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Study on Seedling Growth Respond of Mytilaria laosensis Inoculated with Different ECM and VAM Fungi

不同内外生菌根菌接种对米老排苗期的生长效应



全 文 :林业科学研究 2015,28(4):577 581
ForestResearch
  文章编号:10011498(2015)04057705
不同内外生菌根菌接种对米老排苗期的生长效应
闫彩霞,姜清彬,杨锦昌,尹光天,仲崇禄,陈 羽
(中国林业科学研究院热带林业研究所,广东 广州 510520)
收稿日期:20150119
项目基金:林业公益性行业科研专项(201204304);广东省林业科技创新专项(2011KJCX022、2013KJCX014-08)
作者简介:闫彩霞(1989—),女,河南濮阳人,在读硕士,研究方向为林木苗木培育.
 通讯作者:海南文昌人,副研究员,研究方向为林木菌根.
关键词:米老排;内生菌根菌;外生菌根菌;苗木生长
中图分类号:S79299 文献标识码:A
StudyonSeedlingGrowthRespondofMytilarialaosensis
InoculatedwithDiferentECM andVAM Fungi
YANCaixia,JIANGQingbin,YANGJinchang,YINGuangtian,ZHONGChonglu,CHENYu
(ResearchInstituteofTropicalForestry,ChineseAcademyofForestry,Guangzhou 510520,Guangdong,China)
Abstract:9mycorhizalfungi,including4ectomycorhizalfungi(ECMF)and5arbuscularmycorhizalfungi
(AMF),wereusedtoexploretheirefectonseedlinggrowthofMytilarialaosensis.ThestudyshowsthatM.laosen
sisisoneofthespecieswithbothVAMandECM.MycorhizalinfectionrateofalECMinoculationmethodsreached
level3,andthatofAMFinfectionratewas88%-93%,ofwhichAM91becamethehighest.Indiferentperiods,
diferentinoculationtreatmentexpresseddiferentefectsonseedlinggrowth.Attheendoftheexperiment,the
height,grounddiameter,undergrounddrymassanduppergrounddrymassofseedlinginoculatedwithPX0801and
9006respectivelyincreasedby71%,45%,128%,184%,and65%,54%,150%,208%,whichexhibitedthe
bestoveralefect.CoinoculatedseedlingswithAM90036,AM3008andAM91hadadvantagesoveruninoculated
onesinalthetestedgrowthindicators,whichsuggesttosignificantlypromotethegrowthofM.laosensis.Theresults
obtainedprovidereferenceformycorhizalfungiapplicationonM.laosensis.
Keywords:Mytilarialaosensis;VAM;ECM;seedlinggrowth
米老排(MytilarialaosensisLecomte)别名壳菜
果、三角枫,属金缕梅科(Hamamelidaceae)常绿阔叶
乔木,原生分布于我国云南和两广,同时越南和老挝
亦见[1]。作为重要的饲料资源和油脂资源,米老排
也是防火林带及长期的火烧山土壤造林的先锋树
种,其木材可制作家具、胶合板、客车车箱、纸浆
等[2-3],是我国的优良速生用材树种,具有极高的
生态和经济价值。近年来,作为优良的乡土树种,米
老排在生产上不断得到推广应用[4]。
菌根是自然界中普遍的植物共生现象,它是植
物根系与菌根菌形成的一种联合体[5]。根据菌根的
形态结构和解剖特征,菌根分为外生菌根、内生菌
根、内外生菌根及其它菌根———混合菌根、假菌根和
外围菌根等类型[6]。在菌根菌的应用中,菌根菌接
种已成为改善植物营养、促进生长、提高产量的一种
有效措施。植物学家、微生物学家和林业工作者已
对菌根资源、与菌根菌共生的植物有机体及两者间
的关系进行了大量研究[7]。Takeshi[8]研究了7个外
生菌种对黑松(PinusthunbergiParl.)幼苗生长和养
分效应的影响。Saly等[9]阐述了丛枝菌根真菌对
环境胁迫下植物表现的重要意义。陈羽等[10]研究
了接种3个丛枝菌根(Arbuscularmycorhizae,AM)
林 业 科 学 研 究 第28卷
菌株对5个种源麻楝(ChukrasiatabularisA.Juss.)
