全 文 :书中国假俭草种质资源耐铝性变异分析
褚晓晴1,2,陈静波2,宗俊勤2,丁万文2,李珊2,蒋乔峰2,刘建秀2
(1.南京农业大学园艺学院,江苏 南京210095;2.江苏省中国科学院植物研究所,江苏 南京210014)
摘要:以美国引进的常用品种‘Common’假俭草和目前最耐铝的假俭草品种‘TifBlair’为对照品种,采用小容积营
养液培养法对选用来自中国13个省份的51份假俭草种质资源耐铝性进行评价。结果表明,1500μmol/L的铝
(AlCl3·6H2O)胁迫下假俭草种源间的生长存在显著差异,其中相对根系干重、相对地上部分干重、相对全株干重
的变异系数分别为20.55%,15.62%和15.52%。采用隶属函数值的方法对供试材料的耐铝性划分5个等级,处于
1~3级的(较耐铝种源)共21个,占总数的39.6%,处于第4级的(中间型)共19个,占总数的35.9%,处于第5级
的(铝敏感种源)共13个,占总数的24.5%。其中‘Common’假俭草和耐铝的 ‘TifBlair’假俭草属于中间类型,这
说明中国假俭草种源的耐铝性存在很大的开发潜力。
关键词:假俭草;耐铝性;变异分析
中图分类号:S32;Q945.78 文献标识码:A 文章编号:10045759(2012)03009907
据统计,全世界大约有40%的可耕地属酸性土壤[1]。在中国,酸性土壤的分布遍及14个省区,总面积达203
万hm2,约占全国耕地面积的21%[2]。由于红壤地中含大量的重金属元素,使一些牧草产生毒害而不能很好的
生长,从而限制了红壤丘陵山地作物的生长[3]。铝是世界上含量最丰富的金属元素之一,在酸性(pH≤5.5)条件
下,主要以Al3+形态存在,具有毒害作用,影响植物的生长发育[4]。因此,铝毒害是酸性土壤中限制作物生长的
主要因素[5]。
在世界很多地区,土壤酸化是草坪建植养护及牧草生产过程中的一个重要问题[6]。Baldwin等[7]研究了铝
胁迫对包括假俭草(犈狉犲犿狅犮犺犾狅犪狅狆犺犻狌狉狅犻犱犲狊)在内的10种暖季型草坪草生长的影响,其研究表明铝胁迫抑制了
大部分草坪草的生长和营养吸收。许多研究表明,不同种类的植物间或同种植物不同品种间的耐铝能力存在着
较大基因型差异[8]。
假俭草隶属于禾本科蜈蚣草属,是该属中唯一可以用作草坪草的多年生草本植物[9],是最重要的暖季型草坪
草之一[10],具有养护水平低、容易建植[11]、耐瘠薄、病虫害少[12]等优点,可用作庭院草坪、园林绿化及护坡草坪,
具有广阔的开发应用前景[13,14]。自从1916年FrankMeyer从我国西南把假俭草引进美国,假俭草在美国备受
重视,在其抗逆性、遗传多样性及育种方面都有大量的研究,且育出了‘Common’、‘TC319’、‘Oklawn’、‘Aucen
tennial’和‘TifBlair’等假俭草品种[15],其中‘TifBlair’是耐铝品种[16]。
刘建秀等[10]曾对我国假俭草种质资源进行过系统的调查、研究和总结,结果表明,假俭草分布于北纬19°1′
~35°1′,东经98°5′~122°1′的广阔范围内,广布于热带和亚热带,沿海地区甚至已到暖温带南缘。这表明我国假
俭草广泛分布于南方等酸性土壤和东部沿海等非酸性土壤区,不同分布区的资源耐铝性可能会存在较大的差异。
本试验以引进的在我国广泛应用的‘Common’假俭草和目前最耐铝的假俭草品种‘TifBlair’为对照,采用小
容积营养液培养法对选用来自中国13个省份的51份假俭草种质资源耐铝性进行评价,以研究不同种源间的耐
铝性差异,并从中筛选出耐铝性强的假俭草资源,为假俭草耐铝性的开发利用和进一步遗传改良提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 材料和预培养方法
试验材料为中国长江流域及其以南地区13个省的51份假俭草种质资源以及美国引进的耐铝品种‘Tif
第21卷 第3期
Vol.21,No.3
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA
99-105
2012年6月
收稿日期:20110520;改回日期:20110630
基金项目:国家自然基金项目(30972017)和江苏省科技厅基础设施项目(BM2009905)资助。
