全 文 ：书金属硫蛋白对奶牛血液抗氧化酶犌犛犎犘狓
和犆犃犜基因表达的影响
张彬１，谭琼１，李丽立２，刘海林３，ＤＥＸｉｎｇｈｏｕ４，
肖定福１，陈宇光１，罗佳捷１，毕小艳１
（１．湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙４１０１２８；２．中国科学院亚热带农业生态研究所，湖南 长沙４１０１２５；
３．湖南省畜牧兽医研究所，湖南 长沙４１０１３１；４．日本国立鹿儿岛大学农学部，日本 鹿儿岛８９０００６５）
摘要：为探讨金属硫蛋白（ＭＴ）对奶牛抗氧化应激机能的调控效果及其机理，选取２４头中国荷斯坦奶牛经产泌乳
母牛，随机均分为Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ４组，分别按每头０（对照组），４．０，８．０和１２．０ｍｇ静脉注射ＺｎＭＴ。每隔１５ｄ逐头
采取血样，测定不同剂量的外源性 ＭＴ和 ＭＴ不同作用时间对奶牛抗氧化酶ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平的影
响。结果表明，补给外源性 ＭＴ后，３个试验组ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平都有不同幅度的提高，其中ＩＩＩ组和
ＩＶ组ＧＳＨＰｘ基因表达量分别较对照组有显著（犘＜０．０５）提高。ＩＩＩ组ＣＡＴ基因表达水平显著（犘＜０．０５）高于对
照组；ＩＶ组ＣＡＴ基因表达水平又比对照组、ＩＩ组和ＩＩＩ组分别提高了２２．８８％（犘＜０．０１），１７．７１％（犘＜０．０５）和
７．１０％（犘＞０．０５）。而ＩＩ组ＧＳＨ犘ｘ和ＣＡＴ基因表达量与对照组差异均不显著（犘＞０．０５）。从正试期间不同时
间看，补给外源性ＭＴ后，各组ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平逐步升高，至３０ｄ时达最高，４５ｄ时又有下降。尤其
是３０ｄ时的ＧＳＨＰｘ基因表达水平及１５和３０ｄ时的ＣＡＴ基因表达水平均显著（犘＜０．０５）高于第１天。说明外
源性 ＭＴ能有效调控奶牛ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平，并表现出较为明显的剂量效应和时间效应。
关键词：金属硫蛋白；抗氧化；ＧＳＨＰｘ；ＣＡＴ；基因表达；奶牛
中图分类号：Ｓ８２３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１０）０３０１３２０７
长期以来，氧化应激一直是困扰奶牛饲养业的一大难题。鉴于由奶牛生物学特性决定的应激敏感性以及奶
和奶制品抗氧化的重要性，探索减少或缓解奶牛氧化应激的途径一直是奶牛饲养业的重大课题之一。金属硫蛋
白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）作为一种天然生理活性物质和高效抗氧化剂［１５］，其研究和应用为提高奶牛抗氧化应激
能力带来了新的希望［６］。针对实验动物和人类 ＭＴ的研究发现：ＭＴ的主要作用是参与微量元素储存、运转和代
谢，拮抗电离辐射，清除羟基自由基，重金属解毒，增强机体的免疫力，提高抗应激和抗氧化能力，参与ＤＮＡ的复
制、转录和能量代谢的调节过程，尤以清除羟自由基、抗氧化和抗应激的作用甚大，因而越来越受到人们的广泛关
注［７１１］。近年来，有学者初步研究了 ＭＴ在奶牛体内的代谢规律及其对奶牛抗热应激调控及超氧化物歧化酶
（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）基因表达的影响，探讨了 ＭＴ在奶牛体内拮抗自由基、抗热应激的良好效果及其部
分机理，发现 ＭＴ能明显地缓解热应激对奶牛脉搏、呼吸频率等生理指标的不利影响，显著地改善奶牛的产奶性
能，显著提高奶牛血清 ＭＴ水平和奶中 ＭＴ含量，提高抗氧化应激酶ＳＯＤ基因的表达水平，从而明显提高奶牛
抗热应激的能力［１２１４］。但此类报道极少，研究尤欠深入，尤其是 ＭＴ对奶牛体内其他抗氧化酶基因表达的影响
如何迄今尚未见报道。本研究拟探索外源性 ＭＴ对奶牛谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨＰｘ）
