全 文 ：书稀硫酸预处理王草的研究
马德勇１，２，３，张爱联３，高建明３，陈河龙３，张世清３，葛畅４，易克贤３，５
（１．海南大学农学院，海南 儋州５７１７３７；２．中国热带农业科学院湛江实验站，广东 湛江５２４０１３；３．中国热带农业科学院热带生物技术研究所
农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海南 海口５７１１０１；４．海南大学食品学院，海南 海口５７０２２８；
５．中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，海南 儋州５７１７３７）
摘要：本研究采用稀硫酸对热研４号王草进行预处理，结合３，５二硝基水杨酸法测定水解液中还原糖含量的方法，
对稀硫酸浓度（ｖ／ｖ）、固液比（ｇ／ｍＬ）、水解温度、水解时间和不同粒径５个因素进行单因素实验分析，在单因素试验
的基础上通过二次回归正交旋转组合设计进行工艺参数优化。实验结果表明，最佳预处理条件，水解温度为
１１７℃，水解时间为１５ｍｉｎ，稀硫酸浓度为３％，固液比为１∶１５，粒径为０．４２５～０．８５０ｍｍ。
关键词：王草；稀硫酸；预处理
中图分类号：Ｓ５４３．０４１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１１）０５０２８８０６
　 现今的液体燃料主要来自于石油资源，而地球上可利用的石油资源将在今后几十年内耗尽［１］，寻找可替代的
再生能源，已成为维持人类社会可持续发展的紧迫任务。近年来，乙醇作为一种燃烧效率高，污染物排放少的理
想可再生替代能源而受到世界各国的重视［２４］。发展燃料乙醇即可以缓解能源短缺问题又可以减轻环境污染。
长期以来，粮食一直是发酵制酒精的主要原料。但是随着人口的增长和可利用土地的减少，粮食问题日益严峻，
以粮食为原料的乙醇发酵工业生产难以为继。随着研究的进行，人们将眼光转移到了这种成本低廉、数量巨大的
可再生资源———纤维素类物质［５］。由于自然界中的纤维素类物质结构很稳定，纤维素、半纤维素和木素间互相缠
绕，且纤维素本身存在晶体结构，会阻止酶接近纤维素表面，故生物质直接酶水解时效率很低，所以需要对原料进
行预处理。稀酸预处理是最常用到的，且通常和蒸汽预处理、酶解预处理等结合使用，预处理效果良好。稀酸预
处理和酶解糖化作用相结合，葡萄糖的产出效率更高［６］。同时，许多学者对稀硫酸水解半纤维素做了研究，被认
为是使半纤维素转化为糖类最有效的处理方法，也是酶解纤维素类物质最有效的预处理方法［７９］。
能源禾草有植株高大、生长速度快、且具有高生物质产量、多年生等优势越来越受到人们的重视，特别是Ｃ４
禾草。这类禾草不仅可以通过直接燃烧来生产热能或电能，也可以通过固化、汽化和液化等手段转化成相应的能
源产品。利用多年生能源牧草生产燃料乙醇具有较高的生态效益与经济效益，不仅可控制环境污染、提高能源利
用率，还能扩大原料来源、降低原料成本。目前已有很多多年生牧草作为能源牧草被开发利用，如柳枝稷［１０］
（犘犪狀犻犮狌犿狏犻狉犵犪狋狌犿）、芒草（犕犻狊犮犪狀狋犺狌狊）、!草（犘犺犪犾犪狉犻狊犪狉狌狀犱犻狀犪犮犲犪）、芦竹（犃狉狌狀犱狅犱狅狀犪狓）、紫花苜蓿（犕犲犱犻
犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）、其他多年生杂类草等［１１］。王草［１２］（犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿狆狌狉狆狌狉犲狌犿×犘．犪犿犲狉犻犮犪狀狌犿），英文名Ｋｉｎｇｇｒａｓｓ，
又叫皇草、杂交狼尾草、皇竹草等。是由象草［１３］（犘．狆狌狉狆狌狉犲狌犿）和美洲狼尾草（犘．犪犿犲狉犻犮犪狀狌犿）杂交育成［１４］，
属热带多年生禾本科牧草。由中国热带农业科学院农牧所从２０世纪８０年代引自国际热带农业中心（ＣＩＡＴ）的
少量种植材料中，经多年试验研究选育而成的，该品种于１９９８年通过全国牧草品种审定委员会审定，正式定名为
热研４号王草（犘犲狀狀犻狊狉狋狌犿狆狌狉狆狌狉犲狌犿×犘．狋狔狆犺狅犻犱犲狌犿ｃｖ．ＲｅｙａｎＮｏ．４）。是目前华南地区最适于集约化栽培
的禾本科牧草，因其具有多年生、抗倒伏、抗旱、耐脊薄、抗病力强、分蘖性能强、生长速度以及茎叶柔嫩多叶、口感