作者简介:褚晓晴(1988),女,山东枣庄人,在读硕士。Email:cxq.yx@163.com
通讯作者。Email:turfunit@yahoo.com.cn
Blair’和常用品种‘Common’假俭草,具体见表1。试验材料由刘建秀等[10]于1998-2001年收集,并种植于江苏
省中国科学院植物研究所草业中心试验地(北纬32°02′,东经118°28′,海拔30m)。材料均已成坪且生长良好。
2010年7月上旬取53份材料的匍匐茎,剪取生长发育一致、带有一个节的茎段插入有孔的泡沫板上,每个
泡沫板上有23个孔,每份材料插入2个泡沫板(即每份材料种46个茎段),泡沫板放在2.5L小桶(直径17cm、
高15cm)上,小桶内放入1/2Hoagland营养液[Hoagland营养液配方为:Ca(NO3)25mmol/L、KNO35
mmol/L、MgSO42mmol/L、KH2PO41mmol/L、EDTAFe286μmol/L、H3BO346μmol/L、MnCl29μmol/L、
ZnSO40.8μmol/L、CuSO40.3μmol/L、(NH4)6Mo7O240.1μL/L]2.2L,使茎段最下端的节点浸没在营养液
中。试验在温室内进行,整个试验期间营养液不间断地通气。
1.2 铝处理方法
预培养2周后,所有茎段均已生根。此时,将茎段小心从泡沫板的孔中取出,选取大小一致的小苗种入装有
石英砂(已用酸洗过)的250mL塑料杯(直径6.5cm、高9.5cm、杯底打孔)内,每杯3株。将种有小苗的塑料杯
悬挂于有孔的泡沫板上,泡沫板放在2.5L小桶上,每份材料每个处理单独种植1个小桶,以避免不同种源间根
系分泌物的干扰,每桶中种植4杯材料,即4个重复,每桶放2L1/4Hoagland营养液(为防止Al发生沉淀,将
KH2PO4 的浓度降至0.025mmol/L)。待所有材料种入杯中之后,缓苗4d再进行铝处理。
处理的铝(AlCl3·6H2O)浓度为1500μmol/L,对照不加铝
[17]。营养液用ddH2O配制,pH值控制在4.0±
0.2,处理时间为28d。处理期间每隔3d换1次营养液,每天用HCl和NaOH调节营养液pH值为4.0±0.2,
并检查水面高度,适当补充水分,使其营养液体积保持稳定。
1.3 数据收集和统计分析
1.3.1 地上部和地下部干重测定 处理结束后,将地上部分和根系分开,并用去离子水冲洗3次,105℃杀青15
min,80℃烘48h后称重。以每杯为单位计算每份种源的相对地上部分干重(relativeshootweight,RSW)(RSW
=铝处理地上部分干重/对照地上部分干重×100%)、相对根系干重(relativerootweight,RRW)(RRW=铝处
理根系干重/对照根系干重×100%)和相对全株干重(relativetotalweight,RTW)(RTW=铝处理全株干重/对
照全株干重×100%)。
1.3.2 耐铝隶属函数值 以耐铝毒隶属函数值为指标进行耐铝毒性分级。
犉犻=(犡犻犼-犡min)/(犡max-犡min)
式中,犡犻犼为第犻个材料第犼个性状的平均值,犡max和犡min分别为该性状各材料平均值中最大和最小值。犉犻为第犻
个材料该性状的隶属值。最后按材料将各性状的隶属值进行平均,得各材料的平均隶属函数值。
对RSW、RRW、RTW 进行方差分析,对方差分析结果差异显著的指标进行Duncan氏多重比较。数据分析
软件为Excel2003和SPSS13.0。
2 结果与分析
2.1 铝处理对假俭草不同种源生长的影响
不同种源的相对根系干重、相对地上部分干重、相对全株干重均存在显著差异(表1),其中,相对根系干重差
异最大,变异范围为34.55%~123.39%,变异系数为20.55%,其中E049和E141比对照分别增加了23.39%和
2.16%,而E149和E046分别减少了65.5%和54.4%,说明不同假俭草种源材料间耐铝性差异较大,铝胁迫对
非常耐铝的种源根系生长有明显促进;相对地上部分干重变异范围为34.97%~67.68%,变异系数为15.62%;
相对全株干重变异范围为36.50%~72.84%,变异系数为15.52%。其中除了E049和E141相对根系干重分别
增加23.39%和2.16%,所有种源材料RRW、RSW 和RTW 均显著减小,其中耐铝品种 ‘TifBlair’的RRW、
