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Effects of Extracellular ATP on Operation of Photosystem Ⅱ and Allocation of Absorbed Light of Bean Leaves under Low Temperature

细胞外ATP对低温下菜豆叶片光系统Ⅱ运行及光能分配的影响



全 文 :书西北植物学报!
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"
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文章编号$
#"""*&"!$
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-
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收稿日期$
!"#$*"*#!
&修改稿收到日期$
!"#$*##*#%
基金项目$国家自然科学基金"
%#!)""$
&
%"""#"$
#&教育部科学技术研究重点项目"
!###"
#&甘肃省财政厅高校基本科研业务费项目
作者简介$焦青松"
#1,(
#!男!在读硕士研究生!主要从事植物生理生化研究
2*34.5
$
-
.46+"1!"
!
#)%+763
"
通信作者$贾凌云!高级实验师!在职博士研究生!主要从事植物生化与分子生物学研究
2*34.5
$
5.0
89
:0
-
.4#1!
!
#!)+763
细胞外
$%&
对低温下菜豆叶片光系统
!
运行及光能分配的影响
焦青松!冯汉青!田武英!孙
!
坤!贾凌云"
"西北师范大学 生命科学学院!兰州
,%"","
#

!
要$细胞外
;<=
"
>;<=
#可作为一种重要的胞外分子调节植物的多种生理反应该研究以菜豆"
!"#$%&($
)(
*
#+,$?+
#品种(农普
#!
号)幼苗叶片为实验材料!研究了胞外
#+"3365
%
?;<=
溶液对低温下"
#"@
*
#"A
#菜
豆叶片光系统
"
"
=B
"
#运行及光能分配的影响结果显示$"
#
#低温胁迫"
#"@
*
#"A
#对菜豆叶片
=B
"
的潜在最
大光化学效率"
-
C
%
-
3
#没有产生显著性影响!但低温胁迫却降低了叶片的实际光化学运行效率+
.
"
"
#,!同时降低

=B
"
的光化学反应能量"
!
#!增加了天线热耗散能量"
/
#和非光化学反应耗散能量"
0
#!使叶片胞外
;<=
水平
有所下降"
!
#叶片施加外源
;<=
可以有效缓解低温胁迫下菜豆叶片胞外
;<=
水平的下降!同时使叶片的实际
光化学效率+
.
"
"
#,和光化学反应能量"
!
#显著上升!也使天线热耗散能量"
/
#非光化学反应耗散能量"
0
#均显著
下降研究表明!低温胁迫降低了菜豆叶片
=B
"
的光化学运行并增加了光能的耗散!而在低温胁迫下增加胞外
;<=
水平能够有效提高菜豆叶片光化学反应的运行效率并降低光能的耗散
关键词$菜豆&细胞外
;<=
&低温胁迫&叶绿素荧光
中图分类号$
D&!+$
文献标志码$
;
(()*+,"(-+./*)010/.$%&"23
4
)./+#"2"(&5"+",
6
,+)7
!
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4
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89
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8
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8
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#
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Y
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Y
6S>0S.4534X.345
Y
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9
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"
"
-
C
%
-
3
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Y
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Y
A6S67A>3.745
L
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9
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"
+
.
"
"
#,
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Y
>R4S:R>
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Y
A6S67A>3.745>QQ.7.>07
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2
#
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Y
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9
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8
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89
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8
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9
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89
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>R4S:R>+
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6
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$
V>40
&
>XSR47>5:54R;<=
&
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Y
>R4S:R>
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A
9
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!!
三磷酸腺苷"
4W>06/.0>$[*SR.
Y
A6/
Y
A4S>
!
;<=
#
通常被认为是存在于细胞内的-能量货币.分子而
近年来的研究发现!动物和植物细胞可以将胞内的
部分
;<=
释放到细胞外基质中!从而使得细胞外
也存在着
;<=
!即胞外
;<=
"
>XSR47>5:54R;<=
!
>;<=
#
+
#
,
进一步的研究表明!尽管
>;<=
不能自
由穿过细胞膜+!,!但是细胞膜上存在着
>;<=
的受
体蛋白+#!%*&,而另有研究发现!
>;<=
可作为一种
信号分子通过跨膜受体蛋白的介导作用使得细胞内
部产生第二信使!如细胞自由
P4
!*活性氧和一氧
化氮等+$*,,!从而诱导特定基因和蛋白质的表达+!!1,
此外!植物许多重要的生理学反应!如细胞活力+%,*
生长发育+*#",*抗病反应+##*#%,和细胞程序性死亡+#&,
等也受到了
>;<=
的调节或影响
光合作用是植物生长发育的基础!其初始步骤
是吸收光能并将其传递到光系统
"
"
=B
"
#以驱动
植物的光合作用!因而
=B
"
的光化学运行是植物进
行光合作用的先决条件!其效率高低直接影响着植
物光合作用水平+#$,而在自然环境中!植物光化学
反应经常遭受各种外界因素影响其中!低温就是
影响植物
=B
"
光化学运行和光能分配等反应最为
常见的环境因素之一+#)*#,,尽管
>;<=
可作为一
种细胞外信号分子参与植物诸多生理学反应的调
节!但目前关于
>;<=
对植物
=B
"
光化学运行和光
能分配影响的研究较少!而在低温下
>;<=
对植物
光化学反应影响更是未见报道叶绿素荧光技术是
反映光合机构
=B
"
运行以及光能吸收利用情况的
一种灵敏技术+#1*#,鉴于此!本试验以蚕豆幼苗为
材料!利用叶绿素荧光技术研究和探讨了
>;<=

