全 文 ：林业科学研究摇 圆园员源袁圆苑渊员冤院园愿圆 园愿缘云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员源冤园员鄄园园愿圆鄄园源
白蜡虫脂酰辅酶 粤还原酶多克隆抗体的制备
胡艳红员袁圆袁 杨摇 璞圆袁 陈晓鸣圆鄢袁 徐冬丽圆
渊员援南京林业大学袁江苏 南京摇 圆员园园猿苑曰 圆援中国林业科学研究院资源昆虫研究所袁云南 昆明摇 远缘园圆圆源冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园愿鄄圆怨
基金项目院 林业公益性行业科研专项经费项目渊圆园员圆园源远园圆冤
作者简介院 胡艳红渊员怨苑缘要冤袁女袁山西交城人袁讲师袁主要从事昆虫学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院澡赠澡员圆圆远皂皂岳 员远猿援 糟燥皂
鄢 通讯作者
摘要院白蜡虫脂酰辅酶 粤还原酶渊云粤砸员冤参与了体表蜡泌物的形成过程袁为了进一步研究 云粤砸员 的功能袁通过预测分
析基因 枣葬则员 编码的蛋白结构袁选取亲水性强尧特异性好的一段合成多肽作为抗原肽袁免疫新西兰大白兔制备多克隆
抗体袁并以 月悦粤蛋白浓度试剂盒测定抗体浓度袁通过 杂阅杂鄄孕粤郧耘考马斯亮蓝染色观察纯化抗体的纯度袁以 耘蕴陨杂粤检
测抗体效价遥 结果表明袁纯化所得的多克隆抗体纯度高袁抗体浓度 园援 苑 皂早窑皂蕴 原员袁抗体效价为 员院缘员圆 园园园袁为后续
云粤砸基因功能的研究奠定基础遥
关键词院白蜡虫曰 脂酰辅酶 粤还原酶渊云粤砸员冤曰多克隆抗体
中图分类号院杂愿怨怨援 员 文献标识码院粤
孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 孕燥造赠糟造燥灶葬造 粤灶贼蚤遭燥凿赠 葬早葬蚤灶泽贼 耘则蚤糟藻则怎泽 责藻造葬 云粤砸员 孕藻责贼蚤凿藻
匀哉 再葬灶鄄澡燥灶早员袁圆袁 再粤晕郧 孕怎圆袁 悦匀耘晕 载蚤葬燥鄄皂蚤灶早圆袁 载哉 阅燥灶早鄄造蚤圆
渊员援 悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼 砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁 晕葬灶躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 晕葬灶躁蚤灶早摇 圆员园园猿苑袁 允蚤葬灶早泽怎袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 砸藻泽燥怎则糟藻泽 陨灶泽藻糟贼泽袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 运怎灶皂蚤灶早摇 远缘园圆圆源袁 再怎灶灶葬灶袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 云葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤 则藻凿怎糟贼葬泽藻渊云粤砸员冤责造葬赠泽 葬 噪藻赠 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 憎澡蚤贼藻 憎葬曾 泽藻糟则藻贼蚤燥灶 燥枣 耘则蚤糟藻则怎泽 责藻造葬援 陨灶 责则藻泽藻灶贼
泽贼怎凿赠袁 贼澡藻 葬则贼蚤枣蚤糟蚤葬造造赠 泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿 责燥造赠责藻责贼蚤凿藻 燥枣 耘援 责藻造葬 云粤砸员 憎葬泽 怎泽藻凿 葬泽 葬灶贼蚤早藻灶 枣燥则 贼澡藻 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 责燥造赠糟造燥灶葬造
