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in vitro Pollen Germination and Storage Conditions of Calanthe tsoongiana

无距虾脊兰花粉离体萌发及储藏条件的研究



全 文 :书西北植物学报!
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&修改稿收到日期 !"#("#(#"
基金项目浙江省花卉育种重大科技项目" !"#!1#!2"2(#" # 作者简介
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鑫"
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#!男!在读硕士研究生!主要从事兰科植物的保护生物学研究
3(45.6
7 .508.0"2" ! #,%*9:4 " 通信作者
!
敏!博士!副研究员!主要从事兰科植物研究
3(45.6
;4.0##) ! #,%*9:4 无距虾脊兰花粉离体萌发 及储藏条件的研究 钱 ! 鑫#!刘 ! 芬!!牛晓玲%!王彩霞#!田 ! 敏#" " # 中国林业科学研究院亚热带林业研究所!浙江富阳 %##""
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中国科学院华南植物园!广州
)#",)"
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天目山国家自然保护区
管理局!浙江临安
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以天目山野生无距虾脊兰的花粉为材料!采用离体萌发法研究了花粉的储藏性以及不同的培养基组分和 培养条件对花粉萌发和花粉管生长的影响!并采用联苯胺 ( 过氧化氢法测定了其柱头的可授性!以筛选无距虾脊兰 花粉的培养方法以及储藏条件!为其种质资源保存等研究奠定基础结果表明"
#
#无距虾脊兰最适花粉液体培养
基为
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(
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&#蔗糖
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!并且在
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)温度
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温下培养
E !无距虾脊兰花粉萌发率" #*+#F #和花粉管生长" !+*! # 4 #最佳" ! #无距虾脊兰花粉在 &"D 中低温干燥储藏 %,"G 后仍具有 *)F
的萌发率"
%
#无距虾脊兰的柱头在开花前
)G
内均具有可授性!花粉块
在整个花期内均保持了
!*2,F
"
#*+#F
的生活力!但柱头可授性和花粉活力均随开花后时间的延长显著降低
关键词无距虾脊兰&花粉&生活力&储藏性 中图分类号
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H2*$! 文献标志码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花粉是被子植物雄配子体或者雄配子细胞的载 体+#,!具较强的遗传保守性+!,!是研究植物生殖生物 学)进化生物学)分类学以及育种工程的重要对 象+%,具生活力的花粉到达具可授性的柱头上的有 效传粉过程是植物顺利完成受精作用的必要条件! 故对花粉生活力与柱头可授性的研究是了解其有性 生殖的基础在杂交育种工作中!花粉生活力测定 与储藏性的研究是解决杂交亲本在时间与空间上的 隔离进而扩大育种范围的前提!并且花粉储藏也是 保存珍稀植物种质资源一个重要途径+$(,, 无距虾脊兰" !"#"$%&%())$ * +"$" Q*Q50 < N; M*Q*O50 < #!是一种中国特有的兰科" AT9E.G59N5N # 虾脊兰属" !"#"$%&S*@T* #植物!分布于浙江)福 建)江西)湖南)贵州等省区!生长于海拔 %"" " #$)" 4 的路边)山坡林下以及阴湿岩石上+(,花形似 虾!花色艳丽!唇瓣无距!蕊柱粗短!叶色浓绿并呈倒 卵状披针形!具较高的观赏价值与科研价值!已被列 为国家二级重点保护植物目前对该物种的报道仅 限于一些基本生物学特征+,)果实发育+2,)胚珠发育 及种子形成+#",等方面!关于其花粉生活力)储藏性 以及柱头可授性的研究未见报道本研究以野生无 距虾脊兰的花粉为研究对象!研究了不同培养基组 分及培养条件对花粉萌发率和花粉管生长的影响! 并对开花后不同时间内的花粉活力与柱头可授性进 行了观察分析!