全 文 ：林业科学研究!"#$%!"&"$#$$$- $"$
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!!文章编号!$##$($)*&""#$%##$(#$$-(#-
基于 +EWI分子标记和 FQ+条形码对
无籽刺梨的鉴定
李!旦$!,! 周安佩$! 张德国$! 高!健"! 何承忠$! 李永和$!,!
"$+西南林业大学!云南 昆明!-%#"")% "+贵州兴仁县石漠化综合治理领导小组办公室!贵州 兴仁!%-",##%
,+云南生物多样性研究院!云南 昆明!-%#"")#
收稿日期$ "#$)(#("$
基金项目$ 国家自然科学基金项目",$,-#$%-#,云南省科技厅项目""##& a`#"$#,西南林业大学校级科研启动基金资助项目
作者简介$ 李!旦"$*&%(#!女!吉林省四平市人!博士!助理研究员!主要研究方向$林木遗传育种+
!
通讯作者$博士!教授!博士生导师!研究方向$生物多样性保护与利用+
摘要!利用.?H` 分子标记和 ]^.条形码技术!对采自贵州省兴仁县和贵州省安顺市的刺梨,无籽刺梨和光枝无籽
刺梨共 $* 份样本材料进行鉴定) 结果表明$.?H` 标记分析 $* 个样本间的遗传相似系数在 #+$* # #+** " 之
间!平均相似系数为 #+*,- %) 采用 C`BZ.法进行聚类分析!将 $* 个样本聚类为 " 组!刺梨为单独 $ 组!其他 $& 份
样本为 $ 组) ]^.条形码分析结果显示OJD无变异位点!将 ) 种叶绿体序列片段"WK@.(FI7Q,1FW?(1FWQ,WK@O(WK@G,
FI7H(?#合并后以联合序列作为数据分析的基础!$* 份样本的平均误差为 #+### -!除刺梨外!其他 $& 份样本之间的
遗传距离均为 #!而刺梨与无籽刺梨,光枝无籽刺梨之间的遗传距离均为 #+##% &) 两种方法的鉴定结果一致!无籽
刺梨与刺梨是独立的 " 个种!兴仁县无籽刺梨与安顺市的光枝无籽刺梨为同一个种) 本研究结果明确了无籽刺梨
的系统地位!从分子水平和基因水平上解决无籽刺梨的分类分歧!为今后开展无籽刺梨种质资源的收集,保存,开发
和应用等奠定了理论基础)
关键词!刺梨%无籽刺梨%.?H` 分子标记%OJD序列%9W ]^.序列
中图分类号!D$&+)- 文献标识码!.
G8#*-%-&.-)*)%E-/) /"7(+1+/K.(#8)*+EWI0)/#&O/.1
0.1Y#1(.*8FQ+K.1&)8#(
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_27M.I<7 P:67F5! _27M.I<7!%-",##! B62S;:6! P;271% ,+a67717 .91E<05:>L2:E2T+5(1.&$]27I:0_27M.I<7 17E
.7K;67 27 B62S;:6 :>P;271V2.?H`
K;:V292<7F10:7MF;<$* KW<920<7 I17MI:0#+$* # #+** " 17E F;<1TV1K#+*,- %+J;C`BZ.936KF[#"Y7?6A*2V1KE2KF279F>I:0F;<:F;:I01327F:17:F;MI:6W+J;^].@1I9:EK;:V272F5+L1KF179<@291F2:7 IFV:0[%&$#212%17E [#"Y7?6A*2VI:0_27M.I<7 17E [%&$#212%
T1I+3<2:931E19:3<9FI:0.7K;67 @<3:7MF:F;F;2KKF6E5E第 $ 期 李!旦等$基于.?H` 分子标记和 ]^.条形码对无籽刺梨的鉴定