葬灶贼蚤遭燥凿赠援 栽澡藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽 憎藻则藻 责怎则蚤枣蚤藻凿 遭赠 怎泽蚤灶早 葬糟贼蚤增葬贼藻凿 泽藻责澡葬则燥泽藻 葬灶凿 葬灶葬造赠扎藻凿 遭赠 杂阅杂鄄孕粤郧耘援 栽澡藻 糟燥灶鄄
糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 贼蚤贼藻则 燥枣 贼澡藻 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 憎藻则藻 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 遭赠 月悦粤 运陨栽 葬灶凿 耘蕴陨杂粤 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶鄄
凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 贼蚤贼藻则 渊员院缘员圆园园园冤 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 渊园援 苑 皂早窑皂蕴 原员冤 燥枣 葬灶贼蚤鄄云粤砸员 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 糟燥怎造凿
皂藻藻贼 贼澡藻 则藻择怎蚤则藻皂藻灶贼泽 枣燥则 造葬贼藻则 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽袁 葬灶凿 贼澡藻 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠 糟燥怎造凿 遭藻 怎泽藻凿 贼燥 枣怎则贼澡藻则 泽贼怎凿赠 贼澡藻 造燥糟葬贼蚤燥灶
燥枣 云粤砸员 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 贼澡藻 造葬贼藻则 则藻泽藻葬则糟澡援
运藻赠 憎燥则凿泽院 耘则蚤糟藻则怎泽 责藻造葬曰枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤则藻凿怎糟贼葬泽藻渊云粤砸员冤曰 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼蚤遭燥凿赠
白蜡虫渊耘则蚤糟藻则怎泽 责藻造葬 悦澡葬增葬灶灶藻泽泽冤是我国特有的
传统养殖昆虫袁以分泌性质优异的虫白蜡而倍受关
注遥 虫白蜡是以高级饱和一元酸和高级饱和一元醇
为主要成分的脂类物质袁广泛应用于医药尧食品尧工
业等行业咱员暂 遥 生物中蜡酯的合成主要通过酰基还原
途径咱圆 原 远暂 袁即脂酰辅酶 粤渊枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤冤在脂酰辅酶
粤还原酶渊 枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤 则藻凿怎糟贼葬泽藻袁 云粤砸冤的作用下
还原成脂肪醇袁 脂肪醇和脂酰辅酶 粤 在蜡酯合酶
渊憎葬曾 泽赠灶贼澡葬泽藻袁 宰杂冤的作用下生成酯遥 目前袁关于参
与蜡酯合成的基因主要在小鼠渊酝怎泽 皂怎泽糟怎造怎泽 蕴援 冤尧
加州西蒙得木渊 杂蚤皂皂燥灶凿泽蚤葬 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 渊 蕴蚤灶噪冤 悦援 运援
杂糟澡灶藻蚤凿援 冤尧 拟 南 芥 渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊 蕴援 冤
