全 文 ：书低氢氰酸含量高丹草新品系及其亲本的犛犛犚分析
于卓，谢锐，于肖夏，马艳红，李造哲，纪明妹
（内蒙古农业大学农学院，内蒙古 呼和浩特０１００１９）
摘要：为明确４个低氢氰酸含量的高丹草新品系ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ１３、ＳＬＣＮ１４及其亲本散穗高粱、黑壳
苏丹草、白壳苏丹草、红壳苏丹草和棕壳苏丹草在ＤＮＡ水平上的差异程度，以育成登记的高丹草品种蒙农青饲３
号为对照，对其进行了ＳＳＲ分析。试验从２００个高粱ＳＳＲ引物中筛选出多态性丰富、重复性好的１２对引物，利用
这些引物对１０个材料进行ＰＣＲ扩增共得到５０９个多态性位点，多态性百分率达８７．３０％。每对引物扩增的ＳＳＲ
指纹图清晰、稳定，可作为鉴别４个高丹草新品系及其亲本的分子依据。１０个供试材料间的遗传距离（ＧＤ）变幅在
０．３１６５～０．６６９２之间，平均为０．５３５９；以ＧＤ值０．５０为基准，将１０个材料划分为５类：蒙农青饲３号、散穗高粱、
ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ１３为一类；ＳＬＣＮ１４、棕壳苏丹草为一类；白壳苏丹草、黑壳苏丹草、红壳苏丹草各单独
为一类。该研究为下一步低氢氰酸含量高丹草新品种育成及登记利用奠定了基础。
关键词：高丹草；低氢氰酸含量；新品系；ＳＳＲ分析；指纹图
中图分类号：Ｓ８１６；Ｓ５４４＋．１０３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１４）０１０２２３０６
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１４０１２７
高丹草是高粱（犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉）与苏丹草（犛狅狉犵犺狌犿狊狌犱犪狀犲狀狊犲）的种间杂交后代，具有高粱鲜草产量高、抗
逆性强和苏丹草叶量大、品质好等优良特性，其不足点是鲜草中含有氢氰酸［１３］。有研究表明，高丹草品种间氢氰
酸含量差异较大，含量高的品种（株高约１００ｃｍ时茎叶鲜草氢氰酸含量≥１００ｍｇ／ｋｇ）家畜采食量大时会出现中
毒现象，给生产带来严重损失［４６］。选育青刈饲喂安全的超低氢氰酸含量（株高约１００ｃｍ时茎叶鲜草氢氰酸含量
１～１５ｍｇ／ｋｇ，青刈后可直接饲喂家畜）高丹草新品种是预防氢氰酸危害的有效措施。
为培育青刈饲喂家畜安全的超低氢氰酸含量高丹草新品种，近年来我们利用在内蒙古中西部地区种植多年
的氢氰酸含量低的散穗高粱与黑壳苏丹草、白壳苏丹草、红壳苏丹草和棕壳苏丹草相组配进行人工授粉杂交，获
得４个杂交组合的Ｆ１ 代，通过ＩＳＳＲ分子标记辅助选育，得到４个超低氰氢酸含量高丹草新品系ＳＬＣＮ１１（散穗
高粱×黑壳苏丹草Ｆ５）、ＳＬＣＮ１２（散穗高粱×白壳苏丹草Ｆ５）、ＳＬＣＮ１３（散穗高粱×红壳苏丹草Ｆ５）、ＳＬＣＮ１４
（散穗高粱×棕壳苏丹草Ｆ５）［７１０］。ＳＳＲ（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｓ，简单重复序列）为共显性标记，具有多态性丰
富、重复性好等优点，已广泛应用于牧草和作物的遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因定位及分子标记辅助育
种［１１１４］。目前，国内外有关ＳＳＲ标记技术在高丹草品种或品系鉴定方面的应用尚未见有研究报道。本试验以我
们育成登记的高丹草品种蒙农青饲３号为对照［１５］，重点对上述４个高丹草新品系及其亲本进行ＳＳＲ分析，以明
确其在ＤＮＡ水平上的差异程度，并建立高丹草新品系的ＳＳＲ指纹图，为下一步高丹草新品种育成及登记利用提
供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
材料为４个高丹草新品系ＳＬＣＮ１１（散穗高粱×黑壳苏丹草Ｆ５）、ＳＬＣＮ１２（散穗高粱×白壳苏丹草Ｆ５）、
ＳＬＣＮ１３（散穗高粱×红壳苏丹草Ｆ５）、ＳＬＣＮ１４（散穗高粱×棕壳苏丹草Ｆ５）及母本散穗高粱和父本黑壳苏丹
