全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５３３０ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
袁进成，宋晋辉，马海莲，瓮巧云，王凌云，赵艳，刘颖慧．转玉米犣犿犃犅犐３犔 基因增加拟南芥的抗旱和耐盐性．草业学报，２０１６，２５（２）：１２４１３１．
ＹＵＡＮＪｉｎＣｈｅｎｇ，ＳＯＮＧＪｉｎＨｕｉ，ＭＡＨａｉＬｉａｎ，ＷＥＮＧＱｉａｏＹｕｎ，ＷＡＮＧＬｉｎｇＹｕｎ，ＺＨＡＯＹａｎ，ＬＩＵＹｉｎｇＨｕｉ．Ａｍａｉｚｅａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉ
ｔｉｖｅ３ｇｅｎｅｃｏｎｆｅｒｓｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１６，２５（２）：１２４１３１．
转玉米犣犿犃犅犐３犔基因增加拟南芥的抗旱和耐盐性
袁进成，宋晋辉，马海莲，瓮巧云，王凌云，赵艳，刘颖慧
（河北北方学院农林科技学院，河北 张家口０７５０００）
摘要：ＡＢＩ３（ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ３）是编码 ＡＢＡ信号转导途径中的重要调控因子，广泛地存在于玉米、小麦、
水稻等谷类作物中。本研究从玉米中获得一个新的 ＡＢＩ３ｌｉｋｅ基因，命名为犣犿犃犅犐３犔，该基因全长１７３５ｂｐ，开放
阅读框１２１２ｂｐ，编码蛋白含４０４个氨基酸。同源比对表明ＺｍＡＢＩ３Ｌ和谷子、高粱的同源蛋白相似性高，分别为
６４％和５８％。基因的表达分析表明该基因是组成型表达，在幼胚、穗子和花丝中表达量较高，同时基因的转录水平
可以为盐、ＡＢＡ、干旱和冷所诱导。将犣犿犃犅犐３犔基因转化到拟南芥中，对Ｔ３ 代转犣犿犃犅犐３犔 基因拟南芥进行
抗逆性分析，结果显示犣犿犃犅犐３犔基因可以增强拟南芥的耐盐和抗旱能力。在１５０ｍｍｏｌ／Ｌ高盐培养基中转基因
拟南芥的根和茎长度分别为对照的８．６和１．４倍，在５０ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇的渗透培养基中转基因植株的发芽率是
７４．５％，而对照仅为３３．６％。研究表明犣犿犃犅犐３犔是一个对干旱和盐损伤均有响应而显著上调的基因，同时该基
因可以增加拟南芥的抗旱和耐盐性。
关键词：犣犿犃犅犐３犔基因；玉米；干旱胁迫；盐胁迫；转基因拟南芥
犃犿犪犻狕犲犪犫狊犮犻狊犻犮犪犮犻犱犻狀狊犲狀狊犻狋犻狏犲３犵犲狀犲犮狅狀犳犲狉狊犱狉狅狌犵犺狋犪狀犱狊犪犾狋狊狋狉犲狊狊狋狅犾犲狉犪狀犮犲犻狀
犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊
ＹＵＡＮＪｉｎＣｈｅｎｇ，ＳＯＮＧＪｉｎＨｕｉ，ＭＡＨａｉＬｉａｎ，ＷＥＮＧＱｉａｏＹｕｎ，ＷＡＮＧＬｉｎｇＹｕｎ，ＺＨＡＯＹａｎ，
ＬＩＵＹｉｎｇＨｕｉ
犆狅犾犾犲犵犲狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲犪狀犱犉狅狉犲狊狋狉狔，犎犲犫犲犻犖狅狉狋犺犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犣犺犪狀犵犼犻犪犽狅狌０７５０００，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ３ｇｅｎｅ（犃犅犐３）ｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｓｔｕｄｉｅｄｉｎｃｅｒｅａｌｓｓｕｃｈａｓｗｈｅａｔ，ｍａｉｚｅ
ａｎｄｒｉｃｅｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＡＢＩ３ｈａｖｅｎｏｔｂｅｅｎｆｕｌｙｄｅｓｃｒｉｂｅｄ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ａｎｏｖｅｌｍａｉｚｅ犃犅犐３ｌｉｋｅ
ｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｎａｍｅｄ犣犿犃犅犐３犔．Ｔｈｉｓｇｅｎｅｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｔｏｅｎｃｏｄｅａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｗｉｔｈａｄｉｓ
ｔｉｎｃｔＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇＢ３ｄｏｍａｉｎ．Ｔｈｅｆｕｌｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｇｅｎｅｗａｓ１７３５ｂｐａｎｄｗｉｔｈａｎｏｐｅｎｉｎｇｒｅａｄｆｒａｍｅｏｆ１２１２
ｂｐａｎｄｅｎｃｏｄｅｄ４０４ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＡｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅＺｍＡＢＩ３Ｌｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｏｔｈｅｒｐｌａｎｔｓｒｅｖｅａｌｅｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ
ｗｉｔｈＡＢＩ３ｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｅｓ．ＲＴ－ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄ犣犿犃犅犐３犔ｗａｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｍａｉｚｅｂｙｄｅ
ｈｙｄｒａｔｉｏｎ，ｓａｌｔ，ｃｏｌｄａｎｄＡＢＡｓｔｒｅｓｓ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ犣犿犃犅犐３犔ｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ｐｌａｎｔｓｃｏｕｌｄｅｎｈａｎｃｅｓａｌｔ
ａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｗｉｌｄｔｙｐｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔ犣犿犃犅犐３犔 ｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄ
ｉｎｓａｌｔａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｍａｉｚｅ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犣犿犃犅犐３犔；ｍａｉｚｅ；ｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ；ｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ；ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊
１２４－１３１
２０１６年２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２５卷 第２期
Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
收稿日期：２０１５０６３０；改回日期：２０１５０９３０
基金项目：国家自然科学基金 （３１１０１１５５），河北北方学院重大项目（ＺＤ２０１３０５），河北省科技厅项目 （１３２２６３２６）和河北省高等学科拔尖人才选
拔与培养计划（ＢＲ２２３４）资助。
作者简介：袁进成（１９７０），男，河北张家口人，副教授。Ｅｍａｉｌ：ｎｋｘｙｊｃ＠１６３．ｃｏｍ。宋晋辉（１９７８），女，河北安国人，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｎｋｘｓｊｈ＠
１６３．ｃｏｍ。共同第一作者Ｔｈｅｓｅａｕｔｈｏｒｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄｅｑｕａｌｙｔｏｔｈｉｓｗｏｒｋ．
通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｌｅｅｌｙ５１９＠１２６．ｃｏｍ
Ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ３（ＡＢＩ３）属于具有Ｂ３结构域（Ｂ３ｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｆａｍｉｌｙ）基因家族的
亚家族，是参与ＡＢＡ信号转导途径的重要信号因子［１］。ＡＢＩ３家族基因最早在玉米中发现并命名为ＶＰ１，该基
因和拟南芥的ＡＢＩ３基因为同源基因，参与种子萌发调控、植物的生长和发育以及植物应答逆境胁迫反应等多种
生命过程［２３］。ＡＢＩ３蛋白含有４个结构域，分别为Ａ１、Ｂ１、Ｂ２和Ｂ３结构域，其中Ａ１结构域在酸性的Ｎ基末端，
是一个富含酸性蛋白的转录激活结构域；Ｂ１结构域可以结合犃犅犐５、犫犣犐犘１０、犫犣犐犘２５和犜犚犃犅１等犫犣犐犘类转录
因子；Ｂ２结构域结合Ｇｂｏｘ因子（ＣＡＣＧＴＧ）或者ＡＢＡ应答因子，在参与细胞核定位和转录激活中起重要的作
用；Ｂ３结构域在体外结合ＲＹ基序（ＣＡＴＧＣＡ）［４５］。在拟南芥（犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）中获得许多犪犫犻３突变体，
其中犪犫犻３５的表型明显，植株表现明显的持绿性。犪犫犻３５种子对 ＡＢＡ敏感，在种子萌发期表型显著，和玉米
（犣犲犪犿犪狔狊）的狏狆１突变体一样也表现了早熟的特性。在拟南芥中表达犃犅犐３增加了犃狋２犛３，犃狋犆犚犆，犃狋犈犕１，
犃狋犛犗犕 和犃狋犈犕６的表达量，３５Ｓ：ＡＢＩ３转基因种子对ＡＢＡ更加敏感［６］。
ＡＢＩ３广泛地存在于多种植物中，如玉米、拟南芥、小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、燕麦（犃狏犲狀犪狊犪狋犻狏犪）和水稻
（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）中均有发现，Ｗａｎｇ等［７］通过生物信息学手段搜寻１１个物种的Ｂ３家族基因，结果显示ＡＢＩ３虽然
广泛存在，但是含量较Ｂ３家族其他基因要少得多：如拟南芥中Ｂ３家族基因９５个，而ＡＢＩ３家族仅具有３个，棉
花（犌狅狊狊狔狆犻狌犿犺犻狉狊狌狋狌犿）Ｂ３家族基因１３０个，ＡＢＩ３家族具有３个，高粱（犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉）Ｂ３家族基因８０个，
ＡＢＩ３家族具有４个，柑橘（犆犻狋狉狌狊狉犲狋犻犮狌犾犪狋犪）Ｂ３家族基因４２个，ＡＢＩ３家族具有５个。Ｗａｎｇ等［７］在玉米基因组
中搜索到８１个Ｂ３基因，其中ＡＢＩ３基因仅有４个，Ｒｅｉｄｔ等［８］仅在玉米中发现５个ＡＢＩ３基因，由上可见玉米中
的ＡＢＩ３基因不多，而且多数的基因功能还未知［７８］。本课题获得玉米中一个新的犃犅犐３基因，并深入研究基因的
功能，可以为综合了解玉米犃犅犐３基因的功能提供一些参考信息。
１ 材料与方法
１．１ 植物材料
玉米自交系综３１于２０１３年在河北北方学院农场种植，正常田间管理。收集不同时期的组织，液氮中迅速保
存供后续ＲＮＡ和ＤＮＡ的提取。提取ＲＮＡ和ＤＮＡ的材料包括出苗１０ｄ幼苗的根、茎、叶，以及授粉期的花丝、
穗子和授粉１５ｄ的幼胚。拟南芥（哥伦比亚品种）由本实验室保存，在光照培养箱中种植。
１．２ 玉米幼苗的培养及胁迫处理
因为犣犿犃犅犐３犔 基因的一段ＥＳＴ序列是从玉米苗期干旱胁迫的ｃＤＮＡ文库获得，为研究该基因是否响应
逆境胁迫，做了如下胁迫处理。将适量的水和蛭石搅拌均匀后装入花盆，播种玉米，盖上保鲜膜，置温室培养。将
发育１０ｄ的幼苗转移到发芽盒中在水培条件下培养半天后，再分别移入相应溶液中进行胁迫处理，在不同时间
点取样，处理时间分别为０，０．５，１，３，６，１２，１８，２４和４８ｈ，收集玉米幼苗液氮中速冻保存供提取ＲＮＡ用。不同
胁迫处理液分别为（１）ＡＢＡ（脱落酸）处理：加１００μｍｏｌ／ＬＡＢＡ溶液；（２）盐处理：加入２５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ；（３）干
旱处理：加入２０％ＰＥＧ（聚乙二醇）；（４）低温处理：将生长在盆中的幼苗直接放在４℃冰箱中培养，取材时间点同
上。
１．３ 基因的扩增和ＲＴ－ＰＣＲ
根据ＮＣＢＩ提供的信息（ＧｅｎＢａｎｋ：ＸＭ＿００８６６５２２１．１），设计扩增犣犿犃犅犐３犔 基因的引物，正向引物：５′
ＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＡＣＡＧＧＣＡＧ３′，反向引物：５′ＧＧＴＡＧＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡ３′。以玉米幼苗ｃＤＮＡ为
