 园援 圆苑 藻 灾 怨圆援 苑猿 藻 要
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验在 孕 约园援 园缘水平差异显著遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依
杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
图 员 菌株 再郧云怨 的菌落形态及产孢结构
云蚤早援 员 悦燥造燥灶赠 皂燥则责澡燥造燥早赠 葬灶凿 糟燥灶蚤凿蚤燥早藻灶燥怎泽 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨
摇 摇 葬院 菌株 再郧云怨在 孕阅粤培养基上的菌落形态渊员 伊 冤曰 遭院 再郧云怨 的菌丝形态渊源园园 伊 冤曰 糟院 再郧云怨 的分子孢子梗和分生孢子形态渊源园园
伊 冤遥 葬院 悦燥造燥灶赠 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 燥灶 孕阅粤 责造葬贼藻 渊员 伊 冤曰 遭院 澡赠责澡葬造 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 渊源园园 伊 冤曰 糟院 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻 葬灶凿
糟燥灶蚤凿蚤葬 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 渊源园园 伊 冤援
通过形态学特征初步判定 再郧云怨 菌株为木霉属 栽则蚤鄄
糟澡燥凿藻则皂葬真菌遥
圆援 缘援 圆 分类地位
对菌株 再郧云怨 的 陨栽杂 基因序列进行 孕悦砸 扩
增尧纯化尧测序后袁测得其序列长度为 远源怨 遭责遥 通过
构建的系统发育树分析发现 再郧云怨 菌株与序列号为
匀匝缘怨远怨缘远 的黄绿木霉聚为一支袁相似度为 怨怨豫 袁亲
缘关系最近袁同源性较高渊图 圆冤遥 综合菌株的形态
学特征以及分子鉴定结果袁确定 再郧云怨 菌株为黄绿
木霉 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻遥
猿 讨论
生物防治具有高效尧环保等优点袁是植物病害防
治的发展趋势咱员远暂 遥 植物内生菌是生物防治中重要
猿源源源 期 杨摇 蕾等院 防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定
图 圆 菌株 再郧云怨 与相关模式菌株的系统发育树
云蚤早援 圆 栽澡藻 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 再郧云怨 葬灶凿 则藻造葬贼藻凿 泽贼则葬蚤灶泽
的生物源袁对许多作物病害显示出良好的控制效果袁
而且具有多种生物学功能袁已成为了植物病理学尧微
生物学尧植物学等众多学科的研究热点咱员苑暂 遥 刘会香
等咱员愿暂从石榴果实中分离到一株枯草芽胞杆菌 月葬糟蚤造鄄
造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽袁发现其对杨树溃疡病菌有抑制作用遥 胥
丽娜等咱员怨暂测定了枯草芽胞杆菌对杨树溃疡病病原
菌菌丝生长的抑制作用遥 目前用于生物防治研究的
植物内生真菌的数量远少于内生细菌袁但由于大多
数病原菌都是真菌袁而内生真菌较其它内生菌而言袁
与病原菌拥有相同的生态位袁更易于发挥其竞争尧拮
抗等作用咱圆园暂 遥 本试验成功地从杨树干部组织中分
离到一株生防真菌 再郧云怨袁对杨树溃疡病的防治效
果可达 苑远援 源苑豫 遥
在室内进行平板对峙试验是目前筛选生防菌株
使用最多也最简便的方法遥 孙建波等咱圆员暂用平板对