KF1F6K:>[%&$#212%1FF;<30:3<9631I17E M<7<17E 312E F;:67E1F2:7 >:I>6IF;[%&$#212%M6#7 4)18($ "%( #"Y7?6A*2% "%( %&$#212%% .?H` 01I4无籽刺梨""%( %&$#212%D+^+D;2#!为蔷薇科"N:(
K19<1<#蔷薇属""%(#多年生落叶攀援性灌木!高 )
- 0!在其膨大的子房中!有膨大的胚珠!随着果实
的发育而逐渐萎缩枯死!最终形成无籽果实!故名无
籽刺梨) 无籽刺梨为贵州特有种!贵州农学院于
$*&$ 年进行全省刺梨资源调查时!在贵州省兴仁县
发现!$*&% 年贵州省植物园的时圣德先生发表的蔷
薇属植物新种*$+ ) 与刺梨 "[#"Y7?#A*2JI1F#相
比!无籽刺梨鲜果的口感更佳!香气更浓郁!是珍贵
的营养保健果品!被誉为&新山珍!其鲜果的 \9含
量达 $ $,, 0M-"$## M# [$!单宁含量较低!含糖量
较高!可溶性固形物达 $&d!并含 L,j7,Z:,P6,?<
等多种矿物营养元素!具有较高的经济价值和广阔
的开发应用前景*" [,+ ) 此外!无籽刺梨凭借生长快,
根系发达的特点!已作为山地造林与退耕还林等工
程造林的优选树种之一*)+ )
目前关于无籽刺梨的分类地位存在较大分歧)
$**& 年!季祥彪和李淑久对贵州 ) 种刺梨进行比较
形态解剖学研究!认为无籽刺梨可能是贵州缫丝花
"[3k$2)*"k$6%2%J+J+a6 RJ+P+G6#的自然杂
交种*%+ ) "##, 年!文晓鹏等对刺梨及部分近缘种进
行形态学性状和 N.`^标记分析研究!推测无籽刺
梨可能来源于贵州缫丝花的高度雄性不育变异*-+ )
"##& 年!安明态等发现无籽刺梨的一个变种(((光
枝无籽刺梨!又称安顺金刺梨!命名为 [%&$#212%D+
+^D;2T1I+1$2")1(F( Z+J+.7!a+j+P;<7Mj;:7M) 报道称!光枝无籽刺梨与近几十年来颇受国
内外关注并誉称&维P之王的刺梨近缘*+ ) 次年!
邓朝义等按植物系统分类学命名法对无籽刺梨的命
名进行了修订!将光枝无籽刺梨归为无籽刺梨*,+ )
基于基因组 ]^.水平的分子标记技术!由于不
受年龄,取样部位以及生长环境条件等因素影响!已
广泛应用于种质资源的评价与鉴定研究) 其中!
.?H` 是由 N?H` 和 N.`^相结合的分子标记技术!
它不仅具有 N?H` 的专一性和可靠性!而且具有
N.`^的随机性和方便性*&+ ) "##" 年!J16FS等在
0]1F6I<1上发表论文!提出可以将 ]^.序列用于生
物的分类**+ ) 次年!Q<@条形码的概念!即 ]^.条形编码或称 ]^.条形码
技术" ]^.@1I9:E27M#是利用标准的,有足够变异
的,易扩增且相对较短的 ]^.片段" ]^.@1I9:E<#
自身在物种种内的特异性和种间的多样性而创建的
一种新的生物身份识别系统!它可以对物种进行快
速的自动鉴定*$# [$,+ ) 为此!本研究应用 .?H` 分子
标记和 ]^.条形码技术对刺梨,无籽刺梨和光枝无
籽刺梨进行鉴别分析!从分子水平和基因水平上确
定刺梨,无籽刺梨和光枝无籽刺梨的分类地位!为今
后开展无籽刺梨种质资源的收集,保存,开发和应用
等奠定理论基础)
$!材料与方法
9+9:试验材料
试验样本共 $* 份!于 "#$, 年 & 月,* 月收集于
贵州兴仁和安顺地区) 将采集到的样本枝条进行扦
插繁殖育苗!定植于西南林业大学树木园内)
试验样本 PH($!PH("!PH(,!PH()!PH(% 采自于
贵州省兴仁县回龙镇的无籽刺梨植株%PH(-!PH(!