和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）等抗氧化酶基因表达的影响，为揭示 ＭＴ调控奶牛抗氧化应激机理的理论研究及
其在奶业安全生产中的应用提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ ＭＴ的合成、提取与定量
参照本实验室方法［１５］，采用逐级递增的ＺｎＳＯ４ 溶液颈部肌肉注射法诱导合成和提取奶牛肝脏锌金属硫蛋
１３２－１３８
２０１０年６月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第１９卷 第３期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
收稿日期：２００９０６０２；改回日期：２００９０６２８
基金项目：国家自然科学基金项目（３０６７１５１６；３０１７０６８４）和湖南省自然科学基金重点项目（０６ＪＪ２００９１）资助。
作者简介：张彬（１９５５），湖南安仁人，教授，博士生导师，博士。
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｌｉｌｉ＠ｉｓａ．ａｃ．ｃｎ；ｚｈｂ８２３６＠１２６．ｃｏｍ
白（ＺｎＭＴ），并用间接竞争型酶联免疫法（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）进行定量［１６］，之后分装
冷藏备用。
１．２ 试验动物的选择、分组与试验设计
从湖南省奶牛原种场选取年龄、体重、胎次、产犊时间、日泌乳量及以往泌乳期产奶成绩相近的中国荷斯坦奶
牛健康经产泌乳牛２４头，随机分为Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ４组，每组６头。其中Ｉ组为对照组，ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ组为试验组，分别
在正式试验开始的当天（１ｄ）每头静脉注射经生理盐水溶解的ＺｎＭＴ４．０，８．０和１２．０ｍｇ。预试期７ｄ，正试期
４５ｄ（１～４５ｄ）。
１．３ 饲养管理方式
供试奶牛饲养在同一幢双列式牛舍，每头牛１个牛床。各组奶牛饲喂相同日粮，日粮系奶牛场参照 ＮＲＣ
（２００１）和《中国奶牛饲养标准》（２０００）自行配制，日粮组成（ｋｇ／头）：玉米３．１４、豆粕０．５１、棉粕０．４５、菜粕０．２８、
麦麸０．７３、酵母粉０．２８、磷酸氢钙０．０６、碳酸钙０．０６、食盐０．０６、碳酸氢钠０．０６、稻草１０、象草（犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿狆狌狉
狆狌狉犲狌犿）２０。日粮营养水平：产奶净能９２．２６ＭＪ，奶牛能量单位２９．５６，粗蛋白（ＣＰ）１６４６．６４ｇ，Ｃａ６９．７６ｇ，Ｐ
４３．４４ｇ。专人饲养管理。各组饲养管理方式一致。
１．４ 采样
在正试期的第１（注射 ＭＴ前），１５，３０和４５天分别从供试奶牛尾静脉采血。每次采血约５ｍＬ，用肝素钠
（０．８ｍＬ，２５０Ｕ／ｍＬ）抗凝全血，摇匀于－２０℃冰箱保存待测。
１．５ 基因表达分析
１．５．１ 引物设计及合成 基因表达分析采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ法。根据网上（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．
ｇｏｖ／）发表的基因序列，以ＢｅｔａａｃｔｉｎｍＲＮＡ作内标，根据ＧｅｎＢａｎｋ中奶牛的ＧＳＨＰｘ、ＣＡＴ和Ｂｅｔａａｃｔｉｎ的基
因登陆序列（依次为ＮＭ００１０３５３８６、ＮＭ１７４０７７和ＮＭ１７３９７９），用ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计引物（表１）。引
物均由日本基因株式会社ＤＮＡ合成事业部合成。
表１ 犌犛犎犘狓、犆犃犜和犅犲狋犪犪犮狋犻狀基因的引物设计
犜犪犫犾犲１ 犘狉犻犿犲狉犱犲狊犻犵狀犳狅狉犌犛犎犘狓，犆犃犜犪狀犱犅犲狋犪犪犮狋犻狀
基因Ｇｅｎｅ 引物序列Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ 产物Ｐｒｏｄｕｃｔ（ｂｐ）
