全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４５(１): ９７￣１００(２０１５)
收稿日期: ２０１４￣０２￣０４ꎻ 修回日期: ２０１４￣１０￣０９
基金项目: 安徽省烟草公司科技攻关项目“安徽省烟草有害生物调查研究” ( ２０１００５５１００５)ꎻ公益性行业(农业)科研专项经费资助
(２０１２０３０９１)
通讯作者: 高正良ꎬ研究员ꎬ主要从事烟草病虫害研究ꎻＴｅｌ:０５５１－６５１４８９８７ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｇａｏｚｌ６３＠ｓｏｈｕ.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０１.０１５
研究简报
利用 ｓｉＲＮＡ高通量测序技术检测烟草病毒
王 芳ꎬ 周本国ꎬ 许大凤ꎬ 高正良∗
(安徽省农业科学院烟草研究所ꎬ 合肥 ２３００３１)
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ＲＮＡ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｙ Ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｓｉＲＮＡ
ＷＡＮＧ Ｆａｎｇꎬ ＺＨＯＵ Ｂｅｎ￣ｇｕｏꎬ ＸＵ Ｄａ￣ｆｅｎｇꎬ ＧＡＯ Ｚｈｅｎｇ￣ｌｉａｎｇ (Ｔｏｂａｃｃｏ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ａｎｈｕｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ￣
ｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｈｅｆｅｉ ２３００３１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｐｌａｎｔ ｏｂｔａｉｎｓ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ＲＮＡ ｖｉｒｕｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ＲＮＡ (ｓｉＲＮＡ) ｍｅｃｈａｎｉｓｍ. ｗｅ
ａｄｏｐｔ ｎｅｘｔ￣ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ ｐｅｒｆｏｒｍ ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｔａｂａｃｃｏ ｓｉＲＮＡ ａｎｄ
ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ ＲＮＡ ｖｉｒｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｍｅｔｈｏｄｓ. Ｗｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ＰＶＹꎬ ＣＭＶꎬ ＴＭＶꎬ ＴＶＢＭＶ
ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｍｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ａｎｈｕｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ. Ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａ ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｔｏ ｆｉｎｄ ｎａｔｕｒａｌｌｙ
ＲＮＡ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏꎬ ａｎｄ ｔｈｉｓ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｖｉｒｕｓ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇꎻ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ＲＮＡꎻ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉｒｕｓ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０１￣００９７￣０４