模板，利用ｐｆｕＴａｑｍｉｘ（天根）进行ＰＣＲ扩增，２０μＬ反应体系中包括１０μＬｐｆｕＴａｑｍｉｘ，１μＬｃＤＮＡ，正向引
物和反向引物各１μＬ（１０μｍｏｌ／Ｌ），７μＬｄｄＨ２Ｏ。扩增条件为９５℃变性３ｍｉｎ，随后３５个循环，循环条件为：
９５℃ （３０ｓ），５９℃ （３０ｓ），７２℃ （１ｍｉｎ），循环后７２℃延伸５ｍｉｎ，３次扩增结果进行测序。同时设计构建载体引
物引入相应酶切位点，正义：５′ＡＴＣＣｃｃａｔｇｇＧＡＣＡＧＧＣＡＧ３′（犖犮狅Ⅰ位点），反义：５′ＧＧＴｇｇｔｇａｃｃＧＡＡＧ
ＧＡＡＧＡＡ３′（犅狊狋犈ＩＩ位点），酶切ＰＣＲ产物，同时用相应的酶酶切植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３００，将基因连接到
植物表达载体上，在３５Ｓ启动子驱动下表达。
利用ＲＴ－ＰＣＲ分析基因在不同组织的表达量，设计基因的特异性引物，正义：５′ＣＧＧＧＴＣＡＡＡＴＡＣＡＧＴ
５２１第２５卷第２期 草业学报２０１６年
ＣＡＣＡＣＡ３′和反义：５′ＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴ３′，扩增出约３８０ｂｐ的基因特异性片段，同时扩增３５０
ｂｐ的玉米犪犮狋犻狀基因作为内参，引物为正义：５′ＣＡＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＴＧＡＴＡＴＧＧ３′，反义：５′ＡＴＴＴＣＧＣＴ
ＴＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＴ３′。利用ｐｆｕＴａｑｍｉｘ（天根）进行ＰＣＲ扩增，２０μＬ反应体系中包括１０μＬｐｆｕＴａｑｍｉｘ，１
μＬｃＤＮＡ，正向引物和反向引物各０．５μＬ（１０μｍｏｌ／Ｌ），８μＬｄｄＨ２Ｏ。扩增条件为９５℃变性３ｍｉｎ，随后２８个
循环，循环条件为：９５℃（３０ｓ），５７℃ （３０ｓ），７２℃ （１ｍｉｎ），循环后７２℃延伸５ｍｉｎ，在１％凝胶电泳检测基因的表
达情况。
利用ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ研究基因的诱导表达特性，在荧光定量ＰＣＲ仪上分析（ＰＴＣ２００），所用的引物为：正义：
５′ＣＧＧＧＴＣＡＡＡＴＡＣＡＧＴＣＡＣＡＣＡ３′和反义：５′ＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴ３′，同时扩增３５０ｂｐ的玉
米犪犮狋犻狀基因作为内参（引物同上），利用 ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＫｉｔｓ及 ＰｏｗｅｒＳＹＢＲ
ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＡＢＩ公司）试剂。２０μＬ反应体系中包括１０μＬＰｏｗｅｒＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ，１
μＬｃＤＮＡ（稀释后），正向引物和反向引物各０．５μＬ（１０μｍｏｌ／Ｌ），８μＬｄｄＨ２Ｏ。采用的ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ程序为
９５℃３０ｓ预变性，４０个扩增循环（９５℃１０ｓ，５９℃３０ｓ），从５９℃加热到９０℃的熔解过程，每个样品设３次重复。
１．４ 拟南芥转基因及转基因植株抗旱性和耐盐性的测定
于２０１４年采用花序浸染法转犣犿犃犅犐３犔 基因到拟南芥中［９］。将Ｔ１ 代种子表面消毒后均匀铺洒在含有２５
ｍｇ／Ｌ潮霉素的 ＭＳ培养基上，置２２℃光照（光周期为１６ｈ光照／８ｈ黑暗）生物培养箱中培养。选取正常生长１５
ｄ的幼苗移栽到培养土中继续生长直到收获种子，结合ＰＣＲ扩增验证，共筛选２代直到得到纯合的转基因株系。
ＲＴ－ＰＣＲ对犣犿犃犅犐３犔 基因特异性引物进行扩增，同时犪犮狋犻狀基因做内参（方法和引物同１．３）。选取犣犿犃
犅犐３犔 基因表达量高的Ｔ３ 代纯合转基因拟南芥种子和野生型拟南芥种子点播在含有不同浓度的ＮａＣｌ（０，５０，
１００和１５０ｍｍｏｌ／Ｌ）和甘露醇（５０ｍｍｏｌ／Ｌ）的 ＭＳ固体培养基上，以不含渗透剂的 ＭＳ培养基培养对应种子为
对照（ＣＫ），每培养皿培养约５０粒种子，测定种子发芽率、幼根和幼茎的长度，重复３次。
１．５ 生物信息学分析
基因生物信息学分析用ＮＣＢＩ数据库和玉米基因组数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／，ｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｉｚｅｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｏｒｇ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ和ｈｔｔｐ：／／ｍａｉｚｅｇｄｂ．ｏｒｇ）。基因的进化树分析和同源性比对采用
ＤＮＡＭＡＮ软件，基因的保守位点和３维结构的构建利用ｓｗｉｓｓｍｏｄｌｅ软件。
２ 结果与分析
２．１ 犣犿犃犅犐３犔 基因的克隆和特征
前期，通过构建玉米苗期干旱胁迫的ｃＤＮＡ文库，获得一段４５６ｂｐ的ＥＳＴ序列，用该序列在ＮＣＢＩ和玉米
基因组数据库中查询［１０］。结果表明玉米Ｂ７３一段ｃＤＮＡ（ＸＭ＿００８６６５２２１．１）和我们获得的ＥＳＴ有９９％的相似
性，同源搜寻显示该序列为ＡＢＩ３ｌｉｋｅ基因，属于Ｂ３家族 ＡＢＩ３亚家族，查询结果显示该基因为一个新的ＡＢＩ３
基因，目前还没有研究报道，故设计引物，扩增基因的全长，并将该序列命名为犣犿犃犅犐３犔，进行深入研究。
犣犿犃犅犐３犔 基因全长１７３５ｂｐ，开放阅读框１２１２ｂｐ（图１Ａ），编码蛋白质大小为４０４ＡＡ，蛋白质分子量４３．３５
ｋＤ。通过蛋白质数据库（ｓｗｉｓｓｍｏｄｌｅ）对获得的ＺｍＡＢＩ３Ｌ蛋白进行保守位点和蛋白质结构预测，蛋白的３维结
构显示ＺｍＡＢＩ３Ｌ主要是螺旋－折叠－螺旋的结构（图１Ｂ）。同时，我们研究了基因的序列趋异性，与其他已知
的ＡＢＩ３蛋白进行比较，从图中可见，该蛋白保守性较低，和其他的ＡＢＩ３有很多的差异性残基，这也意味着不同
的ＡＢＩ３基因具有不同的功能，其功能差异也很大（图１Ｃ）。
同源查询及聚类分析表明ＺｍＡＢＩ３Ｌ蛋白与谷子及高粱的ＡＢＩ３蛋白相似性高，聚在一起，与谷子的同源蛋
白（ＸＭ＿００４９７６５３５）相似性为６４％，和高粱的同源蛋白（ＸＭ＿００２４４８３３９）相似性为５８％，与大麦（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾
犵犪狉犲）的同源蛋白（ＡＫ３７４５４６）相似性为５２％，同时该蛋白和水稻的两个同源蛋白（ＸＭ＿００６６４７６３１和 ＮＭ＿
００１１８７１３０）、大麦（ＦＰ０９６４５９）、柏树（犛犲犾犪犵犻狀犲犾犾犪犿狅犲犾犾犲狀犱狅狉犳犳犻犻）（ＸＭ＿００２９９１４９２）的同源蛋白具有较高的相似
性（图２）。
６２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
图１ 犣犿犃犅犐３犔的克隆和特征分析
犉犻犵．１ 犆犾狅狀犲犪狀犱犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳犣犿犃犅犐３犔
Ａ．ＰＣＲ扩增得到１．６ｋｂ基因序列，分子量标准标注在左侧，中间泳道为犣犿犃犅犐３犔 基因，右面泳道为阴性对照。Ｂ．基因的３维结构图。Ｃ．
犣犿犃犅犐３犔 序列趋异性分析。蛋白的保守性和３维结构用Ｓｗｉｓｓ软件分析。Ａ．ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｅｄ１．６ｋｂ犣犿犃犅犐３犔ｇｅｎｅｉｎｌｅｎｇｔｈ．Ｉｎｔｈｅｌｅｆｔｗａｓ
ｔｈｅＤＮＡｍａｒｋｅｒ，ｔｈｅｆｉｓｔｌｉｎｅｗａｓｔｈｅ犣犿犃犅犐３犔ｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｓｅｃｏｎｄｌｉｎｅｗａｓｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ．Ｂ．Ｔｈｅｔｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆ犣犿犃犅犐３犔
ｗｅｒｅａｌｉｇｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｅｍｐｌａｔｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｏｔｈｅｒｐｌａｎｔＢ３ｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃ．ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎｐｌｏｔｆｏｒＢ３ｄｏｍａｉｎｓ．ＴｈｅＳｗｉｓｓＭｏｄｅｌ
ｐｒｏｇｒａｍｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇｏｆｔｈｅｄｅｄｕｃｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ．
图２ 不同物种犃犅犐３蛋白的同源性比对和聚类分析
犉犻犵．２ 犃犾犻犵狀犿犲狀狋犪狀犱狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犣犿犃犅犐３犔狆狉狅狋犲犻狀狊狑犻狋犺狅狋犺犲狉狆犾犪狀狋狊犺狅犿狅犾狅犵狆狉狅狋犲犻狀
７２１第２５卷第２期 草业学报２０１６年
续图２ 不同物种犃犅犐３蛋白的同源性比对和聚类分析
犆狅狀狋犻狀狌犲犱犉犻犵．２ 犃犾犻犵狀犿犲狀狋犪狀犱狆犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲
犣犿犃犅犐３犔狆狉狅狋犲犻狀狊狑犻狋犺狅狋犺犲狉狆犾犪狀狋狊犺狅犿狅犾狅犵狆狉狅狋犲犻狀
Ａ．不同物种ＡＢＩ３蛋白的同源性比对，从图中可见蛋白的保守区域在靠近
中间的区域。Ｂ．不同物种ＡＢＩ３蛋白的聚类分析。用于分析的蛋白来源于：
谷子的蛋白（ＸＭ＿００４９７６５３５）、高粱的蛋白（ＸＭ＿００２４４８３３９）、水稻的两个蛋
白（ＸＭ＿００６６４７６３１和ＮＭ＿００１１８７１３０）、柏树（ＸＭ＿００２９９１４９２）以及大麦的蛋
白（ＡＫ３７４５４６和ＦＰ０９６４５９）。Ａ：ＨｏｍｏｌｏｇｙａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＡＢＩ３ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓ．Ｂ：ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆＡＢＩ３ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓ．
Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｕｓｅｄｉｎｔｈｅｓｅａｒｃｈｅｄｗｅｒｅ：犛犲狋犪狉犻犪犻狋犪犾犻犮犪（ＸＭ＿００４９７６５３５），
犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉（ＸＭ ＿００２４４８３３９），犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲 （ＡＫ３７４５４６ａｎｄ
ＦＰ０９６４５９），犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪（ＸＭ＿００６６４７６３１ａｎｄＮＭ＿００１１８７１３０）ａｎｄ犛犲犾犪犵犻
狀犲犾犾犪犿狅犲犾犾犲狀犱狅狉犳犳犻犻（ＸＭ＿００２９９１４９２）．
图３ 定量犘犆犚分析犣犿犃犅犐３犔基因的表达情况
犉犻犵．３ 犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犣犿犃犅犐３犔犫狔犚犜－犘犆犚
Ａ：基因在不同组织中的差异表达，ＥＡ代表幼穗，ＳＩ代表花丝，ＥＭ 代表幼胚，Ｒ为根，ＳＴ为茎，Ｌ为叶片。Ｂ：平行扩增ａｃｔｉｎ作为内参。Ａ：Ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＺｍＡＢＩ３Ｌｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．ＥＡ，ＳＩ，ＥＭ，Ｒ，ＳＴａｎｄＬｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｈｅｍＲＮＡｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｅａｒ，ｓｉｌｋ，ｅｍｂｒｙｏ，ｒｏｏｔ，ｓｔｅｍａｎｄｌｅａｆ
ｔｉｓｓｕｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂ：Ａｃｔｉｎｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄａｓａｎｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒｏｌｕｓｉｎｇｉｔｓｓｐｅｃｉａｌｐｒｉｍｅｒｓ．