PH(&!PH(*!PH($# 采自于贵州省安顺市普定县的光
枝无籽刺梨"金刺梨#植株!PH($$!PH($"!PH($,!PH(
$)!PH($% 采自于贵州省安顺市西秀区的光枝无籽
刺梨"金刺梨#植株%PH($- 采自于贵州省兴仁县巴
铃镇的刺梨植株%PH($!PH($&!PH($* 采自于贵州
省兴仁县回龙镇的无籽刺梨压条繁殖植株)
9>;:FQ+的提取
分别采取供试材料 $* 个样本的幼嫩叶片带回
西南林业大学林木遗传育种实验室!采用植物 ]^.
提取试剂盒提取 ]^.!用 #+&d 的琼脂糖凝胶电泳
检测其质量!用紫外分光光度计"DW<43($,###检测
其浓度!最后分取各样本 %#
!
H ]^.样品稀释至 "#
0M-H
[$
!保存于["# f冰箱中备用)
9><:+EWI分子标记分析
.?H` 分析的基本程序按照\:K等*$)+所描述的
方法进行!并依据本实验室的前期经验对体系进行
优化) 采用E)"4XH%&O酶切组合进行基因组限制
性双酶切!预扩增反应选用引物组合 /## b`##!选择
性扩增反应采用引物组合 /h"b` h, 和 /h,b` h
,) P`N扩增反应在 J`P($##JZJ;进行) 选择性扩增产物经 *%f % 027 变性后!在
$$
林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
-d的变性聚丙烯酰胺序列分析胶上电泳分离) 应
用ka(P_"L型"改进型#测序电泳槽!在 *# U恒定
功率条件下电泳约 *# 027) 电泳后采用银染检测法
进行.?H` 指纹显色反应*$%+ ) 试验结果按照电泳图
谱中同一位置上 .?H` 条带的有无进行统计!有带
记为&$!无带记为&#!形成 #b$ 矩阵图输入计算
机) 利用 P^?.$+$ 软件将 .?H` 谱带统计结果转
换为 Y`` B/]/软件*$-+适用文件!应用 Y`` B/]/
$+,$ 软件*$+对全部样本进行遗传参数分析!计算多
态位点百分率等参数!采用 C`BZ.方法对样本进
行聚类分析)
9>=:FQ+条形码技术
P`N扩增反应总体系为 "%
!
H!其中正反引物
各 $
!
H"引物浓度为 % W0:3#!引物序列及来源见表
$! ]^.模板 $
!
H!" qJ1X Z1KF!
H!去离
子水 *+%
!
H) P`N反应程序$*)f预变性 ) 027%
*)f变性 ,# K!%f" WK@.(FI7Q,1FW?(1FWQ,WK@O(WK(
@G,OJD#b%*f"FI7H(?序列#退火 )% K!"f延伸 $
027!共 ,% 个循环%"f总延伸 $# 027) 扩增产物送
往北京华大基因科技股份有限公司进行测序)
结果采用L2:对!以确保准确性!使用P36KF13_$+& 进行多序列的
比对切齐*$&+ ) 用 .`C` )+# 软件对 ) 种引物序列进
行非一致性长度检验"OH^ 检验#*$*+ ) 利用 Z/B.
%e#"软件分析序列长度,碱基组成等序列特征!通过
G206I1"(W1I10表 9:扩增引物及来源
名称 方向 引物 文献
W1@.(FI7Q
W1K. BJJ.JBP.JB..PBJ..JBPJP
H1;15<
*""+
FI7Q PBPBP.JBBJBB.JJP.P..JPP
1FW?(1FWQ
1FW? .PJPBP.P.P.PJPPPJJJPP
H1;15<
*",+
1FWQ BPJJJJ.JBB..BPJJJ..P..J
WK@O(WK@G
WK@(O .B.BJJJB.B.BJ..BP.J
H1;15<
*",+
WK@(G JJ.BPPJJJBJJJBBP..B
FI7H(?