好、营养丰富、产量高等特点，被列为鲜饲、青贮、晒制青草或加工草粉的优质高产牧草。热研４号王草已在我国
长江以南的海南、广东、广西、四川、湖南、湖北、贵州、云南等省市推广种植［１５］。王草产量特别高，每公顷产鲜草
一般在３０万ｋｇ以上，在水肥条件好的情况下可达４５万ｋｇ。据报道热研４号王草的利用大部分限制在青饲、青
２８８－２９３
２０１１年１０月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第２０卷　第５期
Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．５
 收稿日期：２０１００７２９；改回日期：２０１０１１０３
基金项目：国家科技支撑计划（２００８ＢＡＤＢ３Ｂ０８），科技部国家科技成果重点推广计划项目（０５ＥＦＮ２１６９００３８１）和中央级公益性科研院所基本
科研业务费专项资金（中国热带农业科学院南亚热带作物研究所）项目（００６２００８０１０）资助。
作者简介：马德勇（１９８６），男，贵州施秉人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｄｅｙｏｎｇｍａ＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｙｉｋｅｘｉａｎ＠２１ｃｎ．ｃｏｍ
贮、氨化、微贮、ＥＭ（有益微生物）处理和青干草等方面［１６］。而在可再生替代能源利用方面还鲜见报道。
本研究以采用稀硫酸对热研４号王草进行预处理，以总还原糖含量作为指标，主要考虑稀硫酸浓度（ｖ／ｖ）、固
液比（ｗ／ｖ）、水解温度、水解时间和不同粒径５个因素对预处理结果的影响，在单因素试验的基础上通过二次回
归正交旋转组合设计进行工艺参数优化。以期为后续半纤维素水解液发酵和纤维素水解及其水解液发酵转化燃
料乙醇提供参考。
１　材料与方法
１．１　实验材料
热研４号王草取自中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所。
１．２　主要试剂和仪器设备
硫酸（ＡＲ）；葡萄糖（ＡＲ）；３，５二硝基水杨酸（ＣＰ）；ＮａＯＨ（ＡＲ）；酒石酸钾钠（ＡＲ）；苯酚（ＡＲ）；亚硫酸钠
（ＡＲ）；酚酞。日本Ｈｉｒａｙａｍａ高压灭菌锅 ＨＶ１１０；ＵＶ１０００紫外可见分光光度计；ＧＭ０．５０Ⅱ型隔膜真空泵；
ＤＨＧ９０７６Ａ电热恒温鼓风干燥箱；ＤＫ９８Ｉ电热恒温水浴。
１．３　样品处理
取热研４号王草茎叶，去除杂质后切成２～４ｃｍ的小段，经烘箱７５℃干燥，粉碎，筛分得到粒径为０．４２５～
０．８５０ｍｍ、０．２５０～０．４２５ｍｍ、０．２５０ｍｍ的粉末，分装密封后保存备用。
１．４　单因素试验
在高压灭菌锅中，体积分数０～３％的稀硫酸溶液、王草粉末（０．４２５～０．８５０ｍｍ，０．２５０～０．４２５ｍｍ，过０．２５０
ｍｍ）与稀硫酸溶液分别在固液比（ｇ／ｍＬ）１∶１０～１∶３０、温度１１０～１３５℃条件下反应１５～１２０ｍｉｎ。反应结束
后，冷却，中和，抽滤，将滤液定容至１００ｍＬ容量瓶中，收集滤液，即为所得糖液。采用ＤＮＳ法测定还原糖含量。
每个单因素试验做３个重复。
１．５　稀硫酸最佳预处理工艺参数及优化
根据以上单因素实验结果，分别将稀硫酸浓度、水
解温度、水解时间对总还原糖含量的综合影响，采用
ＳＡＳ９．０数据处理软件设计三因素二次通用旋转组合
试验设计，对稀硫酸水解进行工艺优化。试验结果分
析均在ＳＡＳ９．０数据处理软件下运行，编码因子见
表１。
１．６　还原糖含量测定
本实验采用３，５二硝基水杨酸法测定水解液中
的还原糖含量［１７］。
样品水解液的总还原糖含量的测定：取处理好适
当稀释的滤液２ｍＬ于２５ｍＬ比色管中，加入１．５ｍＬ
的显色液，塞好盖摇匀沸水浴５ｍｉｎ，取出流水冷却后
表１　稀硫酸水解的二次通用旋转组合设计因子水平表
犜犪犫犾犲１　犜犺犲犳犪犮狋狅狉犾犲狏犲犾狊犻狀狇狌犪犱狉犪狋犻犮犵犲狀犲狉犪犾狉狅狋犪狉狔
狌狀犻狋犻狕犲犱犱犲狊犻犵狀狅犳狑犺犻狋犲狆犲狆狆犲狉
编码
Ｃｏｄｉｎｇ
稀硫酸浓度
Ｄｉｌｕｔｅｓｕｌｐｈｕｒｉｃａｃｉｄ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（％）Ｘ１
温度