低温下对植物
=B
"
光化学运行和光能分配的影响!
进一步丰富对植物
>;<=
的生理学角色以及对光合
作用调控机理的认知
#
!
材料和方法
?+?
!
材料培养
供试菜豆"
!"#$%&($)(
*
#+,$?+
#品种为(农

#!
号)!种子由广州市农业科学院提供菜豆种
子先用
!]
次氯酸钠表面消毒
!"3.0
并用蒸馏水
充分冲洗!然后置于铺有蒸馏水浸湿的多层纱布中
待种子萌发后移栽到塑料盆钵中!每盆
#
株培养
基质为营养土*蛭石*珍珠岩的混合物"比例
%^ #^
#
#培养室的昼%夜温度为
!$@
%
!"@
!光照强度
为"
!""_$
#
#
365
/
3
(!
/
/
(#
!光周期为
#!A
光照%
#!A
黑暗每天浇水
#
次保持表层培养介质湿润!
直至第
#
对真叶完全展开后进行试验处理
?+@
!
材料处理
选取长势一致的菜豆幼苗作供试材料采用去
离子水配制浓度为
#+"3365
%
?

;<=
溶液"
Y
K
)+,
#!对照组用去离子水处理选用
#3?
注射器
吸取以上
;<=
溶液和等量的去离子水!以无针头
注射法+%,对菜豆叶片进行注射将上述处理后的部
分植株在
#"@
下放置
#"A
以进行低温处理&另将
用等量去离子水或
#+"3365
%
?;<=
溶液注射的
部分植株于
!$@
下放置
#"A
作为常温对照低温
处理组和常温组除了温度不同外其它生长条件均保
持一致
?+A
!
测定指标及方法
?+A+?
!
叶绿素荧光参数
!
叶绿素荧光参数参照
>`33.
8
*;W43/
等+#1,的方法在培养室内使用叶绿
素荧光仪
Fa;JFIJ*=;a
"
M45U
!
J>R340
9
#进行测
定!空气相对湿度
$"]
!温度"
!%_%
#
@
测定前对
每组供试材料均暗适应
%"3.0
"以黑布遮挡防止外
部光干扰#首先用弱测量光测定暗适应下初始荧
光"
-
"
#!然后给一个饱和脉冲光"
)"""
#
365
/
3
(!
/
/
(#
!脉冲时间为
"+1/
#!测得暗适应下最大荧光
"
-
3
#&打开光化光"
$""
#
365
/
3
(!
/
/
(#
#待荧光稳
定后测得稳定荧光"
-
/
#!再打开饱和脉冲测得光适
应下最大荧光"
-
3
[
#关闭光化学光!同时打开远
红光!测量光适应下最小荧光"
-
"
[
#每组实验重复
测量
&
次根据以上数据计算暗适应下可变荧光
"
-
C
b-
3
(-
"
#*光适应下可变荧光"
-
C
[b-
3
[(
-
"
[
#*暗适应下
=B
"
潜在最大光化学效率"
-
C
%
-
3
#*光适应下
=B
"
实际光化学效率+
.
"
"
#
b
"
-
3
[(-
/
#%
-
3
[
,同 时!参 照
>`33.
8
*;W43/
等+#1,方法计算
=B
"
吸收光能分配百分率$光化学
反应的能量
!b
"
-
C
[
%
-
3
[
#
c
"
-
3
[(-
/
#%"
-
3
[(
-
"
[
#&天线色素耗散的能量
/b#(
"
-
C
[
%
-
3
[
#&非光
化学反应耗散的能量
0b
+
#(
"
-
3
[(-
/
#%"
-
3
[(
-
"
[
#,
c
"
-
C
[
%
-
3
[
#
?+A+@
!
相对电导率
!
电导率用
`` B*##;
型电导仪
测定!参照宋良图等+!",描述的方法进行将叶片在
去离子水中浸泡
%"3.0
后第
#
次测得电导率记为
!&!
西
!

