全 文 ：书钝裂银莲花不同居群遗传多样性的犐犛犛犚分析
孙涛，刘左军，刘凤梅，伍国强，王永刚，李冰
（兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 兰州７３００５０）
摘要：本研究采用ＩＳＳＲ分子标记技术分析了甘肃省４个地区（合作、碌曲、阿万仓和阿孜）钝裂银莲花的１１个居群
的遗传多样性水平和遗传结构。结果表明，１３个引物共扩增出７０１条带，其中３９２条具有多态性，多态位点百分率
为５５．９２％。在物种水平上，Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数（Ｉ）为０．３７２，Ｎｅｉ基因多样性指数（Ｈ）为０．２５０；Ｎｅｉ的基因分化
系数Ｇｓｔ和ＡＭＯＶＡ分析表明钝裂银莲花居群遗传分化大部分存在于居群间。在居群水平上，Ｉ为０．１８３，Ｈ为
０．１１４，可见钝裂银莲花居群具有较高的遗传多样性。依据Ｎｅｉ的遗传距离对不同居群进行 ＵＰＧＭＡ聚类，聚类结
果为合作居群为一类，碌曲和阿万仓居群为一类，阿孜为一类。居群遗传多样性与环境因子间的相关性分析表明，
遗传多样性水平与海拔、含水量、有效磷和经纬度之间没有相关性，而与降水量之间显著负相关。
关键词：钝裂银莲花；ＩＳＳＲ；遗传多样性；遗传距离
中图分类号：Ｑ９４３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１３）０３０２５９０７
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０３３４　　
　　ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ）为简单重复序列扩增，是近年来发展起来的一类新型的分子标记技
术［１］。ＩＳＳＲ标记技术具有无需知道任何靶标序列的微卫星背景信息，操作技术简单，只需要微量的ＤＮＡ模板，
不需要预知基因组序列，检测多态性能力强等优点。在植物分类与进化、遗传多样性研究以及遗传图谱构建和基
因定位方面具有广阔的应用前景［２］。
钝裂银莲花（犃狀犲犿狅狀犲狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪）为毛茛科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）毛茛亚科银莲花属（犃狀犲犿狅狀犲）中的一种多年生
草本植物，单花顶生，一般产生１～３个独立花茎，花小（１～２ｃｍ），花色有黄色、浅黄色和白色３种［３］。其为自交
亲和性植物，花结构泛化，一般由蜜蜂和蝇类传粉，偶见蚂蚁访花［４］。钝裂银莲花组约有１１种，分布于喜马拉雅
山区和青藏高原东缘地区，我国有９种，多数分布于西南部。主要生长在海拔２９００～４０００ｍ高山草地或铁杉
林下。分布区内年平均降水量５３４ｍｍ，年平均温度为１．６℃，主体土壤类型为亚高山草甸土，从植物区系组成和
水热特征来看，属于典型的高寒草甸［５］。目前对钝裂银莲花的研究主要集中在药用价值、性分配和繁殖分配等方
面。然而，对于其遗传多样性和遗传结构方面的研究还未见报道。此外，由于近年来高寒草甸的不断退化，生态
建设和草地恢复工作的不断进行，利用分子标记技术进行钝裂银莲花遗传多样性水平和遗传分化程度等研究有
着重要意义。鉴于此，本研究以甘肃不同地域的钝裂银莲花为材料，采用ＩＳＳＲ分子标记技术，从分子水平上探
讨钝裂银莲花种质资源间的亲缘关系及遗传多样性，进而为其种质资源的科学管理和治理提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　供试材料
供试材料为从甘肃省甘南藏族自治州收集４个钝裂银莲花居群的１１种材料（表１），每种材料取２０个单株
共２２０株，采后立即放入保鲜袋中，用硅胶干燥保存。采样时间为２０１０年７月。各居群的基本情况见表１。
１．２　研究方法
１．２．１　钝裂银莲花基因组ＤＮＡ的提取　取干燥的钝裂银莲花叶片约１．０ｇ，采用改良后的ＣＴＡＢ法［６］提取钝
裂银莲花的基因组ＤＮＡ。提取物用１００μＬ去离子水溶解，紫外分光光度计测定ＤＮＡ的浓度和纯度，并用
１．０％的琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，－２０℃保存备用［７］。
第２２卷　第３期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
２５９－２６５
２０１３年６月
收稿日期：２０１２０５２２；改回日期：２０１２１２０３
基金项目：国家自然科学基金项目（３０９６００６６）资助。
作者简介：孙涛（１９８６），女，甘肃兰州人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｏｙａｏｄｉｄａｉ＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｚｕｏｊｕｎｌ＠ｌｕｔ．ｃｎ
表１　钝裂银莲花取样地的基本情况
犜犪犫犾犲１　犜犺犲犵犲狀犲狉犪犾狊犻狋狌犪狋犻狅狀狅犳犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪狊犪犿狆犾犻狀犵狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊
项目Ｉｔｅｍ 合作 Ｈｅｚｕｏ（ＨＺ） 碌曲Ｌｕｑｕ（ＬＱ） 阿万仓Ａｗａｎｃａｎｇ（ＡＷ） 阿孜Ａｚｉ（ＡＺ）