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）
Ｘ２
时间
Ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）
Ｘ３
１．６８２ ３．０ １３５ １２０
１ ２．５ １３０ ９９
０ １．８ １２３ ６８
－１ １．０ １１５ ３６
－１．６８２ ０．５ １１０ １５
用去离子水定容至２５ｍＬ，于４９０ｎｍ波长下测定吸光度值，通过下列公式计算还原糖含量：
还原糖含量（％）＝
查曲线所得葡萄糖毫克数×
提取液总体积
测定时取用体积
样品毫克数 ×１００
２　结果与分析
２．１　葡萄糖标准曲线
采用３，５二硝基水杨酸法在４９０ｎｍ处测定吸光度值，以葡萄糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标画出标准曲
线，如图１所示：可以看出在４９０ｎｍ时葡萄糖标准曲线的线性相关系数犚２ 为０．９９９８，线性良好，可以用于还原
糖含量的测定。得到的吸光值（狔）与葡萄糖含量（狓，ｍｇ）的关系：狔＝１．１０１４狓－０．０４９１
９８２第２０卷第５期 草业学报２０１１年
２．２　王草预处理单因素试验
２．２．１　不同浓度的稀硫酸对还原糖含量的影响　称取粒径０．４２５～０．８５０ｍｍ的样品１．０００ｇ，设定固液比
１∶２０（ｇ／ｍＬ），水解温度１２０℃，水解时间３０ｍｉｎ，不同硫酸体积分数下样品的还原糖含量如图２所示。随着稀
硫酸体积分数的增加，还原糖的含量先快速增加而后趋于平缓，稀硫酸浓度为２．０％，２．５％和３．０％时，样品反应
生成的还原糖含量没有显著性差异（犘＞０．０１），为了降低预处理成本及剩余酸的处理费用，故选用体积分数为
２％的稀硫酸进行其他单因素试验。
图１　还原糖标准曲线
犉犻犵．１　犆犪犾犻犫狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲犳狅狉犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀
狅犳狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉
图２　不同浓度的稀硫酸对还原糖含量的影响
犉犻犵．２　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狌犾犳狌狉犻犮犪犮犻犱犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀狋犺犲狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉犮狅狀狋犲狀狋
不同大写字母表示差异显著（犘＜０．０１）Ｄｉｆｆｅｒｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．下同Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
２．２．２　不同固液比对还原糖含量的影响　称取粒径０．４２５～０．８５０ｍｍ的样品１．０００ｇ，设定硫酸浓度２％，水解
温度１２０℃，水解时间３０ｍｉｎ，不同固液比下样品的还原糖含量如图３所示。随着液体含量的增加，还原糖产量
呈上升的趋势，这是因为随着液体含量的增加，试样与稀硫酸接触更加完全，从而水解反应能充分进行，当固液比
达到１∶２５以后还原糖含量趋于平衡，固液比为１∶１５、１∶２０、１∶２５、１∶３０时，样品反应生成的还原糖含量没有
显著性差异（犘＞０．０１），但是液体含量太大，反应体系中的含水量就会过高，在后续的发酵提取工艺中就会发生
很高的处理费用，因此须要综合考虑各种因素来确定固液质量比，所以本试验选取１∶１５来进行其他单因素试
验，固液比的交互作用不再考虑。
２．２．３　不同水解温度对还原糖含量的影响　称取粒径０．４２５～０．８５０ｍｍ的样品１．０００ｇ，设定硫酸浓度２％，固
液比１∶１５，水解时间３０ｍｉｎ，不同水解温度下样品的还原糖含量如图４所示，水解温度越高，水解效果越好，这
是因为水解温度越高，越有利于水解过程的进行，化学反应越充分，但是在１２０℃以后，还原糖含量略有下降，这
是因为随着水解温度的升高体系能量消耗增大，有毒副产物增多，这将对后续纤维素乙醇生产带来不利影响，温