峙法从香蕉根部土样中筛选到一株抑菌带直径达
怨 皂皂的枯萎病拮抗芽胞杆菌遥 徐大勇等咱圆圆暂在双层
琼脂培养基渊上层培养基含有病原菌孢子液冤上接
种拮抗菌株袁培养后测定菌株周围的抑菌圈直径袁由
此方法筛选到番茄灰霉病的生防放线菌菌株遥 本研
究通过对峙生长试验从 员员缘 株杨树内生菌中筛选得
到 圆源 株溃疡病拮抗菌株袁大大缩小了目的菌株的范
围遥 但是对峙生长法亦具有局限性袁如菌株拮抗能
力的强弱可能与供试菌与病原菌之间的距离或是供
源源源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
试菌产生的活性物质的扩散能力相关袁因此袁不能单
一地通过这种方法来筛选生防菌株遥 本试验在进行
发酵液复筛的过程中选用野三明治冶法和改良琼脂
扩散法相结合的方法袁从不同角度考虑了拮抗菌株
的竞争能力和活性物质扩散尧挥发能力等袁减少了在
平板对峙试验中的问题袁能够更充分地体现出拮抗
菌株对病原菌的抗生作用遥 在野三明治冶法测定中袁
病原菌和拮抗菌只隔着一层约 员皂皂厚的培养基袁减
小了拮抗菌分泌物扩散能力对拮抗作用的影响袁使
得接种后拮抗菌与病原菌间可以很快形成强的营养
竞争和相互作用袁同时避免了对峙试验中人为将病
原菌和拮抗菌分开 圆 耀 猿 糟皂 所形成的物理障碍问
题遥 在野三明治冶法复筛中袁各拮抗菌株均表现出较
好的防治效果袁可能是因为加入的发酵液为员 皂蕴袁抑
菌活性物质含量较高袁拮抗活性均较为明显遥 衡量
生防菌株是否优良的一个重要标准就是在实际应用
中能否保持稳定高效遥 通过组织离体试验筛选出的
菌株虽然和大田或是林间的实际应用情况有差别袁
但离体组织试验在很大程度上可以预示生物防治的
效果袁是林间试验的基础遥 本研究通过离体组织试
验袁从 缘 株对杨树溃疡病有良好防治效果的拮抗菌
株中筛选到一株内生生防菌株 再郧云怨袁该菌株对溃
疡病的生防效果显示了其抑菌活性良好的适用性和
稳定性袁这对于后续开发利用至关重要遥
大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌尧细
菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质袁比如细胞
壁降解酶类和次级代谢产物袁并能提高农作物的抗
逆性袁促进植物生长和提高农产品产量袁因此被广泛
用于生物防治尧生物肥料及土壤改良剂咱圆猿 原 圆源暂 遥 高克
祥等咱圆缘暂用哈茨木霉 栽则蚤糟澡燥凿藻皂葬 澡葬则扎蚤葬灶怎皂 菌株 栽愿愿
和深绿木霉 栽援 葬贼则燥增蚤则蚤凿藻 菌株 栽怨缘 分别对杨树烂皮
病菌 悦赠贼燥泽责燥则葬 糟澡则赠泽燥泽责藻则皂葬 和杨树水泡溃疡病菌
阅燥贼澡蚤燥则藻造造葬 早则藻早葬则蚤葬进行了拮抗作用研究袁结果表明
木霉菌株 栽愿愿 和 栽怨缘 对 圆 种病原菌均有明显的抑制
作用遥 本试验中袁综合菌株的形态学特征以及分子
鉴定结果袁确定 再郧云怨 菌株为黄绿木霉 栽援 葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻遥
前人对黄绿木霉菌株 栽员园员园 的生物学特性和发酵条
件咱圆远暂 袁以及对番茄生长和土壤的影响咱圆苑 原 圆愿暂等进行
了一系列研究袁表明黄绿木霉可以增加植物的抗逆
性袁促进番茄生长袁改善土壤肥力咱圆怨暂 遥 另外袁黄绿木
霉对水稻纹枯病和大豆根腐病都有良好的拮抗作
用咱猿园 原 猿员暂 遥 目前还未见关于黄绿木霉防治杨树病害
的报道袁本研究仅对黄绿木霉的分离鉴定进行了研
究袁对于该菌株的其它生物学特性尧抑菌机制以及生
防菌剂的研制等有待进一步研究遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 砸藻灶 允 匀袁 再藻 允 砸袁 蕴蚤怎 匀袁 藻贼 葬造援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶
燥枣 葬 灶藻憎 月怎则噪澡燥造凿藻则蚤葬 责赠则则燥糟蚤灶蚤葬 泽贼则葬蚤灶 允运鄄杂匀园园苑 葬泽 葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造
遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 葬早藻灶贼援 宰燥则造凿 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造鄄
燥早赠袁 圆园员员袁 圆苑院 圆圆园猿 原 圆圆员缘
咱圆暂 洪少民援 杨树防护林常见病害的诊断与防治援 安徽农学通
报袁 圆园员员袁 员苑渊员远冤院 愿源 原 愿缘
咱猿暂 张星耀袁 骆有庆援 中国森林重大生物灾害援 北京院 中国林业
出版社袁 圆园园猿
咱源暂 梁军袁 姜俊清袁 刘会香袁 等援 我国杨树与溃疡病菌互作的病
理学研究援 林业科学研究袁 圆园园缘袁 员愿渊圆冤院 圆员源 原 圆圆员
咱缘暂 王勇袁吴小芹援 苏北杨树溃疡病类型及其病原的致病力援 南
京林业大学学报渊自然科学版冤袁 圆园园愿袁 猿圆渊缘冤院 源苑 原 缘园
咱远暂 黄烈健袁 苏晓华援 我国杨树溃疡病研究进展援 世界林业研
究袁 圆园园猿袁 员远渊源冤院 源怨 原 缘猿
咱苑暂 龚文华袁 刘浩袁 朱国生援 杨树溃疡病发病规律及防治措施援
防护林科技袁 圆园园怨渊远冤院 员员缘 原 员员远
咱愿暂 何劲袁 雷帮星袁 宋贞富袁 等援 石斛内生细菌 阅耘月鄄圆对 缘种辣
椒病原真菌的抑制作用援 植物保护学报袁 圆园员源袁 源员渊圆冤院
员缘苑 原 员远圆
咱怨暂 卢丽俐袁 周国英袁 李河袁 等援 油茶炭疽病拮抗真菌的分离与
筛选援 经济林研究袁 圆园园怨袁 圆苑渊员冤院 缘源 原 缘远
咱员园暂 袁秀英袁 白红霞袁 白玉明袁 等援 杨树内生真菌的分离和拮
抗生防菌的筛选援 林业科学研究袁 圆园园远袁 员怨渊远冤院 苑员猿 原 苑员苑
咱员员暂 王静袁 崔令军袁 梁军袁 等援 中型景观尺度下杨树人工林林
分特征对树干病害发生的影响要以河南省清丰县为例援 生
态学报袁 圆园员员袁 猿员渊员园冤院 圆苑缘苑 原 圆苑远苑
咱员圆暂 王静袁 梁军袁 焦一杰袁 等援 杨树人工林林木个体大小比数
与溃疡病发生程度的关系援 林业科学袁 圆园员圆袁 源愿渊员员冤院
缘苑 原 远圆
咱员猿暂 原犇犇袁 曹支敏援 杨树腐烂病生防放线菌筛选及其活性产
物研究援 西北农林科技大学学报渊自然科学版冤袁 圆园园苑袁 猿缘
渊源冤院 员猿怨 原 员源源
咱员源暂 冯小慧袁 张星耀袁 严东辉援 杨树溃疡病病原的多重 孕悦砸检
测技术援 林业科学袁 圆园员圆袁 源愿渊缘冤院 苑圆 原 苑苑
咱员缘暂 黄立飞袁 罗忠霞袁 房伯平袁 等援 甘薯白绢病病原菌的鉴定援
植物保护学报袁 圆园员猿袁 源园渊远冤院 缘远怨 原 缘苑园
咱员远暂 潘朝勃袁 李其利袁 莫贱友袁 等援 杧果炭疽菌拮抗细菌的筛
选鉴定及其防病效果援 植物保护学报袁 圆园员猿袁 源园 渊远冤院
缘员苑 原 缘圆圆
咱员苑暂 月燥扎援藻灶葬 悦 粤袁 酝葬糟蚤藻躁 运 晕援 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿 糟澡藻皂蚤鄄
糟葬造 糟燥灶贼则燥造泽 燥灶 枣怎灶早葬造 糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽 糟燥造燥灶蚤泽蚤灶早 贼燥皂葬贼燥 渊蕴赠糟燥责藻则鄄
泽蚤糟燥灶 藻泽糟怎造藻灶贼怎皂 酝蚤造造援 冤 责造葬灶贼泽 葬灶凿 泽燥蚤造援 云燥造蚤葬 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则葬藻袁