经度Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ（°） １０２．５３ １０２．２６ １０１．５３ １０１．５１
纬度Ｌａｔｉｔｕｄｅ（°） ３４．５７ ３４．３３ ３３．５１ ３３．４０
年均温Ａｎｎｕａｌｍｅａｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃） ２．０ ２．３ １．２ １．２
降水量Ａｎｎｕａｌｍｅａｎｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ（ｍｍ） ５５０ ５４３ ５０５ ５３７
海拔Ａｌｔｉｔｕｄｅ（ｍ） ２９７３ ３２２９ ３６９７ ３５４４
１．２．２　引物筛选与ＰＣＲ扩增　对１００个ＩＳＳＲ
引物进行筛选，从中选取扩增条带清晰，重复性较
好的１３条引物（表２）用于ＰＣＲ扩增，扩增反应
在 ＭｏｄｅｌＭＧ９６＋ＰＣＲ扩增仪（杭州朗基）上进
行，通过正交和单因素实验确定最优的扩增条件
为每２０μＬ的反应体系：１０×ｂｕｆｆｅｒ２．０μＬ，２．５
ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，０．３ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，Ｔａｑ酶２
Ｕ，引物０．３ｍｍｏｌ／Ｌ，ＤＮＡ模板４０ｎｇ，最后用灭
菌ｄｄＨ２Ｏ补足至２０μＬ。ＩＳＳＲ－ＰＣＲ基本扩增
程序［８］为：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，退火
４５ｓ，７２℃延伸９０ｓ，进行３５个循环，最后７２℃延
伸７ｍｉｎ，４℃保存。
１．２．３　ＰＣＲ产物检测　扩增产物以１．５％的琼
脂糖凝胶（含０．５ｍｇ／ＬＥＢ）电泳（０．５×ＴＢＥ缓
冲液，电压５Ｖ／ｃｍ）１．０～１．５ｈ，以ＤＮＡ Ｍａｒｋ
ｅｒＢ作标准分子质量参照物，ＧｅｌＤｏｃＸＲ型凝胶
成像分析系统照相并作记录。
１．２．４　电泳结果统计与分析　电泳检测后拍照。
分析照片中记录清晰，稳定且长度在３００～１２００
ｂｐ范围内的扩增带。利用 ＱｕａｎｔｉｔｙＯｎｅ．４．０４
软件将有条带的记录为“１”，无条带的记录为“０”，
建立０，１矩阵。
表２　引物序列和位点数
犜犪犫犾犲２　犛犲狇狌犲狀犮犲犪狀犱犾狅犮犻狅犳狆狉犻犿犲狉
引物
Ｐｒｉｍｅｒｓ
序列
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
最佳退火温度
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
（℃）
扩增带数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｂａｎｄｓ
多态性带纹
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态性百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ（％）
ＵＢＣ８０７（ＡＧ）８Ｔ ５２ ７３ ４０ ５４．７９
ＵＢＣ８０８（ＡＧ）８Ｃ ６３ ４３ ２１ ４８．８４
ＵＢＣ８０９（ＡＧ）８Ｇ ６３ ５５ ３３ ６０．００
ＵＢＣ８１１（ＧＡ）８Ｃ ５３ ５２ ３０ ５７．６９
ＵＢＣ８２５（ＡＣ）８Ｔ ６３ ３９ ２８ ７１．７９
ＵＢＣ８３４（ＡＧ）８ＹＴ ５５ ５０ ２８ ５６．００
ＵＢＣ８３５（ＡＧ）８ＹＣ ５６ ５５ ３３ ６０．００
ＵＢＣ８３６（ＡＧ）８ＹＡ ５５ ６０ ２７ ４５．００
ＵＢＣ８４０（ＧＡ）８ＹＴ ５６ ５０ ２８ ５６．００
ＵＢＣ８４６（ＣＡ）８ＲＴ ５５ ６０ ３８ ６３．３３
ＵＢＣ８４７（ＣＡ）８ＲＴ ６３ ４３ ４３ １００．００
ＵＢＣ８６０（ＴＧ）８ＲＣ ６１ ５１ ２９ ５６．８６
ＵＢＣ８７３ＤＶＤ（ＴＣ）７ ５６ ７０ １４ ２０．００
平均值Ａｖｅｒａｇｅ ５３．９２ ３０．１５ ５５．９２
　　１）聚类分析。采用 ＵＰＧＭＡ法（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄｐａｉｒｇｒｏｕｐｍｅｔｈｏｄａｒｉｔｈｍｅｔｉｃａｖｅｒａｇｅｓ，非加权配对算术平均
法）进行居群间Ｎｅｉ遗传距离的聚类分析，并做出遗传相似系数聚类图［９］。使用软件为ＮＴＳＹＳｐｃ２．１０ｅ。
２）居群遗传多样性及遗传结构分析。应用ＰＯＰＧＥＮＥ１．３２软件在假定居群处于 ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡状
态下［１０］，对全部居群和单个居群分别进行遗传参数分析，分别计算多态位点百分率（ＰＰＬ）、观测等位基因数
（Ａｏ）、有效等位基因数（Ａｅ）、Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈｅ）、Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数（Ｉ）、群体总基因多样性（Ｈｔ）、群体
内基因多样性（Ｈｓ）、群体间的遗传分化系数（Ｇｓｔ）、Ｎｅｉ’ｓ遗传距离（Ｄ）和遗传一致度（Ｉ）［１１］。
２　结果与分析
２．１　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增结果
用１３条引物共扩增了４个地区的１１个居群共２２０个个体，共扩增出７０１条带，其中３９２条具有多态性，多