FI7H .JJJB..PJBBJB.P.PB.B
J1@*")+
FI7? PB...JPBBJ.B.PBPJ.PB
OJD
OJD$ JPPBJ.BBJB..PPJBPBP
U;2F<
*"%+
OJD) JPPJPPBPJJ.JJB.J.JBP
"!结果与分析
;>9:+EWI标记分析
通常情况下!.?H` 每一条扩增带都对应着一个
]^.分子位点!出现多态性扩增带!说明样本间在
该位点上存在差异) 本实验应用 E)"NO和 H%&O内
切酶进行酶切!从 $"# 对引物组合中筛选出 $" 对
.?H` 引物组合!对 $* 份样本的 ]^.样品进行 P`N
扩增) 通过 $" 对.?H` 引物组合对 $* 个样本进行
了分析!共检测到 ,- 个标记!其中多态性标记 $$-
个!多态带百分率为 ,#+*,d) 平均每对引物扩增
出 ,#+%& 条带!平均多态性带为 *+- 条) 其中 /h
B.b`h.JB是最有效率的一对引物!其产生位点的
多态性条带比率达到 %-+"%d!而引物 /hBJb` h
P..扩增出的条带的多态性比率最低!其多态性条
带比率为 %+&&d"表 "#)
表 ;:9] 份样本 9; 对不同引物组合的条带多态性
引物组合 总条带数 多态性条带数 多态性百分率bd
/hBJb`hP.. ,) " %+&&
/hP.Pb`hPJJ ," $# ,$+"%
/hBJb`h.JB ,) - $+-%
/h.Pb`hP.. )$ $% ,-+%*
/hB.b`h.JB ," $& %-+"%
/h...b`h.JB ,& $, ,)+"$
/h..Pb`h.JB ", & ,)+&
/h..Pb`hJBP "* * ,$+#,
/h.JPb`hP.. ", ) $+,*
/hP.Pb`hP.. ,# & "-+-
/hP.Bb`hPBP $% ) "-+-
/hB..b`h..P ,- $* %"+&
总计 ,- $$- (((
平均 ,#+%& *+- ,#+*,
Y`` B/]/分析结果显示!$* 个样本间的遗传
相似系数在 #+$* # #+** " 之间!平均相似系数
为 #+*,- %"表 ,#) 采用 C`BZ.法进行聚类得到系
统关系树!将 $* 个样本聚类为 " 组"图 $#) 第 O组
为PH($- 即刺梨!第O组为其他 $& 份样本即包括 %
份贵州省兴仁县回龙镇的无籽刺梨!% 份贵州省安
顺市普定县的光枝无籽刺梨!% 份安顺市西秀区的
光枝无籽刺梨和 , 份兴仁县回龙镇的无籽刺梨压条
繁殖植株的样本构成) 这 $& 份样本的遗传相似系
数在 #+*, 以上)
;>;:FQ+条形码分析
将序列进行比对切齐后!用 .`C` )+# 软件对 )
种引物序列进行非一致性长度检验"OH^ 检验#!其结
果表明 ) 种叶绿体序列片段"WK@.(FI7Q,1FW?(1FWQ,
WK@O(WK@G,FI7H(?#的吻合度高"Hc$ n#+#%#!可将序
列进行合并!并以联合序列作为数据分析的基础"表
)#) 由于OJD无变异位点!故只对叶绿体的联合序列
片段进行 G"`模型的遗传距离分析) 结果显示!$*
份样本的平均误差为 #+### -!除PH($- 即刺梨外!其
他 $&份样本之间的遗传距离均为 #!而PH($- 与他们
的遗传距离均为 #+##% &"表 %#) 由于序列无信息位
点!故不用进行系统发育树的构建)
&$$
第 $ 期 李!旦等$基于.?H` 分子标记和 ]^.条形码对无籽刺梨的鉴定
表 <:9] 份样本的遗传相似系数
PH($ PH(" PH(, PH() PH(% PH(- PH( PH(& PH(* PH($# PH($$ PH($" PH($, PH($) PH($% PH($- PH($ PH($&
PH($
PH(" #+** "
PH(, #+**) % #+** "
PH() #+*)) * #+*) #+*%# )
PH(% #+*& # #+*% " #+*& # #+*-$ )
PH(- #+*&# #+*&, % #+*&# #+*%& #+*&- "
PH( #+*-* #+*" % #+*-* #+*-) " #+*&# #+*&* #
PH(& #+*& # #+*&# #+*& # #+*%% * #+*" % #+*&# #+*&#
PH(* #+*&, % #+*&# #+*&, % #+*%# ) #+*&, % #+*&# #+*-* #+*&* #
PH($# #+*-- * #+*-* #+*" % #+*-$ ) #+*& # #+*&# #+*&# #+*&* # #+*&, %
PH($$ #+*%, " #+*%% * #+*%, " #+*%, " #+*-) " #+*" % #+*& # #+*% " #+*-) " #+*&#
PH($" #+*-) " #+*-- * #+*-) " #+*%, " #+*&# #+*&, % #+*&, % #+*% " #+*-* #+*&# #+*&, %
PH($, #+*-- * #+*-) " #+*-$ ) #+*%# ) #+*&, % #+*&# #+*&# #+*" % #+*" % #+*& # #+*&# #+** "
PH($) #+*%& #+*-$ ) #+*%& #+*) #+*-* #+*" % #+*& # #+*-* #+*%& #+*% " #+*& # #+*&* # #+*&- "
PH($% #+*%% * #+*%& #+*%% * #+*,* ) #+*%% * #+*%& #+*-) " #+*-$ ) #+*%# ) #+*-- * #+*-* #+*-* #+*-- * #+*&#