草、白壳苏丹草、红壳苏丹草、棕壳苏丹草，对照品种为蒙农青饲３号高丹草（犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉×犛狅狉犵犺狌犿狊狌
第２３卷 第１期
Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２２３－２２８
２０１４年２月
收稿日期：２０１３０８１９；改回日期：２０１３１０３０
基金项目：国家“９７３”计划基金项目（２０１４ＣＢ１３８７０３），国家自然科学基金项目（３１０６０３２２）和内蒙古农业综合开发办项目（２０１２９７）资助。
作者简介：于卓（１９５８），男，内蒙古托克托人，教授，博士。
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｙｕｚｈｕｏ５８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ｄａｎｅｎｓｅｃｖ．ＭｅｎｇｎｏｎｇＱｉｎｇｓｉＮｏ．３）。各供试材料的种子由内蒙古农业大学农学院饲用作物育种研究室提供，
试验于２０１２年７月至２０１３年５月在室内进行。
１．２ 总ＤＮＡ提取与纯度检测
将各供试材料的种子播种在花盆中，室温条件下培养成苗，在三叶期每种材料随机剪取２０个单株幼苗的叶
片混合，用植物基因组试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取ＤＮＡ，取５μＬＤＮＡ用１．５％琼脂糖凝胶电泳
检测ＤＮＡ纯度，将各材料的ＤＮＡ浓度稀释至５０ｎｇ／μＬ置冰箱中冷冻保存备用。
１．３ ＳＳＲＰＣＲ扩增反应
扩增反应体系：反应液总体积为２０μＬ，其中ｄｄＨ２Ｏ１１．６μＬ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ２．０μＬ，Ｍｇ
２＋１．６μＬ，ｄＮＴＰ１．６
μＬ，Ｔａｑ酶０．２μＬ，上游引物１．０μＬ，下游引物１．０μＬ，６０ｎｇ／μＬ的模板ＤＮＡ１．０μＬ。
扩增反应程序：在ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＭａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ５３３１ＰＣＲ仪上，９５℃变性４ｍｉｎ，１个循环；９４℃变性３０ｓ，５６℃
退火４５ｓ，７２℃延伸９０ｓ，３４个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ，１个循环后终止反应。
聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染检测：扩增产物在６％变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，每样品点样８μＬ，电泳
时间２ｈ。胶板在０．１５％ ＡｇＮＯ３溶液中银染１５ｍｉｎ，取出后蒸馏水速漂５ｓ，放入含有３％ＮａＯＨ和０．５％甲醛
的溶液中显色１０ｍｉｎ，视条带清晰后转入固定液终止反应，蒸馏水清洗２ｍｉｎ后晾干、扫描。
１．４ ＳＳＲ适宜引物的筛选
利用已开发的同属植物高粱的２００对ＳＳＲ引物进行筛选（ｈｔｔｐ：／／ａｌｇｏｄｏｎ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｓｏｒｇｈｕｍｄｂ．ｈｔｍｌ提
供的引物序列，由上海生物工程公司合成），选出多态性丰富的适宜引物，用于ＰＣＲ扩增。试验重复５次。
１．５ ＳＳＲ分子标记的数据处理
将染色好的胶板放在透射光灯箱上，记录胶板上清晰的条带，电泳结果采取０／１赋值记带，将所观察到的每
一条带视为１个单位，有带记为１，无带记为０，生成０，１组成的数据矩阵，进行统计分析，并计算下列相关遗传系
数［１６］。
多态性位点百分率：对于某一位点而言，当变异个体频率大于０．０１时，该位点即为多态性位点（Ｐ）：犘＝（犓／
犖）×１００％，式中，犓 为多态性位点数目、犖 为扩增位点总数。
供试材料的遗传相似系数（ＧＳ）和遗传距离（ＧＤ）：犌犛＝２犛犻犼／（犛犻＋犛犼），式中，犛犻犼为材料犻和材料犼共有的条