态性位点百分率为５５．９％，每条引物扩增出的条带数为３９～７３条，平均每条引物扩增的条带数为５３．９条（表
２），扩增条带在３００～１２００ｂｐ之间。其中引物８４６对阿万仓浅黄色（ＡＷＱ），１８个个体的扩增结果见图１。
０６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
图１　引物犝犅犆８４６在阿万仓浅黄色居群中的扩增结果
犉犻犵．１　犐犛犛犚犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀犃犠犙狑犻狋犺狆狉犻犿犲狉犝犅犆８４６
２．２　钝裂银莲花的遗传多样性分析
钝裂银莲花居群内的多态性位点百分率在２７．８％～５４．１％之间，平均为４２．４％。每个位点的平均有效等位
基因数为１．１６７。Ｎｅｉ’ｓ基因多样性在居群水平上为０．０５８～０．１７０之间，平均值为０．１１４，在物种水平上为
０．２５０；ｓｈａｎｎｏｎ信息指数在物种水平上为０．１００～０．２６３之间，平均值为０．１８３，在物种水平上为０．３７２。
统计分析表明，各居群的多态性百分率差异较大（表３），其中阿万仓黄色居群（ＡＷＨ）的多态比率最高，达到
５４．０５％，阿万仓白色居群（ＡＷＢ）的多态比率最低（２７．７８％），这１１个居群的多态性高低依次为：阿万仓黄色
（ＡＷＨ）＞阿孜浅黄色（ＡＺＱ）＞碌曲浅黄色（ＬＱＱ）＝阿孜黄色（ＡＺＨ）＞合作黄色（ＨＺＨ）＞阿万仓浅黄色
（ＡＷＱ）＞合作浅黄色（ＨＺＱ）＝碌曲黄色（ＬＱＨ）＞合作白色（ＨＺＢ）＞碌曲白色（ＬＱＢ）＞阿万仓白色（ＡＷＢ）。
表３　钝裂银莲花居群犐犛犛犚遗传多样性统计
犜犪犫犾犲３　犘狅狆狌犾犪狋犻狅狀犵犲狀犲狋犻犮狏犪狉犻犪犫犻犾犻狋狔狅犳犐犛犛犚犿犪犽犲狉犻狀犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
居群编号
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
Ｎｏ．
样本数
Ｓａｍｐｌｅｓｉｚｅ
多态性条带
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态性百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉ
（％）（ＰＰＬ）
观测等位基因数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ａｌｅｌｅｓ（Ａｏ）
有效等位基因数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｌｅｌｅｓ
（Ａｅ）
Ｎｅｉ’ｓ遗传多样性指数
Ｎｅｉ’ｓｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｄｅｘ
（Ｈｅ）
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ
ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｉｎｄｅｘ（Ｉ）
ＨＺＨ ２０ ３１ ４８．４４ １．４８４±０．５０４ １．２０４±０．２５５ ０．１３７±０．１５７ ０．２１８±０．２４１
ＨＺＱ ２０ ２６ ４０．６２ １．４０６±０．４９５ ０．１９３±０．２８８ ０．１２３±０．１６７ ０．１９２±０．２４９
ＨＺＢ ２０ １９ ２９．６９ １．２９７±０．４６１ １．１１２±０．２０２ ０．０７８±０．１３１ ０．１２６±０．２０５
ＬＱＨ ２０ ２６ ４０．６２ １．４０６±０．４９５ １．１１７±０．１５９ ０．０８８±０．１１５ ０．１５１±０．１９２
ＬＱＱ ２０ ３５ ４９．３０ １．４９２±０．５０４ １．１５８±０．１８８ ０．１１６±０．１２９ ０．１９４±０．２０８
ＬＱＢ ２０ ２１ ２９．５８ １．２９６±０．４６０ １．１００±０．１８１ ０．０７２±０．１２１ ０．１１９±０．１９３
ＡＷＨ ２０ ４０ ５４．０５ １．５４１±０．５０２ １．２０３±０．２３５ ０．１４１±０．１４７ ０．２２９±０．２２８
ＡＷＱ ２０ ３２ ４３．２４ １．４３２±０．４９９ １．２１６±０．３１５ ０．１３４±０．１７５ ０．２０７±０．２５８
ＡＷＢ ２０ ２０ ２７．７８ １．２７８±０．４５１ １．０７５±０．１３３ ０．０５８±０．０９８ ０．１００±０．１６７
ＡＺＨ ２０ ３５ ４９．３０ １．４９３±０．５０４ １．１９６±０．２５４ ０．１３３±０．１５３ ０．２１３±０．２３４
ＡＺＱ ２０ ３８ ５３．５２ １．５３５±０．５０２ １．２６５±０．２９６ ０．１７０±０．１７５ ０．２６３±０．２６１
平均Ａｖｅｒａｇｅ ４２．３８ １．４２９±０．４８９ １．１６７±０．２２８ ０．１１４±０．１３５ ０．１８３±０．２１６
总群体Ａｌｌｏｃｕｓ ５１ ７３．１３ １．７３２±０．４３６ １．４４５±０．４１２ ０．２５０±０．１１１ ０．３７２±０．１５２
　ＨＺＨ：合作黄 Ｈｅｚｕｏｈｕａｎｇ；ＨＺＱ：合作浅黄Ｈｅｚｕｏｑｉａｎｈｕａｎｇ；ＨＺＢ：合作白Ｈｅｚｕｏｂａｉ；ＬＱＨ：碌曲黄Ｌｕｑｕｈｕａｎｇ；ＬＱＱ：碌曲浅黄Ｌｕｑｕｑｉａｎｈｕａｎｇ；
ＬＱＢ：碌曲白Ｌｕｑｕｂａｉ；ＡＷＨ：阿万仓黄Ａｗａｎｃａｎｇｈｕａｎｇ；ＡＷＱ：阿万仓浅黄Ａｗａｎｃａｎｇｑｉａｎｈｕａｎｇ；ＡＷＢ：阿万仓白Ａｗａｎｃａｎｇｂａｉ；ＡＺＨ：阿孜黄Ａｚ