PH($- #+,# # #+," & #+,# # #+$* # #+,# # #+,& , #+), & #+,# # #+$* # #+,% % #+), & #+), & #+)$ # #+%) & #+-& -
PH($ #+*,, * #+*,$ $ #+*"& ) #+*## & #+*,, * #+*,$ $ #+*"% - #+*$ ) #+*"" * #+*"" * #+*"% - #+*,$ $ #+*,, * #+*,- - #+*%% * #+) $
PH($& #+*,, * #+*,$ $ #+*"& ) #+*#- , #+*,* ) #+*,- - #+*,$ $ #+*"" * #+*"& ) #+*"& ) #+*,$ $ #+*,- - #+*,* ) #+*,$ $ #+*%# ) #+-& - #+**) %
PH($* #+*"& ) #+*"% - #+*"" * #+*## & #+*,, * #+*,$ $ #+*"% - #+*$ ) #+*"" * #+*"" * #+*"% - #+*,$ $ #+*,, * #+*"% - #+*)) * #+) $ #+*&* # #+**) %
图 $!$* 份样本 $" 对引物.?H` 标记的聚类分析
表 =:叶绿体基因片段的序列特征
9W ]^. 长度范围b@W 平均长度b@W 对齐后长度b@W PhBbd 保守位点 变异位点 信息位点
WK@.(FI7Q ,)& [,% ,)&+% ,-" "%+, ,) $ [
1FW?(1FWQ --% [,$ -#+ -&, ,#+, --- % [
WK@O(WK@G "%- ["%& "%+* "%& ,"+" "%- " [
FI7H(? **% [** **%+$ ** ,$+& **# % [
9W ]^.联合序列 " "" [" "% " ""+" " ,## ,#+) " "%* $, [
OJD --) [-% --)+- -% %-+- --) [ [
,!结论与讨论
.?H` 标记所揭示的是分析样本基因组 ]^.在
酶切位点和其后的选择性碱基的变异!多态性条带
的数量反映了供试材料之间在 ]^.水平上酶切位
点的差异性*"-+ ) 赵琴等利用.?H` 分子标记技术!
*$$
林!业!科!学!研!究 第 "& 卷
表 ?:9] 份样本&,FQ+片段6;I模式的遗传距离
PH($ PH(" PH(, PH() PH(% PH(- PH( PH(& PH(* PH($# PH($$ PH($" PH($, PH($) PH($% PH($- PH($ PH($&
PH($ #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(" #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(, #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH() #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(% #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(- #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH( #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(& #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH(* #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($# #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($$ #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($" #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($, #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($) #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($% #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##$ - #+### # #+### #
PH($- #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##% & #+##$ - #+##$ -
PH($ #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##% & #+### #
PH($& #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##% & #+### #
PH($* #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+### # #+##% & #+### # #+### #
!!注$下三角为遗传距离!上三角为标准误)
对 * 份常用狗牙根材料的遗传多样性进行了分
析*"+ ) 鲁凤娟应用.?H` 分子标记鉴定库尔勒香梨
的分类地位!确定库尔勒香梨与白梨系统,沙梨系
统,秋子梨系统,西洋梨系统的亲缘关系*"&+ ) 本研
究中应用.?H` 分子标记技术!对 $* 份样本之间的
遗传差异分析显示!多态带百分率为 ,#+*,d!说明
供试样本之间在 ]^.水平上具有较低的遗传变异!