带数目，犛犻＋犛犼为２种材料中出现的条带数目之和；犌犇＝１－犌犛。根据类平均法，运用ＤＰＳＶ８．０１分析软件进
行聚类分析。
２ 结果与分析
图１ 供试植物基因组犇犖犃电泳检测
犉犻犵．１ 犜犺犲犲犾犲犮狋狉狅狆犺狅狉犲狊犻狊狅犳犵犲狀狅犿犻犮犇犖犃狅犳狋犲狊狋犲犱狆犾犪狀狋狊
Ｍ：ＤＮＡｍａｒｋｅｒＤＬ２０００；１：蒙农青饲３号 ＭｅｎｇｎｏｎｇＱｉｎｇｓｉＮｏ．３；
２：ＳＬＣＮ１１；３：ＳＬＣＮ１２；４：ＳＬＣＮ１３；５：ＳＬＣＮ１４；６：♀散穗高粱 Ｌｏｏｓｅ
ｓｐｉｋｅｓｏｒｇｈｕｍ；７：♂黑壳苏丹草Ｂｌａｃｋｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；８：♂白壳苏丹草
Ｗｈｉｔｅｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；９：♂红壳苏丹草Ｒｅｄｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；１０：♂棕壳
苏丹草Ｂｒｏｗｎｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ．
２．１ 供试材料基因组ＤＮＡ质量检测
用植物基因组试剂盒提取１０个供试材料基因组
ＤＮＡ的电泳条带清晰、可辨、均匀且无拖尾现象，表明
所提取的ＤＮＡ纯度高，完全能满足ＳＳＲ分析的要求
（图１）。
２．２ ＳＳＲ扩增结果
以４个高丹草新品系ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ
１３、ＳＬＣＮ１４和其亲本散穗高粱、黑壳苏丹草、白壳苏
丹草、红壳苏丹草、棕壳苏丹草及蒙农青饲３号高丹草
基因组ＤＮＡ为模板，从２００个ＳＳＲ引物中筛选出条带清晰、稳定性好、多态性丰富的适宜引物１２对（表１），用
于１０个供试材料基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增，共得到５７６个ＳＳＲ位点，其扩增片段长度多在２００～２５００ｂｐ之间，
平均每对引物扩增出４８个，多态性位点５０９个，多态性百分率达８７．３％。在１２对引物中，以引物Ｘｔｘｐ７扩增的
总位点数和多态性位点数最少，分别为２６和１８个，引物 Ｘｔｘｐ９６扩增的多态性位点百分率最高，为１００％
（表２）。
４２２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
表１ 犛犛犚分析所用引物及其碱基序列
犜犪犫犾犲１ 犘狉犻犿犲狉狊犪狀犱狋犺犲犻狉狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊狌狊犲犱犳狅狉犛犛犚犪狀犪犾狔狊犻狊
引物编号
Ｐｒｉｍｅｒｓ
碱基序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
上游Ｆｏｒｗａｒｄ 下游Ｒｅｖｅｒｓｅ
Ｘｔｘｐ７ ＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＣＣＴＣＴＣＡＣＣ ＡＣＡＣＡＴＣＧＡＧＡＣＣＡＧＴＴＧ
Ｘｔｘｐ１２ ＡＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＡＡＣＧ ＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＧＡＴＣＡＴＣ
Ｘｔｘｐ１３ ＴＣＴＴＴＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＣＴＡＧ ＧＡＡＧＴＴＡＴＧＣＣＡＧＡＣＡＴＧＣＴＧ
Ｘｔｘｐ１９ ＣＴＴＴＣＡＡＴＣＧＧＴＴＣＣＡＧＡＣ ＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＧＴＡＣＴＣ
Ｘｔｘｐ６１ ＧＡＴＧＣＣＣＡＴＧＣＣＴＴＧＣ ＣＣＣＡＣＴＡＡＡＣＴＡＡＡＧＣＧＧＡＣＡ
Ｘｔｘｐ６３ ＣＣＡＡＣＣＧＣＧＴＣＧＣＴＧＡＴＧ ＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＴＣＧＧＧＧＣＡＣＴＧ