幼苗生长的影响;陈展等[11]报道,接种彩色豆马勃
对酸雨胁迫下马尾松(PinusmasonianaLanb.)生长
的保护作用,但对米老排菌根菌类型及菌根菌接种
对米老排苗期生长影响的研究鲜有报道。为解决苗
木培育和造林中存在的米老排苗期生长偏慢等问
题,本文对内生菌根菌和外生菌根菌分别接种,探讨
了米老排根系是否能被菌根菌侵染、形成的菌根类
型及菌根菌的侵染对米老排生长的影响,旨在为米
老排菌根菌应用等基础工作提供参考。
1 材料及方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌种 供试菌种为 4种外生菌根菌
(ECMF)和5种内生菌根菌(AMF),具体菌种信息
见表1。ECMF菌种在实验室中扩大培养后,经匀浆
器粉碎,制成菌液使用;利用三叶草(Trifliumrepens
L.)使AMF菌种在消毒混合介质(蛭石∶泥炭∶河沙
=1∶1.5∶2)中生物繁殖4个月,之后去其茎叶,将根
系剪碎与育苗基质混合,晾干后备用。
表1 供试菌种信息
菌根类型 菌株号 菌种 来源
ECMF PX0829 彩色豆马勃 (Pisolithustinctorius)(Pers.)Coker&Couch 广西省凭祥市热林中心30年生红椎林下
PX0801 多根硬皮马勃 (SclerodermPantherina)(Dc.:Fr.) 广西省凭祥市热林中心6年生红椎林下
9006 粗柄白蘑 (Tricholomacrasum(Berk.)Sacc.(1887)) 1999年由BernieDel引自泰国
YN0807 正红菇 (RusulagriseocarnosaX.H.Wang,ZhuL.Yang&Knudsen) 广东省郁南县桂圩镇麦村黎朔与马尾松混交次生林下
AMF AM90036苏格兰球囊霉 (Glomuscaledonium(Nicol.&Gerd.)rappe&Cerde)引自中国科学院南京土壤研究所
AM9004地表球囊霉 (Glomusepigaeam(Karsten)Berch) 引自中国科学院南京土壤研究所
AM90068苏格兰球囊霉 (Glomuscaledonium) 引自中国科学院南京土壤研究所
AM3008木薯球囊霉 (GlomusmanihotHowderetal) 引自中国科学院南京土壤研究所
AM91 摩西球囊霉 (Glomusmoseac(Nicol.&Gerd.)Gerdemann&Tewari)引自北京市农科院土肥所
1.1.2 供试苗与培养基质 供试树种为米老排,
ECMF供试种子采自广西省靖西市同德镇弄凌屯停
岭天然林(106°36′19.4″E,23°03′46.4″N),野外编号
为JXMLP015,上坡,西北坡向,坡度 10°;林地海拔
863m,母岩为花岗岩,红壤,土层厚度40cm,土壤质
地为壤土。林中主要植被为米老排、瓜馥木(Fisis
tigmashantzeenseTsiangetP.T.Li)、杉木(Cunning
hamiaLanceolata(Lamb.)Hook.)、枫香(Liquidambar
formosana)、鸭脚木(Schefleraoctophyla(Lour.)
Harms)、乌 毛 蕨 (Blechnum orientaleL.)、蕨 类
(Pteridium)等,郁闭度0.8。AMF供试种子于2011
年采自广西凭祥。
先用70%的工业酒精对米老排种子进行表面
消毒4 5min,然后将其倒入1‰的升汞溶液中搅
拌10min,再用无菌水冲洗4 5次后播种。播种
基质为沙∶泥灰∶蛭石 =4∶3∶2(体积比),经高压锅
高温高压(0.11Mpa,121℃)灭菌1h后使用。种子
播种50d后,选取植株健壮、长势均匀一致的幼苗
进行移植。育苗基质为黄心土∶沙∶泥灰∶蛭石=2∶2
∶1.5∶1(体积比),经高压锅高温高压(0.11Mpa,
121℃)灭菌1h后使用。
1.2 试验方法
1.2.1 试验设计 试验采用完全随机设计,共9种
供试菌种,对照为不接种内外生菌根菌,共计11个
处理,每处理10株,共计10×11=110株。试验在
中国林业科学研究院热林所苗圃温室内进行。
1.2.2 接种方法及管理 ECMF培养及接种方法:
将ECMF菌转管于800mL三角瓶PDA液体培养基
中,放置摇床振荡培养,PX0829、PX0801、9006菌株
培养15d,YN0807菌株培养5 7d,菌丝量增值位
数均达到50倍以上时,再利用培养好的菌液经匀浆
器粉碎配制成菌剂供接种用,菌液的烘干净质量为
3mg·mL-1。待试验幼苗移植成活后(约10 15
d)进行接种。在试验幼苗基部的基质上打一小孔
(深度为营养杯的1/2,孔径0.6cm),注入2mL的