ｉｈｕａｎｇ；ＡＺＱ：阿孜浅黄Ａｚｉｑｉａｎｈｕａｎｇ．下同 Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
１６２第２２卷第３期 草业学报２０１３年
２．３　钝裂银莲花的遗传结构分析
通过Ｐｏｐｇｅｎｅ１．３２软件分析，钝裂银莲花所有群体的基因多样度（Ｈｔ）为０．２８６，居群内的基因多样度（Ｈｓ）
为０．１４３，居群间的基因多样度为０．１４４，遗传分化系数（Ｇｓｔ）为０．５０１，居群间的基因流（Ｎｍ）的估测值为每代群
体间平均为０．５２４（表４）。由此表明，分布在居群间的遗传变异占总遗传变异的５０．１％，分布在居群内个体间的
遗传变异占４９．９％。进一步用ＡＭＯＶＡ分析结果显示（表５）：居群间的变异百分率为６２％，居群内的变异百分
率为３８％。即在总的遗传变异中有３８％的变异发生在居群内，有６２％的变异发生在居群间，居群内和居群间的
差异均极显著（犘＜０．００１）。
表４　钝裂银莲花居群的遗传分化
犜犪犫犾犲４　犌犲狀犲狋犻犮犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀狊犪犿狅狀犵犲犾犲狏犲狀狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
引物
Ｐｒｉｍｅｒｓ
样点数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｓａｍｐｌｅ
ｓｉｚｅ
总基因多样度
Ｔｏｔａｌｇｅｎｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
（Ｈｔ）
居群内基因多样度
Ｇｅｎｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｗｉｔｈｉｎ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ（Ｈｓ）
居群间遗传分化系数
Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ａｍｏｎｇｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ（Ｇｓｔ）
基因流
Ｇｅｎｅｆｌｏｗ
（Ｎｍ）
ＵＢＣ８０７ ３８ ０．２１９ ０．１２２ ０．１８１ ５．９７０
ＵＢＣ８０８ ２７ ０．２８０ ０．１４７ ０．３４２ ３．８８３
ＵＢＣ８０９ ３１ ０．３０４ ０．１１６ ０．４１７ ４．８３０
ＵＢＣ８１１ ３２ ０．３０８ ０．１２７ ０．３７０ ４．４３３
ＵＢＣ８２５ ２４ ０．２７２ ０．１４１ ０．２２３ ３．５３３
ＵＢＣ８３４ ３０ ０．２７７ ０．１１５ ０．３２９ ３．２５０
ＵＢＣ８３５ ３４ ０．２４８ ０．１１８ ０．２８１ ４．０６２
ＵＢＣ８３６ ３４ ０．２３２ ０．１３２ ０．２３０ ６．０６１
ＵＢＣ８４０ ３０ ０．２０９ ０．０８８ ０．２６５ ２．３１５
ＵＢＣ８４６ ３８ ０．１８６ ０．１０２ ０．１６５ ４．０４８
ＵＢＣ８４７ ３０ ０．３３６ ０．０８５ ０．４９５ ３．７７０
ＵＢＣ８６０ ３０ ０．２４３ ０．１１８ ０．２３６ ４．６２４
ＵＢＣ８７３ ３８ ０．２０４ ０．１１５ ０．２００ ４．１８５
平均值 Ｍｅａｎ ０．２５５ ０．１１７ ０．２８７ ４．２２８
标准差Ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ ０．０４２ ０．０１１
物种水平Ｓｐｅｃｉｅｓｌｅｖｅｌ ０．２８６ ０．１４３ ０．５０１ ０．５２４
表５　钝裂银莲花犐犛犛犚标记的分子方差分析
犜犪犫犾犲５　犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳犿狅犾犲犮狌犾犪狉狏犪狉犻犪狀犮犲（犃犕犗犞犃）狅犳犐犛犛犚犿犪狉犽犲狉狊犪犿狅狀犵狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊犻狀犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅｏｆｆｒｅｅｄｏｍ
方差
Ｖａｒｉａｎｃｅ
均方差
Ｍｅａｎｖａｒｉａｎｃｅ
方差分量
Ｖａｒｉａｎｃｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔ
变异百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｖａｒｉａｎｃｅ（％）
犘值
犘ｖａｌｕｅ
居群间Ａｍｏｎｇｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ９９ ２８７．２６ ２８．７３ ２．７１ ６２ ＜０．００１
居群内 Ｗｉｔｈｉｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ １０ １６１．００ １．６３ １．６３ ３８ ＜０．００１
总计Ｔｏｔａｌ １０９ ４４８．２６ ４．２４ １００
　　居群间遗传相似系数的变化范围为０．５６９～０．９１７，所有群体间的平均遗传相似系数为０．７０３（表６）。居群
间的遗传距离（ＧＤ）变幅为０．０８６～０．５６４，平均为０．３６６。阿万仓黄色和阿孜黄色的遗传距离较大，ＧＤ值为
０．５６４；合作黄色和合作浅黄色的遗传距离较小，ＧＤ值为０．０８６。根据遗传相似系数将所有群体进行 ＵＰＧＭＡ