RSW、RTW 分别减少35.59%,44.53%和48.45%,‘Common’假俭草RRW、RSW和RTW分别减少45.27%,
33.12%和47.27%。这说明铝处理对假俭草3个生物量指标都有较显著的影响。
对相对根系干重、相对地上部分干重、相对全株干重与耐铝隶属函数值进行相关分析,结果表明,这3个指标
与耐铝隶属函数值的相关系数分别为0.797,0.963,0.987,均达到了极显著正相关水平,表明这3个指标均可用
于判断假俭草种质资源受铝毒害的情况。
001 ACTAPRATACULTURAESINICA(2012) Vol.21,No.3
表1 铝处理对53份假俭草相对生长参数的影响及其隶属函数值
犜犪犫犾犲1 犚犲犾犪狋犻狏犲犵狉狅狑狋犺犻狀犱犲狓狅犳53犪犮犮犲狊狊犻狅狀狊犪狀犱犮狌犾狋犻狏犪狉狊狋狉犲犪狋犲犱狑犻狋犺犪犾狌犿犻狀狌犿
犪狀犱狋犺犲犿犲犿犫犲狉狊犺犻狆犻狀犱犲狓狏犪犾狌犲狅犳犲犪犮犺犪犮犮犲狊狊犻狅狀
材料
Accession
采样地
Colectingsite
相对根系干重
Relativerootmass(%)
相对地上部分干重
Relativeshootmass(%)
相对全株干重
Relativetotalbiomass(%)
隶属函数值(FAi)
Membershipindexvalue
E049 福建Fujian 123.39a 67.60a 72.84a 0.9992
E105 湖南 Hunan 94.21bc 67.68a 69.40ab 0.8589
E132 广东Guangdong 88.62b~d 64.93ab 66.95a~c 0.7875
E041 广西Guangxi 94.10bc 63.36a~d 65.79a~e 0.7814
E028 安徽Anhui 82.76b~g 64.88ab 66.23a~d 0.7585
E075 湖南 Hunan 76.32b~h 63.50a~g 65.17a~f 0.7105
E119 江苏Jiangsu 83.51b~g 61.87a~e 64.00a~g 0.7100
E139 贵州Guizhou 75.42b~i 60.92a~e 62.88a~h 0.6598
E034 安徽Anhui 68.88c~k 62.43a~e 62.97a~h 0.6514
E144 河南 Henan 82.24b~g 58.42a~f 60.36a~i 0.6368
E025 江苏Jiangsu 79.99b~g 58.15a~g 60.09a~i 0.6231
E113 四川Sichuan 77.72b~h 58.52a~f 60.04a~i 0.6179
E053 海南 Hainan 86.61b~e 53.88a~h 56.34a~j 0.5700
E118 贵州Guizhou 79.47b~g 54.51a~h 57.08a~j 0.5564
E141 安徽Anhui 102.16ab 49.21b~i 52.57b~k 0.5462
E042 安徽Anhui 83.60b~g 53.54a~h 55.26a~j 0.5453
E060 广东Guangdong 82.47b~g 53.54a~h 55.68a~j 0.5450
E115 湖南 Hunan 88.37b~d 51.29a~i 54.20b~k 0.5305
E061 广东Guangdong 84.72b~f 52.30a~i 54.11b~k 0.5264
E018 浙江Zhejiang 66.68c~k 55.61a~h 56.92a~j 0.5182
E127 湖南 Hunan 59.57e~l 57.27a~h 57.43a~j 0.5131
E091 重庆Chongqing 79.89b~g 51.96a~i 54.92a~j 0.5122
E054 广东Guangdong 88.08b~d 50.42a~i 52.64b~k 0.5063
E130 湖南 Hunan 71.78c~k 53.55a~h 55.09a~j 0.4996
TifBlair 美国 America 64.41d~k 54.73a~h 55.47a~j 0.4874
E017 浙江Zhejiang 73.06c~j 51.24a~i 52.45b~k 0.4566
