全 文 ：林业科学研究 ２０１６，２９（４）：６１５ ６１９
ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ
文章编号：１００１１４９８（２０１６）０４０６１５０５
管芯片技术通量检测杨树溃疡病病菌的应用
王凯英１，高 茜１，严东辉１，２
（１．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 国家林业局森林保护学重点实验室，北京 １０００９１；
２．南京林业大学南方现代林业协同创新中心，南京 ２１００３７）
收稿日期：２０１６０３０９
基金项目：水解纤维素产烃树木内生菌资源利用技术引进（２０１３４１０）、效应物在杨盘二孢半活养方式及亲和寄主致病性中的作用
（３１３７０６４５）
作者简介：王凯英（１９９０—），女，河北邯郸人，在读硕士研究生，森林植物微生物组学，Ｅｍａｉｌ：ｗｋｙｌｉｂｒａ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者：博士，研究员，主要从事森林病理与树木微生物群学（ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｉｃｓ），Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｄｈ＠ｃａｆ．ａｃ．ｃｎ
关键词：溃疡病菌；Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｄｏｔｈｉｄｅａ；芯片杂交；检测；管芯片
中图分类号：Ｓ７９２１１ 文献标识码：Ａ
ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＰｏｐｌａｒＣａｎｋｅｒＦｕｎｇａｌＰａｔｈｏｇｅｎｓｂｙＡｒｒａｙＴｕｂｅＴｅｃｈｎｉｑｕｅ
ＷＡＮＧＫａｉｙｉｎｇ１，ＧＡＯＱｉａｎ１，ＹＡＮＤｏｎｇｈｕｉ１，２
（１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔＥｃｏｌｏｇｙ，ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆ
ＳｔａｔｅＦｏｒｅｓｔｒｙＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＦｏｒｅｓｔｒｙｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＣｈｉｎａ，
ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＵｓｉｎｇＡｒａｙＴｕｂｅ，ａｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｍｉｃｒｏａｒａｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｏｄｅｔｅｃｔｐｏｐｌａｒｃａｎｋｅｒｐａｔｈｏ
ｇｅｎｓｉｎＢｅｉｊｉｎｇａｒｅａ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＴｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃａｎｄａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃｐｏｐｌａｒｂａｒｋｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ
ｈｙｂｒｉｄｉｚｉｎｇｂｙＡｒａｙＴｕｂｅ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｗｅｒｅｒｅｃｏｒｄｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｂｙＩｃｏｎｏＣｌｕｓｔＡＴ３．０．Ｔｈｅｎｔｈｅ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｃｌｏｎｉｎｇｏｆｔｈｅｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｔｉｓｓｕｅ．［Ｒｅｓｕｌｔ］ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＢｏｔｒｙｏ
ｓｐｈａｅｒｉａｄｏｔｈｉｄｅａａｎｄＶａｌｓａｓｏｒｄｉｄａｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｔａｒｇｅｔｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃｓａｍｐｌｅｓｂｙ
ｍｉｃｒｏａｒａｙｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．ＴｈｅＢ．ｄｏｔｈｉｄｅａｗａｓａｌｓｏｆｏｕｎｄａｓａｎｅｎｄｏｐｈｙｔｅｉｎｈｅａｌｔｈｙｔｉｓｓｕｅ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｅｒｅ
ｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＡｒａｙＴｕｂｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｓａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕｉｃｋｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｏｐｌａｒｃａｎｋｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ｉｔ
ｃｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒａｐｐｌｉｅｄｉｎｏｔｈｅｒｆｏｒｅｓｔｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃａｎｋｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｓ；Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｄｏｔｈｉｄｅａ；ｍｉｃｒｏａｒａｙｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ＡｒａｙＴｕｂｅ
基因芯片技术因能对生物样本进行快速、高通
量的定性和定量分析，而在植物病害诊断中也得到
普遍的应用［１］。树木溃疡病是指引起木本植物树皮
上出现溃疡腐烂等症状的病害［２］。引起杨树溃疡病
的真菌种类较多，加之其无性型和有性型多样，所
以，关于杨树溃疡病病原菌的报道多有不同。另外，
受地理位置、寄主植物关系及分类体系的限制，迫切
需要发展不依赖于常规分离培养的病原鉴定新
技术。
以ＡｒａｙＴｕｂｅ（ＡＴ）为基础的管芯片技术，在衣
原体、细菌及真菌鉴定中都得到了应用［３－５］。Ｓａｃｈｓｅ
等［６］利用 ＡＴ平台技术构建了包含３５个探针有效
针对ｏｍｐＡ基因的管芯片技术，用于快速、准确分析
衣原体菌株的基因分型。Ｂｏｒｅｌ等［７］利用 ＡｒａｙＴｕｂｅ
检测衣原体，通过对 ３３９个样本的分析检测，发现
ＡＴ可以检测混合感染临床样本，与传统１６ＳＰＣＲ相
比，灵敏度更高。Ｆｅｌｄｅ等［５］为了检测环境样本中的
炭疽杆菌Ｂａｃｉｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓ，分别以毒力基因ｒｐｏＢ和
１６ＳｒＤＮＡ为靶标基因设计探针，构建了 ＡＴ芯片。
采用８个供试菌株检测芯片的有效性，并结合环境
林 业 科 学 研 究 第２９卷
样本分离物的检测，证明该芯片能够从含有Ｂ．ｃｅｒｅ
ｕｓ种和Ｂａｃｉｌｕｓ其他种的环境样本中特异性地检测
出Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ。Ｔａｍｂｏｎｇ等［８］根据ＩＴＳ设计了包含
有１７２条寡核苷酸探针的芯片用于检测腐霉菌
Ｐｙｔｈｉｕｍ，每一个物种芯片杂交结果模式都是明显不
同的，从而从土壤中同时检测出 ５０个 Ｐｙｔｈｉｕｍ菌
株，获得的结果与基于形态和 ＩＴＳ数据分析的结果
完全吻合。因此，管芯片技术平台可用于森林病害
病原物的诊断和鉴定。
目前，管芯片技术在杨树溃疡病病原诊断和鉴
定中还没有得到应用。本研究是在原有的分子技术
基础上，利用ＰＣＲ直接扩增植物组织中真菌种群及
生物素标记，通过管芯片杂交，对来自北京不同区县
的２４个杨树样本进行检测，旨在为杨树溃疡病的病
害流行和病原生态研究提供新方法，也为树木病害
的检测提供新技术参考。
１ 材料与方法
１．１ 病原检测管芯片组成
杨树主要病害病原管芯片由本实验室构建和评
价［９］，点制由 Ｃｌｏｎｄｉａｇ公司在 ＡｒａｙＴｕｂｅ（ＡＴ）平台
上完成。构建好的管芯片共含探针２９个，检测病原
对象包括引起杨树溃疡病的病菌 Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｄｏ
ｔｈｉｄｅａ和腐烂病菌Ｖａｌｓａｓｏｒｄｉｄａ在内的５个属１６个
种真菌。探针源自ＩＴＳ和ＥＦ１α基因。本研究主要
检测病原菌Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ和 Ｖ．ｓｏｒｄｉｄａ。本文点阵布
局示意图仅标识这两个种的专化型探针位置如图
１，探针详细信息见表１。
表１ 探针信息
菌种 靶标基因 探针点阵编号 注释
Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ ＥＦ１
１
２
溃疡病菌
Ｖ．ｓｏｒｄｉｄａ ＩＴＳ ５０ 烂皮病菌
Ｂｉｏｔｉｎ（生物素） 杂交标记点 ５３ 杂交阳性对照
１．２ 杂交样本采集
采集北京地区有感病症状和无感病症状的杨树
树皮组织供检测（表２）。
１．３ 管芯片标记及杂交
通过ＣＴＡＢ法［１０－１１］提取有症状和无症状杨树
树皮样本的总 ＤＮＡ，然后置于 －２０℃条件下保存
备用。
利用引物ＩＴＳ１／ＩＴＳ４［１２］扩增核糖体内部转录间
隔区ＩＴＳ１５．８ＳＩＴＳ２基因片段；利用引物ＥＦ１７２８Ｆ／
图１ 管芯片点阵的探针布局示意图
ＥＦ１９８６Ｒ［１３］扩增延伸因子ＥＦ１α，反向引物５’端添
加生物素，经由ＰＣＲ［１４］反应将生物素标记在目的基
因上，扩增程序：预变性９４℃ ３ｍｉｎ，变性９４℃３０ｓ，
退火５５℃３０ｓ，延伸７２℃３０ｓ，２４个循环，最后延伸
７２℃ ３ｍｉｎ。
杂交试剂盒由 Ｃｌｏｎｄｉａｇ公司提供，杂交过程除
了文 中 指 出 外，按 照 试 剂 盒 所 述 方 法 进 行
（ＣｌｏｎｄｉａｇＣｈｉｐＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。简要过程如下：上
述 ＰＣＲ生物素标记产物１０μＬ中加入９０μＬ的杂
交液 Ｃ１（ＣｌｏｎｄｉａｇＣｈｉｐＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ），在杂交仪
（Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒｃｏｍｆｏｒｔ，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａ
ｎｙ）５５℃ ５５０ｒｐｍ下杂交１ｈ；经 ＨＲＰ（辣根过氧化
物酶，Ｃｌｏｎｄｉａｇ）进行连接（３０℃，５５０ｒｐｍ，１０ｍｉｎ），