!

!

!

!

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$

1#
!然后沸水浴
%"3.0
冷却至室温第
!
次测得电导
率记为
1
!
!相对电导率
1b1
#
%
1
!
每组实验重复
测量
%

?BABA
!
胞外
$%&
水平
!
胞外
;<=
水平采用荧光
素酶发光法测量$荧光素与
;<=
在荧光素酶的催
化作用下产生反应!发光强度与
;<=
浓度呈正比
将荧光素和荧光素酶的混合物"
B.
8
34*;5WR.7A
!
NB;
#配制成饱和溶液!用无针头注射法注射到各
组不同处理的叶片中&以灭活的荧光素和荧光素酶
混合物的注射作为对照!参照
PA.C4/4
等+##,描述的
方法检测
;<=
依赖的光释放强度!每组实验重复
测量
&
次将对照叶片的光释放强度设为
#+"
!并
相应计算其他处理组的胞外
;<=
水平
?+C
!
数据分析
数据用
GR.
8
.0+"
统计软件计算出平均值和标
准偏差"
0(#
#!进行显著性检验并绘图
!
!
结果与分析
@B?
!
低温和
$%&
处理后菜豆叶片电导率和光系统
!
运行的变化
相对电导率是表征低温对植物影响的重要指
标菜豆幼苗叶片在短时低温处理"
#"@
!
#"A
#后
相对电导率较之常温对照显著上升了大约
$"]
!说
明该低温处理已经对菜豆叶片造成了明显胁迫伤害
"图
#
!
;
#为了研究低温下菜豆叶片相对电导率的
变化是否受到了细胞外
;<=
的影响或调节我们

#+"3365
%
?;<=
溶液分别对常温或低温下的
叶片进行了处理与常温对照相比!施加
;<=

未对常温下菜豆幼苗叶片相对电导率造成显著性影
响!但能够明显缓解低温所导致的叶片相对电导率
的上升"图
#
!
;
#表明了外源
;<=
能够明显减轻
低温对叶片所造成的胁迫伤害
同时!
=B
"
潜在最大光化学效率"
-
C
%
-
3
#反映
了植物叶绿体
=B
"
潜在最大光合作用能力+!#*!!,
与常温对照和去离子水对照相比!单独的低温处理

;<=
处理均未对菜豆幼苗叶片
-
C
%
-
3
产生显著
性影响&而较之低温处理的叶片!在低温下外加
#+"
3365
%
?;<=
可以使得菜豆叶片的
=B
"
潜在最大光
化学效率"
-
C
%
-
3
#略有上升!但影响不显著"图
#
!
d
#
另外!
.
"
"
#反映了光下
=B
"
的实际光化学运
行效率由图
#
!
P
可知!低温导致了叶片
.
"
"
#的
下降!并与对照"常温下的叶片#相比显著降低了
#%+,]
!说明低温引起了叶片
=B
"
光化学运行效
率的降低与常温对照相比!施加
;<=
并未对常
温下菜豆幼苗叶片的
.
"
"
#造成显著性影响!然而
却使低温下叶片
.
"
"
#显著性上升"与单独低温处
理的叶片相比上升约
!+)]
#!明显缓解了低温所
导致的
.
"
"
#的下降"图
#
!
P
#表明外源
;<=

