全 文 ：华北农学报 飞” 挤, 1了7 }只 (
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二一一二 二 二二 一二二~ 一 = = 一 = 二一二 = 一一一一—— _ _ _ __ _ _ _ _ _ _菜豆对大丽花轮枝泡菌坑险
及鉴定方法的研究
齐秀菊 * 刘俊芳* * 刘学 民 * 刘克明 * * 马春红 * *
摘 要
本试验用根冠离体活 细胞测定法 和苗期 浸根法测定了不同抗性的十二个菜豆
( 尸六。 、 e o l u s o u l g a r i s L . ) 品种 对大 丽花轮枝抱菌 ( 卜’ e ; r i ` · 1221` , m d a 人zi a o k l e b )
毒素的敏感性 , 两者的结果墓本一致 。 经统计分析 , 这 两种结果呈极 显著正 相关 。
试验结果还表明 : 根冠活 细胞测定法比苗期浸根法快速 , 简便 , 准确 , 可 靠 , 是进
行菜 豆抗病性 鉴定和选育抗病 品种等研究 的一 种比较理想的手段 。
关键词 菜豆 根冠 活细胞 大丽 花轮枝抱菌毒素 抗性
近年来 , 国内外已 有利用根冠活细胞测定法进行 抗病性 鉴定和选育 抗病 品种的研究报
道 。 19 83 年 H a w es 用玉米小斑病菌毒素 ( H M T ) 对离体玉米根冠活细胞进 行 生 物 学 测
定 〔 “ 〕 ` 1 9 8 年 , 郭兰凯等对此法加以 简化 , 证实 了 C 毒素 ( H M C ) 对 d 细胞质玉米根冠
活细胞毒 害作用的专效性 〔 4 〕 。 但此法在蔬菜上进行抗病鉴定和抗病品种 的选育方面 , 尚未
见报道 。 本试验采用根冠活细胞测定法用大丽花 轮枝抱菌毒素对菜豆十二个 品种进行 抗病性
鉴定 , 初步肯定 了此法在蔬菜上的应用价值 。
材料和方法
一 、 材料
l
、 供试菜 豆品种 12 个 :
88一 14 88一 2 5 美国芸豆 8 3一 3
保丰 尼克斯 泰架 豆 红旗 豆
唐山芸豆 沙克沙 五月绿 双季 豆
2
、 供试 大丽花轮枝抱菌菌种 , 由河北省棉花研究所抗病育种组提 洪 。
二 、 方法
, 河北省农林科学 院蔬菜研究所
二 河北省农 林科学 院农业物理生理生化所
本试验 得到研究 员魏建昆 、 廉志宏同志的支持与指导 , 在此 谨致 谢意
「 砖 `护 北 农 `举 扬
l
、 毒素相提
将大丽花轮枝抱菌菌种分别接种于两种 培养基中 。 第一种 : 山 jc 、 嗬养豁 , 2 5 ℃振荡培
养 7 一 8 天 。 第二种 : 棉籽培养基 ( 经高 压高温 灭菌 10 ℃ 飞. 污磅 , 功分 护曰 。 25 ℃ 培养 7 一
8 天后 , 将 F r i es 培养基倒入棉 籽培养」华中 . 继续 培养24小时 ; 将 培养液用 铺有一层 湿 滤 纸
的布氏漏斗抽滤一次 , 过滤液再通过三层滤纸抽滤两次 , 得到的过滤液为毒 索粗提液原液 。
再将原液用无菌水 稀释 5 倍 , 置冰箱备 用 .
2
一 根冠活 细胞致死测定法
( 1 ) 幼根 培养 : 将菜 豆种子用温水 妞 () ` C ) 浸泡 3 小时 , 捞出 , 用 0 . 01 “ 、 升汞溶液表
面消毒 5 分钟 , 用 自来水反复 冲洗后 , 放在铺有湿滤 纸的培养 皿中 , 2 5 c 培养 4 8小时 , 当初
生根生长至 2 厘米时供实验用 。
( 2 ) 根 冠活细胞致 死测定 : 在 25 毫升的烧杯中 , 加入备好的毒素液 2 毫升 , 切取 3 一
4 个 2 厘米长 的根 尖 , 放入盛有毒素的烧杯中 , 用液体快速 混合器 ( 3 速 ) 震荡 1 分钟 , 再
放入 25 D恒温生长箱 中培养 , 1 小时后取出 , 充分振荡均匀 , 从中取一滴浴液置 于 载 玻 片
七 , 再加一滴 0 . 05 %的中性红溶液 , 染色 10 分钟 , 然后在显微镜 下观察 , 并记录活 细胞和 死
细胞的数量 。
细胞死 1’ :率 二 死细胞数量总细胞数量 x 10 0 乡毛
3
、 苗期浸根法
、 l ) 幼 苗培 养: 将菜豆种子按以上方法 消毒催 芽后 , 播种 f 育苗钵内 。 育 苗土均经
10 0 c 1
.
