全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５４１０ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
姜志艳，于肖夏，于卓，张志成，石悦，姜超．利用ＳＳＲ分子标记构建四倍体杂交冰草的遗传连锁图谱．草业学报，２０１６，２５（６）：９４１０１．
ＪＩＡＮＧＺｈｉＹａｎ，ＹＵＸｉａｏＸｉａ，ＹＵＺｈｕｏ，ＺＨＡＮＧＺｈｉＣｈｅｎｇ，ＳＨＩＹｕｅ，ＪＩＡＮＧＣｈａｏ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｇｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｍａｐｆｏｒｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｈｙｂｒｉｄ
ｗｈｅａｔｇｒａｓｓｕｓｉｎｇａＳＳＲｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１６，２５（６）：９４１０１．
利用犛犛犚分子标记构建四倍体
杂交冰草的遗传连锁图谱
姜志艳１，２，于肖夏１，于卓１，张志成１，石悦１，姜超１
（１．内蒙古农业大学农学院，内蒙古 呼和浩特０１００１９；２．内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古 包头０１４０１０）
摘要：为构建四倍体杂交冰草分子遗传连锁图谱，对深入开展冰草产量、抗性等重要性状的 ＱＴＬ定位及分子标记
辅助育种提供依据，以四倍体杂种Ｆ２ 分离群体的３４７个单株及亲本蒙古冰草和航道冰草为材料，采用ＳＳＲ分子标
记技术和Ｊｏｉｎｍａｐ４．０软件进行了遗传作图研究。试验从２５６对ＳＳＲ引物中筛选出条带清晰稳定、多态性丰富的
适宜引物３０对，ＰＣＲ扩增得到２２４个ＳＳＲ标记位点，平均每对引物扩增出７．４７个位点，其中多态性标记位点１８５
个，占８２．６％。偏分离分析显示，在１８５个ＳＳＲ多态性标记位点中有２４个标记产生偏分离，占１３．０％，符合植物
遗传作图时通常偏分离标记比率＜３０％的要求，可用于遗传作图。构建了１张四倍体杂交冰草的分子遗传连锁框
架图谱，该图谱包含１４个连锁群、１８５个标记，其长度范围在１２３．０～２０２．６ｃＭ 之间，连锁群ＬＧ４最长、ＬＧ１２最
短，各连锁群的平均长度１６７．３２ｃＭ，覆盖基因组总长度２３４２．５ｃＭ，标记间的平均距离１２．６６ｃＭ。
关键词：杂交冰草；四倍体；ＳＳＲ标记；遗传连锁图谱
犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀狅犳犪犵犲狀犲狋犻犮犾犻狀犽犪犵犲犿犪狆犳狅狉狋犲狋狉犪狆犾狅犻犱犺狔犫狉犻犱狑犺犲犪狋犵狉犪狊狊狌狊犻狀犵犪犛犛犚
犿狅犾犲犮狌犾犪狉犿犪狉犽犲狉
ＪＩＡＮＧＺｈｉＹａｎ１，２，ＹＵＸｉａｏＸｉａ１，ＹＵＺｈｕｏ１，ＺＨＡＮＧＺｈｉＣｈｅｎｇ１，ＳＨＩＹｕｅ１，ＪＩＡＮＧＣｈａｏ１
１．犃犵狉狅狀狅犿狔犆狅犾犾犲犵犲，犐狀狀犲狉犕狅狀犵狅犾犻犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犎狌犺犺狅狋０１００１９，犆犺犻狀犪；２．犛犮犺狅狅犾狅犳犕犪狋犺犲犿犪狋犻犮狊，犘犺狔狊犻犮狊犪狀犱犅犻狅
犾狅犵犻犮犪犾犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵，犐狀狀犲狉犕狅狀犵狅犾犻犪犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犛犮犻犲狀犮犲牔犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔，犅犪狅狋狅狌０１４０１０，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｇｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｍａｐｉｎｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｈｙｂｒｉｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｕ
ｓｉｎｇａｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｓ（ＳＳＲ）ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗｉｔｈ‘Ｊｏｉｎｍａｐ’４．０ｓｏｆｔｗａｒｅ．３４７ｉｎｄｉｖｉｄｕ
ａｌｓｆｒｏｍｔｈｅＦ２ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇｐｏｐｕｌａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｐａｒｅｎｔｓｗｅｒｅｕｔｉｌｉｚｅｄ，ｔｈｉｓｈｅｌｐｅｄｌａｙｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒ
ｓｔｕｄｙｏｆｍａｒｋｅｒａｓｓｉｓｔｅｄｂｒｅｅｄｉｎｇ，ａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ（ＱＴＬ）ｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｒａｉｔｓｉｎｗｈｅａｔ
ｇｒａｓｓ，ｓｕｃｈａｓｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｙｉｅｌｄ．Ｔｈｉｒｔｙｏｐｔｉｍａｌｐｒｉｍｅｒｓｗｉｔｈｃｌｅａｒ，ｓｔａｂｌｅａｎｄｈｉｇｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍ２５６ｔｅｓｔｅｄＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓ．Ａｔｏｔａｌｏｆ２２４ＳＳＲｌｏｃｉｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｏｆ７．４７ｌｏｃｉｐｅｒｐｒｉｍｅｒ，ｏｆｗｈｉｃｈ１８５ｗｅｒｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏ
ｃｉ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ８２．６％ｏｆａｌｌｏｃｉ．Ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｔｏｔａｌｏｆ２４ｌｏｃｉｗｅｒｅｄｉｓｔｏｒｔ
ｅｄ，ａｃｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ１３．０％ｏｆａｌ （１８５）ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉ，ｗｈｉｃｈｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｆ＜３０％ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎｄｉｓ
ｔｏｒｔｉｏｎｆｏｒｐｌａｎｔｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇ．Ｔｈｅｓｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉｗｏｕｌｄｂｅｕｓｅｆｕｌｆｏｒｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，
ａｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｍａｐｏｆｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｈｙｂｒｉｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｈｉｃｈｃｏｎｔａｉｎｅｄ１８５ｌｏｃｉａｎｄ
９４－１０１
２０１６年６月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２５卷 第６期
Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６
收稿日期：２０１５０９０６；改回日期：２０１５１０２１
基金项目：国家自然科学基金面上项目（３１１７２２５４）资助。
作者简介：姜志艳（１９７６），女，内蒙古包头人，讲师，博士。Ｅｍａｉｌ：Ｌ２３５９９１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｙｕｚｈｕｏ５８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
１４ｌｉｎｋａｇｅｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈｌｅｎｇｔｈｒａｎｇｉｎｇｆｒｏｍ１２３．０ｔｏ２０２．６ｃＭ．Ｔｈｅｌｏｎｇｅｓｔａｎｄｔｈｅｓｈｏｒｔｅｓｔｌｉｎｋａｇｅｇｒｏｕｐ
ｗｅｒｅＬＧ４ａｎｄＬＧ１２，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｌｅｎｇｔｈｏｆｅａｃｈｌｉｎｋａｇｅｇｒｏｕｐｗａｓ１６７．３２ｃＭ，ｔｏｔａｌｌｅｎｇｔｈｏｆ
ｔｈｅｇｅｎｏｍｅｗａｓ２３４２．５ｃＭａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｍａｒｋｅｒｄｉｓｔａｎｃｅｗａｓ１２．６６ｃＭ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｈｙｂｒｉｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓ；ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ；ＳＳＲｍａｒｋｅｒ；ｇｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｍａｐ
冰草为多年生草本植物，隶属于禾本科小麦族（Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ）。其抗逆性强、适应性广，饲用和生态价值高，可用
于退化的天然草地改良、人工草地建植及公路和铁路护坡等水土保持［１２］。四倍体杂交冰草（犃犵狉狅狆狔狉狅狀犿狅狀犵狅
犾犻犮狌犿×犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｉｒｗａｙ，２狀＝４狓＝２８）是课题组利用国产蒙古冰草（犃．犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿，２狀＝２狓＝１４）与产
自美国的航道冰草（犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｉｒｗａｙ，２狀＝２狓＝１４）相组配，人工去雄授粉杂交获得的二倍体杂种Ｆ１，经
秋水仙碱溶液加倍染色体而育成的优良牧草，其既有母本蒙古冰草耐寒抗旱、适应性强等优良特性，又有父本航
道冰草再生性和分蘖性强、耐倒伏、叶量大、营养价值和产量高的特点［３５］。
简单序列重复ＳＳＲ（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ）是一项成熟的ＤＮＡ标记技术，因其具有重复性好、多态性丰富、
标记呈共显性等优点，在作物品种和杂种真实性鉴定、种质资源遗传差异分析、辅助选择育种、分子遗传连锁图谱
建立等方面已得到应用［６９］。由于大多数多年生禾本科或豆科牧草都具有多倍性和异花授粉等生物学特性［１０］，
其复杂的遗传背景使得牧草的遗传作图、重要性状ＱＴＬ定位及分子标记辅助育种研究工作相比作物进展较慢。
１９９３年Ｂｒｕｍｍｅｒ等［１１］最早利用ＲＦＬＰ分子标记构建了四倍体紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）的遗传连锁图，之后
在二倍体的羊茅（犉犲狊狋狌犮犪ｓｐｐ．）、黑麦草（犔狅犾犻狌犿ｓｐｐ．）、高丹草（犛狅狉犵犺狌犿犛狌犱犪狀犵狉犪狊狊）及二倍体杂交冰草等牧
草上构建了分子遗传连锁图谱［１２１５］，而有关四倍体杂交冰草的遗传作图至今未见有研究报道。本试验以四倍体
杂交冰草Ｆ２ 群体为作图材料，拟利用ＳＳＲ分子标记技术构建四倍体杂交冰草分子遗传连锁图谱，为深入开展四
倍体冰草重要农艺性状的ＱＴＬ定位、分子标记辅助育种及基因图位克隆等奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