Ｘｔｘｐ６７ ＣＣＴＧＡＣＧＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＣ ＴＣＣＡＣＡＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＴＣＣ
Ｘｔｘｐ６９ ＴＧＡＣＴＧＡＡＡＧＣＴＣＧＧＣＧＴ ＣＧＣＡＡＣＴＧＣＧＣＴＴＡＡＣＡＡＣＴ
Ｘｔｘｐ９６ ＧＣＴＧＡＴＧＴＣＡＴＧＴＴＣＣＣＴＣＡＣ ＣＡＴＴＣＧＴＧＧＡＣＴＣＴＧＴＣＧＧ
Ｘｔｘｐ２５８ ＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＣＧＣＧＡＡＣＴＧＡＡ ＧＣＴＴＡＧＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＡＣＣＡＧ
Ｘｔｘｐ３３１ ＡＡＣＧＧＴＴＡＴＴＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡ ＡＧＴＡＴＡＡＴＡＡＣＡＴＴＴＴＧＡＣＡＣＣＣＡ
ＺＣＴ３３９ ＣＣＡＡＣＣＧＴＡＴＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣ ＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＣＡＴＣＧＴＣＴＴＣＴＴ
此外，每对引物扩增的ＳＳＲ指纹图均可以清晰地
将１０个供试材料区别开来，这可为高丹草新品系鉴定
及下一步新品种育成登记和知识产权保护利用提供
ＤＮＡ分子依据（图２～４）。
２．３ 遗传距离和聚类分析
１０ 个供试材料间的遗传距离 （ＧＤ）变幅在
０．３１６５～０．６６９２之间，平均为０．５３５９（表３）；以 ＧＤ
值０．５０为基准，１０个材料大体分为５类：蒙农青饲３
号、散穗高粱、ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ１３为一类；
ＳＬＣＮ１４、棕壳苏丹草为一类；白壳苏丹草、黑壳苏丹
草、红壳苏丹草各单独为一类（图５）。
３ 讨论
植物远缘杂交是实现不同物种间基因交流和创造
新种质（新物种、新品种）的重要途径［１７１８］。本试验用
育成登记的高丹草品种蒙农青饲３号作对照，将散穗
高粱与黑壳苏丹草、白壳苏丹草、红壳苏丹草和棕壳苏
丹草种间远缘杂交获得的４个低氰含量高丹草新品系
ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ１３、ＳＬＣＮ１４［９１０］和其亲
表２ 供试植物犛犛犚引物及扩增结果
犜犪犫犾犲２ 犛犛犚犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狋犲狊狋犲犱狆犾犪狀狋狊
引物编号
Ｐｒｉｍｅｒ
扩增位点数
Ｎｏ．ｏｆ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｌｏｃｉ
多态性位点数
Ｎｏ．ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｌｏｃｉ
多态性位点百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｌｏｃｉ（％）
Ｘｔｘｐ７ ２６ １８ ６９．２３
Ｘｔｘｐ１２ ４４ ３７ ８４．０９
Ｘｔｘｐ１３ ４９ ３８ ７７．５５
Ｘｔｘｐ１９ ３３ ３１ ９３．９４
Ｘｔｘｐ６１ ５１ ４５ ８８．２３
Ｘｔｘｐ６３ ３８ ２９ ７６．３２
Ｘｔｘｐ６７ ５０ ４２ ８４．００
Ｘｔｘｐ６９ ４５ ４４ ９７．７８
Ｘｔｘｐ９６ ４６ ４６ １００．００
Ｘｔｘｐ２５８ ５６ ５３ ９４．６４
Ｘｔｘｐ３３１ ５５ ４８ ８７．２７
ＺＣＴ３３９ ８３ ７８ ９３．９８
合计 Ｔｏｔａｌ ５７６ ５０９ ８７．２５
本间的遗传差异及亲缘关系进行ＳＳＲ分析显示，各供试材料间的遗传距离（ＧＤ值）平均为０．５３５９，遗传差异较
大；１０个材料聚为３类，其中在第１类的５个材料中，包含了３个母本遗传背景均为散穗高粱的新品系ＳＬＣＮ