匀藻赠灶澡援 冤等动植物的皮脂尧角质层蜡中有所研
究咱圆袁缘 原 苑暂 袁但在昆虫中无相关报道遥 这些已报道的参
与蜡酯合成的关键基因脂酰辅酶 粤还原酶基因 枣葬则袁
主要是通过基因克隆尧生物信息学技术分析基因序
列结构袁推测基因编码的蛋白结构以及系统发育曰利
用 砸栽鄄孕悦砸 法分析相关基因 皂砸晕粤 转录情况曰利用
第 员 期 胡艳红等院白蜡虫脂酰辅酶 粤还原酶多克隆抗体的制备
特定分子标签通过 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 技术尧基因与分
子标签融合表达技术研究基因编码的蛋白表达量或
组织或亚细胞定位等曰在植物拟南芥等中利用基因
突变技术反向研究相关基因的功能咱愿暂 曰少数研究通
过测定相关基因编码的蛋白质的生化特征说明其功
能咱猿袁怨暂 袁而此类基因研究中对于特异性抗体技术的
利用非常有限袁仅 悦澡藻灶早 等人利用序列中插入表达
标签从而特异识别该标签的方法将研究基因进行了
体内定位咱圆暂 遥
白蜡虫 枣葬则员 基因是与泌蜡密切相关的基因之
一咱员园暂 遥 本课题组经过大量的前期研究袁已经克隆得
到了 枣葬则员 全长基因遥 为了进一步研究该基因的功
能袁根据蛋白序列软件预测结果袁考虑其结构及亲水
性等特点袁拟选取该基因部分序列合成多肽作为抗
原肽袁免疫新西兰大白兔获得特异性强的多克隆抗
体袁为研究该基因的蛋白表达动态和表达产物定位
等研究提供必要的基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 主要试剂
杂阅杂 原 孕粤郧耘蛋白质分子质量标准渊购自 栽葬噪葬则葬
公司冤袁陨孕栽郧尧栽则蚤泽尧月蚤泽尧粤则糟 渊购自 杂蚤早皂葬 公司冤袁 杂阅杂
渊购自 粤皂则藻泽糟燥 公司冤袁 栽耘酝耘阅渊购自 月陨韵鄄砸粤阅 公
司冤袁园援 圆圆 滋皂无菌滤器和透析袋渊购自 酝蚤造造蚤责燥则藻 公
司冤袁 考马斯亮蓝 砸鄄圆缘园尧冰醋酸尧乙腈等试剂均为国
产分析纯或色谱纯遥
员援 圆摇 试验方法
员援 圆援 员摇 多肽合成与纯度测定摇 应用 孕则燥贼孕葬则葬皂渊澡贼鄄
贼责院 辕 辕 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责则燥贼责葬则葬皂援 澡贼皂冤尧 孕藻责贼蚤凿藻酝葬泽泽
渊 澡贼贼责院 辕 辕 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责藻责贼蚤凿藻鄄皂葬泽泽援 澡贼皂造 冤尧
孕则燥贼杂糟葬造藻 渊 澡贼贼责院 辕 辕 糟葬援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责则燥贼泽糟葬造藻援 澡贼鄄
皂造冤等多种蛋白质结构功能分析软件袁综合考虑蛋白
质的二级结构尧抗原性尧亲疏水性尧可及性及柔韧性
等指标选择一段特异性强的多肽序列渊第 缘缘 原 远怨 个
氨基酸冤作为抗原区用于抗体制备袁送南京钟鼎生物
技术公司合成该多肽作为抗原肽袁合成的多肽以
匀孕蕴悦和 酝杂分析其纯度与分子量遥 匀孕蕴悦分析所用
色谱柱为 运则燥皂葬泽蚤造 员园园鄄缘悦员愿袁源援 远 皂皂 伊 圆缘园 皂皂袁缘
皂蚤糟则燥灶袁进样速度为 员 皂蕴窑皂蚤灶 原员袁样品进样量为 员园
滋蕴袁检测波长 圆圆园 灶皂袁保留时间为 猿园 皂蚤灶袁流动相为
乙腈渊含 园援 员豫三氟乙酸 栽云粤冤袁流速为 员援 园 皂蕴窑
皂蚤灶 原员袁记录检测峰面积遥 以电子喷雾电离质谱测量
法 渊 藻造藻糟贼则燥泽责则葬赠 蚤燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠袁 耘杂陨鄄