烟草是我国的主要经济作物之一ꎬ病毒病是烟
草生产上的重要病害ꎮ 常见的烟草病毒主要有马
铃薯 Ｙ病毒(Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ ＹꎬＰＶＹ)、黄瓜花叶病毒
(Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬＣＭＶ)、烟草花叶病毒
(Ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬＴＭＶ)、烟草脉带花叶病毒
( Ｔｏｂａｃｃｏ ｖｅｉｎ ｂａｎｄｉｎｇ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓꎬ ＴＶＭＢＶ )
等[１]ꎮ 此外ꎬ近年来在烟草上还发生一些新的病
毒病害ꎬ如南美红辣椒脉斑驳病毒 (Ｃｈｉｌｌｉ ｖｅｉｎａｌ
ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓꎬＣｈｉＶＭＶ) [２]、番茄环纹斑点病毒(Ｔｏ￣
ｍａｔｏ ｚｏｎａｔｅ ｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓꎬ ＺＴＳＶ) [３]和番茄斑萎病毒
(Ｔｏｍａｔｏ ｓｐｏｔｔｅｄ ｗｉｌｔ ｖｉｒｕｓꎬ ＴＳＷＶ) [４]ꎮ 这些病毒
都对烟草造成严重的危害ꎮ 调查烟田已知和未知
的病毒ꎬ对了解不同烟区病毒病情况ꎬ防治和控制
病毒病具有一定意义ꎮ
植物具有天然抗病毒机制ꎬ当外来的 ＲＮＡ 病
毒在植物体内复制时ꎬ机体会启动该机制ꎬ产生大
量针对入侵病毒的 ｓｉＲＮＡꎮ ｓｉＲＮＡ 是长为 ２０ ~ ２５
个核苷酸的小分子 ＲＮＡꎬ在植物体内通过与靶
ＲＮＡ结合导致靶 ＲＮＡ 的降解ꎮ 由于 ｓｉＲＮＡ 具有
分子量小的特点ꎬ可以很容易地与细胞中的
ｍＲＮＡꎬ ｔＲＮＡꎬ ｒＲＮＡ 区别出来ꎬ因此通过分析
ｓｉＲＮＡ寻找动植物中的病毒成为一种简便易行的
手段ꎬＷｕ等[５]利用此方法发现多种果蝇携带的新
病毒ꎮ 本研究主要通过高通量测序技术对病毒所
产生的 ｓｉＲＮＡ 进行测序ꎬ并利用软件对所测序的
读数进行组装ꎬ组装的结果与数据库比对分析ꎬ检
测和发现新病毒ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 实验材料
发病烟草材料采自安徽东至ꎬ宣城和亳州烟
植物病理学报 ４５卷
区ꎮ 采集烟草样品主要症状为:叶片表现叶脉坏
死ꎬ花叶ꎬ褶皱鼠尾状ꎬ黄斑ꎬ坏死斑点ꎬ叶片皱缩ꎮ
东至、宣城和亳州 ３个烟区的大田期样品采集时间
为 ２０１３年 ６月ꎮ 采集部位烟叶上部叶ꎬ样品用锡
箔纸包裹液氮保存ꎮ 同一烟区表现以上症状的样
品混合构成一个地区的文库ꎬ总共构建东至、宣城
和亳州 ３个小 ＲＮＡ文库ꎮ
１.２ 血清学检测
采用购自 ＡＤＧＥＮ 的 ＤＡＳ￣ＥＬＩＳＡ 检测试剂盒
对病样进行检测ꎬ具体检测方法参照说明书ꎮ 选用
番茄斑萎病毒(ＴＳＷＶ)、马铃薯 Ｙ 病毒(ＰＶＹ)、烟
草饰文病毒(ＴＥＶ)、黄瓜花叶病毒(ＣＭＶ)、烟草花
叶病毒(ＴＭＶ)、烟草脉带花叶病毒(ＴＶＭＢＶ)和烟
草环斑病毒(Ｔｏｂａｃｃｏ ｒｉｎｇ ｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓꎬＴＲＳＶ)的抗血
清ꎮ 样品采用同一烟区的混合样品进行检测ꎮ
１.３ 烟草总 ＲＮＡ的提取
采用改良 ＳＤＳ /酚法:取 １ ｇ 研磨混合后的样
品每个地区混合样品叶片ꎬ研磨过程中加入少许粉
末 ＰＶＰꎬ取室温放置研钵ꎬ加入 １０ ｍＬ 提取液ꎬ将
粉末转移至提取液中继续匀浆ꎬ将匀浆液转移至离
心管中ꎬ充分混匀后冰浴 １５ ｍｉｎꎬ４℃１２ ０００ ｒｐｍ离
心 １５ ｍｉｎꎬ移上清至新的离心管ꎻ加入 １ / ３ 体积 ５
ｍｏｌ / Ｌ ＫＡｃ(ｐＨ４.８)ꎬ充分混匀ꎬ冰浴 １５ ｍｉｎꎬ４℃
１２ ０００ ｒｐｍ 离心 １５ ｍｉｎꎬ移上清至新的离心管ꎻ加
入等体积氯仿:异戊醇(２４ ∶ １)ꎬ充分混匀ꎬ冰浴
１０ ｍｉｎꎬ４℃１２ ０００ ｒｐｍ离心 １５ ｍｉｎꎬ移上清至新的
离心管ꎻ加入等体积预冷的异丙醇ꎬ￣２０℃放置２ ｈꎬ
４℃１２ ０００ ｒｐｍ离心 １５ ｍｉｎꎬ弃上清ꎻ７５％乙醇洗涤