E088 四川Sichuan 72.99c~j 50.71a~i 52.56b~k 0.4520
Common 美国 America 66.88c~k 51.55a~i 52.73b~k 0.4391
E094 河南 Henan 79.12b~h 48.35b~i 50.75c~k 0.4343
E024 江苏Jiangsu 78.48b~h 48.23b~i 50.46c~k 0.4280
E188 安徽Anhui 68.93c~k 50.16a~i 51.71b~k 0.4233
E038 安徽Anhui 67.30c~k 50.42a~i 51.86b~k 0.4212
E092 重庆Chongqing 65.77d~k 50.24a~i 51.73b~k 0.4124
E058 广东Guangdong 74.83c~j 47.96b~i 50.53c~k 0.4122
E114 湖南 Hunan 77.18b~h 46.36c~i 50.42c~k 0.4037
E004 福建Fujian 77.78b~h 46.68b~i 48.65c~k 0.3930
E098 河南 Henan 76.79b~h 45.78c~i 48.14d~k 0.3754
E086 贵州Guizhou 70.72c~k 45.56c~i 47.52e~k 0.3447
E149 河南 Henan 34.55l 53.66a~h 51.34b~k 0.3266
101第21卷第3期 草业学报2012年
续表1 Continued
材料
Accession
采样地
Colectingsite
相对根系干重
Relativerootmass(%)
相对地上部分干重
Relativeshootmass(%)
相对全株干重
Relativetotalbiomass(%)
隶属函数值(FAi)
Membershipindexvalue
E106 安徽Anhui 70.79c~k 44.28e~i 45.98g~k 0.3178
E015 江西Jiangxi 67.58c~k 44.65e~i 46.31g~k 0.3125
E145 河南 Henan 58.24f~l 46.68b~i 47.87d~k 0.3125
E128 湖南 Hunan 63.60d~k 45.11d~i 46.92f~k 0.3079
E099 安徽Anhui 57.67f~l 45.91c~i 47.24f~k 0.2967
E029 安徽Anhui 66.97c~k 41.01f~i 42.56i~k 0.2388
E026 江苏Jiangsu 62.70d~k 41.17f~i 43.19i~k 0.2302
E191 湖南 Hunan 48.02j~l 44.13e~i 44.54h~k 0.2177
E096 河南 Henan 65.07d~k 38.92hi 40.83jk 0.1944
E037 江苏Jiangsu 59.56e~l 39.97g~i 41.18jk 0.1878
E006 江苏Jiangsu 56.51g~l 39.00hi 39.96jk 0.1552
E179 安徽Anhui 48.33i~l 39.87g~i 40.74jk 0.1405
E046 江苏Jiangsu 45.65kl 39.86g~i 40.37jk 0.1270
E045 安徽Anhui 51.69h~l 34.97i 36.50k 0.0643
变异范围
Rangeofvariation(%)
34.55~123.39 34.97~67.68 36.50~72.84 0.0643~0.9992
犆犞 (%) 20.55 15.62 15.52 42.85
犉值Value 3.726 2.428 2.529
注:同列不同字母表示在0.05水平上差异显著; 差异显著(犘<0.05);差异极显著(犘<0.01)。
Note:Valueswithinacolumnfolowedbythedifferentlettersaresignificantdifferenceatthe5%levelofprobabilitybasedonDuncan’smultiple
rangetest;significantdifferenceat犘<0.05;significantdifferenceat犘<0.01.