１１、ＳＬＣＮ１２和ＳＬＣＮ１３，新品系ＳＬＣＮ１４与其没有杂交关系的棕壳苏丹草聚在一起，另外３个父本材料黑壳
苏丹草、白壳苏丹草和红壳苏丹草各单独为一类，即部分遗传背景相同或不同的杂交新品系并没有表现出明显的
聚类规则。这说明高粱和苏丹草种间杂交育成的新品系实现了亲本间基因的复杂交流，打乱了其亲本原有的基
因次序，组合形成了新的基因型，这可能是高丹草杂交新品系杂种优势强的重要分子依据。
５２２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
图２ 引物狓狋狓狆６１的犛犛犚指纹图
犉犻犵．２ 犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱犫狔狋犺犲狆狉犻犿犲狉狊狓狋狓狆６１
１：蒙农青饲３号 ＭｅｎｇｎｏｎｇＱｉｎｇｓｉＮｏ．３；２：♀散穗高粱
Ｌｏｏｓｅｓｐｉｋｅｓｏｒｇｈｕｍ；３：ＳＬＣＮ１１；４：♂黑壳苏丹草Ｂｌａｃｋｈｕｌ
ｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；５：ＳＬＣＮ１２；６：♂白壳苏丹草 Ｗｈｉｔｅｈｕｌｓｕｄａｎ
ｇｒａｓｓ；７：ＳＬＣＮ１３；８：♂红壳苏丹草 Ｒｅｄｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；９：
ＳＬＣＮ１４；１０：♂棕壳苏丹草Ｂｒｏｗｎｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；Ｍ：ＤＮＡ
ｍａｒｋｅｒＤＬ２０００；下同Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
图３ 引物狓狋狓狆６９的犛犛犚指纹图
犉犻犵．３ 犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱犫狔狋犺犲狆狉犻犿犲狉狊狓狋狓狆６９
图４ 引物犣犆犜３３９的犛犛犚指纹图
犉犻犵．４ 犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱犫狔狋犺犲狆狉犻犿犲狉狊犣犆犜３３９
表３ 供试植物的遗传距离矩阵
犜犪犫犾犲３ 犜犺犲犵犲狀犲狋犻犮犱犻狊狋犪狀犮犲犿犪狋狉犻狓狅犳狋犲狊狋犲犱狆犾犪狀狋狊
材料 Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９
２ ０．３５７１
３ ０．３８８９ ０．３１６５
４ ０．５６０３ ０．５２２６ ０．５３４６
５ ０．５８５２ ０．４３６２ ０．５１６３ ０．５３３３
６ ０．５７８２ ０．４７８３ ０．４４２４ ０．５８０２ ０．５８９７
７ ０．５０７７ ０．４４４４ ０．４５９５ ０．５３１０ ０．４６７６ ０．４９６７
８ ０．６６９２ ０．６１９０ ０．６４２４ ０．６４８６ ０．６１９７ ０．５７１４ ０．６０５８
９ ０．５８２７ ０．５２９４ ０．６０５１ ０．５９７４ ０．５４０５ ０．５７５０ ０．５５２４ ０．５８９０
１０ ０．５２７８ ０．４１７７ ０．５３０９ ０．５９７５ ０．５９４８ ０．４７８８ ０．５２７０ ０．６１５９ ０．４５２２
１：蒙农青饲３号 ＭｅｎｇｎｏｎｇＱｉｎｇｓｉＮｏ．３；２：♀散穗高粱Ｌｏｏｓｅｓｐｉｋｅｓｏｒｇｈｕｍ；３：ＳＬＣＮ１１；４：♂黑壳苏丹草Ｂｌａｃｋｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；５：ＳＬＣＮ１２；６：
♂白壳苏丹草 Ｗｈｉｔｅｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；７：ＳＬＣＮ１３；８：♂红壳苏丹草Ｒｅｄｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；９：ＳＬＣＮ１４；１０：♂棕壳苏丹草Ｂｒｏｗｎｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ．
由于高丹草目前还没有开发出ＳＳＲ引物，若单独开发成本高，故本试验从网上公布 （ｈｔｔｐ：／／ａｌｇｏｄｏｎ．ｔａｍｕ．