沉淀 ２次ꎬ室温干燥后溶解于 ＤＥＰＣ￣Ｈ２Ｏ中ꎬ￣８０℃
保存ꎮ
１.４ 建库及测序
小 ＲＮＡ文库构建及测序均由测序公司完成ꎬ
测序平台为 Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｉｓｅｑ ２０００ꎮ
１.５ 样本病毒分析
去除低质量ꎬ未插入 ３′接头ꎬ５′接头 ｒｅａｄｓꎬ另
外再除去带 ｐｏｌｙＡ 尾巴的数据ꎬ最后选取不小于
１８ ｎｔ的 ｒｅａｄｓꎮ 所得的序列去除 ３′接头ꎬ处理后的
序列用序列组装软件 ｖｅｌｖｅｔ ｖｅｒｓｉｏｎ １.１.０６ 进行短
序列组装ꎬ由于小 ＲＮＡ 文库中序列均较短ꎬ所以
设定参数 ｈａｓｈ＿ｌｅｎｇｔｈ １７ꎮ 组装的重叠群寻找高度
同源序列:首先ꎬ用 ｂｌａｓｔｎ 将组装的重叠群比对到
核酸数据库 ｎｔ ｄａｔａｂａｓｅ中ꎬ从比对结果文件中选出
每一条序列的比对结果中 ｅ值最小的结果ꎬ再筛选
出这些结果中比对序列的覆盖度至少达到 ９０％且
同源性也至少达到 ９０％的结果ꎮ 组装的重叠群寻
找部分同源序列:将寻找高度同源序列中没有找到
高度同源性的重叠群ꎬ用 ｂｌａｓｔｘ在蛋白质数据库 ｎｒ
ｄａｔａｂａｓｅ中寻找同源序列ꎬ所设参数为￣ｅ １ｅ￣３ꎬ从每
一条重叠群的比对结果中选出 ｅ 值最小的结果ꎮ
筛选和已知病毒序列具有同源性的重叠群:从寻找
高度同源序列和寻找部分同源序列筛选出的结果
中选出和病毒序列同源的重叠群ꎬ这些重叠群必须
只和已知病毒同源ꎬ若和非病毒序列也具有同等的
同源性ꎬ则舍弃ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 血清学检测结果
采集症状表现为 １.１ 中描述的烟草样品ꎬ采用
ＴＳＷＶ、ＰＶＹ、ＣＭＶ、ＴＭＶ、ＴＥＶ、ＴＲＳＶ 和 ＴＶＢＭＶ
共 ７个抗血清进行检测ꎮ 东至样品的 ＰＶＹ、ＣＭＶ
和 ＴＭＶ 呈阳性ꎬ宣城样品的 ＰＶＹ 和 ＴＭＶ 呈阳
性ꎬ亳州样品的 ＰＶＹ、ＣＭＶ 和 ＴＶＢＭＶ 呈阳性ꎬ所
有样品的 ＴＳＷＶ、ＴＥＶ和 ＴＲＳＶ 均呈阴性ꎬ初步确
定 ３个烟区的烟草病毒病种类ꎬ其中东至烟区病毒
病种类有 ＰＶＹ、ＣＭＶ 和 ＴＭＶꎻ宣城烟区病毒病种
类有 ＰＶＹ和 ＴＭＶꎬ亳州烟区病毒病种类有 ＰＶＹ、
ＣＭＶ和 ＴＶＢＭＶꎮ
２.２ 烟草 ｓｉＲＮＡ高通量测序结果
安徽东至ꎬ宣城和亳州 ３ 个烟区烟草样本经
ＲＮＡ提取ꎬ小 ＲＮＡ分离ꎬ纯化和测序处理ꎬ处理 ｒｅａｄｓ
分别为 １８ ４６２ ９７９ 个(共组装成 ５ １０２ 条重叠群)ꎬ
２２ ５４７ ２５２个(共组装成 ８ ６００条重叠群)和 ２０ ４０５ ９７０
个(共组装成 １０ ００４条重叠群)ꎮ 如图 １所示ꎮ
２.３ 烟草病毒检测结果
所得序列用序列组装软件 Ｖｅｌｖｅｔ ｖｅｒｓｉｏｎ １.１.０６
进行短序列组装ꎬ组装的重叠群寻找高度同源序列
(同源性大于 ９０％)和部分同源序列(同源性低于
９０％)ꎬ从所得序列中筛选与病毒同源的重叠群比
对结果见表 １ꎮ
８９
１期 王 芳ꎬ等:利用 ｓｉＲＮＡ高通量测序技术检测烟草病毒
Ｆｉｇ. １ Ｒｅａｄｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ｌｅｎｇｔｈ ｄｉｓｔｒｉｂｕ￣
ｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｄｏｎｇｚｈｉ ( Ａ )ꎬ Ｘｕａｎｃｈｅｎｇ
(Ｂ)ａｎｄ Ｂｏｚｈｏｕ(Ｃ)
从病毒检测结果中我们可以看出ꎬ３ 个文库中
均检测到了 ＰＶＹꎬ并且同源重叠群数目较高ꎬ
分别为东至 ７３２ꎬ宣城 ６１６ꎬ亳州 ２４４ꎻ其次东至和宣
城都检测到了 ＴＭＶꎬ同源重叠群数为东至 ７４ꎬ宣
城 ４６ꎻ东至和亳州都检测到了 ＣＭＶꎬ同源重叠群
数为东至 ３ꎬ亳州 ４９２ꎮ 从检测的结果中我们可以
得出ꎬ３个烟区东至ꎬ宣城和亳州都有 ＰＶＹ侵染ꎬ并
且 ＴＭＶ和 ＣＭＶ同源重叠群数也较高ꎬ说明 ＰＶＹ、
ＴＭＶ和 ＣＭＶ是安徽烟区的主要病毒ꎬ检测结果与
用 ＥＬＩＳＡ方法检测结果一致ꎮ 亳州烟区还检测到
了 ＴＶＢＭＶꎬ同源重叠群 １２２ꎮ ３个文库还检测到了
芸薹黄化病毒(Ｂｒａｓｓｉｃａ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓꎬＢｒＹＶ)、芜菁
黄化病毒(Ｔｕｒｎｉｐ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓꎬＴｕＹＶ)和甜菜西方