2.2 聚类分析
以相对根系干重、相对地上部分干重、相对全株干重为指标,对53份假俭草进行聚类分析,结果见图1。从
聚类分析的结果看,在欧氏距离10.0处,将53份假俭草分为三大类,第I大类只包括E049,占供试材料的
1.88%,耐铝隶属函数值为0.9992,说明E049的耐铝性明显强于其他材料,非常耐铝。第II大类共13份材料,
占供试材料的24.53%,此13份材料的耐铝隶属函数值为0.0643~0.3266,平均值为0.2153,说明它们的耐铝
性较弱。第III大类包括39份材料,占供试材料的73.59%。在欧氏距离5.0处,又可将第III大类分为4个小
类,其中第i小类共19份材料,它们的耐铝隶属函数值为0.3125~0.5182,平均值为0.4234,耐铝性处于中等
水平;第i小类共16份材料,它们的耐铝隶属函数值为0.5063~0.7585,平均值为0.6038,耐铝性处于中等偏
上水平;第ii小类共3份材料,它们的隶属函数值为0.7814~0.8589,平均值为0.8093,耐铝性较强;第iv小
类只有E141,其耐铝隶属函数值为0.5462。
2.3 53份假俭草供试种源材料耐铝毒性分级
结合上述聚类分析结果及耐铝隶属函数值,将各种源材料按照下列标准进行耐铝毒性分级。1级:平均隶属
值在0.9以上,为极端耐铝毒型;2级:平均隶属值在0.75~0.90,为耐铝毒型;3级:平均隶属值在0.50~0.75,
为较耐铝毒型;4级:平均隶属值在0.35~0.50,为中间型;5级:平均隶属值在0.35以下,为铝毒敏感型。
供试的53份种源材料中,处于1~3级的(较耐铝种源)共21个,占总数的39.6%,处于第4级的(中间型)共
19个,占总数的35.9%,处于第5级的(铝敏感种源)共13个,占总数的24.5%。引进品种‘TifBlair’和‘Com
mon’属于中间类型。
201 ACTAPRATACULTURAESINICA(2012) Vol.21,No.3
3 讨论
图1 53份假俭草种源的聚类分析
犉犻犵.1 犇犲狀犱狉狅犵狉犪犿狅犳53犮犲狀狋犻狆犲犱犲犵狉犪狊狊犪犮犮犲狊狊犻狅狀狊
植物的铝毒症状是由Al3+与根尖之间相互作用
导致根的发育抑制所引起的,铝毒害最容易识别的症
状就是根生长的抑制[18],根系的生长变化可以作为植
物耐铝性的筛选指标,而在大豆(犌犾狔犮犻狀犲犿犪狓)中已
有试验表明地上部分的生长状况(相对株高和相对地
上干重)也可用来判断植物的耐铝性[19],因此本试验
选用相对根系干重、相对地上部分干重及相对全株干
重3个指标对53份假俭草材料进行耐铝性评价,而且
这3个指标与耐铝隶属函数值的相关系数分别为
0.797,0.963,0.987,均达到了极显著正相关水平
(犘<0.01),进一步表明这3个指标均可用于判断假
俭草种质资源受铝毒害的情况。
Rengel和 Robinson[20]发现2种一年生黑麦草
(犔狅犾犻狌犿 犿狌犾狋犻犳犾狅狉狌犿)栽 培 品 种 (‘Marshal’和
‘Gulf’)在Al浓度小于74μmol/L时,根系和地上部
生长量都有所增加。Liu等[21]报道在Al处理浓度为
320μmol/L时,草地早熟禾(犘狅犪狆狉犪狋犲狀狊犻狊)品种地
上和根系生长量都有所增加。本研究中发现E049和
E141在1500μmol/L的铝处理下,根系生长还能受
到促进,说明与上面这些草相比较,假俭草具有更高的
耐铝性。
由于同一材料不同指标在铝毒胁迫下表现并不完
全一致,因此,单独以某一指标来进行材料间耐铝性强
弱的评价会存在一定误差,所以本研究采用计算平均
耐铝隶属函数值的方法来对各材料的耐铝性进行综合
评价。这种方法在大豆的耐铝毒品种筛选中已用过,
刘莹和盖钧镒[22]在苗期以株高、叶龄、根干重和茎叶
干重隶属函数的平均值为指标对黄淮海和长江中下游
地区的51份代表性大豆材料进行耐铝毒性鉴定。
以相对根系干重、相对地上部分干重和相对全株
干重为指标,对53份假俭草进行聚类分析。从聚类分
析的结果看(图1),在欧氏距离10.0处,将53份假俭
草分为三大类;在欧式距离5.0处,又可将第III大类
分为4个小类,其中第iv小类只有E141一份材料,其
耐铝隶属函数值为0.5462,根据耐铝隶属函数值它应
该处于第i小类中,但是却被单独列出,原因是E141
的整体耐铝隶属函数值虽然不高,但是它的相对根系
干重高达102.16%,而地上部分干重只有49.21%。
因此E141较为特殊,被单独列到一类,耐铝性处于第i小类与第ii小类之间。此外,第I大类和第ii小类共包