这与无籽刺梨长期依靠无性繁殖扩繁相一致) Y`` (
B/]/软件分析显示!$* 个样本的平均遗传相似系
数为 #+*,- %) C`BZ.法进行聚类分析明显地将刺
梨和其他 $& 份无籽刺梨样本分成 " 组!且 $& 份样
本的遗传相似系数在 #+*, 以上)
目前! ]^.条形码技术已被广泛应用于物种的
鉴别研究) 唐先华等测定和分析了 % 个属的 种睡
莲类植物核核糖体 OJD 序列!并与 B<7L174 中提取
的相关序列进行了组合分析!初步获得了睡莲类植
物的 " 个OJD系统树*"*+ ) 王晓锋等对黄杨属 $& 种
植物的OJD序列比较发现!珍珠黄杨并非瓜子黄杨
的变种!而是属于姊妹种!并且发现珍珠黄杨与大花
黄杨的亲缘关系相对较近*,#+ ) H1;15<等比较了中
美洲,北美洲 " 个生物多样性密集区域 $ -## 个植物
样本的 & 种 ]^.条形码候选片段!发现 01FG在单
个片段中的识别率最高!建议将其作为开花植物的
通用 ]^.条形码*,$+ ) a17M等利用OJD,01FG,I@9H,
FI7Q(WK@.共 ) 种候选 ]^.条形码片段对中国省藤
属 $% 个种及变种进行了鉴定分析!结果表明!FI7Q(
WK@.序列片段拥有较高的变异信息!物种识别率为
%-+,d!若把南巴省藤的变种和云南省藤归为一个
种!其识别率则达到 *$+d*,"+ ) 由此可见!植物基
因组的复杂性使得同一个 ]^.条形码候选序列对
不同物种的鉴定效果具有较大差异) 因此!在对植
物条形码的研究中!除了对单片段的评估外!很多研
究者相继提出了不同的片段组合方案*,,+ ) H26 等对
欧亚地区红豆杉的 % 种 ]^.条形码及其片段组合
进行了比较!发现 FI7H(?和 OJD 无论单片段还是其
片段组合均能很好地对红豆杉属植物进行识别*,)+ )
j;17M等利用FI7D(FI7B和 7E;?片段对茄属 )& 个种
# 份个体进行鉴定!成功识别率达 $## d*,%+ ) 本研
究 ]^.条形码分析结果显示OJD无变异位点) 将 )
种叶绿体序列片段 " WK@.(FI7Q,1FW?(1FWQ,WK@O(WK(
@G,FI7H(?#进行合并后以联合序列作为数据分析!
$* 份样本中除刺梨外!其他 $& 份样本之间的遗传
距离均为 #!而刺梨与他们的遗传距离均为 #+##% &)
本研究基于 .?H` 分子标记和 ]^.条形码对
无籽刺梨的鉴定结果一致!无籽刺梨与刺梨是独立
的 " 个种!兴仁县无籽刺梨,安顺市光枝无籽刺梨为
同一个种) 研究结果与邓朝义等从形态学上对贵州
特有种子植物无籽刺梨的分类学订正结果一致!将
光枝无籽刺梨与无籽刺梨归并为一类*,+ ) 文晓鹏等
对刺梨及部分近缘种进行形态学性状和N.`^标记
分析研究!也表明刺梨与无籽刺梨是独立的 " 种!非
近缘种*-+ ) 本研究应用分子标记和 ]^.条形码技
术对无籽刺梨相似种进行鉴定!从分子水平和基因
水平上订正了 "##& 年安明态等*+关于光枝无籽刺
梨是一个区别于无籽刺梨的新种论述!且提出了该
种与刺梨并非近缘种的证明!遗传相似系数仅为
#"$
第 $ 期 李!旦等$基于.?H` 分子标记和 ]^.条形码对无籽刺梨的鉴定
#e,) 研究结果明确了无籽刺梨的系统地位!从分
子水平和基因水平上解决无籽刺梨的分类分歧!为
今后开展无籽刺梨种质资源的收集,保存,开发和应
用等提供了科学理论依据)
参考文献!
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