以筛选适宜于其花粉活力检测的培 养方法以及较适合的储藏条件!旨在为无距虾脊兰 的分类鉴定)传粉过程)杂交育种及种质资源保存等 研究提供基础资料 # ! 材料和方法 8*8 ! 材 ! 料 供试材料采自浙江省临安市天目山国家自然保 护区内的无距虾脊兰老殿" ##2_!)`3 ! %"_!#`B #野生 居群该地为亚热带季风气候类型!年平均气温 * D " #$*D !年降水量 #%2" " #+"44 !相对湿度 +,F " #F 于盛花期" % 月下旬 " $ 月上旬#晴天上午 #" $ "" 左右!选取当天开放的无距虾脊兰健康花序!置于冰 盒中迅速带回实验室在体视镜" A6 Y 4 C U/WZ,# # 下!用镊子去除药帽!用解剖针针头从黏盘处挑出花 粉块 8*9 ! 单因素试验 花粉萌发采用液体培养法!培养基基本成分同 @(a 试液" @TN]X5^NT50Ga]59^ # + ## , 在探讨每个 培养基因子时!以不加该因子作为参照!设置不同的 浓度蔗糖设置 , 个浓度梯度$ )" ) #"" ) #)" ) !"" ) !)" 和 %"" < ( = &# & ? % @A % ) 15 " BA % # ! ( $? ! A ) R < WA $ ( +? ! A 和 aBA % 也各设置 , 个浓度梯度$ #" ) !" ) %" ) $" ) " 和 ,"4 < ( = &#分别进行单因子筛 选每种培养液取 )4= 加入离心管中!每管放入 $ 个花粉块!置 !)D 的生化培养箱内分别暗培养 $E 后!用移液枪分装培养液于双凹载玻片上!每孔 !"" # = !于生物显微镜" A6 Y 4 C U/1K$# #下镜检!每种培 养液观测 ) 个玻片 #" 个凹孔!每个凹孔观察 )" 个 花粉粒!统计花粉萌发率花粉萌发以花粉管长度 明显大于花粉粒直径为标准 花粉萌发率" F # b "萌发的花粉粒数%花粉粒总 数# c#""F 花粉管的长度用 J45 < N(dT:38 C TN//,*" 软件 测量!至少选取 )" 个已萌发花粉粒的花粉管!统计 并计算出平均长度 8*: ! 最适培养基的筛选 在单因子实验的基础上!选取对无距虾脊兰花 粉萌发影响较大的培养基组分设计正交试验!以确 定培养基的不同组分的最佳组合 8*; ! 最佳培养条件的确定 利用最佳培养基方案!设置不同的温度" #)D ) !"D ) !)D ) %"D 和 %)D #)培养时间" #! ) !$ ) %, ) $ 和 ,"E #和 C ? 值" )*" ) *) ) ,*" ) ,*) ) +*" ) +*) 和 *" #!对无距虾脊兰花粉进行离体培养!以确定其花 粉萌发和花粉管生长的最适条件 8*< ! 花粉储藏性的测定 采集刚绽放花朵的花粉块与适量的硅胶颗粒充 分接触后装入离心管中!分别置于 $D ) &!"D ) &"D 的条件下储藏!并以室温 !)D 条件下储藏 做为对照组分别在储藏 #" ) %" ) 2" ) #)" ) %,"G 后 采用上述筛选出的最佳培养基成分与培养条件测定 花粉萌发率花粉在 &!"D 储藏和取出时经过 " D,E 的缓冲处理!而在 &"D 储藏和取出时经过 &!"D 和 "D 各 ,E 的缓冲处理+#!,在花粉储藏 %,"G 后对无距虾脊兰进行人工授粉! $ 个月后统计 结实率 !$% 西 ! 北 ! 植 ! 物 ! 学 ! 报 !!!!!!!!!!!!!!!!!!! %$ 卷 8*= ! 柱头可授性的检测 采用联苯胺 ( 过氧化氢法+#%,检测柱头的可授 性取开花后不同天数的花朵!将其柱头浸入凹载 玻片上的联苯胺 ( 过氧化氢反应液"体积比! #F 联苯 胺 e%F 过氧化氢 e 水 b$e##e!! #中于体视镜 " A6 Y 4 C U/WZ,# #下观察柱头周围是否呈现蓝色以 及产生大量气泡!根据气泡的数目来判断柱头可授 性的强弱!气泡数目达到 !" 个及以上时!其柱头可 授性强&在 ) 至 !" 个范围时!其柱头具可授性&在 ) 个以下!其柱头不具可授性!重复 % 次 8*> ! 数据处理 对所测定)记录的数据!运用 dIWO/;5/;./;.9/ #*" 软件进行方差分析和多重比较!用 AT. < .0*" 软件绘制柱形图 ! ! 结果与分析 9*8 ! 不同培养基组分对无距虾脊兰花粉离体培养 的影响 9*8*8 ! 蔗糖 ! 由图 # 可知!蔗糖是无距虾脊兰花粉 萌发的必需条件!花粉在不含蔗糖的培养基中不能 萌发随着蔗糖浓度的增加!花粉萌发率逐渐上升! 花粉管长度伸长当浓度达到 !"" < ( = &#时!花粉 萌发率和花粉管长度都达到了最大值!分别为 ,,*!#F 和 #2*## # 4 当浓度继续增大至 %"" < ( = &#时!花粉萌发率降低为 %2*"+F !但花粉管长度 并无显著差异" / # "*") #故最佳的蔗糖浓度为 !"" < ( = &# 图 # ! 蔗糖浓度对花粉萌发率及花粉管生长的影响 不同小写字母表示差异达 )F 显著水平&下同 M. < *# ! 