图４ 基因诱导表达情况
犉犻犵．４ 犚犲犾犪狋犻狏犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狅犳犣犿犃犅犐３犔狌狀犱犲狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋犪犫犻狅狋犻犮狊狋狉犲狊狊
非生物胁迫分别为２５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ盐处理（Ａ），２０％ＰＥＧ模拟干旱处理（Ｂ），冷处理（Ｃ），１００μｍｏｌ／ＬＡＢＡ处理（Ｄ）。玉米幼苗处理时间分别
为０，０．５，１，３，６，１２，１８，２４和４８ｈ，扩增Ａｃｔｉｎ基因为内参，数据统计为３次的重复。Ａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｉｎｃｌｕｄｅ２５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ（Ａ），２０％ＰＥＧ（Ｂ），
ｃｏｌｄ（Ｃ），１００μｍｏｌ／ＬＡＢＡ（Ｄ），ａｌｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎａｌｙｚｅｄｂｙｑＲＴ－ＰＣＲ．ＲＮＡｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｆｔｅｒ０，０．５，１，３，６，１２，１８，２４ａｎｄ４８ｈｔｒｅａｔｍｅｎｔ．
Ｄａｔａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｍｅａｎｓｏｆｔｈｒｅｅｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ，ｖａｌｕｅｓｗｅｒｅｔｈｅｍｅａｎ±ＳＤ．
８２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
２．２ 犣犿犃犅犐３犔 基因的表达特性
图５ 转犣犿犃犅犐３犔基因拟南芥耐盐性提高
犉犻犵．５ 犈狀犺犪狀犮犲犱狊犪犾狋狋狅犾犲狉犪狀犮犲狅犳犣犿犃犅犐３犔狅狏犲狉
犲狓狆狉犲狊狊犻狀犵犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪
Ａ：ＲＴ－ＰＣＲ分析犣犿犃犅犐３犔 基因在拟南芥中的表达情况，扩增质
粒做正对照，扩增野生型植株做负对照；Ｂ：在不同浓度的 ＮａＣｌ培养基
中转基因植株的根茎损伤较野生型小。分别测量在０，５０，１００，１５０
ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ培养基中生长７ｄ转基因植株和野生型植株的根、幼茎的
长度，每个处理大约 ５０ 株，３ 次重复。Ａ：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ犣犿犃犅犐３
犔ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ｌｉｎｅｓ１ｔｏ５ｗｅｒｅｔｈｅＰＣＲｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ｌｉｎｅｓ，ａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｌａｓｍｉｄＤＮＡａｎｄＷＴａｓｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＣＫ）ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅ
ｃｏｎｔｒｏｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｂ：Ｏｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ
ｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ犣犿犃犅犐３犔ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｓｅｅｄｓｗｅｒｅｍｏｒｅｔｏｌｅｒａｎｔｔｈａｎ
ＷＴ．Ｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｕｓｉｎｇａｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｓｓａｙｏｎｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉ
ｎｉｎｇ０，５０，１００ａｎｄ１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ．Ｄａｔａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｍｅａｎｓｏｆ
ｔｈｒｅｅｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ，ａｂｏｕｔ５０ｐｌａｎｔｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｏｎｅｖｅｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，
ｖａｌｕｅｓｗｅｒｅｔｈｅｍｅａｎ±ＳＤ．
图６ 犣犿犃犅犐３犔基因提高拟南芥的抗旱性
犉犻犵．６ 犌犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犪狊狊犪狔狊狅犳犣犿犃犅犐３犔狅狏犲狉
犲狓狆狉犲狊狊犻狀犵狆犾犪狀狋狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
转基因植株（Ａ）和 ＷＴ（Ｂ）分别生长在５０ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇的培养基
中，转基因植株发芽率高，植株根和茎发育良好（Ｃ左侧１０株），ＷＴ发
芽率低，植株根茎受损伤严重（Ｃ右侧１０株），每个培养皿大约种５０粒
种子，３次重复。犣犿犃犅犐３犔ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊（Ａ）ａｎｄＷＴ
（Ｂ）ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｎ５０ｍｍｏｌ／Ｌｍａｎｎｉｔｏｌ，犣犿犃犅犐３犔ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ
犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊（Ｃｌｅｆｔ）ｈａｓｌｏｎｇｅｒｒｏｏｔａｎｄｓｈｏｏｔｔｈａｎＷＴ（Ｃｒｉｇｈｔ）．Ａｌ
ｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｃｕｂａｔｉｏｎａｔ２３℃ｏｎＭＳｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓａｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎｓ．Ａｂｏｕｔ５０ｐｌａｎｔｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｏｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．
ＲＴ－ＰＣＲ研究基因在不同组织的表达情况，结
果表明基因是组成型表达的，在不同部位均检测到了
基因的表达。其中根、茎和叶的表达量较低，花丝、穗
子和幼胚的表达量较高，以幼胚的表达量最高（图３）。
犣犿犃犅犐３犔 在不同组织的差异表达或许和其功能相
关。提取不同胁迫处理玉米幼苗的 ＲＮＡ 通过定量
ＰＣＲ 分析 犣犿犃犅犐３犔 基因的表达量，结果表明
犣犿犃犅犐３犔 基因的表达受冷、干旱、ＡＢＡ和盐胁迫诱
导上调表达（图４）。盐胁迫处理基因的表达量在处理
后１２ｈ表达量最高，为对照的３．３６倍，随后表达量迅
速下降到对照相近水平（图４Ａ）。干旱处理基因的表
达随着处理迅速提高，到处理３ｈ时基因的表达量达
到最高，为对照的２．２３倍，随后表达量逐渐降低，到
４８ｈ时表达量达到最低（图４Ｂ）。冷胁迫处理时，基因
在开始胁迫时表达量略有下降，当达到３ｈ时表达量
为对照的１．５４倍，随后开始下降（图４Ｃ）。ＡＢＡ处理
时基因迅速应答，处理０．５ｈ时表达量就为对照的近
１．８５倍，处理３ｈ时表达量达到最高，为对照的２．３４
倍（图４Ｄ）。从基因的诱导表达特性可见犣犿犃犅犐３犔
基因是受多种非生物胁迫诱导表达的，意味着它在应
答胁迫反应中可能起重要作用。
２．３ 犣犿犃犅犐３犔 基因增加拟南芥的抗旱与耐盐性
从犣犿犃犅犐３犔 基因的表达特性可见，该基因受
多种胁迫诱导表达，其可能在玉米抗逆境胁迫中起作
用，为深入研究其功能，将该基因转到拟南芥中，研究
基因的作用。本实验共获得７株转基因植株，经过２
代筛选培养后，得到５株Ｔ３ 代转基因纯合植株，ＲＴ－
ＰＣＲ检测基因表达量显示转基因株系的犣犿犃犅犐３犔
基因有较高的表达量（图５Ａ），选取犣犿犃犅犐３犔 基因
表达最高的株系（ｌｉｎｅ５）进行深入研究。首先耐盐实
验结果表明在不同盐浓度的培养基生长，转基因植株
和野生型植株的耐盐性不同。测量在不同浓度盐溶液
中培养７ｄ植株的根和幼茎的长度（图５Ｂ），结果显示
在没有胁迫处理的培养基中（０ｍｍｏｌ／Ｌ），转基因植株
和野生型植株的根和茎长度差别不大，而在不同浓度
的盐溶液下两种植株生长差异显著。在５０ｍｍｏｌ／Ｌ
的培养基对两种植株的幼茎影响不大，野生型为０．７３
ｃｍ，而转基因植株为０．８２ｃｍ，比野生型略长；在１００
ｍｍｏｌ／Ｌ盐培养基中野生型为０．２２７ｃｍ，而转基因为
０．３１３ｃｍ，１５０ｍｍｏｌ／Ｌ盐培养基对转基因和野生型
都有较大的损害，野生型的损害更加明显，野生型为
９２１第２５卷第２期 草业学报２０１６年
０．０９ｃｍ，而转基因为０．１２７ｃｍ，为野生型的１．４倍。高盐对根的损伤也很明显，在５０ｍｍｏｌ／Ｌ盐培养基中野生
型的根长为３．７１ｃｍ，而转基因植株根长略高，为４．０２ｃｍ，１００ｍｍｏｌ／Ｌ盐培养基对拟南芥的根损伤非常明显，
野生为１．３１ｃｍ，转基因植株为２．１１ｃｍ，１５０ｍｍｏｌ／Ｌ盐培养基野生型为０．２３ｃｍ，而转基因植株为１．９７ｃｍ，为
野生型的８．６倍。
将转基因和野生型植株分别种植在５０ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇的培养基上进行耐旱性鉴定，结果可见无论从长势还
是发芽率上转基因植株都要较野生型好，在甘露醇渗透培养基中培养７ｄ，转基因植株的发芽率为（７４．５±２）％
（图６Ａ），而野生型为（３３．６±３）％，大部分野生型种子没有萌发（图６Ｂ）。随机选取各种基因型１０株植株进行测
量（图６Ｃ），结果显示转基因植株根的平均长度为（２．６５±０．３）ｃｍ，茎的平均长度为（０．３２±０．１１）ｃｍ，而野生型
根的平均长度为（０．４３±０．１２）ｃｍ，茎的平均长度为（０．２１±０．０８）ｃｍ（表１）。转基因植株的幼苗健康、浓绿，而
野生型长势瘦弱、发黄。
表１ 转犃犅犐３犔基因拟南芥在干旱胁迫下的发芽率和植株长度的变化
犜犪犫犾犲１ 犜犺犲犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犪狀犱狆犾犪狀狋狊犾犲狀犵狋犺狑犪狊犮犺犪狀犵犲犱狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊狅犳犣犿犃犅犐３犔狅狏犲狉犲狓狆狉犲狊狊犻狀犵犪狀犱犠犜狆犾犪狀狋狊
植株Ｐｌａｎｔ
４ｄ
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
（％）
根（茎）的平均长度
Ａｖｅｒａｇｅｌｅｎｇｔｈｏｆｒｏｏｔ
（ｓｈｏｏｔ）（ｃｍ）
６ｄ
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
（％）
根（茎）的平均长度
Ａｖｅｒａｇｅｌｅｎｇｔｈｏｆｒｏｏｔ
（ｓｈｏｏｔ）（ｃｍ）
７ｄ
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
（％）
根（茎）的平均长度
Ａｖｅｒａｇｅｌｅｎｇｔｈｏｆｒｏｏｔ
（ｓｈｏｏｔ）（ｃｍ）
转基因植株
Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ
５３．６±０．８ １．６８±０．２０ — ２．３７±０．５０ ７４．５±２ ２．６５±０．３０
０．１８±０．１３ ０．２２±０．１１ ０．３２±０．１１
野生型
Ｗｉｌｄｔｙｐｅ
１７．８±０．５ ０．２９±０．０７ — ０．３６±０．１１ ３３．６±３ ０．４３±０．１２
— ０．１９±０．０６ ０．２１±０．０８
３ 讨论
ＡＢＡ是植物重要的激素，在植物的生长发育、种子萌发、促进衰老等方面起重要作用，随着对其研究的深入
发现它在植物应答干旱、高盐、低温等逆境反应中也起重要的作用，是植物的重要抗逆境因子［１１］。越来越多的研
究表明，ＡＢＡ在生物体内最主要的功能是其作为胁迫激素参与了植物对外界胁迫条件的应答［１２１３］。