ＧＳＨＰｘ 上游 Ｕｐｐｅｒｓｔｒｅａｍ：５′ＡＧＧＡＡＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＧＡＧＧＡＧ３′ ２１３
下游 Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ：５′ＧＧＧＧＡＣＣＡＧＧＴＧＡＴＧＡＡＣＴＴＡＧ３′
ＣＡＴ 上游 Ｕｕｐｐｅｒｓｔｒｅａｍ：５′ＧＧＣＣＴＣＣＧＣＧＡＴＣＴＴＴＴＣＡＡＴＧ３′ ３９２
下游 Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ：５′ＧＧＧＣＣＧＴＣＡＣＧＣＴＧＧＴＡＧＴＴＧ３′
Ｂｅｔａａｃｔｉｎ 上游 Ｕｐｐｅｒｓｔｒｅａｍ：５′ＣＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＡＣＧＡＧ３′ ２００
下游 Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ：５′ＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＡＡＧＴＣ３′
１．５．２ 血液总ＲＮＡ的提取 采用日本基因株
式会社的ＩＳＯＧＥＮＬＳ总ＲＮＡ抽提试剂盒并按
其试剂盒说明书操作。
１．５．３ 反转录ｃＤＮＡ 采用ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭＦｉｒｓｔ
ＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｓｔｈｅｓｉｓＫｉｔ反转录试剂盒，按试
剂盒说明书操作。
１．５．４ ＣＡＴ和ＧＳＨＰｘｃＤＮＡ的ＰＣＲ反应体
系 ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ的ＲＴ－ＰＣＲ反应体系各
成分及加样量见表２。反应条件为：９４℃预变性５
ｍｉｎ，进行如下循环：９４℃３０ｓ，６３℃３０ｓ，７２℃
３０ｓ；３５个循环后，７２℃延伸７ｍｉｎ，４℃保存。
表２ 犚犜－犘犆犚反应体系各成分及加样量
犜犪犫犾犲２ 犐狀犵狉犲犱犻犲狀狋狊犪狀犱犪犱犱犻狀犵狊犪犿狆犾犲犪犿狅狌狀狋
狅犳犚犜－犘犆犚狉犲犪犮狋犻狅狀狊狔狊狋犲犿
成分
Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ
加入量Ａｄｄｉｎｇｓａｍｐｌｅ
ａｍｏｕｎｔ（μＬ）
ｃＤＮＡ １．０
Ｂｅｔａａｃｔｉｎ上游引物 Ｕｐｐｅｒｓｔｒｅａｍｐｒｉｍｅｒ（１０ｐｍｏｌ／μＬ） １．０
Ｂｅｔａａｃｔｉｎ下游引物 Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｒｉｍｅｒ（１０ｐｍｏｌ／μＬ） １．０
ＴａｑＤＮＡ聚合酶 ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ １２．５
灭菌蒸馏水 Ｄｉｓｔｉｌｅｄｗａｔｅｒ ９．５
总反应体积Ｃｕｂａｇｅｏｆｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ ２５．０
３３１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
１．５．５ ＲＴ－ＰＣＲ产物的检测和定量 对ＰＣＲ产物进行琼脂糖电泳后，在凝胶成像系统下观察结果并拍照。
用图像处理系统对ＲＴ－ＰＣＲ产物条带进行密度扫描，以Ｂｅｔａａｃｔｉｎ作为ＲＴ－ＰＣＲ的质控，将待测ＣＡＴ及
ＧＳＨＰｘ基因表达与其对应Ｂｅｔａａｃｔｉｎ表达的比值进行比较后得出一相对量，从而计算出各组基因表达量的相
对变化量。
１．６ 数据处理与统计分析
采用ＳＡＳ６．１２统计软件（ＧＬＭ过程）进行方差分析［１７］，用Ｄｕｎｃａｎ统计方法进行多重比较以检验组间差异
显著性，检验误差为５％和１％水平。
２ 结果与分析
２．１ 不同剂量 ＭＴ对奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达水平的影响
在正式试验开始的当天（补给外源性 ＭＴ前），各组奶牛血液中ＧＳＨＰｘ基因表达水平均无显著（犘＞０．０５）