黄化病毒(Ｂｅｅｔ ｗｅｓｔｅｒｎ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓꎬＢＷＹＶ)高度
同源的重叠群ꎬ这 ３种病毒同属于马铃薯卷叶病毒
属(Ｐｏｌｅｒｏｖｉｒｕｓ)、黄症病毒科(Ｌｕｔｅｏｖｉｒｉｄａｅ)ꎬ测序结
果需要进一步的试验验证才能明确所采集的样品里
是否含有这 ３种病毒ꎮ 在亳州的样本中还检测到了
４８个重叠群与Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １部分同源的病毒(图 ２)ꎬ
４８个重叠群与已经报道的Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １同源性最高ꎬ
但是低于 ９０％ꎬ这可能是检测到的新病毒ꎬ后续病毒
序列扩增试验正在进行ꎮ
３ 结论与讨论
本研究利用小 ＲＮＡ测序技术研究发现安徽东
Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｄｏｎｇｚｈｉꎬ Ｘｕａｎｃｈｅｎｇ ａｎｄ Ｂｏｚｈｏｕ
Ｔｙｐｅ Ｎａｍｅ ｏｆ ｌｉｂｒａｒｙ
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｃｏｎｔｉｇｓ
Ｎａｍｅ ｏｆ
ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｖｉｒｕｓ
Ｈｉｇｈｌｙ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ
ｗｉｔｈ ｖｉｒｕｓ
Ｄｏｎｇｚｈｉ
７３２ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ
７４ Ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
３ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
Ｘｕａｎｃｈｅｎｇ
６１６ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ
４６ Ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
１３ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓ
１２ Ｔｕｒｎｉｐ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓ
４９２ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
Ｂｏｚｈｏｕ
２４４ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ
１２２ Ｔｏｂａｃｃｏ ｖｅｉｎ ｂａｎｄｉｎｇ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ
２５ Ｔｕｒｎｉｐ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓ
１９ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓ
１４ Ｂｅｅｔ ｗｅｓｔｅｒｎ ｙｅｌｌｏｗｓ ｖｉｒｕｓ
Ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ
ｗｉｔｈ ｖｉｒｕｓ
Ｂｏｚｈｏｕ ４８ Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １
９９
植物病理学报 ４５卷
Ｆｉｇ. ２ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｅｗ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １
Ａ:Ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ４８ ｃｏｎｔｉｇｓ ｏｎ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １ꎻＢ:Ｒｅａｄｓ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅａｄｓꎬｔｏｔａｌ ｒｅａｄｓ ｗａｓ １２８９４７５.