经洗脱液 Ｃ５（Ｃｌｏｎｄｉａｇ）洗脱后，用 Ｃｌｏｄｉａｇ提供的
ＨＲＰ底物Ｄ１（Ｃｌｏｎｄｉａｇ）在３０℃ 进行５ｍｉｎ显色反
应。杂交显色结果用管芯片读器（ＡｒｒａｙＴｕｂｅ０３，
Ｃｌｏｎｄｉａｇ）通过ＩｃｏｎｏＣｌｕｓｔＡＴ３．０软件（Ｃｌｏｎｄｉａｇ）记
录分析。
１．４ 环境样本克隆
为了进一步验证芯片杂交结果，对所有杂交样
本进行ＩＴＳ扩增，然后进行克隆。将 ＰＣＲ产物经过
纯化之后进行克隆，利用 ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体，转入
Ｔｒａｎｓ１Ｔ１ｐｈａｇｅＲｅｓｉｓｔａｎｔ感受态细胞中。
每一个菌液作为 ＰＣＲ模板，反应体系和先前一
样，菌液模板加入１μＬ，扩增后，选择不同大小片段
的克隆子进行测序（华大基因公司）。测序引物为
Ｍ１３Ｆ，测序完毕之后，将载体序列弃去，并用剩余序
列在ＮＣＢＩ（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎ）中进行Ｂｌａｓｔ搜索比对。
６１６
第４期 王凯英，等：管芯片技术通量检测杨树溃疡病病菌的应用
２ 结果与分析
２．１ 环境样本芯片杂交
利用建立和完成的检测新技术，作者对北京地
区杨树溃疡病的病原真菌进行了大量样本检测。其
中１２个感病样本中有 ６个样本检测出了 Ｂ．ｄｏ
ｔｈｉｄｅａ，分别采自延庆、平谷、大兴、房山、顺义和怀
柔；只有采自朝阳区的杨树样品检测出了 Ｖａｌｓａｓｏｒ
ｄｉｄａ。而在健康样本中，有３个样本检测出含有 Ｂ．
ｄｏｔｈｉｄｅａ，分别采自房山、顺义和怀柔；此外，采自昌
平、海淀、门头沟、密云及通州的样品中没有杂交到
任何靶标点。结果表明，在未感病的样本中也同样
存在 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，不过以潜伏侵染状态存在。与健
康样本相比，感病样本中，Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ数量比较多，
芯片杂交样本中只有靶标探针能成功杂交，结果表
明，本实验室构建的芯片达到了预期目标。
芯片杂交结果见图２。
表２ 芯片杂交样本采集地点、寄主和生境
地区 样点 寄主 生境
朝阳 索家坟 北京杨Ｐｏｐｕｌｕｓｂｅｉｊｉｎｇｅｎｓｉｓ 郊野天然林，榆树，柳树混交，树林成片死亡
昌平 百善 美洲黑杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ 新栽植物与农耕地上林子，全死亡，树皮腐烂
大兴 鲍家堡 毛白杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｔｏｍｅｎｔｏｓａ 人工林，壤土地，沙土地
怀柔 白河湾 美洲黑杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ 天然林，灌木发达
海淀 北大未名 毛白杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｔｏｍｅｎｔｏｓａ 行道树
房山 树子湾 美洲黑杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ 郊野零星树
密云 番子牌 大青杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｕｓｕｒｉｅｎｓｉｓ 郊野林，灌木发达
白头沟 妙峰山 山白杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄａｖｉｄｉａｎａ 天然，零星树妙峰山５００米处
平谷 东凡各庄 北京杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｂｅｉｊｉｎｇｅｎｓｉｓ 人工种植与农田旁的行道树
顺义 南坞 美洲黑杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ 公路旁人工林，几种白杨派混交
通州 小杨各庄 银白杨 Ｐｏｐｕｌｕｓａｌｂａ 行道树
延庆 百草洼 美洲黑杨 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ 郊野林
Ａ．感病样本；Ｂ．无症状样本；黑色箭头指示５３号探针；蓝色箭头指示５０号探针；绿色箭头指示１号探针；红色箭头指示２号探针；
图２ 环境样本芯片杂交结果
２．２ 管芯片杂交结果的检验
通过ＩＴＳ１／ＩＴＳ４扩增后进行克隆，克隆结果见
表３，采自门头沟、密云、通州、海淀及昌平５个地区
的样本没有与任何探针成功杂交，其中采自前３个
地区样本的寄主为山白杨、大青杨、银白杨，同样也
没有克隆得到该菌，但克隆得到其他真菌 Ｈｙａｌｏｄｅｎ
ｄｒｉｅｌａｓｐ．、Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｆｕｃｋｅｌｉ、Ｐｅｙｒｏｎｅｌａｅａｓｐ．，而
采自海淀和昌平的样本没有克隆结果；采自朝阳的
样本杂交获得Ｖ．ｓｏｒｄｉｄａ，但无克隆结果；采自房山、
怀柔、顺义（寄主为美洲黑杨）、大兴（毛白杨）、平谷
（北京杨）的样本则成功杂交到 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，通过克
隆也获得了Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ和其他真菌。利用ＩＴＳ克隆
的同时也得到植物组织的 ＩＴＳ序列，如 Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌ
ｔｏｉｄｅｓ。总体克隆结果与管芯片结果相吻合。
７１６
林 业 科 学 研 究 第２９卷
表３ 环境样本克隆结果和杂交比对
地区 样点 杂交结果 ＩＴＳ克隆结果