够明显提高低温下菜豆幼苗叶片
=B
"
的实际光化
学运行效率
@B@
!
低温和
$%&
处理后菜豆叶片光能分配的变化
植物将吸收光能分配为三部分$一部分为用于
光化学反应的能量"
!
#&第二部分为通过天线色素
耗散的能量"
/
#&第三部分为通过非光化学反应耗
散的能量"
0
#
+
#1
,
本研究结果"图
!
#显示!在低温
处理后!菜豆叶片吸收的光能用于光化学反应的能
量"
!
#减少"与对照相比降低了
%)+$]
#&而用于天
线色素耗散的能量"
/
#和非光化学反应耗散的能量

#
!
不同处理对菜豆叶片相对电导率*
=B
"
潜在
最大光化学效率和实际光化学运行效率的影响
PO*e<

;<=*e<
分别代表常温下去离子水和
;<=
溶液
处理的叶片!而
PO*?<

;<=*?<
分别代表低温下去离子水和
;<=
溶液处理的叶片"平均值
_
标准偏差!
0b&
#图中
不同字母表示处理间在
"+"$
水平存在显著性差异&下同
H.
8
+#
!
>QQ>7S/6QW.QQ>R>0SSR>4S3>0S/60SA>R>54S.C>
>5>7SR.7760W:7S.C.S
9
!
-
C
%
-
3
40W.
"
"
#
.0V>405>4C>/
PO*e<40W;<=*e5>4C>/SR>4S>WT.SAT4S>R6R
;<=:0W>R!$@
!
TA.5>PO*?<40W;<=*?
5>4C>/SR>4S>WT.SAT4S>R40W;<=4S56TS>3
Y
>R4S:R>
"
#"@
#
"
3>40_B`
!
0b&
#&
.`QQ>R>0S5>SS>R//A6T>W/.
8
0.Q.740SW.QQ>R>07>
4360
8
SR>4S3>0S/4S"+"$5>C>5
&
SA>/43>4/V>56T
%&!
#!

!!!!!!!!
焦青松!等$细胞外
;<=
对低温下菜豆叶片光系统
"
运行及光能分配的影响

!
!
不同处理对菜豆叶片用于光化学反应的能量*通过
天线色素耗散的能量和非光化学反应耗散的能量的影响
H.
8
+!
!
>QQ>7S/6QW.QQ>R>0SSR>4S3>0S/60
!
!
/40W0.0V>405>4C>/
"
0
#则上升!并以
2
在低温下的上升更加明显在
常温条件下!施加
#+"3365
%
?;<=
未对叶片
!

产生显著性影响!但导致了其
/
值的显著性下降和
2
值的显著性上升在低温条件下!外加
#+"
3365
%
?;<=
也改变了叶片光能的分配比例与
单独低温处理的叶片相比!外源
;<=
使得低温下
叶片
!
显著增加了
!+)]
!而使得
/

0
分别显
著下降了
#!+]

&+&]
"图
!
#以上结果表明
低温胁迫下菜豆叶片用于光化学反应的光能比例显
著降低!而使得更多的光能被耗散掉&外源
;<=

够明显提高低温下植物叶片用于光化学反应的光能
比列!同时有效减少光能的耗散量
@BA
!
低温和
$%&
处理后菜豆叶片细胞外
$%&

对水平的变化
为了进一步明确低温下菜豆叶片光系统
"
运行
及光能分配的变化是否受到了细胞外
;<=
的影响
或调节!试验利用萤光素酶技术检测了低温和
;<=
处理后菜豆叶片细胞外
;<=
相对水平的变化结
果"图
%
#显示!在常温条件下!对叶片施加
#+"
3365
%
?;<=
溶液使得细胞外
;<=
水平有所上
升!但未达到显著性差异&在低温处理条件下!菜豆
叶 片细胞外
;<=
的水平比常温下显著性降低!而

%
!
不同处理对菜豆叶片用于细胞外
;<=
相对水平的影响
H.
8
+%
!
>QQ>7S/6QW.QQ>R>0SSR>4S3>0S/
60>;<=.0V>405>4C>/
外源
#+"3365
%
?;<=
的加入使得低温下细胞外
;<=
水平的降低得到了有效缓解!并回到了与常温
对照相当水平可见!低温显著降低菜豆叶片细胞

;<=
水平!施用外源
;<=
能调节低温下细胞外
;<=
水平恢复至常温状态
%
!