差异（表３）。补给外源性 ＭＴ后，３个试验组奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达水平都有一定的提高，其中ＩＩＩ组在试验期
第１５天的ＧＳＨＰｘ基因表达水平及ＩＶ组在试验期第１５和３０天的ＧＳＨＰｘ基因表达水平均显著（犘＜０．０５）高
于对照组。就正式试验开始后第１５，３０和４５天所测奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达水平的平均值看，ＩＩＩ和ＩＶ组分别较
对照组有显著（犘＜０．０５）提高，而ＩＩ组与对照组差异不显著（犘＞０．０５）。说明通过注射８．０和１２．０ｍｇ剂量的
外源性 ＭＴ对奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达量产生了积极的影响。
表３ 不同剂量 犕犜对奶牛犌犛犎犘狓基因表达水平的影响（犌犛犎犘狓／犅犲狋犪犪犮狋犻狀）
犜犪犫犾犲３ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犕犜犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅狊犪犵犲狊狅狀犌犛犎犘狓犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊狅犳犱犪犻狉狔犮犪狋狋犾犲
时间Ｔｉｍｅ（ｄ）
剂量 Ｄｏｓａｇｅ（ｍｇ）
０ ４．０ ８．０ １２．０
１ １．１８２±０．０９ａ １．１４２±０．１２ａ １．１５４±０．１４ａ １．１３６±０．２０ａ
１５ １．１２６±０．１２ａ １．１５６±０．１３ａ １．２８７±０．１６ｂ １．３０５±０．１５ｂ
３０ １．２０２±０．１３ａ １．１６５±０．１１ａ １．２６２±０．１４ａｂ １．３２１±０．１３ｂ
４５ １．１４０±０．１２ａ １．１４７±０．１２ａ １．２２４±０．１３ａ １．２３７±０．１２ａ
平均 Ｍｅａｎ １．１６３±０．１１ａ １．１５３±０．０１ａ １．２３２±０．０６ａ １．２５０±０．０８ａ
１５～４５ｄ平均值 Ｍｅａｎｄｕｒｉｎｇ１５－４５ｄ １．１５６±０．１２ａ １．１５６±０．１１ａ １．２５８±０．１４ｂ １．２８８±０．１３ｂ
注：同行不同字母表示差异显著（犘＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｒｅａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｆｉｇｕｒｅｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓ（犘＜０．０５）．
２．２ ＭＴ不同作用时间对奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达水平的影响
在正式试验开始的当天（补给外源性 ＭＴ前），各组ＧＳＨＰｘ基因表达水平没有显著（犘＞０．０５）差异（表４）。
在正试期的不同时间，对照组和ＩＩ组ＧＳＨＰｘ基因表达水平都变化不大（犘＞０．０５）。而ＩＩＩ组在正试期的第１５
和３０天的ＧＳＨＰｘ基因表达水平均显著（犘＜０．０５）高于第１天，ＩＶ组在正试期的第３０天ＧＳＨＰｘ基因表达水
平甚至极显著（犘＜０．０１）地高于第１天。虽然ＩＩＩ和ＩＶ组在正试期的第４５天ＧＳＨＰｘ基因表达水平均分别高
于第１天并低于第１５和３０天的ＧＳＨＰｘ基因表达水平，但差异均不显著（犘＞０．０５）。从正试期总的情况看，注
入外源性 ＭＴ后，各组ＧＳＨＰｘ基因表达水平逐步升高，至３０ｄ时达最高，尤其是显著（犘＜０．０５）高于第１天，
４５ｄ时又有下降。说明 ＭＴ对奶牛ＧＳＨＰｘ基因表达水平的影响具有较为明显的时间效应。
２．３ 不同剂量 ＭＴ对奶牛ＣＡＴ基因表达水平的影响
Ｉ组（０ｍｇ剂量组）奶牛ＣＡＴ基因表达水平在试验期间各阶段没有大的变化（犘＞０．０５）（表５）。ＩＩ组奶牛
ＣＡＴ基因表达水平在正式试验开始后虽然较试验开始前有所提高，但各阶段的ＣＡＴ基因表达水平并无显著（犘
＞０．０５）差异。ＩＩＩ组在试验期第３０和１５天时的ＣＡＴ基因表达水平分别显著（犘＜０．０５）和极显著（犘＜０．０１）高
于正式试验开始时ＣＡＴ基因表达水平，ＩＶ组在试验期各阶段的ＣＡＴ基因表达水平均较试验开始时有显著（犘