度为１２０，１２５，１３０，１３５℃时，样品反应生成的还原糖含量没有显著性差异（犘＞０．０１），采用适宜的水解温度，即可
以减少能耗，又能减少副反应的发生。所以本试验采用１２０℃进行其他单因素试验。
２．２．４　不同水解时间对还原糖含量的影响　称取粒径０．４２５～０．８５０ｍｍ的样品１．０００ｇ，设定硫酸浓度２％，固
液比１∶１５，水解温度１２０℃，不同水解时间下样品的还原糖含量如图５所示，在水解过程的前４５ｍｉｎ，随着处理
时间的延长，还原糖的含量提高，４５ｍｉｎ以后还原糖含量略有下降趋势，可能是因为处理时间的增加会导致副反
应的发生，时间为３０，４５，６０，９０，１２０ｍｉｎ时，样品反应生成的还原糖含量没有显著性差异（犘＞０．０１），所以采用
适宜的水解时间也可以减少能耗及副反应的发生。所以本试验采用时间为３０ｍｉｎ进行其他单因素试验。
２．２．５　不同粒径对还原糖含量的影响　设定硫酸浓度２％，固液比１∶１５，水解时间３０ｍｉｎ，水解温度１２０℃，
１．０００ｇ样品在不同粒径时的还原糖含量如图６所示，一般认为，原料颗粒越细小，固体与液体之间的接触面积增
０９２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．５
加，反应也就越充分，因此应该有更多的碳水化合物（半纤维素）被水解成还原糖。但实验结果显示，在水解过程
中随着粒径的减小，还原糖的含量呈先上升后下降的趋势，过０．２５０ｍｍ粒径所得的还原糖含量却小于０．２５０～
０．４２５ｍｍ粒径的，这可能是因为粒度降低，增加了原料表面积，固体表面吸附的液体量增加，当液体用量一定
时，体系中非吸附液体量减少，导致固－液混合不均匀，从而降低了酸解还原糖得率。同时，随着粒度降低，生成
的还原糖会更多的被吸附在固体表面，造成更多的还原糖损失。０．４２５～０．８５０ｍｍ、０．２５０～０．４２５ｍｍ、过０．２５０
ｍｍ粒径的样品反应生成的还原糖含量没有显著性差异（犘＞０．０１），所以本试验采用０．４２５～０．８５０ｍｍ的试样
进行试验，不再考虑其交互作用。
图３　不同固液比对还原糖含量的影响
犉犻犵．３　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狅犾犻犱狋狅犾犻狇狌犻犱
狉犪狋犻狅狅狀狋犺犲狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉犮狅狀狋犲狀狋
图４　不同处理温度对还原糖含量的影响
犉犻犵．４　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犺狔犱狉狅犾狔狊犻狊狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲
狅狀狋犺犲狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉犮狅狀狋犲狀狋
图５　不同处理时间对还原糖含量的影响
犉犻犵．５　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犺狔犱狉狅犾狔狊犻狊狋犻犿犲狅狀
狋犺犲狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉犮狅狀狋犲狀狋
图６　不同粒径对还原糖含量的影响
犉犻犵．６　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犵狉犪狀狌犾犪狉犻狋狔狅狀
狋犺犲狉犲犱狌犮犻狀犵狊狌犵犪狉犮狅狀狋犲狀狋
２．３　稀硫酸最佳预处理工艺参数及优化
根据以上单因素实验结果表明，稀硫酸浓度、水解时间、水解温度等对稀硫酸预处理均具有不同程度的影响。
由于各因素间的相互作用比较复杂，因此本研究以总还原糖含量为指标，采用二次通用旋转组合试验设计对提取
工艺进行了优化（表２）。
采用ＳＡＳ９．０对稀硫酸最佳预处理工艺的优化结果进行回归分析，其实际值回归方程如下：
犢＝－３２１．７４３＋４１．５７７７犡１＋４．８７９２０８犡２＋０．６５４４８５犡３－１．０３７６５２犡１２－０．２８７７７８犡１犡２－０．０３５１８５犡１犡３
－０．０１６８１９犡２２－０．００４８１犡２犡３－０．００００９１犡３２