聚类，得到树状图（图２），以遗传相似系数０．７３为基准，１１个材料聚为３类，第一类为合作钝裂银莲花，碌曲和阿
万仓钝裂银莲花为第二类，阿孜钝裂银莲花为第三类。
２６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３
表６　钝裂银莲花居群间的遗传相似系数（左下角）与遗传距离（右下角）
犜犪犫犾犲６　犌犲狀犲狋犻犮犻犱犲狀狋犻狋狔（犾狅狑犲狉犾犲犳狋狇狌犪狉狋犲狉）犪狀犱犱犻狊狋犪狀犮犲（犾狅狑犲狉狉犻犵犺狋犮狅狉狀犲狉）犫犲狋狑犲犲狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
项目Ｉｔｅｍ ＨＺＨ ＨＺＱ ＨＺＢ ＬＱＨ ＬＱＱ ＬＱＢ ＡＷＨ ＡＷＱ ＡＷＢ ＡＺＨ ＡＺＱ
ＨＺＨ  ０．０８６ ０．２７３ ０．２９７ ０．３３５ ０．４１５ ０．３６１ ０．３２２ ０．３３５ ０．５０２ ０．４５７
ＨＺＱ ０．９１７  ０．２６１ ０．３０９ ０．２９７ ０．４２９ ０．３７４ ０．３３５ ０．４０４ ０．５４８ ０．４７２
ＨＺＢ ０．７６１ ０．７７１  ０．２７３ ０．３３５ ０．３６１ ０．４４３ ０．３７４ ０．４４３ ０．５０２ ０．４５７
ＬＱＨ ０．７４３ ０．７３４ ０．７６１  ０．２１４ ０．３３５ ０．３０９ ０．２７４ ０．３３５ ０．４１５ ０．３７４
ＬＱＱ ０．７１６ ０．７４３ ０．７１６ ０．８０７  ０．２９７ ０．２４９ ０．３１０ ０．４０１ ０．４８７ ０．４４３
ＬＱＢ ０．６６１ ０．６５１ ０．６９７ ０．７１６ ０．７４３  ０．２２５ ０．３８７ ０．３４８ ０．４２９ ０．４４３
ＡＷＨ ０．６９７ ０．６８８ ０．６４２ ０．７３４ ０．７８０ ０．７９８  ０．１９２ ０．２７３ ０．５４９ ０．５６４
ＡＷＱ ０．７２５ ０．７１６ ０．６８８ ０．７６１ ０．７３４ ０．６７９ ０．８２５  ０．１４８ ０．４７２ ０．４２９
ＡＷＢ ０．７１６ ０．６６８ ０．６４２ ０．７１６ ０．６７０ ０．７０６ ０．７６１ ０．８６２  ０．３４８ ０．３３５
ＡＺＨ ０．６０６ ０．５７８ ０．６０６ ０．６６１ ０．６１５ ０．６５１ ０．５７８ ０．６２４ ０．７０６  ０．１６９
ＡＺＱ ０．６３３ ０．６２３ ０．６３３ ０．６８８ ０．６４２ ０．６４２ ０．５６９ ０．６５１ ０．７１６ ０．８４４ 
图２　１１个钝裂银莲花居群的遗传聚类图
犉犻犵．２　犇犲狀犱狉狅犵狉犪犿狅犳犲犾犲狏犲狀狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
２．４　钝裂银莲花遗传多样性与环境因子间相关性分析
利用ＳＰＳＳ１９．０软件将１１个居群的遗传多样性指标，包括等位基因数（Ｎａ），有效等位基因数（Ｎｅ），Ｎｅ的基
因多样性（Ｈ），Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数（Ｉ）和多态性百分率（ＰＰＢ）与各环境因子间作相关性分析。结果（表７）表明，钝
裂银莲花居群遗传多样性水平与海拔、含水量、有效磷含量及经纬度之间没有相关性，而与降水量有显著的负相
关，即在其生长区域内随降水量的增大，遗传多样性指标有减小的趋势［１２］。
３　讨论
３．１　遗传多样性
遗传多样性是指生物所携带的各种遗传信息的总和，是生物多样性的重要组成部分，是生物生存、发展和进
化的基础。多态性百分率可以作为衡量遗传多样性高低的指标［１３］。从本研究结果来看，阿万仓黄色（ＡＷＨ）居
群的多态性百分率（５４．０５％）最高，而阿万仓白色（ＡＷＢ）居群则最低（２７．７８％）。３个地域白色居群的多态性百
分率都低于黄色和浅黄色居群。总的群体多态性百分率（７３．１３％）明显高于各群体，究其原因可能是有些位点仅
在个别群体中能检测到而使这些位点在各群体中分布不均衡所致。１１个群体的多态性百分率大小顺序与
３６２第２２卷第３期 草业学报２０１３年
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数和Ｎｅｉ指数估计的基因多样性顺序基本一致。研究表明，物种居群遗传多样性的高低与环境
因子有关，如生境复杂程度、土壤等有关［１４］。本研究发现钝裂银莲花居群遗传多样性与其他环境因子没有相关
性，而与降水量有显著的负相关性，这可能与钝裂银莲花的生长周期有关，钝裂银莲花的花期在５－７月间，而这
期间的高寒草甸的降水量最为丰富，因此降水量成为了钝裂银莲花生长的重要影响因素。
表７　钝裂银莲花遗传多样性参数与环境因子的相关性
犜犪犫犾犲７　犚犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆犫犲狋狑犲犲狀犵犲狀犲狋犻犮犱犻狏犲狉狊犻狋狔狆犪狉犪犿犲狋犲狉狊犪狀犱犵犲狅犵狉犪狆犺犻犮犪狀犱犲犮狅犾狅犵犻犮犪犾犳犪犮狋狅狉狊狅犳犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪
环境因子
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
ｆａｔｏｒ
多态性百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
（％）（ＰＰＢ）
观测等位基因数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｏｂｓｅｒｖｅｄａｌｅｌｅｓ