3VVN9;:V/U9T:/N9:09N0;T5;.:0:0 C :6N0 < NT4.05;.:0T5;N50G C :6N0;UXN < T:];E+$,+%-) QENG.VVNTN0;0:T4566N;;NT/.0G.95;N/. < 0.V.950; G.VVNTN09N5;"*")6N\N6*QEN/54N5/XN6:] 9*8*9 ! 硼 ! 在一定的范围内!无距虾脊兰花粉萌发 率和花粉管长度随着硼酸浓度的升高而增加!当超 过一定浓度时!硼酸对花粉萌发起抑制作用"图 ! # 当硼酸浓度为 $"4 < ( = &#时花粉萌发率和花粉管 长度最大"分别为 ,"*"#F 和 !")*,, # 4 #!是对照 组"培养基中不添加硼酸#的 !*,2 倍和 #*, 倍!但 与浓度为 )"4 < ( = &#时的花粉萌发率和花粉管长 度的差异并不显著" / # "*") #因此硼酸的最佳浓 度为 $" " )"4 < ( = &# 9*8*: ! 钙 ! 钙对无距虾脊兰花粉萌发率与花粉管 长度的影响与硼相类似!在较低的浓度范围内!钙对 花粉萌发起促进作用"图 % #当钙离子浓度为 $" 4 < ( = &#时花粉萌发率最高!即 )$*%#F !为对照组 的 !*"# 倍而花粉管长度的最大值" !"#*"# # 4 # 发生在钙离子浓度为 )"4 < ( = &#的时候同样!在 图 ! ! 硼酸浓度对花粉萌发率及花粉管生长的影响 M. < *! ! 3VVN9;:V? % @A % 9:09N0;T5;.:0:0 C :6N0 < NT4.05;.:0T5;N50G C :6N0;UXN < T:];E+$,+%-) 图 % ! 钙离子浓度对花粉萌发率及花粉管生长的影响 M. < *% ! 3VVN9;:V15 !> 9:09N0;T5;.:0:0 C :6N0 < NT4.05;.:0T5;N50G C :6N0;UXN < T:];E+$,+%-) %$% ! 期 !!!!!!!!!!!!! 钱 ! 鑫!等$无距虾脊兰花粉离体萌发及储藏条件的研究 钙离子浓度为 $" 和 )"4 < ( = &#时!花粉萌发率与 花粉管长度的差异并不显著" / # "*") #因此无距 虾脊兰花粉萌发的最适钙离子浓度浓度也是 $" " )"4 < ( = &# 9*8*; ! 钾和镁 ! 在实验浓度范围内!钾离子和镁离 子对无距虾脊兰花粉萌发率与花粉管长度的影响均 不显著" / # "*") # 9*9 ! 无距虾脊兰花粉离体萌发最适培养基的筛选 在单因子实验的基础上!选择对无距虾脊兰花 粉离体萌发影响较大的蔗糖)硼酸和硝酸钙采用正 交实验设计!寻找 % 因子的最佳组合"表 # #方差 分析结果表明差异极显著的因子为蔗糖和硼酸" / $ "*"# #!硝酸钙及因素间的交互作用均不显著" / # "*") #利用该正交实验做进一步的平方和比较分 析!结果表明!无距虾脊兰花粉萌发率平方和的最高 值的培养基组合为 !"" < ( = &#蔗糖) )"4 < ( = &# ? % @A % 和 $"4 < ( = &# 15 " BA % # ! ( $? ! A !但此组合 在正交实验中并未出现!表 # 中最佳组合为 !" 号!即 !"" < ( = &#蔗糖) "4 < ( = &# ? % @A % 和 %"4 < ( = &# 15 " BA % # ! ( $? ! A 为了找出最佳培养基组合!增加 了 !"" < ( = &#蔗糖) "4 < ( = &# ? % @A % 和 $"4 < ( = &# 15 " BA % # ! ( $? ! A 这一组实验结果表明这组 培养基组合的花粉萌发率" +2*"F #与 !" 号培养基 并没有显著差异" / # "*") #但是!结合考虑钙离子 单因素实验的结果!无距虾脊兰花粉离体培养的最佳 培养基组合为 !"" < ( = &#蔗糖) "4 < ( = &# ? % @A % 和 $"4 < ( = &# 15 " BA % # ! ( $? ! A 9*: ! 培养条件对无距虾脊兰花粉离体培养的影响 9*:*8 ! 培养时间 ! 从图 $ 可以看出!培养时间小于 $E 时!无距虾脊兰花粉萌发率与花粉管长度随着 表 8 ! 无距虾脊兰花粉萌发的正交实验结果 Q5X6N# ! d:6N0 < NT4.05;.:0T5;N50G;UXN6N0 < ;E:V!.%())$ * +"$".0:T;E: < :056;N/; 编号 B:* 蔗糖 WU9T:/N %" < ( = &# # ? % @A % %" 4 < ( = &# # 15 " BA % # ! ( $? ! A %" 4 < ( = &# # 萌发率 PNT4.05;.:0 C NT9N0;5 < N % F 花粉管长度 d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注$ "" * 表示在 "*"# 水平差异极显著 B:;N $ "" 4N50/;ENG.VVNTN09N.//. < 0.V.950;5;;EN"*"#6N\N6* %
西
!