材料为四倍体杂交冰草Ｆ２群体的单株及其亲本蒙古冰草和航道冰草，种植于呼和浩特市赛罕区内蒙古农业
大学农场的饲草材料圃内。试验于２０１４年５月—２０１５年５月在田间和室内进行。
１．２ ＤＮＡ的提取与纯度检测
从四倍体杂交冰草Ｆ２ 群体内随机取３４７个单株及其父母本各１０个单株的嫩叶，用北京天根公司生产的植
物基因组试剂盒提取ＤＮＡ，１．６％琼脂糖凝胶电泳检测其ＤＮＡ纯度后稀释至５０ｎｇ／μＬ，置于－２０℃冰箱中备
用［１６］。
１．３ ＳＳＲ－ＰＣＲ扩增反应体系和程序
ＳＳＲ－ＰＣＲ扩增体系：反应液总体积为２０μＬ，其中含５０μｍｏｌ／Ｌ的１０×Ｂｕｆｆｅｒ２．０μＬ、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ的
ｄＮＴＰ２．０μＬ、２５ｍｍｏｌ／Ｌ的 ＭｇＣｌ２１．８μＬ、５０μｍｏｌ／Ｌ的Ｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ和 Ｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒ各１．０μＬ、５
Ｕ／μＬ的ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１μＬ、模板ＤＮＡ１．０μＬ、ｄｄＨ２Ｏ１１．１μＬ。ＳＳＲ－ＰＣＲ扩增程序：９４℃５ｍｉｎ，９４℃
３０ｓ，５６℃３０ｓ，７２℃１ｍｉｎ，３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ［１７］。
１．４ ＰＣＲ扩增产物检测及ＳＳＲ引物来源
ＰＣＲ反应结束后，加入６．０μＬ变性剂，于ＰＣＲ仪上９５℃变性５ｍｉｎ，用７％的变性聚丙烯酰胺凝胶进行电
泳，功率７０Ｗ，预电泳３０ｍｉｎ，电泳时间２ｈ。电泳胶板在乙醇－冰乙酸溶液中固定，ＡｇＮＯ３ 溶液中染色，
ＮａＯＨ－甲醛溶液中显影，风干后照相［１８］。
试验所用的２５６对ＳＳＲ引物，是从 ＮＣＢＩ网站公布的禾本科作物小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、玉米（犣犲犪
犿犪狔狊）和高粱（犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉）上开发的部分ＳＳＲ引物中选取，送至上海生物工程有限公司进行合成。
１．５ ＳＳＲ多态性位点统计
按胶板点样顺序对每个位点上的多态性位点条带进行记录，有带记为“１”，无带记为“０”，带型模糊不清或缺
５９第２５卷第６期 草业学报２０１６年
失的记为“—”，生成“０”和“１”组成的原始矩阵进行统计分析。多态性标记位点百分率计算公式：Ｐ（％）＝（Ｋ／Ｎ）
×１００，式中，Ｋ为多态性位点数目、Ｎ为观测位点总数［１９］。同一ＳＳＲ引物ＰＣＲ扩增２～３次，统计电泳胶板条带
清晰稳定后的多态性位点。
１．６ ＳＳＲ标记偏分离统计
依据孟德尔分离规律，四倍体杂交冰草Ｆ２ 群体基因型理论分离比为３∶１，将每个ＳＳＲ标记的基因型数目进
行卡方检验（χ
２ 测验），凡犘＜０．０５的ＳＳＲ标记均列入偏分离标记之内。
１．７ ＳＳＲ分子遗传连锁图谱构建
将统计的ＳＳＲ标记数据中的“０”和“１”原始矩阵分别转换成Ｆ２ 群体所要求的数据格式，应用计算机作图软
件Ｊｏｉｎｍａｐ４．０，构建以ＳＳＲ分子标记为基础的四倍体杂交冰草的分子遗传连锁图谱。具体步骤：开Ｎｅｗｐｒｏ
ｊｅｃｔ命令创建一个新的文件夹；选择Ｏｐｔｉｏｎｓ，设置参数即选择作图群体模式、群体数量和标记位点数；导入数据，
选择ＬＯＤＧｒｏｕｐｉｎｇｓ（ｔｒｅｅ）窗口，用Ｃａｌｃｕｌａｔｅ命令进行标记连锁分组（ＬＯＤ＝３．０～１０．０），选用ＬＯＤ≥３．０标
记连锁组群，运行ＣｒｅａｔｅＧｒｏｕｐｓｆｏｒＭａｐｐｉｎｇ命令得到用于作图的连锁群；选择Ｃａｌｃｕｌａｔｅｍａｐ命令构建连锁图
谱；用 Ｍａｐｃｈａｒｔ完成图谱的绘制。
２ 结果与分析
２．１ 各材料基因组ＤＮＡ的纯度检测
用ＤＮＡ试剂盒提取的四倍体杂交冰草Ｆ２ 群体３４７个单株及其亲本的基因组ＤＮＡ，其电泳条带清晰稳定、
无降解、无蛋白和ＲＮＡ污染（图１），表明各材料的ＤＮＡ纯度高，符合ＳＳＲ分子标记试验的要求。
图１ 犉２ 群体部分单株基因组犇犖犃电泳纯度检测
犉犻犵．１ 犌犲狀狅犿犻犮犇犖犃犲犾犲犮狋狉狅狆犺狅狉犲狊犻狊狆狌狉犻狋狔狋犲狊狋狅犳狆犪狉狋犻犪犾狆犾犪狀狋狊狅犳狋犺犲犉２狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀
Ｐ１：蒙古冰草；Ｐ２：航道冰草；１－３１：Ｆ２ 群体部分单株。Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００．Ｐ１：犃．犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿；Ｐ２：犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｒｉｗａｙ；１－３１：Ｐａｒｔｉａｌ
ｐｌａｎｔｓｏｆｔｈｅＦ２ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．
２．２ ＳＳＲ引物筛选及多态性分析
用亲本蒙古冰草和航道冰草及其四倍体杂种Ｆ２ 群体１个单株的基因组ＤＮＡ为模板进行适宜引物筛选，从
２５６对ＳＳＲ引物中选出条带清晰、重复性和多态性好的ＳＳＲ适宜引物３０对（表１，图２）。
利用这３０对引物对Ｆ２ 作图群体３４７个单株及亲本的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共获得２２４个位点，平均每对引
物扩增出７．４７个位点，其中多态性标记位点１８５个，平均多态性标记位点百分率为８２．６％，表明该四倍体杂交
冰草Ｆ２ 群体的ＳＳＲ多态性丰富（图３，表１）。
２．３ ＳＳＲ作图标记的分离及遗传连锁图谱特征分析
ＳＳＲ标记分离及连锁图谱的基本特征如表２和图４所示。经卡方检验表明，当犘＜０．０５时，在已获得的１８５
个ＳＳＲ多态性标记位点中，有１６１个标记符合孟德尔分离比例，其占标记总数的８７．０％。另有２４个ＳＳＲ标记
产生偏分离，偏分离比例仅为１３．０％，符合植物遗传作图时通常偏分离标记比率＜３０％的要求［２０］，这１８５个ＳＳＲ
分子标记均可用于遗传作图。
利用Ｊｏｉｎｍａｐ４．０软件对１８５个ＳＳＲ标记进行连锁分析，构建出１张四倍体杂交冰草的ＳＳＲ分子遗传连锁
框架图谱，该图谱包含１４个连锁群、１８５个标记，１４个连锁群的长度范围在１２３．０～２０２．６ｃＭ 之间，连锁群
