全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４５(１): ８４￣８７(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０４￣２３ꎻ 修回日期: ２０１４￣１０￣０９
基金项目: 云南省科技厅重点新产品开发计划(２０１１Ｂ００８)ꎻ 公益性行业(农业)科研专项经费资助(２０１３０３０１８)
通讯作者: 赵志坚ꎬ研究员ꎬ主要从事植物真菌、卵菌病害研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｈｉｊｉａｎｚｈａｏ＠ ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０１.０１２
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研究简报
云南魔芋新病害—疫病病原菌的鉴定
孙道旺１ꎬ３ꎬ４ꎬ 曹继芬２ꎬ 裴卫华２ꎬ 尹桂芳１ꎬ３ꎬ４ꎬ 马继琼１ꎬ３ꎬ４ꎬ 潘开华５ꎬ
吴 康５ꎬ 赵 琴５ꎬ 段钟情６ꎬ 杨明英２ꎬ 王 玲１ꎬ３ꎬ４ꎬ 赵志坚２∗
( １云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所ꎬ昆明 ６５０２２３ꎻ ２云南省农业科学院农业环境资源研究所ꎬ昆明 ６５０２０５ꎻ
３云南省农业生物技术重点实验室ꎬ昆明 ６５０２２３ꎻ ４农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室ꎬ昆明 ６５０２２３ꎻ
５ 云南省农业科学院富源魔芋研究所ꎬ富源 ６５５５００ꎻ ６云南省富源县植保植检站ꎬ富源 ６５５５００)
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｋｏｎｊａｃ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ 　 ＳＵＮ
Ｄａｏ￣ｗａｎｇ１ꎬ３ꎬ４ꎬ ＣＡＯ Ｊｉ￣ｆｅｎ２ꎬ ＰＥＩ Ｗｅｉ￣ｈｕａ２ꎬ ＹＩＮ Ｇｕｉ￣ｆａｎｇ１ꎬ３ꎬ４ꎬ ＭＡ Ｊｉ￣ｑｉｏｎｇ１ꎬ３ꎬ４ꎬ ＰＡＮ Ｋａｉ￣ｈｕａ５ꎬ ＷＵ
Ｋａｎｇ５ꎬＺＨＡＯ Ｑｉｎ５ꎬ ＤＵＡＮ Ｚｈｏｎｇ￣ｑｉｎｇ６ꎬ ＹＡＮＧ Ｍｉｎｇ￣ｙｉｎｇ２ꎬ ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ１ꎬ３ꎬ４ꎬ ＺＨＡＯ Ｚｈｉ￣ｊｉａｎ２ 　 ( １Ｂｉｏ￣
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
２Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ＆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０５ꎬＣｈｉｎａꎻ ３Ｙｕｎｎａｎ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２３ꎬＣｈｉｎａꎻ ４Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｒｏｐ Ｇｅｎｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ
Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎꎬ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＫｕｎｍｉｎｇ ６５０２２３ꎬＣｈｉｎａꎻ ５Ｆｕｙｕａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｋｏｎｊａｃꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｆｕｙｕａｎ ６５５５００ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ６Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｙｕａｎ Ｃｏｕｎｔｙ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ
Ｆｕｙｕａｎ ６５５５００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｎｅｗ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｏｎ ｋｏｎｊａｃ ａｎｄ ｃａｕｓｅｄ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｌｏｓｓ ｉｎ Ｆｕｙｕａｎ Ｃｏｕｎｔｙꎬ ａ ｍａｉｎ ｋｏｎｊａｃ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｒｅａ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ. Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｋｏｃｈ’ｓ ｐｏｓｔｕｌａｔｅｓ ａｎｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｗｏ ｔａｒｇｅｔｓꎬ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ￣ＩＴＳ ａｎｄ Ｃｏｘ２. Ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｄ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ａｎａｌｙｚｅｄ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｎｅｗ
ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｋｏｎｊａｅ. Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｏｒｍｅｄ ｗｈｉｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｏｎ ｃｌａｒｉｆｉｅｄ Ｖ８ ａｇａｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｙｐｈａ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ｗｉｔｈｏｕｔ ｓｅｐｔｕｍꎬ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅｓ ａｎｄ ｆｏｒｍｉｎｇ ｏｖｏｉｄ ｏｒ ｏｂｐｙｒｉｆｏｒｍ ｓｐｏｒａｎｇｉａ ｗｉｔｈ ｏｂｖｉｏｕｓ
ｐａｐｉｌｌａｔｅ. Ｂｏｔｈ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ａｎｄ Ｃｏｘ２ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｓｈａｒｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｈａｄ
９９％ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ｋｎｏｗｎ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ. Ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ａｌｓｏ ｓｈｏｗｅｄ ｂｏｔｈ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｄ
Ｐ. ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｕｂ￣ｇｒｏｕｐ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｌｉｇｈｔ
ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｋｏｎｊａｃ ｗａｓ Ｐ. ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ. Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｏｕｒ ｋｎｏｗｎｌｅｄｇｅꎬ ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｎｅｗ ｈｏｓｔ ｏｆ
Ｐ. ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ ａｎｄ ｎｅｗ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｋｏｎｊａｃ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｋｏｎｊａｃꎻ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅꎻ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅꎻ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０１￣００８４￣０４