ＡＢＩ３家族是 ＡＢＡ信号途径中的重要信号因子，属于Ｂ３转录因子家族，在植物的生长发育中起重要的作
用，ＡＢＩ３可以和多个转录因子结合如ＬＥＣ１，ＬＥＣ２和ＦＵＳ３，这些因子同时也可以控制 ＡＢＩ３在植物体内的表
达。研究表明ＡＢＩ３的作用是多方面的，如玉米的犞犘１基因在种子成熟中起作用，狏狆１突变体表现种子早熟性。
拟南芥的ＡＢＩ３在黑暗诱导植株顶芽的衰老中起重要的作用，通过转基因已经证明ＡＢＩ３／ＶＰ１同源蛋白在种子
和胚的发育中起重要的作用；拟南芥的犔犈犆２基因和犉犝犛３是犃犅犐３最近的同源基因，它们也参与调控种子发育
过程和多种生命过程，在植物发育的早期阶段，犔犈犆２基因决定着胚柄细胞和子叶的发育，在植物发育的晚期阶
段，犔犈犆基因可以使种子抗干燥的能力大大增加［１４１５］。ＡＢＩ３的作用并不仅仅局限于种子发育的调控中，Ｂｒｏ
ｃａｒｄ等［１６］从拟南芥中分离鉴定出一种突变体，可以使植株对ＡＢＡ敏感性降低，具有抑制细胞的伸长、阻止纤维
素的合成、影响维管的分化等功能，并且在气孔调节、胁迫应答基因表达调控方面出现障碍。花生（犃狉犪犮犺犻狊犺狔
狆狅犵犪犲犪）中发现的犃犅犐３／犖犘１基因可以调控胚对脱落酸的敏感性、调控胚中叶绿素的降解和花青素的合成、使种
子获得抗干燥能力和抑制不成熟种子的萌发等作用。水稻中克隆到犃犅犐８基因，是一个对干旱和盐害均有响应
而显著上调的基因可能参与ＡＢＡ和乙烯信号互作调控拟南芥根的生长［１６１８］。
目前许多物种的ＡＢＩ３基因还没有进行深入研究，尤其是它们在 ＡＢＡ介导的信号通路中的作用还远远未
知。本文的初期研究表明犣犿犃犅犐３犔 基因可以应答多种逆境胁迫因子，同时转基因到拟南芥中可以增加拟南
芥的抗性，是一个潜在的胁迫耐受候选功能基因。ＡＢＡ发挥特定生理功能的机制是非常复杂的，对胁迫信号如
何通过犣犿犃犅犐３犔 来精确应答，还需要继续深入研究。
０３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＳｗａｍｉｎａｔｈａｎＫ，ＰｅｔｅｒｓｏｎＫ，ＪａｃｋＴ．ＴｈｅｐｌａｎｔＢ３ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，１３（１２）：６４７６５５．
［２］ ＨａｔｔｏｒｉＴ，ＴｅｒａｄａＴ，ＳａｔｏｓｈｉＨ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｉｃｅｇｅｎｅｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏｔｈｅｍａｉｚｅ犞犘１．ＰｌａｎｔＭｏ
ｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９４，２４（５）：８０５８１０．
［３］ ＧｉｒａｕｄａｔＪ，ＨａｕｇｅＢＭ，ＶａｌｏｎＣ，犲狋犪犾．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ＡＢＩ３ｇｅｎｅｂｙｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ．ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９２，
４（１０）：１２５１１２６１．
［４］ ＦｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎＲ，ＳｏｍｅｒｖｉｌｅＲ．Ｔｈｒｅｅｃｌａｓｓｅｓｏｆａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ（ＡＢＡ）ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｆ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ｄｅｆｉｎｅｇｅｎｅｓｔｈａｔｃｏｎ
ｔｒｏｌｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｓｕｂｓｅｔｓｏｆＡＢＡｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９０，９４（６）：１１７２１１７９．
［５］ ＳｕｚｕｋｉＭ，ＫａｏＣＹ，ＭｃＣａｒｔｙＤＲ．ＴｈｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄＢ３ｄｏｍａｉｎｏｆＶＩＶＩＰＡＲＯＵＳ１ｈａｓａｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ．
ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９７，９（５）：７９９８０７．
［６］ ＳｕｚｕｋｉＭ，ＷｕＳ，ＬｉＱ，犲狋犪犾，ＤｉｓｔｉｎｃｔｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＣＯＡＲａｎｄＢ３ｄｏｍａｉｎｓｏｆｍａｉｚｅＶＰ１ｉｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｃｔｏｐｉｃｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎａｎｄｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊．ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２０１４，ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１１０３０１４０１７７ｘ．
［７］ ＷａｎｇＪ，ＤｅｎｇＸ，ＳｈｉＴ，犲狋犪犾．Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｐｈｙｌｏｇｅｎｙａｎｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒ（ＡＲＦ）ｆａｍｉｌｙ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ
ｇａｉｎｅｄｆｒｏｍａｎａｌｙｚｉｎｇｍａｉｚｅＡＲＦｇｅｎｅｓ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｓ，２０１２，３９（３）：２４０１２４１５．