ＬＧ１２最短、ＬＧ４最长，各连锁群的平均长度为１６７．３２ｃＭ，总长度为２３４２．５ｃＭ，标记间的平均距离为１２．６６ｃＭ。
６９ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６
表１ 适宜犛犛犚引物碱基序列及其多态性标记位点
犜犪犫犾犲１ 犖狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狅犳犛犛犚狆狉犻犿犲狉狊犪狀犱狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻犮犿犪狉犽犲狉狊犾狅犮犻
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
正向引物碱基序列
Ｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ
反向引物碱基序列
Ｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ
扩增位点数
Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｌｏｃｉＮｏ．
多态位点数
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｌｏｃｉＮｏ．
多态位点百分率
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ（％）
ＡＨ４ ５′ＧＣＧＡＡＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＧ３′ ５′ＣＧＡＡＧＴＣＧＧＣＧＴＴＣＡＴＣＴＣ３′ ７ ５ ７１．４
ＡＨ１５ ５′ＡＧＡＧＣＧＡＴＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡ３′ ５′ＧＣＡＡＣＧＧＧＴＧＧＴＡＧＡＡＡＴ３′ ８ ７ ８７．５
ＡＨ２５ ５′ＴＴＧＡＡＣＣＧＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＴ３′ ５′ＣＡＡＡＧＣＡＧＴＡＡＧＧＧＧＡＡＡ３′ ５ ３ ６０．０
ＡＨ６３ ５′ＣＡＣＣＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＣ３′ ５′ＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡ３′ ８ ６ ７５．０
ＡＨ７０ ５′ＴＴＧＣＡＣＴＡＣＣＧＴＧＡＣＴＴＴ３′ ５′ＡＧＡＡＡＣＣＡＣＧＣＴＣＡＣＡＴＡ３′ ６ ５ ８３．３
ＡＨ７１ ５′ＴＧＣＣＣＡＡＣＣＧＡＡＴＣＡＣＡＡ３′ ５′ＣＴＧＧＡＣＧＧＡＧＣＣＡＣＡＴＣＡ３′ １０ １０ １００．０
ＡＨ８５ ５′ＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＡ３′ ５′ＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＴＧＡＡＡＣＡＣ３′ ６ ５ ８３．３
Ｂ３１０７ ５′ＣＴＴＧＴＴＣＡＣＣＴＴＧＣＴＴＧＣＣＴＡＴ３′ ５′ＡＴＧＣＧＴＴＴＣＴＧＣＴＣＴＧＴＴＣＡＣＴ３′ ５ ５ １００．０
Ｂ３２５２ ５′ＣＧＣＣＧＡＧＴＣＣＣＡＧＴＡＧＴＧＴＴ３′ ５′ＣＧＡＧＧＧＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡ３′ １０ ８ ８０．０
Ｂｒａｃ１２４ ５′ＴＧＣＡＣＣＣＣＴＴＣＣＡＡＡＴＣＴ３′ ５′ＴＧＣＧＡＧＴＣＧＴＧＴＧＧＴＴＧＴ３′ ５ ４ ８０．０
Ｂａｒｃ１０６０ ５′ＧＣＧＴＣＴＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＴＴＴＣＣＡ３′ ５′ＧＣＧＡＴＧＴＴＣＴＧＴＡＧＴＴＣＴＴＡＧＴＧＴＴ３′ ５ ４ ８０．０
Ｃ１２ ５′ＣＧＣＣＧＡＧＴＣＣＣＡＧＴＡＧＴＧＴＴ３′ ５′ＣＧＡＧＧＧＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡ３′ １２ １０ ８３．３
Ｃ２７４３ ５′ＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＧＣＧＧＡＴＧＡＡＧ３′ ５′ＣＴＡＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＡＡＣ３′ ９ ７ ７７．８
Ｃ３２６９ ５′ＴＴＴＣＣＡＣＴＣＧＧＣＴＣＴＴＧ３′ ５′ＣＣＡＧＴＴＴＧＧＣＡＧＴＴＴＣＧ３′ ７ ７ １００．０
Ｃ５５１１ ５′ＧＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＴＣＣＴＡ３′ ５′ＧＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＴＣＣＴＡ３′ ５ ５ １００．０
Ｄ９６５ ５′ＣＴＴＴＧＡＧＡＡＧＴＧＣＣＡＧＡＣＧ３′ ５′ＧＧＧＡＡＴＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＡＡ３′ ９ ８ ８８．９
Ｄ５７５０ ５′ＣＧＣＣＧＡＧＴＣＣＣＡＧＴＡＧＴＧＴＴ３′ ５′ＣＧＡＧＧＧＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＡ３′ ６ ６ １００．０
Ｆ３９７４ ５′ＡＴＧＣＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡ３′ ５′ＣＡＡＣＧＧＡＣＧＡＡＡＣＧＡＧＡＡ３′ １１ ９ ８１．８
Ｆ２３５９ ５′ＧＧＡＴＴＴＣＣＡＧＣＣＣＴＡＣＣＡ３′ ５′ＣＴＴＴＣＣＡＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＣ３′ ９ ８ ８８．９
Ｓ６８ ５′ＡＡＣＣＧＡＡＣＣＡＡＡＣＣＡＡＧＣ３′ ５′ＧＣＡＧＡＧＣＡＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡ３′ ８ ６ ７５．０
Ｔｃ６８２６８ ５′ＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧ３′ ５′ＧＣＡＡＡＣＧＡＡＴＡＡＧＣＡＧＧＧＴＣ３′ ７ ５ ７１．４