!

!

!

!

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
% 卷 培养时间的延长而增加超过 E
时!花粉萌发率
与花粉管长度有稍微增加!但与
E 时的差异并不 显著" / # "*") #而且随着培养时间的增加!培养 液中的微生物量也会逐渐增加!影响观察因此!无 距虾脊兰花粉离体萌发的最佳培养时间为 E

9*:*9
!
培养温度
!

)
显示!在
#)
"
!)D
范围内!
温度得升高对无距虾脊兰花粉的萌发起促进作用
!)D
时!花粉萌发率与花粉管长度达到最大值当
温度高于
!)D
时!无距虾脊兰花粉萌发率与花粉管
长度均随着培养温度的升高而显著下降可见温度
过高和过低都会抑制花粉萌发故无距虾脊兰花粉
离体培养的最适温度为
!)D

9?:?:
!
@
A

!
培养基的
C
?
值对花粉萌发同样有
显著的影响!由图
,
可以看出!当
C
?
值为
)*)

,*"
时!无距虾脊兰花粉萌发率与花粉管长度显著高

! 培养时间对花粉萌发率及花粉管生长的影响 M. < *
!
3VVN9;:V.09UX5;.:0;.4N:0
C
:6N0
<
NT4.05;.:0
T5;N50G
C
:6N0;UXN
<
T:];E+,+%-) 图 ) ! 温度对花粉萌发率及花粉管生长的影响 M. < *) ! 3VVN9;:V;N4 C NT5;UTN:0 C :6N0 < NT4.05;.:0 T5;N50G C :6N0;UXN < T:];E+,+%-)
于其它处理组当
C
?
值低于
)*)
或者高于
,*"
时!无距虾脊兰花粉的萌发和花粉管的生长都受到
了抑制因此!无距虾脊兰花粉离体萌发的最佳
C
?
值为
)*)
"
,*"

9*;
!
花粉储藏性测定
从表
!
中可以看出!无距虾脊兰花粉萌发率与
储藏条件密切相关储藏时间相同的情况下!低温
下储藏的花粉萌发率高于室温下的花粉萌发率在
!)D
条件下储存
E 后!无距虾脊兰花粉萌发力 基本丧失在 D
条件下储存
#"G
后!花粉萌发率
迅速下降为
#,*,%F

&!"D

&"D
低温条件
显著降低了花粉萌发率的下降速度!在储藏
%,"G
后花粉仍然可以萌发!萌发率分别为
!,*,#F

*)F 在 %"G 的储藏时间内! &!"D 和 &"D 两个储藏条件之间的花粉萌发率的差异不显著" / # "*") #但是储藏 2"G 后! &"D 储藏条件下的 无距虾脊兰花粉萌发率显著高于 &!"D 条件下的 花粉萌发率" /
"*")
#因此!
&"D
的储藏效果
最佳取
&"D
储藏
%,"G
后的花粉进行授粉!结
实率达
*"2F

9*<
!
花粉生活力与柱头可授性
无距虾脊兰的单花平均花期为"
2f%
#
G
由表
%
可以看出!开花当天的花粉萌发率最高!之后逐渐
降低!开花
2G
后花粉萌发率显著降低!但在单花花
期结束时!花粉依然具有一定的生活力无距虾脊
兰柱头上分布丰富的紫色粘性物质!表面微凹柱
头可授性在开花的前
%G
最强!从开花第
天起柱 头可授性开始减弱!到开花第 , 天部分柱头已不具 可授性!至开花第 2 天时!柱头萎蔫!变黑并失去粘 性!完全丧失可授性 图 , !C ? 值对花粉萌发率及花粉管生长的影响 M. < *, ! 3VVN9;:V C ?\56UN:0 C :6N0 < NT4.05;.:0 T5;N50G C :6N0;UXN < T:];E+,+%-)
)% ! 期 !!!!!!!!!!!!! 钱 ! 鑫!等无距虾脊兰花粉离体萌发及储藏条件的研究