含4个耐铝品种,它们来自于福建、湖南、广东、广西这些南方土壤偏酸性的地区;而第II大类中的13份铝敏感
301第21卷第3期 草业学报2012年
种源来自于江苏、安徽、河南等土壤呈中性或偏碱性的地区。这说明假俭草的耐铝性还存在一定的地域差异,受
到其原生境的影响。
结合聚类分析及耐铝隶属函数值,供试的53份种源材料中,处于1~3级的(较耐铝种源)共21个,占总数的
39.6%,处于第4级的(中间型)共19个,占总数的35.9%,处于第5级的(铝敏感种源)共13个,占总数的
24.5%。这表明不同基因型的假俭草,其耐铝性存在显著差异。其中假俭草品种‘TifBlair’和‘Common’假俭草
属于中间类型,来自中国的51份假俭草材料中有24份材料的耐铝隶属函数值高于耐铝品种‘TifBlair’,这说明
中国假俭草种源耐铝性存在很大的开发潜力。
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401 ACTAPRATACULTURAESINICA(2012) Vol.21,No.3
犞犪狉犻犪狋犻狅狀狅犳犃犾狋狅犾犲狉犪狀犮犲犻狀狋犺犲犵犲狉犿狆犾犪狊犿狉犲狊狅狌狉犮犲狊狅犳犮犲狀狋犻狆犲犱犲犵狉犪狊狊犻狀犆犺犻狀犪
CHUXiaoqing1,2,CHENJingbo2,ZONGJunqin2,DINGWanwen2,
LIShan2,JIANGQiaofeng2,LIUJianxiu2
(1.ColegeofHorticulture,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China;2.Instituteof
Botany,JiangsuProvince&ChineseAcademyofSciences,Nanjing210014,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Thesmalvolumesolutionculturemethodwasusedtoevaluatethealuminum (Al)toleranceof51
centipedegrassaccessionsandtwocultivars(‘TifBlair’and‘Common’)fromtheUSAasabasisforselecting
centipedegrassresourceswithstrongAltolerancethusprovidinganexperimentalbasisforfuthergeneticim
provement.Significantgrowthdifferenceswerefoundamong53accessionstreatedwith1500μmol/LAl,and
theCVsofrelativerootweight,relativeshootweight,andrelativetotalweightwere20.55%,15.62%and
15.52%,respectively.Usingthemembershipfunctionvaluemethod,51centipedegrassaccessionswereclassi
fiedintofivegroupswithdifferentlevelsofAltolerance.Twentyoneaccessionsbelongedtogroups1-3(Al
toleranttype),accountingfor39.6%ofthetotalaccessions,13accessionsbelongedtogroup5(Alsensitive
type),accountingfor24.5%,and19accessionsbelongedtogroup4(intermediateAltoleranttype),account
ingfor35.9%.‘TifBlair’and‘Common’wereintermediatetypes,indicatingagoodpotentialfordeveloping
thegeneticresourceofAltoleranceincentipedegrass.
犓犲狔狑狅狉犱狊:centipedegrass(犈狉犲犿狅犮犺犾狅犪狅狆犺犻狌狉狅犻犱犲狊);aluminumtolerance;variation
501第21卷第3期 草业学报2012年