Ｔｃ６９６７５ ５′ＡＣＡＣＡＡＣＡＴＡＧＣＧＣＡＴＧＧＡＡ３′ ５′ＣＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＡＧＡＴ３′ ７ ５ ７１．４
Ｔｃ８５８０４ ５′ＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣ３′ ５′ＧＣＴＣＴＧＧＴＣＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＴ３′ ７ ６ ８５．７
Ｔｘｐ８３ ５′ＣＧＣＴＡＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＧ３′ ５′ＣＡＡＡＣＣＧＡＴＡＡＡＣＡＡＧＴＡＴＧ３′ ８ ６ ７５．０
Ｔｘｐ１５８ ５′ＧＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＴＴＧＡＣ３′ ５′ＧＡＧＣＴＴＣＧＣＴＧＡＧＴＡＡＧＧ３′ ６ ６ １００．０
Ｔｘｐ１６０ ５′ＡＧＴＣＧＧＣＴＧＧＴＡＡＡＧＴＧＧ３′ ５′ＧＧＡＴＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＧＧ３′ ７ ５ ７１．４
Ｔｘｐ３５３ ５′ＣＴＣＣＡＡＣＡＴＧＣＴＣＴＧＣＴＧ３′ ５′ＧＧＡＴＣＡＡＣＴＴＡＴＴＧＧＧＧＡＴＧ３′ ６ ５ ８３．３
Ｗｍｃ５０６ ５′ＣＡＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＡＴＧＣＣＡＧＡ３′ ５′ＣＴＴＴＣＡＡＴＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡＣ３′ ９ ７ ７７．８
Ｗｍｃ６１７ ５′ＣＣＡＣＴＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡＡ３′ ５′ＡＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＣＴＧＴ３′ ７ ５ ７１．４
Ｘｇｗｍ１６９ ５′ＧＴＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＡＡＧＴＧＴＧＧＧ３′ ５′ＡＣＣＡＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＧ３′ ９ ７ ７７．９
合计Ｔｏｔａｌ ２２４ １８５ ８２．６
图２ 用犉２ 的１个单株及双亲的犇犖犃对部分犛犛犚引物筛选结果
犉犻犵．２ 犛犛犚狆狉犻犿犲狉狊犮狉犲犲狀犻狀犵狉犲狊狌犾狋狑犻狋犺狅狀犲狆犾犪狀狋犻狀犉２狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀犪狀犱狆犪狉犲狀狋狊
Ｆ２：Ｆ２的１个单株；Ｐ１：蒙古冰草；Ｐ２：航道冰草。Ｆ２：ＯｎｅｐｌａｎｔｏｆｈｙｂｒｉｄＦ２；Ｐ１：犃．犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿；Ｐ２：犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｒｉｗａｙ．
７９第２５卷第６期 草业学报２０１６年
图３ 引物犇９６５（犃）和犉３９７４（犅）对犉２ 分离群体部分单株及其亲本犇犖犃的扩增结果
犉犻犵．３ 犇犖犃犪犿狆犾犻犳犻犲犱狉犲狊狌犾狋狊狅犳狆犪狉狋犻犪犾狆犾犪狀狋狊狅犳犉２狊犲犵狉犲犵犪狋犻狀犵狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀犻狀犺狔犫狉犻犱狑犺犲犪狋犵狉犪狊狊犪狀犱
狋犺犲犻狉狆犪狉犲狀狋狊狌狊犻狀犵狋犺犲狆狉犻犿犲狉犇９６５（犃）犪狀犱犉３９７４（犅）
Ｐ１：蒙古冰草；Ｐ２：航道冰草；１－５５：Ｆ２群体部分单株。Ｍ：ＭａｒｋｅｒＤＬ１０００．Ｐ１：犃．犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿；Ｐ２：犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｒｉｗａｙ；１－５５：Ｆ２ｐａｒｔｉａｌ
ｐｌａｎｔｓ．
表２ 四倍体杂交冰草犛犛犚标记分离及遗传连锁图谱的基本特征
犜犪犫犾犲２ 犜犺犲狊犲犵狉犲犵犪狋犻狅狀狅犳犛犛犚犿犪狉犽犲狉狊犪狀犱狋犺犲犫犪狊犻犮犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犵犲狀犲狋犻犮犿犪狆犻狀狋犲狋狉犪狆犾狅犻犱犺狔犫狉犻犱狑犺犲犪狋犵狉犪狊狊
连锁群
Ｌｉｎｋａｇｅ
ｇｒｏｕｐｓ
连锁群长度
Ｍａｐｌｅｎｇｔｈ
（ｃＭ）
连锁标记数
Ｎｏ．ｏｆｌｉｎｋｅｄ
ｍａｒｋｅｒｓ
偏分离标记数 （犘＜０．０５）
Ｎｏ．ｏｆｂｉａｓｅｄ
ｍａｒｋｅｒｓ
偏分离标记比率
Ｒａｔｉｏｏｆｄｉｓｔｏｒｔｅｄｍａｒｋｅｒｓ
（％）
标记间平均距离
Ａｖｅｒａｇｅｄｉｓｔａｎｃｅ
（ｃＭ）
ＬＧ１ １７４．９ ５ １ ２０．０ ３４．９８
ＬＧ２ １７５．４ １０ ２ ２０．０ １７．５４
ＬＧ３ １８０．８ ５ ０ ０ ３６．１６
ＬＧ４ ２０２．６ ２９ ４ １３．８ ６．９９
ＬＧ５ １９５．３ １８ ２ ７．１ １１．４９
ＬＧ６ １４７．５ ４１ ６ １１．８ ３．６０
ＬＧ７ １５０．５ １２ ２ １６．７ １２．５４
ＬＧ８ １４１．４ ３ ０ ０ ４７．１３
ＬＧ９ １５１．２ ３ ０ ０ ５０．４０
ＬＧ１０ １７８．０ １４ ３ ２１．４ １２．７１
ＬＧ１１ １６１．３ ２３ ２ ８．７ ７．０１
ＬＧ１２ １２３．０ ７ １ １４．３ １７．５７
ＬＧ１３ １７８．４ １０ １ ０．１ １７．８４
ＬＧ１４ １８２．２ ５ ０ ０ ３６．４４
合计Ｔｏｔａｌ ２３４２．５ １８５ ２４ １３．０ １２．６６
８９ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６
图４ 四倍体杂交冰草犛犛犚分子遗传连锁框架图谱
犉犻犵．４ 犛犛犚犵犲狀犲狋犻犮犾犻狀犽犪犵犲犿犪狆狅犳狋犲狋狉犪狆犾狅犻犱犺狔犫狉犻犱狑犺犲犪狋犵狉犪狊狊
３ 讨论
高密度的分子遗传连锁图谱是深入开展植物重要性状ＱＴＬ定位及分子标记辅助育种等研究的基础［２１２２］。
与小麦、玉米、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）等农作物构建的遗传连锁图相比，目前国内外已构建的牧草遗传连锁图谱的