１９２第２０卷第５期 草业学报２０１１年
　　对稀硫酸最佳预处理工艺的优化结果的数学模型
进行方差分析，并对各因子的偏回归系数进行检验，一
次项中Ｘ２ 的偏回归系数显著，说明水解温度对预处
理效果有显著影响；二次项中Ｘ１２ 的偏回归系数达显
著水平，Ｘ２２ 的偏回归系数达到极显著水平；交互项
Ｘ１Ｘ２、Ｘ１Ｘ３、Ｘ２Ｘ３ 的偏回归系数达极显著水平，其他
各项的偏回归系数均未达到显著水平。根据方差分析
可以看出，各因素对还原糖含量影响的主次顺序为：水
解温度＞水解时间＞稀硫酸浓度。将其回归方程用
ＬＩＮＧＯ语言进行分析，得到最佳工艺为：稀硫酸浓度
为３％，水解温度１１７℃，水解时间１５ｍｉｎ。对最佳配
方进行验证，得到还原糖含量为３２．３４％，与理论值
３３．０５％相差不大，所以可认为其为最佳方案。
３　讨论
植物纤维原料生产燃料乙醇，主要包括原料预处
理、纤维素酶水解和戊糖己糖发酵等工艺［１８］。稀酸处
理是常见的一种预处理方法［１９，２０］。原料经稀酸预处
理和纤维素酶水解后，水解糖液中除糖分外，还存在一
些对微生物的生理特性和发酵特性有抑制作用的物
质，这些发酵抑制物主要包括四类［２１］：一是预处理过
程中形成的乙酸（来源于半纤维素乙酰基）、萜类化合
物、单宁等；二是预处理和水解过程中的单糖分解产
物，例如糠醛、５羟甲基糠醛、乙酰丙酸、甲酸、腐殖质
等；三是预处理或水解过程中形成的木质素降解产物；
四是来源于设备的金属离子和预处理中加入的二氧化
表２　二次通用旋转组合设计方案及结果
犜犪犫犾犲２　犜犺犲狋犲狊狋狊犮犺犲犿犲犪狀犱犻狋狊狉犲狊狌犾狋狊犻狀狇狌犪犱狉犪狋犻犮
犵犲狀犲狉犪犾狉狅狋犪狉狔狌狀犻狋犻狕犲犱犱犲狊犻犵狀
试验号
Ｎｏ．
Ｘ１ Ｘ２ Ｘ３ 还原糖含量
Ｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔ（％）
１ －１ －１ －１ ２６．５１
２ －１ －１ １ ３０．２１
３ －１ １ －１ ３１．９３
４ －１ １ １ ３０．１５
５ １ －１ －１ ３１．６２
６ １ －１ １ ３１．０６
７ １ １ －１ ２９．６３
８ １ １ １ ２５．４６
９ －１．６８２ ０ ０ ２８．５２
１０ １．６８２ ０ ０ ３１．０７
１１ ０ －１．６８２ ０ ３０．２３
１２ ０ １．６８２ ０ ２７．３１
１３ ０ ０ －１．６８２ ３１．４５
１４ ０ ０ １．６８２ ３０．９３
１５ ０ ０ ０ ３１．４５
１６ ０ ０ ０ ３０．７９
１７ ０ ０ ０ ３１．４７
１８ ０ ０ ０ ３１．５５
１９ ０ ０ ０ ３１．２６
２０ ０ ０ ０ ３１．２１
硫等。通过加萃取、中和、加石灰、蒸发、吸附、离子交换树脂法等［２２２４］手段可将各水解液中发酵抑制物去除，但成
本较高。本试验只是针对王草预处理效果进行的，如果要综合考虑能耗，发酵抑制物的产生和其他操作费用等因
素，最佳预处理条件可能须作出适当调整。
４　结论
１）通过二次通用旋转组合试验设计建立了稀硫酸最佳预处理工艺的稀硫酸浓度、水解温度、水解时间３个因
素的回归方程，此模型在试验范围内能较准确地预测稀硫酸最佳预处理工艺效果。
２）３个因素对稀硫酸最佳预处理工艺处理效果的影响大小依次为：水解温度＞水解时间＞稀硫酸浓度。
３）通过二次通用旋转组合试验设计，获得了稀硫酸最佳预处理工艺参数为：稀硫酸浓度为３％，水解温度
１１７℃，水解时间１５ｍｉｎ。
参考文献：
［１］　王艳敏，丁长河，李里特，等．树干毕赤酵母发酵半纤维素稀酸水解液生产乙醇的研究进展［Ｊ］．酿酒科技，２００８，（１２）：
９７９９．
［２］　杜风光，冯文生．燃料乙醇发展现状和前景展望［Ｊ］．现代化工，２００６，２６（１）：６９．
［３］　廖兴华，夏延斌，周传云．燃料乙醇的发展现状和研究趋势［Ｊ］．酿酒，２００７，３４（５）：１８２０．
［４］　孙智谋，蒋磊，张俊波，等．世界各国木质纤维原料生物转化燃料乙醇的工业化进程［Ｊ］．酿酒科技，２００７，１：９１９４．
［５］　肖春玲，徐常新．微生物纤维素酶的应用研究［Ｊ］．微生物学杂志，２００２，（２）：３３３５．
２９２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．５