（Ｎａ）
有效等位基因数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｌｅｌｅｓ
（Ｎｅ）
Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数
Ｎｅｉ’ｓｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｄｅｘ
（Ｈ）
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ
ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｉｎｄｅｘ（Ｉ）
经度Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ －０．３１３ －０．３１４ －０．３１４ －０．３１３ －０．３１４
纬度Ｌａｔｉｔｕｄｅ －０．３３８ －０．３３９ －０．３５６ －０．３５３ －０．３５１
海拔Ａｌｔｉｔｕｄｅ ０．２３６ ０．２３６ ０．１９４ ０．１９７ ０．２０５
降水量Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ －０．０４９ －０．０４９ －０．０３３ －０．０２２ －０．０２４
含水量 Ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ ０．４０８ ０．４０８ ０．５４８ ０．３５４ ０．３７０
有效磷Ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ０．２３９ ０．２４１ ０．３８０ ０．３４４ ０．３２３
　　本研究发现，在１１个钝裂银莲花居群中，黄色和浅黄色居群的多态性百分率差异小，而白色居群的多态性百
分率均低于黄色和浅黄色居群，这可能与居群间本身的遗传差异有关。根据采样地实际观察，同一地域内白色钝
裂银莲花明显少于黄色和浅黄色钝裂银莲花，但同一地域内白色钝裂银莲花的昆虫访花率明显高于黄色和浅黄
色钝裂银莲花。
３．２　遗传结构
根据Ｐｏｐｇｅｎｅ１．３２软件结果分析，居群内的基因多样度（Ｈｓ）为０．１４３，居群间的基因多样度为０．１４４，总遗
传变异的５０．１０％来源于居群间。Ｂｕｓｓｅｌ［１５］对３５个物种的ＲＡＰＤ研究结果进行了总结，发现２９个远交物种的
居群间变异在总的遗传变异中占０．９％～４１．３％，而６个近交物种则为４４．８％～６６．９％。Ｈｏｇｂｉｎ和Ｐｅａｋａｌ［１６］
也总结了７个物种的ＲＡＰＤ分析结果，发现异交物种的遗传变异主要分布于居群内，而居群间的遗传变异分布
通常不足２７％。迄今为止，尚未见与钝裂银莲花同属植物的遗传多样性的报道。本研究发现，钝裂银莲花Ｎｅｉ’ｓ
基因分化指数Ｇｓｔ＝０．５０１，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数Ｉ＝０．３７２。可见，钝裂银莲花无论在种还是居群水平上都存在着
丰富的遗传变异。Ｎｙｂｏｍ和Ｂａｒｔｉｓｈ［１７］利用ＲＡＰＤ标记检测植物的遗传结构，高达０．５０１的钝裂银莲花遗传分
化系数均高于多年生短寿植物（Ｇｓｔ＝０．３２）、重力散播种子植物（Ｇｓｔ＝０．３２）、异交植物（Ｇｓｔ＝０．２２）、狭域分布
种（Ｇｓｔ＝０．２１）、混交植物（Ｇｓｔ＝０．１９３）的平均水平，但略低于自交为主植物的平均值（Ｇｓｔ＝０．５９），这与赵志刚
等［１８］的研究结果相一致。可见，钝裂银莲花属于自交植物且居群间存在较为丰富的遗传变异。
影响居群遗传结构的因素除繁育系统外，基因流也是一个重要因素。高水平、稳定的基因流可以防止居群间
的遗传分化［１９］。根据Ｇｓｔ和ＡＭＯＶＡ分析结果，钝裂银莲花居群间已发生了较高的遗传分化。这可能与居群
间的地理隔离有关。因地理隔离，造成居群间的基因流较低（Ｎｍ＝０．５２４），从而造成了居群间主要的遗传分化。
植物居群内和居群间的基因流是借助于花粉、种子、孢子、植株个体以及其他携有居群遗传物质的物体为媒介进
行的，其中花粉和种子扩散是自然植物居群最主要的基因流［１４］。虽然在取样地发现钝裂银莲花有蜜蜂、蚂蚁、熊
蜂、食蚜蝇访花，但还没有信息证明钝裂银莲花有远距离传播者。Ｗｒｉｇｈｔ［２０］认为，如果Ｎｍ＜１，则由于遗传漂变
可以导致居群间明显的遗传分化。因此，较低的基因交流可能是造成钝裂银莲花居群遗传分化的主要原因之一。
致谢：在本论文的写作过程中，得到了兰州大学高寒草甸与湿地生态系统定位研究站的大力支持与帮助，在此表
示衷心的感谢！
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参考文献：
［１］　ＺｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚＥ，ＲａｆａｌｓｋｉＡ，ＬａｂｕｄａＤ．Ｇｅｎｏｍｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｂｙｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ（ＳＳＲ）ａｎｃｈｏｒｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅ
ａｃｔｉｏｎａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９９４，２０（２）：１７６１８３．