图幅均偏小，且标记间空隙较大，使得遗传图谱在牧草分子标记辅助育种及重要性状ＱＴＬ定位等研究方面较薄
弱。本课题组曾利用蒙古冰草×航道冰草杂种Ｆ２ 分离群体构建了含７个连锁群、１７５个分子标记（ＡＦＬＰ标记
１５２个、ＲＡＰＤ标记２３个）的二倍体杂交冰草分子遗传图谱，其全长为４１６ｃＭ，平均标记间密度为２．４７ｃＭ［１５］；
本试验构建了含１４个连锁群、１８５个ＳＳＲ标记的四倍体杂交冰草分子遗传连锁图谱，其全长为２３４２．５ｃＭ，远超
过二倍体杂交冰草图谱的长度，表明四倍体的基因组明显大于二倍体；但标记间的密度（１２．６６ｃＭ）小于二倍体，
而且在各连锁群上标记的分布密度不均匀，如连锁群ＬＧ６上的标记数较多，密集了４０个ＳＳＲ标记，而连锁群
ＬＧ８和ＬＧ９上ＳＳＲ标记数均只有３个，这说明该图谱是一张ＳＳＲ框架图谱，还有待于进一步扩大ＳＳＲ标记数
量或与其他分子标记如ＡＦＬＰ及ＳＲＡＰ等进行整合，来增加图谱中的分子标记数目、加大图谱密度，目前课题组
正在开展四倍体杂交冰草遗传连锁图谱的加密研究。
９９第２５卷第６期 草业学报２０１６年
遗传图谱精确度的高低很大程度取决于构建群体的大小，理论上作图群体越大，作图精度就越高，但若作图
群体过大，就会使实验工作量和费用相应增加，故选择合适的群体数目很重要［２３２４］。从作图效率看，作图群体的
大小主要决定于３个方面：一是参照随机分离的结果计算出最大图距，二是两个标记间能够测算出重组的最小图
距，三是所选用作图群体的类型。为了能够提高作图精度，在构建植物分子标记连锁图时需考虑作图群体的类
型，一般认为作图所需的群体大小的顺序为Ｆ２＞Ｒｌ＞ＢＣ和ＤＨ［２５］。目前在牧草上遗传图谱构建所用的作图群
体在１００～２００个之间，本试验选用四倍体杂交冰草Ｆ２ 分离群体的３４７个单株进行遗传作图研究，主要考虑多年
生牧草的多倍性，其数量性状分离复杂且表型受环境影响较大，因此控制试验误差显得尤为重要。
４ 结论
试验筛选出条带清晰、重复性和多态性好的ＳＳＲ适宜引物３０对。对四倍体杂交冰草Ｆ２ 群体３４７个单株及
亲本的基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增得到１８５个ＳＳＲ标记。构建了１张四倍体杂交冰草ＳＳＲ分子遗传连锁框架
图谱，其１４个连锁群的长度变幅１２３．０～２０２．６ｃＭ，覆盖基因组总长度２３４２．５ｃＭ，标记间的平均距离１２．６６
ｃＭ。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＹｕｎＪＦ，ＬｉＲＦ，ＭｉＦＧ．Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｈｙｂｒｉｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｒｅｓｔｅｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓ．ＡｃｔａＡｇｒｅｓｔｉａＳｉｎｉｃａ，１９９７，
５（４）：２２１２２７．
［２］ ＷａｎｇＦ．ＳｔｕｄｙｏｎＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｏｐｙｒｏｎＧａｅｒｔｎＧｅｒｍｏｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓ［Ｄ］．Ｌａｎｚｈｏｕ：ＬａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００９．
［３］ ＱｕａｎＷ，ＹｕＺ，ＷａｎｇＹＨ，犲狋犪犾．ＩｓｏｚｙｍｅａｎａｌｙｓｉｓｏｎｌｉｎｅｓｏｆＦ４ｈｙｂｒｉｄｂｅｔｗｅｅｎ犃犵狉狅狆狔狉狅狀犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿ａｎｄ犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿
ｃｖ．Ｆａｉｒｗａｙ．ＡｃｔａＡｇｒｅｓｔｉａＳｉｎｉｃａ，２００６，１４（１）：１４１９．
［４］ ＢａｏＭＬ．ＧｅｎｅｔｉｃＣｈａｒａｃｔｅｒＡｎａｌｙｓｉｓｏｎＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＤｏｕｂｌｉｎｇＰｌａｎｔｓＦ２ｏｆＲｅｃｉｐｒｏｃａｌＨｙｂｒｉｄｓｂｅｔｗｅｅｎ犃．犿狅狀犵狅犾犻犮狌犿ａｎｄ
犃．犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｃｖ．Ｆａｉｒｗａｙ［Ｄ］．Ｈｕｈｈｏｔ：ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１２．
［５］ ＹｕＸＸ，ＪｉａｎｇＺＹ，ＹｕＺ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｎｅｗｖａｒｉｅｔｙｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｈｙｂｒｉｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓ—ＭｅｎｇｚａＮｏ．１．ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉ
ｅｎｃｅ，２０１５，３２（５）：７３８７４４．
［６］ ＣａｉＨ Ｗ，ＩｎｏｕｅＭ，ＹｕｙａｍａＮ，犲狋犪犾．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｍａｐｐｉｎｇｏｆｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｍａｒｋｅｒｓｉｎＺｏｙｓｉａ
ｇｒａｓｓ（犣狅狔狊犻犪ｓｐｐ．）．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００５，１１２（１）：１５８１６６．
［７］ ＷａｎｇＨ Ｍ，ＺｈａｎｇＺＹ，ＣｈｅｎＹＬ．ＳＳＲｍａｒｋｅｒｓａｎｄｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｇｅｎｅｔｉｃｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ，２００３，３９（１）：１１３１１６．