ECMF菌剂,覆盖孔口。
AMF培养及接种方法:AMF菌种的培养条件见
文献[12]。AMF菌种在幼苗移植同时进行接种,在
育苗杯中装入2/3的灭菌育苗基质后,加入5gAMF
菌剂(对照加入相同质量和配比的灭菌基质),再用
灭菌育苗基质覆盖,淋水,移苗,再浇定根水。
试验均采用上下直径高分别为9cm×7cm×9
cm的育苗杯,容量350mL;移苗后按正常苗木管理
方法施肥及淋水。用3‰的复合肥水溶液做基肥,
每盆复合肥用量为0.63g(0.350L×60%含水量 ×
3g)搅拌育苗介质,装杯。追肥:接种ECMF1周后,
进行第1次追肥(3‰的复合肥水溶液),之后每2周
施1次3‰的复合肥水溶液,每盆追肥用量为0.63g。
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第4期 闫彩霞等:不同内外生菌根菌接种对米老排苗期的生长效应
1.2.3 指标观测 在幼苗接种ECMF后第60、120、
270天测定苗高(分别用 H60、H120、H270表示)、叶片
数(分别用LN60、LN120、LN270表示),并在270d时加
测植株地径(D)、地上干质量(UDM)、地下干质量
(DDM)和菌根侵染强度。
菌根侵染分级标准[13]:
0级———根系无侵染;
1级———侵染根段在10%以下;
2级———侵染根段占11% 30%;
3级———侵染根段占31% 50%;
4级———侵染根段占50%以上。
在接种AMF后每30d测定植株高度(分别用
H30、H60、H90、H120、H150表示),5个月后加测植株地径
(D)、根长(RT)、叶片数(LN)、地上干质量(UDM)
和地下干质量(DDM)。采用 Philips和 Hayman染
色法[14],在显微镜下观察根段,按下列公式统计菌
根侵染率[12]。
菌根侵染率=(菌根侵染的根段数/检查的菌根
根段总数)×100%
1.3 数据分析
采用Excel2007软件对苗高、地茎、根长、叶片
数、地上干质量、地下干质量和总干质量进行统计分
析并绘制图表,用软件 SAS8.1进行方差分析和
Ducan多重比较。
2 结果与分析
2.1 米老排幼苗菌根合成情况
2.1.1 外生菌根的合成 菌根侵染率是衡量和应
用菌根效果好坏的重要指标之一[12]。接种270d时
对米老排幼苗根系外生菌根的合成情况进行调查,
结果表明:4种 ECMF菌种都能与米老排形成共生
菌根(图1),菌根侵染率均达到3级以上,与对照(0
级)形成极显著差异,而菌种间侵染率差异并不明
显。由此看出,4种供试 ECMF均能与米老排根系
形成良好的共生关系。
2.1.2 内生菌根的合成 实验结束时,即接种150
d时,5种AMF菌种都在米老排幼苗根系上形成菌
根,且不同菌株处理幼苗间菌根侵染率(88%
93%)不同,MA91菌株的侵染率最高,MA90036菌
株的侵染率最低。各 AMF菌种处理间幼苗的菌根
侵染率的差异不显著,但均与对照(27%)的差异显
著(图2)。
图1 ECMF菌的菌根侵染情况 图2 AMF菌的菌根侵染情况
2.2 接种菌根菌对不同时期米老排高生长的影响
2.2.1 接种ECMF对米老排高生长的影响 方差分
析和Duncan多重比较结果(表2)显示:接种 ECMF
的米老排幼苗初期高生长效果不显著,接种60d时,
只有接种9006菌种的米老排株高比对照的高,但与
对照的差异不显著;接种120d时,除 YN0807菌种
外,其他菌种均对米老排的高生长有促进作用;至接
种ECMF270d时,各接种幼苗株高分别比对照增加
55%(PX0829),71%(PX0801),65%(9006),43%
(YN0807),说明4种 ECMF菌种均能促进米老排的
高生长,同时菌种间对米老排高生长的影响不显著。
2.2.2 接种AMF对米老排高生长的影响 米老排
幼苗接种AMF30d时,AM90068和AM91菌种株高
表2 接种ECMF米老排的苗期生长
菌种 H60/cm H120/cm H270/cm 侵染等级
CK 7.43±0.47a13.56±1.41ab 30.92±2.44b 0
PX0829 7.36±0.38a15.89±1.29ab 47.86±1.90a 3
PX0801 7.04±0.52a15.20±1.82ab 52.75±3.31a 4
9006 7.79±0.72a 17.33±1.56a 51.00±3.92a 3
YN0807 6.93±0.44a 12.60±1.04b 44.29±3.24a 4
  注:表中数据为平均值 ±标准误,同列不同字母表示差异显著
(P<0.05)。
均达到14.4cm以上,为对照幼苗株高的118%以