［６］　ＶａｎｄｅｎＯｅｖｅｒＭＪＡ，ＥｌｂｅｒｓｅｎＨ Ｗ，ＫｅｕｓｅｒｓＥＲＰ．Ｓｗｉｔｃｈｇｒａｓｓ（犘犪狀犻犮狌犿狏犻狉犵犪狋狌犿Ｌ．）ａｓａｒｅｉｎｆｏｒｃｉｎｇｆｉｂｒｅｉｎｐｏｌｙｐｒｏ
ｐｙｌｅｎｅｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭａｔｅｒｉａｌｓＳｃｉｅｎｃｅ，２００３，３８：３６９７３７０７．
［７］　ＭｏｓｉｅｒＮＳ，ＬａｄｉｓｃｈＣＭ，ＬａｄｉｓｃｈＭＲ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｃｉｄｃａｔａｌｙｔｉｃｄｏｍａｉｎｓｆｏｒｃｅｌｕｌｏｓｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｄｅｇｒａ
ｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００２，７９（６）：６１０６１８．
［８］　ＫｉｍＳＢ，ＹｕｍＤＭ，ＰａｒｋＳＣ．Ｓｔｅｐｃｈａｎｇｅｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎａｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎｒｅａｃｔｏｒｆｏｒｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｈａｒｄｗｏｏｄ
ｈｅｍｉｃｅｌｕｌｏｓｅ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０００，７２：２８９２９４．
［９］　ＮｇｙｕｅｎＱＡ，ＴｕｃｋｅｒＭＰ，ＫｅｌｅｒＦ，犲狋犪犾．Ｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｓｏｆｔｗｏｏｄｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
１９９９，７７（１３）：１３３１４２．
［１０］　刘吉利，朱万斌，谢光辉，等．能源作物柳枝稷研究进展［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（３）：２３２２４０．
［１１］　余醉，李建龙，李高扬．利用多年生牧草生产燃料乙醇前景［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（９）：６２６９．
［１２］　刘秦华，张建国，卢小良．乳酸菌添加剂对王草青贮发酵品质及有氧稳定性的影响［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（４）：１３１１３７．
［１３］　张向前，周峰，谢新明．ＭＴ１象草及其近缘品种的外稃微形态特征［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（４）：１５９１６５．
［１４］　陈志彤，黄勤楼，潘伟彬，等．狼尾草属牧草ｒＤＮＡ的ＩＴＳ序列分析［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（４）：１３５１４１．
［１５］　刘国道，白昌军，王东劲，等．热研４号王草选育［Ｊ］．草地学报，２００２，１０（２）：９２９６．
［１６］　侯冠，王东劲，周汗林．热研４号王草利用概述［Ｊ］．热带农业科学，２００９，（３）：７１７４．
［１７］　ＭｉｌｅｒＧＬ．Ｕｓｅｏｆｄｉｎｉｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｒｅａｇｅｎｔｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｓ［Ｊ］．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌａｎｄＢｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９５９，３１（３）：４２６４２８．