ｅｄｕ／ｓｏｒｇｈｕｍｄｂ．ｈｔｍｌ）的２００个普通高粱（近源同属植物）的ＳＳＲ引物中，筛选出多态性丰富、条带稳定的１２对
引物进行了ＰＣＲ扩增和位点分析，由于这些引物在普通高粱上扩增的ＳＳＲ位点数目等表现情况目前还未见有
研究报道，尚难与本试验结果进行比对，但本试验所用的母本材料散穗高粱是高粱属的一种，从１２对引物扩增的
电泳图片可知，由于引物不同其位点数不同，总体看散穗高粱的ＳＳＲ位点数较多，它们与其余９个供试材料的
６２２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１
图５ １０个供试植物的犛犛犚聚类图
犉犻犵．５ 犜犺犲犛犛犚犱犲狀犱狉狅犵狉犪犿狅犳１０狋犲狊狋犲犱狆犾犪狀狋狊
ＳＳＲ位点数和条带位置存在着一定的差异，而且每对引物扩增的ＳＳＲ指纹图均可将１０个供试材料区分开来，说
明同属近缘种普通高粱的ＳＳＲ引物用于高丹草新品系在ＤＮＡ水平上鉴定是可行的。
本试验采用植物基因组试剂盒提取各供试植物基因组ＤＮＡ的质量很高，但在试验中应注意样品经液氮处
理后要迅速研磨成粉末状，且要避免长时间放置研好的样品，否则会影响ＤＮＡ的提取效果，甚至导致ＤＮＡ提取
失败。另外，在聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）制备过程中，加速剂ＴＥＭＥＤ应最后加入，并迅速充分混匀、立即匀速灌
胶，否则会导致同一胶板电泳速度不一致，出现非水平的条带而影响试验结果。
４ 结论
试验筛选出ＳＳＲ适宜引物１２对，ＰＣＲ扩增１０个材料的基因组ＤＮＡ共得到５０９个多态性位点，多态性百分
率达８７．３０％。每对引物扩增的ＳＳＲ指纹图清晰、稳定，是识别４个低氰含量高丹草新品系及其亲本的重要分子
依据。供试材料间的ＧＤ值变幅为０．３１６５～０．６６９２，以ＧＤ值０．５０为基准，１０个材料划分为５类：蒙农青饲３
号、散穗高粱、ＳＬＣＮ１１、ＳＬＣＮ１２、ＳＬＣＮ１３为一类；ＳＬＣＮ１４、棕壳苏丹草为一类；白壳苏丹草、黑壳苏丹草、红
壳苏丹草各单独为一类。
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７２２第２３卷第１期 草业学报２０１４年
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犛犛犚犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狊狅狉犵犺狌犿狊狌犱犪狀犵狉犪狊狊狀犲狑狊狋狉犪犻狀狊狑犻狋犺犾狅狑犺狔犱狉狅犮狔犪狀犻犮犪犮犻犱犮狅狀狋犲狀狋
ＹＵＺｈｕｏ，ＸＩＥＲｕｉ，ＹＵＸｉａｏｘｉａ，ＭＡＹａｎｈｏｎｇ，ＬＩＺａｏｚｈｅ，ＪＩＭｉｎｇｍｅｉ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００１９，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｄｅｇｒｅｅｏｆｆｏｕｒｎｅｗｓｔｒａｉｎｓｏｆｓｏｒｇｈｕｍｓｕｄａｎｇｒａｓｓｗｉｔｈｌｏｗｈｙｄｒｏｃｙａｎｉｃ
ａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔＳＬＣＮ１１，ＳＬＣＮ１２，ＳＬＣＮ１３ａｎｄＳＬＣＮ１４，ａｎｄｔｈｅｉｒｐａｒｅｎｔｓａｔａＤＮＡｌｅｖｅｌ，ｗｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄ
ＳＳＲａｎａｌｙｓｅｓｕｓｉｎｇｔｈｅｖａｒｉｅｔｙＭｅｎｇｎｏｎｇＱｉｎｇｓｉＮｏ．３ａｓａｃｏｎｔｒｏｌ．Ａｔｏｔａｌｏｆ１２ＳＳＲｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｗｉｔｈｈｉｇｈ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎｄｇｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍ２００ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｓｏｒｇｈｕｍＳＳＲｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓ．Ｔｈｅ１０
ｍａｔｅｒｉａｌｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｓｅＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓ．Ａｔｏｔａｌｏｆ５０９ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒ
ｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｌｏｃｉｗａｓｕｐｔｏ８７．３０％．ＥａｃｈＳＳＲｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｃｏｕｌｄａｍｐｌｉｆｙｃｌｅａｒａｎｄｓｔａ
ｂｌｅｂａｎｄｓ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｔｈｅｆｏｕｒｎｅｗｓｔｒａｉｎｓｏｆｓｏｒｇｈｕｍｓｕｄａｎｇｒａｓｓ．
Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅ（ＧＤ）ａｍｏｎｇ１０ｍａｔｅｒｉａｌｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ０．３１６５－０．６６９２，ｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｏｆｕｓｉｎｇ０．５３５９；Ｕ
ｓｉｎｇｔｈｅＧＤｖａｌｕｅｏｆ０．５０ａｓａｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，ｔｈｅ１０ｍａｔｅｒｉａｌｓｃａｎｂｅｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏｆｉｖｅｇｒｏｕｐｓ：Ｍｅｎｇｎｏｎｇｑｉｎｇｓｉ
Ｎｏ．３，ｌｏｏｓｅｓｐｉｋｅｓｏｒｇｈｕｍ，ＳＬＣＮ１１，ＳＬＣＮ１２ａｎｄＳＬＣＮ１３；ＳＬＣＮ１４ａｎｄｂｒｏｗｎｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；ｗｈｉｔｅ
ｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；ｂｌａｃｋｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓ；ｒｅｄｈｕｌｓｕｄａｎｇｒａｓｓ．Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｌａｉｄｔｈｅｇｒｏｕｎｄｗｏｒｋｆｏｒｔｈｅｎｅｘｔｓｔｅｐ
ｂｒｅｅｄｉｎｇ，ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｅｗｓｏｒｇｈｕｍｓｕｄａｎｇｒａｓｓｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｉｔｈｌｏｗｈｙｄｒｏｃｙａｎｉｃａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｓｏｒｇｈｕｍｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；ｌｏｗｈｙｄｒｏｃｙａｎｉｃａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔ；ｎｅｗｓｔｒａｉｎ；ＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
８２２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１４） Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１