　 　 魔芋为天南星科 (Ａｒａｃｅａｅ)魔芋属 ( Ａｍｏｒ￣
ｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ Ｂｌｕｍｅ)植物ꎬ是富含葡甘露聚糖的经济
作物ꎮ 随着人们对魔芋葡甘露聚糖的进一步研究
和深度开发利用ꎬ魔芋的生产越来越受到重视ꎬ种
植方式也由传统的半野生零星种植转向规模化大
面积种植ꎮ
　
　 １期 孙道旺ꎬ等:云南魔芋新病害———疫病病原菌的鉴定
　 　 云南是魔芋的起源中心之一[１]ꎬ其气候环境
非常适宜魔芋的生长和种植ꎬ但由于规模化种植程
度的扩大以及芋农较为粗放的栽培管理方式ꎬ魔芋
病害日趋严重ꎬ新病害亦不断出现ꎮ ２０ 世纪 ９０ 年
代初ꎬ我国魔芋有 ３ 种主要病害ꎬ现已增至 １１ 种ꎮ
最近在云南省魔芋不同生育期的叶片及茎杆上又
发现一种新病害———魔芋疫病ꎮ 该病水渍状的黑
褐色病斑在叶片上首先出现ꎬ随后病斑沿茎杆向下
扩展ꎬ引起植株叶片枯萎ꎬ严重时整个植株枯萎死
亡ꎮ 魔芋球茎感病后ꎬ魔芋生长中后期整个植株褪
绿变黄直至枯萎死亡ꎬ严重影响魔芋产量和质量ꎮ
本文通过形态学和分子生物学技术ꎬ对魔芋疫病新
病害进行鉴定ꎬ以期为魔芋疫病的深入研究和病害
防治提供科学依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 供试材料
１.１.１　 病样采集　 魔芋疫病病样于 ２０１２年 ７月采
自云南省富源县魔芋种植区ꎮ 魔芋品种为花魔芋
(Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｋｏｎｊａｃ)ꎮ
１.１.２　 培养基　 加有抗生素终浓度分别为 ５０ ｍｇ /
Ｌ利福平、１００ ｍｇ / Ｌ氨苄青霉素和 １５０ ｍｇ / Ｌ五氯
硝基苯的选择性黑麦固体培养基(ＲＳＡ)和澄清
Ｖ８蔬菜汁培养基(Ｃ￣Ｖ８Ａ)ꎮ
１.１.３　 魔芋苗　 在水培条件下繁育的苗龄为 １ 年
的花魔芋脱毒苗ꎮ
１.２　 试验方法
１.２.１　 病原菌分离　 取具有典型疫病症状的叶片
和茎用于病原菌的分离ꎮ 将供试病样表面消毒后ꎬ
用无菌手术刀切取病健交界处约 ０.５ ｃｍ×０.６ ｃｍ
的小块组织ꎬ接于准备好的 ＲＳＡ培养基中ꎬ２５℃黑
暗培养 ３~４ ｄꎮ 待长出菌落后ꎬ挑取菌丝尖端对分
离的病原菌进一步纯化ꎬ获得纯培养ꎮ
１.２.２　 致病性测定　 分离获得的纯培养用柯赫氏
法则进行验证ꎮ 致病性测定采用菌丝块和游动孢
子悬浮液接种花魔芋健康植株进行ꎮ 分离物游动
孢子的诱导参考 Ｚｈｅｎｇ[２]的方法进行ꎮ 将获得的
纯培养菌株 ２５℃黑暗培养 ５ ｄ后ꎬ用打孔器从菌落
边缘切取直径为 ０.５ ｃｍ 的菌饼ꎬ将菌丝面向下接
种于花魔芋健康植株叶片上ꎬ每个菌株 ３ 次重复ꎻ
用诱导产生的浓度约 １×１０４个 / ｍＬ 的游动孢子悬
浮液接种健康魔芋叶片及茎杆ꎬ每个菌株 ３ 次重
复ꎮ 接种后的魔芋植株置于温度为 ２３℃、相对湿
度为 ７０％~ ８０％的人工气候箱中 １６ ｈ 光照 ８ ｈ 黑
暗培养 ５~７ ｄ后调查致病性结果ꎮ
１.２.３　 病原菌的分子生物学鉴定
　 　 (１)基因组 ＤＮＡ提取　 供试菌株菌丝体基因
组 ＤＮＡ提取采用修改的 ＣＴＡＢ 法ꎬ提取的基因组
ＤＮＡ保存于－２０℃备用ꎮ
　 　 (２) ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 与 Ｃｏｘ２ 基因的 ＰＣＲ 扩增及测
序　 采用真菌核糖体 ｒＤＮＡ 区通用引物 ＩＴＳ１(ＴＣ￣
ＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ ) 和 ＩＴＳ４ ( ＴＣＣＴＣ￣
ＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ )ꎬ 扩 增 ＩＴＳ１￣５. ８Ｓ￣ＩＴＳ２
ｒＤＮＡ 全序列及部分 １８Ｓ 和 ２８Ｓ ｒＤＮＡ 序列ꎻ采用
疫霉菌细胞色素 ｃ 氧化酶亚单位 (Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃ
ｏｘｉｄａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ＩＩꎬＣｏｘ２)基因引物 ＦＭ７５ (５′￣ＣＴＴ￣
ＧＧＣＡＡＴＴＡＧＧＡＴＴＴＣＡＡＧＡＴ￣３′) 和 ＦＭ７８ ( ５′￣
ＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡＣＴＡＣＡＴＴＧＴＣＣ￣３′)ꎬ 扩增 Ｃｏｘ２
基因[３]ꎮ 目的片段经 ＤＮＡ 胶回收试剂盒回收纯
化后ꎬ由华大基因公司测序ꎮ