酝杂冤分析合成多肽的质量袁流动相为乙腈渊含 园援 员豫
甲酸冤袁流速为 园援 圆 皂蕴窑皂蚤灶 原员袁进样量为 员园 滋蕴袁质
谱仪以正离子状态采样遥
员援 圆援 圆摇 动物免疫摇 合成的多肽 孕园员猿 偶联匙孔血蓝
蛋白渊运蕴匀冤遥 将偶联产物 孕园员猿鄄运蕴匀 免疫成年健康
的新西兰大白兔渊体重约 圆援 缘 噪早冤遥 每次取 缘园园 滋早
的 孕园员猿鄄运蕴匀与等量弗氏完全佐剂乳化后袁多点注
射白兔背部皮下袁圆 猿 周免疫 员 次袁共免疫 源 次袁最
后 员 次免疫后 苑 凿采血袁低温离心分离血清袁 通过间
接 耘蕴陨杂粤 方法确定抗血清的效价袁待效价大于 员院
缘园 园园园 时进行采血袁低温离心分离制备抗血清袁保存
于 原愿园益备用遥
员援 圆援 猿摇 抗体纯化摇 将合成的多肽与溴化氢活化的
琼脂糖介质偶联制备成抗原亲和纯化层析柱袁将所
得抗血清与 孕月杂渊责匀 苑援 源冤 等量混合后缓慢过柱袁待
抗原抗体结合后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱袁即得到
所需纯化抗体袁立即在 孕月杂 中进行 源益透析过夜袁利
用 杂阅杂鄄孕粤郧耘检测所得纯化抗体的纯度遥
员援 圆援 源摇 抗体效价与浓度测定 摇 通过 耘蕴陨杂粤 检测
纯化抗体的效价袁用合成的抗原肽作为检测抗原袁
以免疫前血清为阴性对照袁按常规间接 耘蕴陨杂粤 操
作步骤袁采用方阵滴度法确定抗原最佳包被浓度袁
试验重复 猿 次袁建立用于抗 云粤砸员 蛋白的多克隆抗
体效价检测的间接 耘蕴陨杂粤 方法遥 以 责匀苑援 源 的磷酸
盐缓冲液倍比稀释抗原袁栽酝月 底物显色遥 在 源缘园
灶皂 下测定各孔 韵阅 值袁以样品 韵阅 值与阴性对照
韵阅值的比值不小于 圆援 员 作为判断为阳性或确定效
价的临界点遥
抗体浓度的测定参照 月悦粤 蛋白浓度测定方法
略有修改遥 主要操作流程有院以 孕月杂渊责匀苑援 圆冤缓冲
液稀释 月杂粤至 园援 缘 皂早窑皂蕴 原员作为蛋白标准品袁将标
准品按 园尧圆尧源尧愿尧员远 加到 怨远 孔板的标准品孔中袁以
孕月杂溶液补足至 圆园 滋蕴曰各孔加入 圆园园 滋蕴 月悦粤 工作
液袁室温放置 远园 皂蚤灶曰酶标仪测定 粤缘远圆处的吸光值袁
绘制标准直线遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 合成多肽
根据软件预测结果袁选取可及性强袁亲水性好的
部分序列 栽砸耘运运郧运阅孕运耘砸云运悦 合成多肽袁以 匀孕蕴悦
检测多肽纯度遥 由图 员 显示袁色谱峰单一袁基线平
稳袁按照面积归一法计算所测物质纯度袁合成的多肽
纯度大于 愿缘豫 遥 在设定的色谱条件下袁噪声低袁基
猿愿
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
线稳定遥 梯度洗脱结果表明袁不同保留时间内袁各峰
面积约分别占 员援 愿豫 尧园援 源豫 尧员援 远豫 尧怨源援 远豫 尧员援 远豫 袁
样品保留时间约为 员猿援 苑苑圆 皂蚤灶 时袁峰面积达 猿 猿苑员
愿缘缘渊图 员冤遥 酝杂 分析表明袁多肽的相对分子量为 员
愿缘园援 员愿袁与所选氨基酸序列的理论分子量一致渊图
圆冤遥
圆援 圆摇 抗体纯度鉴定
经抗原亲和纯化层析柱纯化后的抗体于 孕月杂中
低温过夜透析后袁进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘袁考马斯亮蓝染
色袁多次更换脱色液至背景清晰遥 抗体纯化后纯度 图 员摇 匀孕蕴悦分析合成的多肽
图 圆摇 酝杂分析合成的多肽
高袁在约 缘园 噪阅葬 和 圆缘 噪阅葬 处可见清晰的条带袁分别
与预期的抗体重链尧轻链大小相符渊图 猿冤遥
图 猿摇 杂阅杂鄄孕粤郧耘检测纯化的抗体纯度