上。5次测量结果表明:接菌幼苗分别比对照增加
41%(AM3008) 73% (AM91)(30d),37%
(AM90036) 56% (AM3008)(60 d),38%
(AM90036) 59% (AM3008)(90 d),31%
(AM9004) 56%(AM91)(120d),21%(AM9004)
975
林 业 科 学 研 究 第28卷
47%(AM3008)(150d),说明各个菌种对米老排
高生长均有促进作用,且不同时期对其促进程度不
同。对接种AMF菌米老排的高生长进行方差分析,
结果(表3)表明:5次测量各处理间的差异均极显著
(P<0.01)。Duncan多重比较显示:接种4个月内,
不同菌种处理幼苗的株高均与对照的差异显著,而
菌种间差异不显著;至 150d时,接种 AM3008和
AM91菌种的苗高最大,与对照的差异显著,说明这
2个菌种能显著促进其幼苗高生长。
表3 米老排接种AMF的高生长
菌种 H30/cm H60/cm H90/cm H120/cm H150/cm
CK 8.43±0.57b 16.54±0.80b 20.29±1.16b 25.86±1.95c 32.00±2.09c
AM90036 12.20±1.10a 22.70±1.80a 27.90±1.90a 34.80±1.80b 41.00±2.30abc
AM9004 13.38±0.57a 25.31±1.12a 29.56±1.43a 33.75±1.48b 38.86±2.05c
AM90068 14.43±1.10a 25.00±1.62a 29.86±1.59a 34.36±1.50b 39.71±1.30bc
AM3008 11.88±1.26a 25.75±1.68a 32.31±1.65a 40.00±1.89a 47.13±2.54a
AM91 14.60±1.54a 24.70±2.07a 31.35±1.78a 40.25±1.69a 46.10±1.90ab
  注:表中同列不同字母表示差异极显著(P<0.01)。
2.3 菌根菌接种对米老排幼苗及其他生长指标的
影响
2.3.1 接种 ECMF对米老排其他生长指标的影响
 从表 4可看出:接菌 60d时,接种 PX0829和
YN0807菌株的米老排叶片数(LN60)高于对照,
PX0801和9006的低于对照;至120d时,接菌米老
排的叶片数(LN120)均高于对照。接菌60、120d时,
各菌种间幼苗的叶片数的差异不显著。接种 9006
菌株270d时,米老排的叶片数(LN270)(18.0片)与
对照(12片)的差异显著。试验结束时,各接菌处理
幼苗的地径(D)、地上干质量(UDM)、地下干质量
(DDM)分别是对照的 125%(PX0829) 141%
(9006)、213%(PX0829) 308%(9006)、209%
(PX0829) 288%(YN0807),前二项均与对照差异
显著。4种ECMF菌种从不同程度上促进了米老排
的地径生长和生物量积累,其中,菌种9006对促进
地径生长、地上干质量积累效果最佳,菌种9006和
YN0807对增加地下生物量积累效果最佳。
表4 接种ECMF米老排苗期的生长指标
菌种 LN60/片 LN120/片 LN270/片 D/cm UDM/(g·株 -1) DDM/(g·株 -1)
CK 5.57±0.69ab 6.14±0.80a 11.67±0.76b 0.45±0.02b 3.86±0.52b 0.93±0.19b
PX0829 6.22±0.40a 8.22±1.54a 16.00±2.36ab 0.56±0.03a 8.24±0.65a 1.94±0.58ab
PX0801 4.50±0.31a 6.50±0.43a 16.88±1.32ab 0.60±0.01a 10.96±1.09a 2.13±0.29ab
9006 5.40±0.40ab 6.33±0.78a 18.00±2.19a 0.63±0.05a 11.88±2.50a 2.33±0.52a
YN0807 5.90±0.50ab 6.30±0.67a 17.14±1.98ab 0.59±0.04a 9.73±1.03a 2.68±0.51a
  注:表中数据为平均值±标准误,同列不同字母表示差异显著(P<0.05)。
2.3.2 接种AMF对米老排其他生长指标的影响 
从方差分析和Duncan多重比较结果(表5)可看出:
5种菌种在幼苗的地径(D)生长、根长(RT)、叶片数
(LN)、地上干质量(UDM)、地下干质量(DDM)积累
上效果均显著优于对照,分别是对照的 120%