　 　 (３) ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ和 Ｃｏｘ２ 序列及系统发育分析
　 　 魔芋疫病分离物测序获得的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 和
Ｃｏｘ２ 序列ꎬ用生物信息学分析软件 ＤＮＡＳｔａｒ 的
ＳｅｑＭａｎ程序进行拼接、人工校对ꎬ编辑后获得的准
确序列提交 ＧｅｎＢａｎｋꎮ 参考疫霉属 ２０１２ 年最新分
组ꎬ从 ＮＣＢＩ下载与烟草疫霉同一组群(Ｃｌａｄｅ Ｉ)的
所有疫霉种以及其他组群的部分疫霉种的 ｒＤＮＡ￣
ＩＴＳ和 Ｃｏｘ２序列进行系统发育分析ꎮ 不同疫霉种
的系统发育用 Ｍｅｇａ ５.０ 来分析ꎬ采用 ＮＪ( ｎｅｉｇｈ￣
ｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ)算法 １ ０００ 次重复构建系统发育树ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 病原菌的分离及形态学特征
　 　 从具有典型疫病症状的叶片和茎杆上共分离
获得 ５ 个纯培养菌株(ＡＫ１２０１、ＡＫ１２０２、ＡＫ１２０３、
ＡＫ１２０４和 ＡＫ１２０５)ꎮ 在 ２５℃黑暗培养条件下ꎬ
不含抗生素的 Ｃ￣Ｖ８Ａ 上ꎬ５ 个纯培养菌株的菌株
特征一致ꎬ均为白色菌落ꎬ菌落生长速率较快ꎬ气生
菌丝较旺盛ꎬ菌落均匀一致ꎬ边缘较整齐ꎮ 菌丝无
隔ꎬ孢囊梗不规则分枝或不分枝ꎬ孢子囊不从孢囊
梗上脱落ꎬ孢子囊形态多样ꎬ常为倒梨形、卵形、卵
圆形、梨形或近球形ꎬ大多数顶生ꎬ偶尔侧生ꎬ具明
显乳突ꎮ 厚垣孢子球形到卵圆形、光滑ꎬ顶生或间
５８
　
植物病理学报 ４５卷
生(图 １)ꎮ 观察魔芋疫病分离物菌落、孢子囊和厚
垣孢子形态特征ꎬ初步确定病原物为卵菌纲疫霉
菌[２]ꎮ
２.２　 病原菌的致病性
　 　 分别用 ５个纯培养分离物的菌丝块和诱导获
得的游动孢子囊悬浮液ꎬ接种健康魔芋叶片或茎杆
保湿培养 ３ ｄ后ꎬ结果发现菌丝块和游动孢子囊悬
浮液接种的叶片或茎杆均出现水渍状、扩展性的病
斑ꎬ症状与魔芋在田间发病的初期症状一致(图
２)ꎮ 随机挑取接种的发病组织进行分离ꎬ均可得
到与原来接种的菌落特征相同的分离物ꎮ 根据柯
赫氏法则ꎬ证实获得的 ５个纯培养分离物即为引起
魔芋疫病的病原菌ꎮ
２.３　 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ和 Ｃｏｘ２ 序列分析
　 　 为了准确鉴定魔芋疫病的病原菌ꎬ挑取菌株
ＡＫ１２０２ 进行 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 和 Ｃｏｘ２ 序列的分析ꎮ
ＤＮＡ片段经胶回收后测序分析ꎬｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列长
度为 ８４０ ｂｐ (ＧｅｎＢａｎｋ 登录号:ＫＦ６０１１９４)ꎬＣｏｘ２
基因序列长度为 ５４４ ｂｐ ( ＧｅｎＢａｎｋ 登录号:
ＫＦ６３６１３３)ꎮ 将菌株 ＡＫ１２０２ 的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 和
Ｃｏｘ２序列在 ＮＣＢＩ 中利用 ＢＬＡＳＴＮ程序进行同源
搜索ꎬ发现与其 ＩＴＳ 和 Ｃｏｘ２ 序列同源性最高的菌
株均 为 烟 草 疫 霉 ( Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ )ꎬ
ＡＫ１２０２菌株与它们的同源性均为 ９９％ꎮ 通过对
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ和 Ｃｏｘ２ ２个靶标序列的分析ꎬ将引起魔
芋疫病的病原菌鉴定为烟草疫霉ꎮ
２.４　 魔芋疫病菌的系统发育
　 　 分别将鉴定的魔芋疫病菌 ＡＫ１２０２ 的 ＩＴＳ 和
Ｃｏｘ２序列与从 ＧｅｎＢａｎｋ获取的疫霉种组群 Ｉ 及其
他组群部分疫霉种的相应序列进行比对ꎬ并构建系
统发育树ꎮ在以 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列构建的系统发育
Ｆｉｇ. １　 Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｋｏｎｊａｃ
Ａ: Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ Ｃ￣Ｖ８ ｍｅｄｉｕｍꎻ Ｂ: Ｇｌｏｂｕｌａｒ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅｓꎻ Ｃ: Ｐａｐｉｌｌａｔｅ ｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ. Ｂａｒ＝ ２０ μｍ.