至、宣城和亳州存在 ＰＶＹ、ＴＭＶ、ＣＭＶ、ＴＶＢＭＶ、
ＢｒＹＶ、ＴｕＹＶ和 ＢＷＹＶ以及一种与 Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １ 部
分同源的新病毒ꎮ 其中 ＰＶＹ、ＴＭＶ、ＣＭＶ 和 ＴＶＢ￣
ＭＶ与酶联免疫法(ＥＬＩＳＡ)检测结果一致ꎬ证明所
采集的样品中确实含有 ＰＶＹ、ＴＭＶ、ＣＭＶ 和 ＴＶＢ￣
ＭＶꎮ ＢｒＹＶ、ＴｕＹＶ 和 ＢＷＹＶ 需进行进一步 ＲＴ￣
ＰＣＲ试验检测是否含有这 ３种病毒ꎮ 发现的一种新
病毒ꎬ其同源性与Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １最高ꎬ但低于 ９０％ꎮ
常规的病毒检测方法主要有电镜法ꎬ酶联免疫
法(ＥＬＩＳＡ)ꎬ聚合酶链式反应法(ＰＣＲ)ꎬ这些方法
在病毒检测和新病毒的发现中存在一定的缺陷ꎬ检
测病毒的范围也比较固定ꎬ对于新病毒的发现较困
难ꎮ ＲＮＡ沉默是植物抗病毒的一种机制ꎮ 当病毒
入侵宿主细胞后ꎬＲＮＡ 病毒的基因组复制中间物
或 ＤＮＡ病毒的 ｍＲＮＡ 转录产物间会形成双链
ＲＮＡ(ｄｓＲＮＡ)中间体ꎬ这些病毒的 ｄｓＲＮＡ 会被细
胞内核酸内切酶 Ｄｉｃｅｒ 识别并产生病毒的 ｓｉＲＮＡꎮ
本研究利用这种植物抗病毒的机制对这些小干扰
ＲＮＡ进行高通量测序ꎬ这些小干扰 ＲＮＡ之间存在
相互重叠序列ꎬ并且能够被组装成较长的重叠群ꎮ
因此从病患的植物组织样本中提取出 ＲＮＡꎬ通过
筛选ꎬ建立小 ＲＮＡ 文库ꎬ然后对小 ＲＮＡ 进行测
序ꎬ并组装总小 ＲＮＡ 来检测病毒和发现新病毒ꎮ
但值得注意的是ꎬ通过小 ＲＮＡ 高通量测序和组装
鉴定未知的病毒都需要该病毒与已知的病毒有一
定的序列同源性ꎬ这也是利用该技术的主要弊端所
在ꎮ Ｗｕ等[５]利用这种方法发现多种果蝇携带的
新病毒ꎮ 我们用此方法发现了一种新病毒ꎬ其同源
性与Ｍｉｎｔ ｖｉｒｕｓ １最高ꎬ但低于 ９０％ꎬ是否含有新病
毒以及新病毒的序列获得及病毒特性有待进一步
的实验证实ꎮ 关于症状、取样叶片部位、ＥＬＩＳＡ 检
测结果与 ｓｉＲＮＡ高通量测序技术检测烟草病毒的
一致性还需要我们进一步的分析进行实验研究ꎮ
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[５] Ｗｕ Ｑꎬ Ｌｕｏ Ｙꎬ Ｌｕ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ｖｉｒｕｓ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｂｙ ｄｅｅｐ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｖｉｒｕｓ￣ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｍａｌｌ ｓｉｌｅｎ￣
ｃｉｎｇ ＲＮＡｓ [Ｊ] . Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. Ｕ Ｓ Ａꎬ２０１０ꎬ
１０７(４): １６０６－１６１１.
责任编辑:曾晓葳
００１