(AM90068) 130% (AM9004、AM3008),103%
(AM9004) 130%(AM90036),120%(AM91)
134% (AM3008),202% (AM3008) 267%
(AM90036、AM9004),204%(AM90036) 225%
(AM91),各菌种间的差异不显著。其中,菌种
AM90036对促进地径、根长生长和地下干质量积累
有显著作用,AM9004对促进地径生长和地下干物
质量积累作用显著,AM3008对提高地径生长和增
加叶片数效果最佳,AM91能显著增加米老排根长
及地上干物质积累。
3 结论与讨论
(1)研究发现,参试的9种内外生菌根菌种均能
侵染米老排幼苗,与米老排形成共生关系,表明米老
排属于具有混合菌根(ECMF和 AMF)的树种。4种
供试ECMF侵染率均达到3级以上,均能与米老排根
系形成良好的共生关系。5种AMF菌种侵染率(88%
93%)不同,其中,AM91菌株的侵染率最高。
(2)不同时期,菌种对米老排高生长的影响不
同。4种ECMF接种初期效果不显著,这可能是因
为接种初期尚未充分形成菌根,随着时间的延长,促
生效果随菌根数量的增加愈见明显,但尚需试验验
证。至试验结束时,4种菌种均能显著促进米老排
的高生长,其中,PX0829有显著促生效果,与 Lu
等[15]的报道不一致,可能是不同树种对同一菌种效
085
第4期 闫彩霞等:不同内外生菌根菌接种对米老排苗期的生长效应
表5 接种AMF米老排的苗期生长指标
菌种 D/cm RT/cm LN/片 侵染率/% UDM/(g·株 -1) DDM/(g·株 -1)
CK 0.40±0.02b 12.57±1.00b 9.43±0.61b 27.09±0.13b 2.86±0.35b 0.55±0.09b
AM90036 0.50±0.02a 16.30±1.16a 12.20±0.30a 87.78±0.06a 5.84±0.30a 1.47±0.14a
AM9004 0.51±0.02a 13.00±0.80a 11.88±0.40a 92.50±0.06a 5.90±0.33a 1.47±0.11a
AM90068 0.48±0.01a 14.00±0.90a 11.86±0.51a 81.41±0.13a 5.72±0.30a 1.38±0.13a
AM3008 0.51±0.02a 14.63±0.71a 12.63±0.75a 88.83±0.07a 5.99±0.40a 1.11±0.14a
AM91 0.50±0.01a 14.60±0.40a 11.30±0.75a 93.00±0.04a 6.44±0.54a 1.28±0.16a
  注:表中数据为平均值±标准误,同列不同字母表示差异显著(P<0.05)。
应不一。接种PX0801、9006菌种的米老排苗高分别
比对照的增加 71%、65%。接种 4个月内,不同
AMF处理幼苗均与对照差异显著,而菌种间差异不
显著。试验结束时,接种 AM3008和 AM91菌种的
株高分别是对照的147%和144%,显著促进株高生
长,与在金诺橘(CitrusreticulataBlanco)[16]上的反
应吻合;AM9004和AM90068的促生效果不显著。
(3)接种不同菌种对米老排生长的影响不同。
本试验中,4种 ECMF菌种从不同程度上促进了地
径生长和生物量的积累,其中,菌种9006对促进地
径生长、地上干质量的积累效果最佳,菌种9006和
YN0807对增加地下生物量积累效果最佳;整体上,
PX0801和9006对米老排的促生效果最好。对于内
生菌根菌,AM9004对促进地径生长和地下干质量
的积累作用显著,AM3008能显著提高株高、地径生
长和增加叶片数;综合来讲,内生菌种 AM90036、
AM3008和AM91接种效果最佳,接菌米老排幼苗的
各项生长指标均高于对照,且与对照的差异显著,表
明对促进米老排生长有显著效果,这与弓明钦等[16]
的研究结果一致。这再次验证了不是所有菌根菌接
种都能与宿主植物形成较佳的共生体,应在推广应
用前依据“适树适菌”的原则对菌种进行筛选[10]。
(4)混合菌根不同接种处理产生了不同的接种
效果[17]。研究表明,接种菌根菌对促进米老排生
长、提高产量具有重要的意义。本试验只探讨了9
种内外生菌根菌对米老排生长的影响,这些菌种对
米老排生理生化、植株养分变化的影响有待研究,还
有更多的菌根菌资源有待开发利用。未来还可以从
生理学、解剖学、生态学等微观宏观多角度探索菌根
机理,为推动菌根菌剂在米老排培育上提供参考。
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