9
!
不同储藏条件下无距虾脊兰的花粉萌发率
Q5X6N!
!
d:6N0
<
NT4.05;.:0T5;N:V!.%()) * +""U0GNTG.VVNTN0;/;:T5
<
N9:0G.;.:0/
储藏时间
W;:T5
<
N;.4N
%
G
花粉萌发率
PNT4.05;.:0T5;N
%
F
!)D D &!"D &"D " #*+#f!*)!5 #*+#f!*)!5 #*+#f!*)!5 #*+#f!*)!5 #" "*""f"*""E #,*,%f#*+ < +*,,f%*"2X +*%,f#*%%5X
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数据后面的不同字母代表差异达到显著水平" /
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B:;N
g.VVNTN0;6N;;NT/56:0 < /.GN:VG5;5.0G.95;N/. < 0.V.950;G.VVNTN09N5;"*")6N\N6* 表 : ! 无距虾脊兰的花粉活力与柱头可授性 Q5X6N% ! d:6N0\.5X.6.; Y 50G/;. < 45 TN9N C ;.\.; Y :V!.%())
*
+"" 开花天数 g5 Y /:VV6:]NT.0 < % G 花粉萌发率 PNT4.05;.:0T5;N % F 柱头可授性 W;. < 45TN9N C ;.\.; Y # #*+#f!*)!5 >> ! +*,#>%*5X >> % +,*##>!*"25X >> +%*2>!*,!5X >
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数据后面的不同字母代表差异达到显著水平" /
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>>*
具有
强可授性&
>*
具有可授性&
>
%
&*
部分柱头具可授性&
&*
不具可授性
B:;N
g.VVNTN0;6N;;NT/56:0 < /.GN:VG5;5.0G.95;N/. < 0.V.950;G.VVNTN09N5;"* ")6N\N6 & >> 4N50/E. < E/;. < 45TN9N C ;.\.; Y & > % & 4N50//:4N/;. < 45E5\N TN9N C ;.\.; Y & > 4N50/0:T456/;. < 45TN9N C ;.\.; Y & & 4N50/0:/;. < 45TN9N C ;.\.( ; Y * % ! 讨 ! 论 兰科植物的花粉块结构减缓了其花粉离体萌发 速度+#,!故使用液体培养基可以明显提高其花粉萌
发效率+#),蔗糖是大多数植物花粉离体培养所必
需的成分!它为花粉的萌发和花粉管的生长提供了
碳源!并且起到了维持培养基的花粉粒内外的渗透
平衡的作用+#,,蔗糖浓度对无距虾脊兰花粉萌发
的影响较为明显!未添加蔗糖的培养基中无距虾脊
兰花粉不能萌发!当浓度为
!""
<
(
=
&#时!萌发率
最高!浓度继续增高时!高的渗透压会造成花粉细胞
壁的质壁分离!从而抑制花粉萌发+#+,绝大多数的
研究显示培养基中添加一定的蔗糖会对花粉萌发起
促进作用+,!#)!#+(#2,!但是龚双姣等+!",发现培养基中
不添加蔗糖反而更有利于蜡梅 "
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#花粉的萌发!其具体机制目前还不明确
硼离子能够与蔗糖结合形成络合物!使其易于通过
质膜在组织中运输!进而促进蔗糖的吸收和代谢!硼
离子还参与了花粉管顶端细胞壁的形成+#2!#,!因而
一定浓度的硼可以提高花粉的萌发率硼离子浓度
不足会阻碍花粉的萌发!而且会导致花粉管的形态
异常+!!,本实验中!促进无距虾脊兰花粉萌发的最
佳硼浓度为
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度并不相同!如无距虾脊兰为
" " )"4 < ( = &# !远低 于杂种卡特兰" #""4 < ( = &# # + #) ,和大花蕙兰" ! 7 18 ;+9+21& 7 ;-+9+21 #" #)"4 < ( = &# # + !) , 然而!但这三 个因素共同起作用时!蔗糖和硼对无距虾脊兰花粉 的萌发起最主要作用!钙离子次之!因素间的交互作 用也不明显!无距虾脊兰花粉离体培养的最佳液体 培养基组合为 !"" < ( = &#蔗糖 >)"4 < ( = &# ? % @A % >"4
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不遇或需异地授粉!可将父本花粉储藏于
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