［２］　ＪｅｌｅｎａＭ，ＭｉｋｅＣ，ＬｅｉｔｃｈＡＲ，犲狋犪犾．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅＤＮＡｆａｍｉｌｉｅｓｉｎ犃
狀犲犿狅狀犲犺狅狉狋犲狀狊犻狊Ｌ（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）［Ｊ］．ＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２００９，１７：３３１３４６．
［３］　刘鮬心．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９３：１７６７．
［４］　赵志刚．青藏高原高寒草甸常见毛茛科植物繁殖对策研究［Ｄ］．兰州：兰州大学，２００６：５．
［５］　覃光莲，杜国祯，李自珍．高寒草甸植物群落中物种多样性与生产力关系研究［Ｊ］．植物生态学报，２００２，２６：５７６２．
［６］　肖冰梅，周小江，罗京，等．总ＤＮＡ提取方法的比较研究［Ｊ］．湖南中医药大学学报，２００８，２８（２）：３１３２．
［７］　胡盨，王永清，陶炼．三角紫叶酢浆草ＩＳＳＲ反应体系的建立与优化［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（５）：１４２１５０．
［８］　郑轶琦，王志勇，郭海林，等．正交设计优化假俭草ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系及引物筛选［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（４）：１１０
１１７．
［９］　赵杨，陈晓阳，王秀荣，等．二色胡枝子遗传多样性１ＳＳＲ分析［Ｊ］．植物遗传资源学报，２００７，８（２）：１９５１９９．
［１０］　范彦，李芳，张新全，等．扁穗牛鞭草种质遗传多样性的ＩＳＳＲ分析［Ｊ］．草业学报，２００７，１６（４）：７６８１．
［１１］　冯亮亮，唐红，李毅，等．甘肃红砂不同种群遗传多样性的ＩＳＳＲ分析［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（１）：１２５１３０．
［１２］　张妙青，王彦荣，张吉宇，等．垂穗披碱草种质资源繁殖相关特性遗传多样性研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（３）：１８２１９１．
［１３］　高宝嘉，高立杰，侯建华，等．三种松毛虫不同地理居群遗传多样性［Ｊ］．生态学报，２００８，２８（２）：８４２８４８．
［１４］　李海生，陈桂株．海南岛红树植物洛桑遗传多样性的ＩＳＳＲ分析［Ｊ］．生态学报，２００４，２４（８）：１６５６１６６２．
［１５］　ＢｕｓｓｅｌＪＤ．ＴｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ （ＲＡＰＤ）ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇｓｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆ犐狊狅狋狅犿犪
狆犲狋狉犪犲犪（Ｌｏｂｅｉａｃｅａｅ）［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｃｏｌｏｇｙ，１９９９，８（５）：７７５７８９．
［１６］　ＨｏｇｂｉｎＰＭ，ＰｅａｋａｌＲ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｔｏｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｅｎｄａｎｇｅｒｅｄｐｌａｎｔ犣犻犲狉犻犪
狆狉狅狊狋狉犪狋犲［Ｊ］．ＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎＢｉｏｌｏｇｙ，１９９９，１３：５１４５２２．
［１７］　Ｎｙｂｏｍ Ｈ，ＢａｒｔｉｓｈＩＶ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｉｆｅｈｉｓｔｏｒｙｔｒａｉｔｓａｎｄｓａｍｐｌｉｎｇｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｏｎｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｅｓｔｉｍａｔｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈ
ＲＡＰＤｍａｒｋｅｒｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｅｒｓｐｅｃｔＰｌａｎｔＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＥｖｏｌＳｙｓｔｅｍ，２０００，３１２：９３１１４．
［１８］　赵志刚，杜国祯，任青吉．５种毛茛科植物个休大小依赖的繁殖分配和性分配［Ｊ］．植物生态学报，２００４，２８（１）：９１６．
［１９］　ＨａｒｔｌＤＬ，ＣｌａｒｋＡＧ．ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆＰｏｐｕｌａｔｉｏｎＧｅｎｅｔｉｃｓ［Ｍ］．２ｎｄｅｄｎ．Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ．Ｓｉｎａｕｅｒ，１９８９．