圆援 猿摇 纯化抗体的效价与浓度测定
间接 耘蕴陨杂粤法所得结果表明袁所得抗血清效价为
员院缘员圆 园园园渊表 员冤袁表明该抗体具有较高的免疫原性遥
蛋白浓度测定结果显示抗体浓度达园援 苑 皂早窑皂蕴 原员遥
表 员摇 枣葬则员 多克隆抗体效价测定
稀释倍数 韵阅 样品 韵阅 辕对照 韵阅
缘园园 圆援 苑愿怨 员愿援 缘怨猿
员 园园园 圆援 苑圆猿 员愿援 员缘猿
圆 园园园 圆援 远源苑 员苑援 远源苑
源 园园园 圆援 远猿园 员苑援 缘猿猿
愿 园园园 圆援 源愿愿 员远援 缘愿苑
员远 园园园 圆援 源圆员 员远援 员源园
猿圆 园园园 圆援 猿缘缘 员缘援 苑园园
远源 园园园 圆援 员缘猿 员源援 猿缘猿
员圆愿 园园园 员援 愿远远 员圆援 源源园
圆缘远 园园园 员援 缘园愿 员园援 园缘猿
缘员圆 园园园 员援 园缘源 苑援 园圆苑
糟噪 园援 员缘园
源愿
第 员 期 胡艳红等院白蜡虫脂酰辅酶 粤还原酶多克隆抗体的制备
猿摇 讨论
抗体是可与相应抗原发生特异性结合的免疫球
蛋白遥 人工合成的抗原所产生的抗体与抗原表位结
合的特性可能不同于天然抗原袁但制备方法简便等
特点使其广泛应用于蛋白抗体的制备遥 马颖哲等人
在研究蛋白抗体的制备比较时发现袁制备的人 责陨悦造灶
蛋白的肽段血清抗体具有高特异性的优点咱员员暂 遥 朱
峰利用大鼠 粤栽员粤 肽段制备的抗 粤栽砸员圆员愿员 肽段抗
体袁免疫印迹结果与免疫荧光实验均显示肽段抗体
能与 灾杂酝悦细胞膜上的 粤栽员粤 受体特异性结合咱员圆暂 遥
本研究利用生物信息学方法分析了 枣葬则员 基因编码的
蛋白结构袁人工合成抗原肽制备得到兔抗白蜡虫
云粤砸员 多克隆抗体遥 该实验策略有效地避开了较大
的 云粤砸员 蛋白难于在大肠杆菌中高效表达的困境袁
可以在较短时间内获得抗原肽用于免疫动物遥
在众多昆虫中袁针对不同目的蛋白的单克隆抗
体或多克隆抗体研究与应用已获得长足发展袁利用
抗体建立了相关免疫学检测方法咱员猿 原 员怨暂 袁成功应用于
目的基因功能的研究遥 白蜡虫是重要的资源昆虫袁
雄性二龄幼虫分泌了大量性质优异的虫白蜡袁但目
前对于泌蜡机制尚缺乏深入的认识遥 本研究制备得
到的多克隆抗体经 耘蕴陨杂粤 测定结果表明效价高袁
杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳结果表明抗体纯度较高遥 该抗体是
否具有优良的特异性袁能否用于研究白蜡虫 云粤砸员
蛋白表达的组织部位与表达量等信息袁有待于在今
后研究工作中逐步证实遥
参考文献院
咱员暂 陈晓鸣袁冯颖援资源昆虫学概论咱酝暂援北京院科学出版社袁圆园园怨
咱圆暂 悦澡藻灶早 允 月袁 砸怎泽泽藻造造 阅 宰援 酝葬皂皂葬造蚤葬灶 憎葬曾 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽援 陨陨援 耘曾责则藻泽鄄
泽蚤燥灶 糟造燥灶蚤灶早 燥枣 憎葬曾 泽赠灶贼澡葬泽藻 糟阅晕粤泽 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 皂藻皂遭藻则 燥枣 贼澡藻 葬糟赠造鄄
贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 藻灶扎赠皂藻 枣葬皂蚤造赠咱允暂援 允 月蚤燥造 悦澡藻皂袁 圆园园源袁圆苑怨渊猿远冤院 猿苑苑怨愿
原 猿苑愿园苑
咱猿暂 悦澡藻灶早 允 月袁 砸怎泽泽藻造造 阅 宰援 酝葬皂皂葬造蚤葬灶 憎葬曾 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽援 陨援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤鄄
糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼憎燥 枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄糟燥藻灶扎赠皂藻 粤 则藻凿怎糟贼葬泽藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽怎遭泽贼则葬贼藻
泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼蚤藻泽 葬灶凿 贼蚤泽泽怎藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶泽 咱 允暂 援 允 月蚤燥造 悦澡藻皂 圆园园源袁圆苑怨
渊猿远冤院 猿苑苑愿怨 原 猿苑苑怨苑
咱源暂 匀藻造造藻灶遭则葬灶凿 允袁 月蚤藻泽贼藻则 耘 酝袁 郧则怎遭藻则 允袁 藻贼 葬造援 云葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤 则藻凿怎糟鄄
贼葬泽藻泽 燥枣 遭蚤则凿泽咱允暂援 月酝悦 月蚤燥糟澡藻皂袁 圆园员员袁 员圆渊远源冤院员 原 员圆
咱缘暂 酝藻贼扎 允 郧袁 孕燥造造葬则凿 酝 砸袁 粤灶凿藻则泽燥灶 蕴袁 藻贼 葬造援 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 躁燥躁燥遭葬
藻皂遭则赠燥 枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄糟燥藻灶扎赠皂藻 粤 则藻凿怎糟贼葬泽藻 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 蚤贼泽 糟阅晕粤
蚤灶 澡蚤早澡 藻则怎糟蚤糟 葬糟蚤凿 则葬责藻泽藻藻凿 咱 允暂援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园园袁员圆圆院 远猿缘
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咱远暂 蕴葬则凿蚤扎葬遭葬造 运 阅袁 酝藻贼扎 允 郧袁 杂葬噪葬皂燥贼燥 栽袁 藻贼 葬造援 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 躁燥躁燥鄄
遭葬 藻皂遭则赠燥 憎葬曾 泽赠灶贼澡葬泽藻袁 糟造燥灶蚤灶早 燥枣 蚤贼泽 糟阅晕粤袁 葬灶凿 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣
澡蚤早澡 造藻增藻造泽 燥枣 憎葬曾 蚤灶 泽藻藻凿泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽鄄
蚤燥造袁 圆园园园袁 员圆圆渊猿冤院 远源缘 原 远缘缘
咱苑暂 运造赠责蚤灶葬 晕袁 匀葬灶泽燥灶 杂 云援 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 憎葬曾 泽赠灶贼澡葬泽藻 早藻灶藻
澡燥皂燥造燥早怎藻泽 泽澡燥憎 凿蚤增藻则泽藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶泽 贼澡葬贼 泽怎早早藻泽贼 葬 泽责藻糟蚤葬造鄄
蚤扎藻凿 则燥造藻 枣燥则 贼澡藻泽藻 早藻灶藻泽 蚤灶 则藻责则燥凿怎糟贼蚤增藻 燥则早葬灶泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁
圆园园愿袁员苑缘院 猿员圆 原 猿圆园