［８］ ＭａＹＨ，ＹｕＸＸ，ＹｕＺ，犲狋犪犾．ＣｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆｎｅｗｓｔｒａｉｎｓｏｆｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｙｈｙｂｒｉｄｗｈｅａｔｇｒａｓｓ．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｉｔｉｃｅａｅＣｒｏｐｓ，２０１４，３４（２）：１８７１９３．
［９］ ＨａｙｗａｒｄＭＤ，ＦｏｒｓｔｅｒＪＷ，ＪｏｎｅｓＪＧ，犲狋犪犾．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆ犔狅犾犻狌犿．Ｉ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｎｋａｇｅｇｒｏｕｐｓａｎｄｔｈｅｅｓｔａｂ
ｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｇｅｎｅｔｉｃｍａｐ．ＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，１９９８，１１７（５）：４５１４５５．
［１０］ ＪｏｎｅｓＥＳ，ＮａｔａｌｉａＬ，ＭａｈｏｎｅｙＭＤ，犲狋犪犾．Ａｎｅｎｈａｎｃｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｂａｓｅｄｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｏｆｐｅｒｅｎｎｉａｌｒｙｅｇｒａｓｓ（犔狅犾犻狌犿
狆犲狉犲狀狀犲）ｒｅｖｅａｌｓｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗｉｔｈｏｔｈｅｒ犘狅犪犮犲犪犲犵犲狀狅犿犲狊．Ｇｅｎｏｍｅ，２００２，４５：２８２２９５．
［１１］ ＢｒｕｍｍｅｒＥＣ，ＢｏｕｔｏｎＪＨ，ＫｏｃｈｅｒｔＧ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎＲＦＬＰｍａｐｉｎｄｉｐｌｏｉｄａｌｆａｌｆａ．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，
１９９３，８６（２）：３２９３３２．
［１２］ ＡｌｍＶ，ＦａｎｇＣ，ＢｕｓｓｏＣＳ，犲狋犪犾．Ａｌｉｎｋａｇｅｍａｐｏｆｍｅａｄｏｗｆｅｓｃｕｅ（犉犲狊狋狌犮犪狆狉犪狋犲狀狊犻狊Ｈｕｄｓ．）ａｎｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｍａｐｐｉｎｇ
ｗｉｔｈｏｔｈｅｒＰｏａｃｅａｅｓｐｅｃｉｅｓ．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０８（１）：２５４０．
［１３］ ＳｔｕｄｅｒＢ，ＢｏｌｅｒＢ，Ｂａｕｅｒ，犲狋犪犾．ＣｏｎｓｉｓｔｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＱＴＬｓｆｏｒｃｒｏｗｎｒｕｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＩｔａｌｉａｎｒｙｅｇｒａｓｓ（犔狅犾犻狌犿犿狌犾狋犻
犳犾狅狉狌犿Ｌａｍ．）ａｃｒｏｓｓｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓａｎｄｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，１１５（１）：９１７．
［１４］ ＬｕＸＰ．ＧｅｎｅｔｉｃＭａｐｐｉｎｇａｎｄＧｅｎｅＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＭａｉｎＡｇｒｏｎｏｍｉｃＣｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆ犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉×犛．狊狌犱犪狀犵狉犪狊狊［Ｄ］．
Ｈｕｈｈｏｔ：ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００５．
［１５］ ＬｉＸＬ．ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＧｅｎｅｔｉｃＣｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＳｅｖｅｒａｌＩｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃＨｙｂｒｉｄｓＦ１ｉｎ犈犾狔犿狌狊ａｎｄＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃ
ＭａｐｏｆＷｅａｔｇｒａｓｓ［Ｄ］．Ｈｕｈｈｏｔ：ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００８．
［１６］ ＬｉＣＱ，ＹｕＸＸ，ＪｕＴＨ，犲狋犪犾．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿ｈｙｂｒｉｄｓｂｙＳＳＲｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ．ＡｃｔａＢｏｔａｎｉｃａＢｏ
ｒｅａｌｉｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａＳｉｎｉｃａ，２０１２，３２（７）：１３５１１３６０．
［１７］ ＺｈａｎｇＺＱ，ＹｕＸＸ，ＪｕＴＨ，犲狋犪犾．ＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎｄＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆ３ｐｏｔａｔｏｈｙｂｒｉｄｌｉｎｅｓ．ＡｃｔａＢｏｔａｎｉｃａＢｏｒｅａｌｉｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａ
Ｓｉｎｉｃａ，２０１４，３４（７）：１３１８１３２４．
［１８］ ＹｕＺ，ＸｉｅＲ，ＹｕＸＸ，犲狋犪犾．ＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆＳｏｒｇｈｕｍＳｕｄａｎｇｒａｓｓｎｅｗｓｔｒａｉｎｓｗｉｔｈｌｏｗｈｙｄｒｏｃｙａｎｉｃａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔ．ＡｃｔａＰｒａｔ