Ｆｉｇ. ２　 Ｓｙｍｐｔｏｍ ｏｆ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｋｏｎｊａｃ
Ａ: Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｃｃｕｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄｓꎻ ＢꎬＣ: Ｓｙｍｐｔｏｍ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ. ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｙｃｅｌｉａ ｐｌｕｇｓ ａｎｄ ｚｏｏｓｐｏｒｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
６８
　
　 １期 孙道旺ꎬ等:云南魔芋新病害———疫病病原菌的鉴定
树中ꎬＡＫ１２０２ 与疫霉种组群 Ｉ 的所有疫霉种位于
同一个大的组群ꎬ而且与 ＧｅｎＢａｎｋ 中所有已知的
烟草疫霉的遗传距离最近ꎬ位于系统发育树的同一
分支ꎻ以 Ｃｏｘ２基因构建的系统发育树也有一致的
结果ꎬ魔芋疫病菌 ＡＫ１２０２与所有已知的烟草疫霉
聚类于同一分支ꎬ进一步证实分离得到的病原菌为
烟草疫霉ꎮ
３　 讨论
　 　 传统的植物病原菌分类和鉴定方法通常以形
态特征和生理生化指标作为依据ꎮ 疫霉属病原菌
传统的鉴定主要包括孢子囊、孢囊梗、厚垣孢子、有
性器官、菌丝和菌落等形态特征ꎬ由于疫霉属病原
菌形态变异大ꎬ一些分类、鉴定的依据不太稳定ꎬ因
此疫霉属种的分类与鉴定难度较大[２ꎬ ４]ꎮ
　 　 近年来ꎬＤＮＡ 技术的快速发展有效地弥补了
传统分类方法的不足ꎬ其中 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 成为植物病
原菌分类和鉴定应用最广泛的靶标之一ꎬ成功用于
大量真菌和卵菌的鉴定ꎮ 传统鉴定方法与 ＤＮＡ
技术结合ꎬ极大地提高了植物病原物种类鉴定的准
确性ꎮ 然而对于一些亲缘关系非常相近的疫霉近
缘种或姊妹种ꎬ有时候仅靠单一的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 序列
可能也难以区分ꎬ需要同时对其他保守的靶基因进
行分析ꎬ这样才能更准确地进行物种的鉴定或分
类[５]ꎮ 大量疫霉种的线粒体 ＤＮＡ(ｍｔＤＮＡ)编码
区测序显示 Ｃｏｘ２ 和 Ｃｏｘ１基因适合于疫霉属广谱
的系统发育分析[３]ꎮ 因此ꎬ本文除了利用 ｒＤＮＡ￣
ＩＴＳ序列对病原菌进行鉴定外ꎬ还使用 Ｃｏｘ２ 基因
序列进行分析ꎬ发现魔芋疫病菌 ２ 个靶标 ＤＮＡ 序
列与已知烟草疫霉的同源性均为 ９９％ꎬ确保了鉴
定结果的可靠性ꎬ而且通过系统发育分析也进一步
明晰了病原菌的归属ꎮ
　 　 本研究首次发现烟草疫霉侵染魔芋引起叶、茎
疫病ꎬ这是魔芋为烟草疫霉新寄主的首次报道ꎬ表
明烟草疫霉在云南的发生与危害范围逐步扩大ꎮ
烟草疫霉通常引起土传病害ꎬ植株病原残体、厚垣
孢子或卵孢子往往成为侵染源引发病害ꎬ防治困
难ꎬ易造成毁灭性危害ꎮ 当前ꎬ魔芋疫病已给云南
魔芋产业的健康发展带来威胁ꎮ 本研究明确其病
原菌为烟草疫霉ꎬ可为魔芋疫病的识别与诊断ꎬ病
害的有效防控以及减少病害损失提供帮助ꎮ
参考文献
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ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｆｏｒ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｒｉｖｅｄ
ｆｒｏｍ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ[Ｊ] . Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００８ꎬ４５:２６６－２７７.
责任编辑:于金枝
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