［１８］　ＯｈｇｒｅｎＫ，ＶｅｈｍａａｎｐｅｒａＪ，ＳｉｋａＡｈｏＭ，犲狋犪犾．Ｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｐｒｉｏｒｔｏｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｓａｃｃｈａｒｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｓｔｅａｍｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｃｏｒｎｓｔｏｖｅｒｆｏｒｅｔｈａｎｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＥｎｚｙｍｅａｎｄＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，
４０（４）：６０７６１３．
［１９］　ＬｅｅＹＹ，ＩｙｅｒＰ，ＴｏｒｇｅｔＲＷ．Ｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｌｉｇｎｏｃｅｌｕｌｏｓｉｃｂｉｏｍａｓｓ［Ｊ］．ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９９，６５：９４１１５．
［２０］　王联结，陈建华．木质纤维原料预处理技术［Ｊ］．现代化工，２００７，６：６６７０．
［２１］　ＧｏｎｇＣＳ，ＣａｏＮＪ，ＤｕＪ，犲狋犪犾．Ｅｔｈａｎｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍｒｅｎｅｗａｂｌｅｒｅｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９９，６５：２０９２４１．
［２２］　ＺｙｌＶＡ，ＰｒｉｏｒＡＢ，ＰｒｅｅｚＪＣ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍｓｕｇａｒｃａｎｅｂａｇａｓｓｅｈｅｍｉｃｅｌｕｌｏｓｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｂｙ犘犻犮犺犻犪狊狋犻狆犻狋犻狊［Ｊ］．
ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８８，１７：３５７３６９．
［２３］　ＥｋｅｎＳ，ＮｕｒｄａｎＡ，ＹｅｓｉＭ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｉｎｅｔｈａｎｏｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｃｏｒｎｃｏｂｈｅｍｉｃｅｌｕｌｏｓｉｃ
ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｗｉｔｈ犘犻犮犺犻犪狊狋犻狆犻狋犻狊ａｎｄ犆犪狀犱犻犱犪狊犺犲犺犪狋犪犲［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒ，２０００，２２：８５５８８５．
［２４］　ＳｉｌｖａＣ，ＲｐｂｅｒｔｏＩ．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｘｙｌｉｔｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙ犆犪狀犱犻犱犪犵狌犻犾犾犻犲狉犿狅狀犱犻犻ＦＴＩ２００３７ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙａｄａｐｔｅｄｔｏｒｉｃｅｓｔｒａｗ
ｈｅｍｉｃｅｌｕｌｏｓｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ［Ｊ］．ＬｅｔｔｅｒｓｉｎＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，３２：２４８２５２．
犛狋狌犱犻犲狊狅狀狋犺犲狆狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋狅犳犘犲狀狀犻狊狉狋狌犿狆狌狉狆狌狉犲狌犿×犘．狋狔狆犺狅犻犱犲狌犿犫狔犱犻犾狌狋犲狊狌犾犳狌狉犻犮犪犮犻犱
ＭＡＤｅｙｏｎｇ１，２，３，ＺＨＡＮＧＡｉｌｉａｎ３，ＧＡＯＪｉａｎｍｉｎｇ３，ＣＨＥＮＨｅｌｏｎｇ３，