大兴 鲍家堡 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
房山 树子湾 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｈｙａｌｏｄｅｎｄｒｉｅｌａｓｐ．，Ｌｏｐｈｉｏｓｔｏｍａｃｙｎａｒｏｉｄｉｓ，Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
怀柔 白河湾 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｐｅｙｒｏｎｅｌａｅａｓｐ．，Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｆｕｃｋｅｌｉ，Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓｓｐ．，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅ
门头沟 妙峰山 无 Ｈｙａｌｏｄｅｎｄｒｉｅｌａｓｐ．，Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｆｕｃｋｅｌｉ
密云 番子牌 无 Ｈｙａｌｏｄｅｎｄｒｉｅｌａｓｐ．，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
平谷 东凡各庄 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ａｓｃｏｍｙｃｉｔａｓｐ．，Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｆｕｃｋｅｌｉ，Ｄｏｔｈｉｄｅｍｙｃｅｔｅｓｓｐ．
顺义 南坞 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ｐｅｙｒｏｎｅｌａｅａｓｐ．，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
通州 小杨各庄 无 Ａｓｃｏｍｙｃｉｔａｓｐ．，Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｆｕｃｋｅｌｉ，Ｐｏｐｕｌｕｓａｌｂａ
延庆 百草洼 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ Ｈｙａｌｏｄｅｎｄｒｉｅｌａｓｐ．，Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，Ｐｏｐｕｌｕｓｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
朝阳 索家坟 Ｖ．ｓｏｒｄｉｄａ ———
昌平 百善 无 ———
海淀 北大未名 无 ———
３ 结论与讨论
本研究采用引进的管芯片（ＡｒａｙＴｕｂｅ）平台技
术具有高通量分析能力，其处理具有即时性与平行
性的特点。与片基生物芯片技术相比，管芯片平台
技术中的芯片载体是１．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ离心管，芯片
点制在截面的离心管底部内侧表面，即时与平行的
通量处理，２ｈ的杂交过程不仅减少了环境中污染，
而且明显提高了实验效率。
全部的杂交结果可分为３种。第一种，在采自
房山、顺义和怀柔三个地区的感病样本和未感病样
本中均检测到 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，表明 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ既是致
病菌，又是内生菌，但如何以无害的内生菌变成病原
菌的机制尚不清楚，但外部环境及发育阶段等因素
可能诱变内生菌为致病菌［１５］；第二，在采自朝阳、大
兴、延庆和平谷４个地区的样本中，只在感病样本中
检测到了病原菌 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，而在采自海淀、门头
沟、密云、通州及昌平等５个地区的感病样本和非感
病样本中均没有检测出任何病原菌，表明这５个地
区发生的杨树溃疡病症状可能是由其他病原菌引起
的。李如华等［１６］发现在北京地区引起杨树溃疡的
病原菌是多样的，可能是 Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ或
Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍｐａｒｖｕｍ，也可能存在复合病原［１６－１９］。
由于本研究采用的探针是专化针对 Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ，因
此，采用本试验设计的管芯片技术无法检测出其他
病原菌，但证明在这些地区发生的杨树溃疡病症状
不是由Ｂ．ｄｏｔｈｉｄｅａ引起的。
本文首次将管芯片技术应用到树木溃疡病病原
的鉴定中，并且成功快速地检测到了致病菌。该技
术为杨树溃疡病的病原生态及病害流行的探索提供
了新技术手段。由于一些病原菌也是内生菌，在一
定条件下不引起任何症状，如本研究中检测出的 Ｂ．
ｄｏｔｈｉｄｅａ既是病原菌又是内生菌，并且作为常见的树
木内生真菌，寄主广泛，可能成为树木溃疡病的潜在
病原［２０］。因此，病原菌与内生菌在什么条件下会相
互转换，以及其与寄主或环境条件之间的关系如何，
能否采用芯片技术加以解决，还有待于深入研究。
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（责任编辑：崔 贝）
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