5 磅灭菌 1 小时 , 当幼苗第 3 片真叶充分展开时备用 。
(2 ) 毒 素浸根测定 : 将生长一致的菜 豆幼苗挖出 , 充分水洗后 , 把幼苗根部浸入 稀
释 5 倍的毒素溶液中 。 每品种不少于 20 株 , 以清水浸根为对照 。 重复 尾次 , 24 小时调查 记录
发病情况 , 以病情指数表示 (本试验在 20 一 25 C 防虫人工气候室进行元
( 3 ) 分级标准 :
o 级 : 无症 ;
1 级 : 子 叶发黄 , 失水下垂 , 真叶无症
2 级 : 真 叶边缘失水上卷 ;
3级 : 真 叶萎蔫 。
试验结果
一 、 品种 鉴定情况
用稀释 5 倍的毒素过滤液分别处理十二个菜 豆品种的根冠活细胞尽及进行苗期浸根两种
方法的观察结果列于表 1 。
由表 1 看出 , 十二个菜 豆品种对大丽花轮枝抱菌毒素的 打胜是不同的 。 用两种方法对菜
豆十二个 品种 抗性测定的结果 , 除泰架 豆在用 离体根冠活细胞测定法 中排列第 7 位 , 和在浸
增 刊 齐秀菊等 : 某豆对 人阴 花论 枝抱 菌杭性 乏
` 「…一正 汰 的研究
表 1 大丽花轮枝 抱菌毒素对 : 1个菜豆品种的毒害作 用 ”
根冠活 细胞测定法 节期 淡根法
细胞死亡 率 位 次 炳 指 位 次
88一 14
88 一 5 2
美国芸 豆
8 3一 3
保丰
尼克斯
泰架豆
红旗 豆
唐山芸豆
抄克秒
五月绿
双季 豆
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7 1
· 结果为试验的平均值 , 根冠活细胞测定法 每品种重复 6 次以 上 , 舔品种观察的细胞总数 l1() 。一 60 。个 。 苗期 投根
法重复 2 次 。
根法中病情指数偏高 , 排列第 9 位外 , 其它 品种的测定结果基本一致 。
二 、 两种方法的比较 .
1
、 两种测定方法的相关系数
在直观分析了菜豆十二个 品种在两种方法中的表现后 , 为了进一步 揭示这 两种方法一致
的关系 , 进行了相关 系数的计算 。 统计结果 : r 二 .0 8 9 8 , 说明根冠离体活 细胞测定和 苗期
浸根这两种方法的相关性极为 显著。 进 一步证实 了根冠离体活细胞测定法的可靠性 。
2
、 可 重复性的比较
根冠 离体活 细胞测定法 , 条件易于人为控制 , 虽每个 品种至少重复 6 次 , 有的多 达 12
次 , 但每次 重复取得数据的标准差均小于苗期 浸根法 ( 红旗 豆标准差略高 ) 。 而苗期 浸根法
可能 由于受 育苗过程中对根部伤 害程度等多种 因素影响 , 标准 差大于根冠离体活 细胞测定方
法 。 这就说明用离体根冠活细胞测定法要比苗期浸根法 稳定可靠 , 精确度户 ( 见表 3 ) 。
3
、 潜育期 、 鉴定 周期和使用毒素量 的比较
用 “ 坦 二 离体活细胞测定法 ” 和 “ 苗期 浸根 ” 两种方法 , 在十二种菜 豆品种上接种 稀释
5 倍的大丽花轮枝抱菌毒素液后 , 均可使其有 效致病 。 但是使用根冠活 细胞测定法 , 在接种
毒素 3() 分钟后 , 一般就可见到致死的根冠 离体 细胞 , 1 小时即可达到最佳测定时间 。 鉴定 -
次只需 2 天时间 , 鉴定所需的种子和毒素量也 很少 。 而用苗期浸根法则在 12 小时后个别植株
才发生 轻度萎蔫 , 症状充分表现则需要抓 小时 . 鉴定 周期长达 20天 , 用种量 和使用毒素量也
较多
出此 可见 , 根 冠离体活细胞测定法是进 T丁杭病性 鉴定的 种 简褪 汀介 、 快速 、 准确
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表 3两种方法在菜豆 12 个品种上反应稳定性比较 `
品 种 根冠 离体活 细胞测定法 苗期浸根法
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19 士 13 。 9
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56 士 9 。 1
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。
3 3 士 7 。 9
85
.
71 士 11 . 1
· 数 字是试验的平均值和标准差 。
经济实用的测定方法 , 不但具有节省人力 、 物力的 优点 , 还能快速获得 抗源 , 为加速 抗病 品
种提供物质基础 。
小 结
选育 抗病 品种是 防治蔬菜病害的经济有效途 径 , 而抗病性鉴定工作又是 抗病育种的重要
环节 , 选用精确 、 快速 、 简便的测定方法是 抗病鉴定的关键 。 突规 鉴定方法 , 不仅周期长 ,
而且容易受各种因素的干扰 , 既影响试验的准确性 、 又浪费人力物力 。 本试验结果表明 : 12
个菜豆品种对大丽花轮枝抱菌毒素的 抗性是有差异的 ; 组成植株或组织的细胞对致病病 菌毒
素的反应要 比植株个体反应敏感 。 从而证明 了根冠离体活细胞测定的可行性 , 为今后蔬菜抗
病性 鉴定 和抗病育种工作提供了一个在 细胞水平上进行研究的科学方法 。
根冠离体活细胞测定方法技术性强 , 操作要求 严格 , 对测试 材料的生长阶段 , 细胞自然
死 亡率 , 处理过程中的温度控制等问题有 待进一步深入研究 。
参 考 文 献
王 贺祥 . 徐孝华 : 棉花枯萎病菌锹 )J 沐i酸 的产生和致病力的关系 , 《植物病理学报 》
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增 刊 齐 秀菊等
: 菜 `丈对人阴 花轮枝饱 菌抗性及 鉴定方法的研究
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