［２０］　ＷｒｉｇｈｔＳ．Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＡｎｎａｌｓｏｆＥｕｇｅｎｉｃｓ，１９５１，１５：３２３３５４．
犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳犵犲狀犲狋犻犮犱犻狏犲狉狊犻狋狔犻狀犃狀犲犿狅狀犲狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狑犻狋犺犐犛犛犚犿犪狉犽犲狉狊
ＳＵＮＴａｏ，ＬＩＵＺｕｏｊｕｎ，ＬＩＵｆｅｎｇｍｅｉ，ＷＵＧｕｏｑｉａｎｇ，ＷＡＮＧＹｏｎｇｇａｎｇ，ＬＩＢｉｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＬａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００５０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｅｌｅｖｅｎｓｐｅｃｉｅｓｏｆ犃狀犲犿狅狀犲狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪ｃｏｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ４ａｒｅａｓｏｆＧａｎｓｕ［Ｈｅｚｕｏ（ＨＺ），Ｌｕｑｕ（ＬＱ），
Ａｗａｎｃａｎｇ（ＡＷＣ），ａｎｄＡｚｉ（ＡＺ）］ｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙｉｎｔｅｒｓｉｎｇｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｓ（ＩＳＳＲ）ｔｏｅｌｕｃｉｄａｔｅｔｈｅｉｎ
ｈｅｒｉｔｄｉｖｅｒｓｉｔｙｌｅｖｅｌａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｓｅｖｅｎｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｏｎｅｂａｎｄｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ１３ｐｒｉｍｅｒｓａｎｄ３９２ｂａｎｄｓ
ｗｅｒｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ，ａｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｕｓｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ（Ｐ）ｏｆ５５．９２％．ＴｈｅＳｈａｎｎｏｎｉｎｄｅｘ（Ｉ）ｗａｓ０．３７２ａｎｄＮｅｉ’
ｓｇｅｎｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｈ）ｗａｓ０．２５０．ＢａｓｅｄｏｎＮｅｉ’ｓＧｓｔｖａｌｕｅａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｖａｒｉａｎｃｅ（ＡＭＯＶＡ），
ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｐｅｃｉｅｓｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪ｅｘｉｓｔｅｄｍａｉｎｌｙ．Ｉｎｉｎｔｅｒｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ：Ｉｗａｓ
０．１８３ａｎｄＨｗａｓ０．１１４ａｔｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅｓｅｄａｔａｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｈｉｇｈｉｎｈｅｒｅｎｔｄｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓｉｎ
ｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆ犃．狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪．ＵｓｉｎｇＵＰＧＭＡ，ｔｈｒｅｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｃｌｕｓｔｅｒｅｄ：ＨＺ，ＬＱａｎｄＡＷＣ，ａｎｄ
ＡＺ．Ｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｌｅｖｅｌａｎｄａｌｔｉ
ｔｕｄｅ，ｗａｔｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓｏｒｌｏｎｇｉｔｕｄｅａｎｄｌａｔｉｔｕｄｅ，ｂｕｔｔｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａ
ｔｉｏｎｗｉｔｈｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犃狀犲犿狅狀犲狅犫狋狌狊犻犾狅犫犪；ＩＳＳＲ；ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅ
５６２第２２卷第３期 草业学报２０１３年