００１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６
ａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１４，２３（１）：２２３２２８．
［１９］ ＮｅｉＭ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｓｕｂｄｉｖｉｄｅｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵＳＡ，
１９７３，７０（１２）：３３２１３３２３．
［２０］ ＳｏｎｇＸＬ，ＳｕｎＸＺ，ＺｈａｎｇＴＺ．Ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇｉｎｐｌａｎｔｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，１４（２）：２８６２９２．
［２１］ ＺｈａｎｇＹＨ，ＹｕＨＦ，ＨｏｕＪＨ，犲狋犪犾．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｏｆｓｕｎｆｌｏｗｅｒｕｓｉｎｇａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｉｎｂｒｅｄ
ｌｉｎｅｓ（ＲＩＬｓ）．Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ，２０１４，３６（１０）：１０３６１０４２．
［２２］ ＨｕＬＬ，ＹｅＹＱ，ＬｖＴＴ，犲狋犪犾．ＱＴＬｍａｐｐｉｎｇａｎｄｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｇｒａｉｎｗｅｉｇｈｔｉｎｗｈｅａｔ（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）ｕｎｄｅｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｗａｔｅｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（８）：１１８１２９．
［２３］ ＨａｃｋｅｔｔＣＡ，ＢｒｏａｄｆｏｏｔＬＢ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇｅｒｒｏｒｓ，ｍｉｓｓｉｎｇｖａｌｕｅｓａｎｄｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｄａ
ｔａｏｎｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｌｉｎｋａｇｅｍａｐｓ．Ｈｅｒｅｄｉｔｙ，１９９２，６９：３１５３２４．
［２４］ ＺｈａｎｇＬＹ，ＷａｎｇＳＱ，ＬｉＨＨ，犲狋犪犾．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉｓｓｉｎｇｍａｒｋｅｒａｎｄｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎｏｎＱＴＬｍａｐｐｉｎｇｉｎＦ２ｐｏｐｕｌａ
ｔｉｏｎｓ．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２０１０，１２１（６）：１０７１１０８２．
［２５］ ＹｕＸＸ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａＨｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙＧｅｎｅｔｉｃＬｉｎｋａｇｅＭａｐａｎｄＭａｐｐｉｎｇｏｆＱＴＬｓｆｏｒＤｒｙｍａｔｔｅｒＣｏｎｔｅｎｔｉｎＳｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ，
犐狆狅犿狅犲犪犫犪狋犪狋犪狊（Ｌ．）Ｌａｍ［Ｄ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１３．
参考文献：
［１］ 云锦凤，李瑞芬，米福贵．冰草的远缘杂交及杂种分析．草地学报，１９９７，５（４）：２２１２２７．
［２］ 王方．冰草属植物种质资源遗传多样性研究［Ｄ］．兰州：兰州大学，２００９．
［３］ 权威，于卓，王月华，等．蒙古冰草×航道冰草杂种Ｆ４ 代株系同工酶分析．草地学报，２００６，１４（１）：１４１９．
［４］ 包美莲．蒙古冰草与航道冰草正反交杂种染色体加倍植株Ｆ２ 遗传性状分析［Ｄ］．呼和浩特：内蒙古农业大学，２０１２．
［５］ 于肖夏，姜志艳，于卓，等．四倍体杂交冰草新品种—蒙杂冰草１号的选育．草业科学，２０１５，３２（５）：７３８７４４．
［７］ 王红梅，张正英，陈玉梁．ＳＳＲ标记技术及其在植物遗传学中的应用．西北师范大学学报，２００３，３９（１）：１１３１１６．
［８］ 马艳红，于肖夏，于卓，等．四倍体杂交冰草新品系的细胞学鉴定及ＳＳＲ分析．麦类作物学报，２０１４，３４（２）：１８７１９３．
［１４］ 逯晓萍．高丹草遗传图谱构建及重要农艺性状的基因定位研究［Ｄ］．呼和浩特：内蒙古农业大学，２００５．
［１５］ 李小雷．几种披碱草种间杂种Ｆ１ 遗传特性及冰草分子图谱构建研究［Ｄ］．呼和浩特：内蒙古农业大学，２００８．
［１６］ 李长青，于肖夏，鞠天华，等．马铃薯杂种Ｆ１ 的ＳＳＲ鉴定．西北植物学报，２０１２，３２（７）：１３５１１３６０．
［１７］ 张自强，于肖夏，鞠天华，等．３个马铃薯杂种优良株系的核型及ＳＳＲ分析．西北植物学报，２０１４，３４（７）：１３１８１３２４．
［１８］ 于卓，谢锐，于肖夏，等．低氢氰酸含量高丹草新品系及其亲本的ＳＳＲ分析．草业学报，２０１４，２３（１）：２２３２２８．
［２０］ 宋宪亮，孙学振，张天真．偏分离及对植物遗传作图的影响．农业生物技术学报，２００６，１４（２）：２８６２９２．
［２１］ 张永虎，于海峰，侯建华，等．利用向日葵重组自交系构建遗传图谱．遗传，２０１４，３６（１０）：１０３６１０４２．
［２２］ 胡亮亮，叶亚琼，吕婷婷，等．不同水分环境条件下小麦粒重ＱＴＬ定位及遗传分析．草业学报，２０１５，２４（８）：１１８１２９．
［２５］ 于肖夏．甘薯高密度分子连锁图谱的构建和干物质含量的ＱＴＬ定位［Ｄ］．北京：中国农业大学，２０１３．
１０１第２５卷第６期 草业学报２０１６年