咱愿暂 韵憎藻灶 砸燥憎造葬灶凿袁 在澡藻灶早 匀 匝袁 杂澡藻造造藻赠 砸援 匀藻责憎燥则贼澡袁 孕葬贼则蚤糟蚤葬 蕴葬皂袁
砸藻蚤灶澡葬则凿 允藻贼贼藻则袁 葬灶凿 蕴躁藻则噪葬 运怎灶泽贼袁 悦耘砸源 耘灶糟燥凿藻泽 葬灶 粤造糟燥澡燥造鄄
云燥则皂蚤灶早 云葬贼贼赠 粤糟赠造鄄悦燥藻灶扎赠皂藻粤 砸藻凿怎糟贼葬泽藻 陨灶增燥造增藻凿 蚤灶 悦怎贼蚤糟怎造葬则 宰葬曾
孕则燥凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁员源圆渊猿冤院愿远远
原 愿苑苑
咱怨暂 栽藻藻则葬憎葬灶蚤糟澡责葬灶 孕袁 砸燥遭藻则贼泽燥灶 粤 允袁 匝蚤怎 载援 粤 枣葬贼贼赠 葬糟赠造鄄悦燥粤 则藻凿怎糟鄄
贼葬泽藻 澡蚤早澡造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 贼澡藻 澡藻葬凿 燥枣 澡燥灶藻赠 遭藻藻 渊粤责蚤泽 皂藻造造蚤枣藻则葬冤 蚤灶鄄
增燥造增藻泽 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 燥枣 葬 憎蚤凿藻 则葬灶早藻 燥枣 葬造蚤责澡葬贼蚤糟 枣葬贼贼赠 葬造糟燥澡燥造泽咱允暂 援 陨灶鄄
泽藻糟贼 月蚤燥糟澡藻皂 酝燥造藻糟袁 圆园员园袁 源园院 远源员 原 怨
咱员园暂 再葬灶早 孕袁 在澡怎 允 再袁 郧燥灶早 在 允袁 藻贼 葬造援 栽则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻
悦澡蚤灶藻泽藻 憎澡蚤贼藻 憎葬曾 泽糟葬造藻 耘则蚤糟藻则怎泽 责藻造葬 憎蚤贼澡 枣燥糟怎泽 燥灶 早藻灶藻泽 蚤灶增燥造增藻凿
蚤灶 憎葬曾 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽咱允暂援 孕蕴燥杂 韵晕耘袁 圆园员圆曰 苑渊源冤院 藻猿缘苑员怨
咱员员暂 马颖哲袁 程光惠袁 张桂荣袁等援 责陨悦造灶 蛋白肽段血清抗体和单克
隆抗体的制备咱允暂援吉林大学学报袁圆园园缘袁猿院 源苑圆 原 源苑猿
咱员圆暂 朱摇 峰援抗 粤栽赃员 受体胞外肽段抗体的效应与 粤栽赃员 受体降压
疫苗研究咱阅暂援武汉院华中科技大学袁圆园园远院缘缘 原 苑员
咱员猿暂 张摇 晴袁汪晓纯袁金丽华援 果蝇 责燥造赠糟燥皂遭造蚤噪藻 蛋白多克隆抗体的
制备及纯化咱允暂 援免疫学杂志袁圆园员圆袁圆愿渊愿冤院远缘远 原 远远员
咱员源暂 郝阳光袁 张摇 晴袁 金丽华援 果蝇 躁怎皂藻葬怎曾 蛋白多克隆抗体的制
备及鉴定咱允暂 援免疫学杂志袁 圆园员员袁 圆苑渊员圆冤院 员园猿愿 原 员园源圆
咱员缘暂 马焕艳袁韩凤丽袁盛摇 洁袁等援家蚕 杂栽粤栽 基因的克隆尧表达及多
克隆抗体制备与组织表达差异分析咱 允暂援 中国蚕学会第六届青
年学术研讨会论文集渊员冤袁圆园园怨院员圆缘 原 员猿圆
咱员远暂 李摇 坚袁刘摇 强袁王玉芹袁等援棉铃虫核型多角体病毒 燥则枣愿远 基因
的原核表达尧抗体制备与免疫印迹检测咱 允暂 援 微生物学通报袁
圆园员园袁猿苑渊员园冤院员源源苑 原 员源缘园
咱员苑暂 董胜张袁高秀云袁程正贤袁等援 蝶蛹金小蜂卵黄蛋白单克隆抗体
的制备及其应用方法的建立咱 允暂援 昆虫学报袁圆园园苑袁缘园渊怨冤院愿苑员
原 愿苑苑
咱员愿暂 徐摇 利援 棉铃虫核型多角体病毒 燥则枣愿园 多克隆抗体的制备咱 允暂 援
西北农业学报袁圆园员圆袁圆员渊源冤院员怨猿 原 员怨远
咱员怨暂 查宏贤袁 刘摇 罡袁 张摇 晨袁 等援家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂 源渊泽藻则鄄
责蚤灶鄄源冤的基因克隆尧原核表达和多克隆抗体制备咱 允暂援 昆虫学
报袁圆园员员袁 缘源 渊远冤院 远源圆 原 远源苑
缘愿