!

有研究表明!低温胁迫可以通过降低
=B
"
的容
量或抑制
=B
"
在光下的运行效率而抑制叶片的光
化学反应+!%*!,,本研究观察表明!在
#"@

#"A
低温处理后!菜豆叶片
=B
"

-
C
%
-
3
并没有发生
明显变化!但叶片的
.
"
"
#值显著性下降这一观
察表明!这一短期的轻度低温胁迫虽然未改变
=B
"
的容量!但抑制了
=B
"
在光下的运行而光能分配
比例的测量则说明了低温使得菜豆叶片投入于光化
学反应的能量降低!而将更多的能量以非光化学反
应耗散掉
以前的研究多从细胞内部的生理学变化来阐明
低温下
=B
"
运行以及光能分配比例变化的原因
如众多的研究发现!低温导致了活性氧的上升!增加
的活性氧使得
=B
"
中的功能蛋白受到了氧化损伤!
从而导致了叶片
=B
"
运行效率以及用于光化学反
应的光能比例下降+!1*!,而是否低温下
=B
"
运行
以及光能分配比例变化也和细胞外生理学事件有关
则未见报道基于此!本研究探讨了细胞外
;<=
对低温下菜豆叶片光系统
"
运行及光能分配的影
响观察表明!菜豆叶片细胞外
;<=
的水平在低
温下有所下降植物的胞外
;<=
来自于细胞质
呼吸作用是细胞质
;<=
的主要来源"光合电子传
递也产生大量的
;<=
!但光合电子传递产生的
;<=
一般只用于叶绿体内部!较少向细胞质输送&
而胞外
;<=
来自于细胞质#!而低温能够降低植物
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在光下的正常运行!但可以改变光能的耗散方
式!使得更多的光能通过非光化学反应耗散作者
最近的研究发现对植物细胞施加
;<=
可以刺激线
粒体呼吸的活性!而线粒体呼吸活性的上升已经被
证明是一种重要的非光化学反应的光能耗散机
制+%#*%%,故而推测在常温下对叶片施加
;<=
是通
过刺激线粒体呼吸的活性而改变光能的耗散方式
通过进一步测量外源
;<=
对低温下菜豆叶片
细胞外
;<=
水平*光系统
"
运行及光能分配的影
响!发现低温下胞外
;<=
的回升可以提高低温下
菜豆叶片的实际光化学效率和叶片用于光化学反应
的光能比例!并同时减少两种形式的非光化学光能
耗散!而使得植物将更多的光能用于光化学
PA.C*
4/4
等+!,的研究表明!植物细胞外
;<=
水平下降导
致了烟草叶片中
=B
"
相关蛋白表达水平的下降
因此!外源
;<=
的加入很可能是通过缓解低温下
细胞外
;<=
水平的降低而缓解了
=B
"
相关蛋白表
达水平的下降!从而提高了低温下菜豆叶片的实际
光化学效率和叶片用于光化学反应的光能比例!并
同时减少两种形式的光能耗散以上的观察结果提
示!低温下植物叶片
>;<=
的变化可能是调节菜豆
幼苗光化学反应和光能耗散方式的重要机制之一
由于
;<=
具有较高的极性!其不可能自由穿
过细胞膜而进入细胞内部+%%,!但是!已有研究揭示
外源
;<=
能够导致植物细胞中
P4
!\ 含量的上
升+)!%&,同时!也有研究发现!内囊体中可以通过接

P4
!\而促进光合电子传递链的形成+%$*%),因此!
细胞外
;<=
很可能是通过
P4
!\而影响了
=B
"

光化学反应其具体机制有待于进一步研究确认
如何缓解低温胁迫对植物的伤害一直是人们亟
待解决的问题利用外源物质进行处理是目前提高
植物对逆境耐性的简便*有效*可行的方法之一+%,,
鉴于本研究所观察到的外源
;<=
对植物在低温下
光化学的提升作用!外源
;<=
或其类似物有可能
为利用外源化学物质提高植物耐寒性提供一定的参
考和借鉴
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