圆园员圆袁 圆源渊员冤院 员猿 原 圆园
缘源源源 期 杨摇 蕾等院 防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定
咱员愿暂 刘会香袁 周翠袁 金静袁 等援 一株拮抗细菌的鉴定及其抗菌
特性援 林业科学袁 圆园员园袁 源远渊怨冤院 员员园 原 员员源
咱员怨暂 胥丽娜袁 徐亮袁 李磊袁 等援 枯草芽孢杆菌对杨树水泡溃疡
病菌菌丝生长的抑制作用援 菌物研究袁 圆园园苑袁 缘 渊猿冤院
员远缘 原 员远愿
咱圆园暂 杂糟澡憎葬则扎藻 云 宰 酝 砸袁 允葬怎泽泽 云袁 杂责藻灶糟藻则 悦袁 藻贼 葬造援 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣
葬灶 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽贼则葬蚤灶 枣燥则 则藻凿怎糟蚤灶早 贼澡藻 则葬贼藻 燥枣 憎燥燥凿
凿藻糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 遭赠 贼澡藻 憎澡蚤贼藻 则燥贼 枣怎灶早怎泽 孕澡藻造造蚤灶怎泽 灶燥曾蚤怎泽援 月蚤燥鄄
造燥早蚤糟葬造 悦燥灶贼则燥造袁 圆园员圆袁 远员院 员远园 原 员远愿
咱圆员暂 孙建波袁 王宇光袁 赵平娟袁 等援 香蕉枯萎病生防细菌的筛
选尧鉴定及其抑菌作用援 中国生物防治袁 圆园员园袁 圆远 渊猿冤院
猿源苑 原 猿缘员
咱圆圆暂 徐大勇袁 李志栋袁 李峰袁 等援 番茄灰霉病菌拮抗放线菌的
筛选尧鉴定及其活性评价援 中国生物防治学报袁 圆园员圆袁 圆愿
渊圆冤院 圆怨愿 原 猿园圆
咱圆猿暂 阅燥造葬贼葬遭葬凿蚤 运袁 郧燥造贼葬责藻澡 耘 酝袁 酝燥澡葬皂皂葬凿蚤 晕袁 藻贼 葬造援 月蚤燥糟燥灶鄄
贼则燥造 责燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 则燥燥贼 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 枣怎灶早蚤 葬灶凿 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽责藻糟蚤藻泽
葬早葬蚤灶泽贼 云怎泽葬则蚤怎皂 憎蚤造贼 燥枣 造藻灶贼蚤造 怎灶凿藻则 蚤灶 增蚤贼则燥 葬灶凿 早则藻藻灶澡燥怎泽藻
糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁
圆园员圆袁 员源院 源园苑 原 源圆园
咱圆源暂 耘造葬凿 再援 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 澡葬则扎蚤葬灶怎皂 栽猿怨 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 枣燥则 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造
燥枣 责造葬灶贼 凿蚤泽藻葬泽藻泽鄄糟燥灶贼则燥造 燥枣 月燥贼则赠贼蚤泽 糟蚤灶藻则藻葬袁 杂糟造藻则燥贼蚤灶蚤葬 泽糟造藻则燥贼蚤鄄
燥则怎皂 葬灶凿 悦造葬凿燥泽责燥则蚤怎皂 枣怎造增怎皂援 月蚤燥糟燥灶贼则燥造 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡鄄
灶燥造燥早赠袁 圆园园园袁 员园院 源怨怨 原 缘园苑
咱圆缘暂 高克祥袁 刘晓光袁 郭润芳袁 等援 木霉菌对杨树树皮溃疡病
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