［８］ ＲｅｉｄｔＷ，ＷｏｈｌｆａｒｔｈＴ，Ｅｌｅｒｓｔｒｏｍ Ｍ，犲狋犪犾．Ｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｌａｔｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｔｈｅＲＹｍｏｔｉｆｏｆｍａｔｕｒａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｉｓａｄｉｒｅｃｔｔａｒｇｅｔｏｆｔｈｅＦＵＳ３ｇｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔ．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０００，２１（５）：４０１４０８．
［９］ ＣｌｏｕｇｈＳＪ，ＢｅｎｔＡＦ．Ｆｌｏｒａｌｄｉｐ：ａｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒ犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪．
ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９８，１６（６）：７３５７４３．
［１０］ ＬｉｕＹＨ，ＷａｎｇＸＴ，ＳｈｉＹＳ，犲狋犪犾．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｐｒｏｔｅｉｎｄｉｓｕｌｆｉｄｅｉｓｏｍｅｒａｓｅｓｉｎｍａｉｚｅ（犣犲犪犿犪狔狊
Ｌ．）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００９，２５（３）：２２９２３４．
［１１］ ＬｉｕＱ，ＺｈａｎｇＳＫ，ＳｕｎＷＢ，犲狋犪犾．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｄｉｎｋｅｎｔｕｃｋｙｂｌｕｅｇｒａｓｓ．ＡｃｔａＰｒａｔ
ａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（２）：３１４０．
［１２］ ＺｈｕＪＫ．Ｓａｌｔａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｓ．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３（２）：２４７２７３．
［１３］ ＣｈｅｎｇＷ Ｈ，ＣｈｉａｎｇＭ Ｈ，ＨｗａｎｇＳＧ．Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍｂｅｔｗｅｅｎａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄａｎｄｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ａｃｔｓｉｎｐａｒａｌｅｌｗｉｔｈ
ｔｈｅｒｅｃｉｐｒｏｃａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ．ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００３，７１（２）：６１８０．
［１４］ ＵｍｅｚａｗａＴ，ＮａｋａｓｈｉｍａＫ，ＭｉｙａｋａｗａＴ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｎｅｔｗｏｒｋｉｎＡＢＡｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：ｓｅｎｓｉｎｇ，ｓｉｇｎａ
ｌｉｎｇａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔ．ＰｌａｎｔＣｅｌＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１０，５１（１１）：１８２１１８３９．
［１５］ ＢｉｅｓＥｔｈｅｖｅＮ，ＳｉｌｖａＣｏｎｃｅｉｃａｏＡ，ＧｉｒａｕｄａｔＪ，犲狋犪犾．ＩｍｐｏｒｔａｎｃｅｏｆｔｈｅＢ３ｄｏｍａｉｎｏｆｔｈｅ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ＡＢＩ３ｐｒｏｔｅｉｎｆｏｒＥｍ
ａｎｄ２Ｓａｌｂｕｍｉｎｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９９，４０（６）：１０４５１０５４．
［１６］ ＢｒｏｃａｒｄＧｉｆｆｏｒｄＩ，ＬｙｎｃｈＴＪ，ＧａｒｃｉａＭＥ．Ｔｈｅ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ８ｅｎｃｏｄｅｓａｎｏｖｅｌｐｒｏｔｅｉｎｍｅｄｉ
ａｔｉｎｇａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄａｎｄｓｕｇａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｇｒｏｗｔｈ．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００４，１６（２）：４０６４２１．
［１７］ ＹａｎｇＸＧ，ＦａｎＮＳ，ＬｉａｎｇＷ Ｈ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ８ｌｉｋｅｇｅｎｅｆｒｏｍｒｉｃｅ
（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪Ｌ．）．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１１，４１（３）：２９０２９４．
［１８］ ＤｏｎｇＨＰ，ＹｕＨ，ＢａｏＺＬ，犲狋犪犾．ＴｈｅＡＢＩ２ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌｓＨｒｐＮｉｎｄｕｃｅｄｄｒｏｕｇｈｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎ
犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊．Ｐｌａｎｔａ，２００５，２２１（７）：３１３３２７．
参考文献：
［１０］ 刘颖慧，王秀堂，石云素，等．玉米蛋白质二硫键异构酶（ＰＤＩ）基因的特征和表达．中国生物化学与分子生物学报，２００９，
２５（３）：２２９２３４．
［１１］ 刘强，张锁科，孙万斌，等．不同营养调控对草地早熟禾生长和内源激素含量影响研究．草业学报，２０１５，２４（２）：３１４０．
［１７］ 杨献光，范念斯，梁卫红．水稻胁迫应答基因ＯｓＡＢＩ８的克隆与表达分析．河南大学学报，２０１１，４１（３）：２９０２９４．
１３１第２５卷第２期 草业学报２０１６年