ＺＨＡＮＧＳｈｉｑｉｎｇ３，ＧＥＣｈａｎｇ４，ＹＩＫｅｘｉａｎ３，５
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＨａｉｎａｎＵｎｉｎｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｎｚｈｏｕ５７１７３７，Ｃｈｉｎａ；２．ＺｈａｎｊｉａｎｇＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔａｔｉｏｎ，
ＣＡＴＡＳ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ５２４０１３，Ｃｈｉａｎ；３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡＴＡＳ，
ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＣｒｏｐＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈａｉｋｏｕ５７１１０１，Ｃｈｉｎａ；
４．ＣｏｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅｏｆＴｃｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨａｉｎａｎＵｎｉｎｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｉｋｏｕ５７０２２８，Ｃｈｉｎａ；
５．ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＡＴＡＳ，Ｄａｎｚｈｏｕ５７１７３７，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿狆狌狉狆狌狉犲狌犿×犘．狋狔狆犺狅犻犱犲狌犿ｃｖ．ＲｅｙａｎＮｏ．４ｗａｓｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｔｈｅｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ
ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｓｕｇａｒｓｉｎｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｔｈｅＤＮＳｍｅｔｈｏｄ．Ａｆｔｅｒｓｅｐａｒａｔｅａｎａｌｙｓｉｓｏｎｓｕｌｆｕｒｉｃ
ａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｖ／ｖ），ｓｏｌｉｄｔｏｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏ（ｇ／ｍＬ），ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｉｍｅａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｈｅｑｕａｄｒａｔｉｃｇｅｎｅｒａｌｒｏｔａｒｙｕｎｉｔｉｚｅｄ
ｄｅｓｉｇｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ１１７℃ｆｏｒ１５ｍｉｎｗｉｔｈ３％
（Ｈ２ＳＯ４），ａｓｏｌｉｄｔｏｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏｏｆ１∶１５ａｎｄａｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙｏｆ０．４２５－０．８５０ｍｍ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犘犲狀狀犻狊狉狋狌犿狆狌狉狆狌狉犲狌犿×犘．狋狔狆犺狅犻犱犲狌犿；ｄｉｌｕｔｅｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄ；ｐｒｅｔｒｅａｔ
３９２第２０卷第５期 草业学报２０１１年