４３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
＜０．０５）和极显著（犘＜０．０１）的提高。从试验全期结果看，ＩＶ组奶牛ＣＡＴ基因表达水平均高于其他各组，并且
显著（犘＜０．０５）高于对照组。就正试期而言，ＩＩＩ组奶牛ＣＡＴ基因表达水平分别较对照组和ＩＩ组提高了１４．７３％
（犘＜０．０５）和９．９１％（犘＞０．０５）；而ＩＶ组奶牛ＣＡＴ基因表达水平又比对照组、ＩＩ和ＩＩＩ组分别提高了２２．８８％
（犘＜０．０１），１７．７１％（犘＜０．０５）和７．１０％ （犘＞０．０５）。说明本试验中的８．０和１２．０ｍｇ剂量对奶牛ＣＡＴ基因
表达水平影响较大，尤以１２．０ｍｇ剂量效果更为明显。
２．４ ＭＴ不同作用时间对奶牛ＣＡＴ基因表达水平的影响
在正式试验开始时，各组的ＣＡＴ基因表达水平差异不显著（犘＞０．０５）（表６）。在整个正试期间，对照组各阶
段的ＣＡＴ基因表达水平没有大的变化（犘＞０．０５），ＩＩ组１５，３０和４５ｄ的ＣＡＴ基因表达水平虽然较试验开始时
表４ 犕犜不同作用时间对奶牛犌犛犎犘狓基因表达水平的影响（犌犛犎犘狓／犅犲狋犪犪犮狋犻狀）
犜犪犫犾犲４ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犕犜犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犻犿犲狊狅狀犌犛犎犘狓犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊狅犳犱犪犻狉狔犮犪狋狋犾犲
项目Ｉｔｅｍ
时间Ｔｉｍｅ（ｄ）
１ １５ ３０ ４５
Ｉ组 ＧｒｏｕｐＩ １．１８２±０．０９ａ １．１２６±０．１２ａ １．２０２±０．１３ａ １．１４０±０．１２ａ
ＩＩ组 ＧｒｏｕｐＩＩ １．１４２±０．１２ａ １．１５６±０．１３ａ １．１６５±０．１１ａ １．１３７±０．３１ａ
ＩＩＩ组 ＧｒｏｕｐＩＩＩ １．１５４±０．１４ａ １．２８７±０．１６ｂ １．２６２±０．１４ｂ １．２２４±０．１３ａｂ
ＩＶ组ＧｒｏｕｐＩＶ １．１３６±０．２０ａ １．３０５±０．１５ｂｃ １．３２１±０．１３ｃ １．２３７±０．１２ａｂｃ
平均 Ｍｅａｎ １．１５４±０．１５ａ １．２１９±０．１４ａ １．２３８±０．１３ａ １．１８５±０．２１ａ
ＩＩ～ＩＶ组平均值 ＭｅａｎｏｆｇｒｏｕｐＩＩ－ＩＶ １．１３９±０．１４ａ １．２３１±０．１２ａｂ １．２４３±０．１１ｂ １．１８７±０．２０ａ
注：同行相同字母表示差异不显著（犘＞０．０５），相邻字母如ａ、ｂ或ｂ、ｃ表示差异显著（犘＜０．０５），不相邻字母如ａ，ｃ表示差异极显著（犘＜０．０１）。
下同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅｒｅａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｆｉｇｕｒｅｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｓｕｃｈａｓａ，ｂｏｒｂ，ｃ（犘＜０．０５）ａｎｄａ，ｃ（犘＜０．０１）ｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
表５ 不同剂量 犕犜对奶牛犆犃犜基因表达水平的影响（犆犃犜／犅犲狋犪犪犮狋犻狀）
犜犪犫犾犲５ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犕犜犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱狅狊犪犵犲狊狅狀犆犃犜犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊狅犳犱犪犻狉狔犮犪狋狋犾犲
时间Ｔｉｍｅ（ｄ）
剂量 Ｄｏｓａｇｅ（ｍｇ）
０ ４．０ ８．０ １２．０
１ ０．３０２±０．０２ａ ０．３２３±０．０５ａ ０．２９８±０．０３ａ ０．３２５±０．０３ａ
１５ ０．３１４±０．０３ａ ０．３３１±０．０３ａｂ ０．３７９±０．０３ｃ ０．４０６±０．０５ｃ
３０ ０．３２６±０．０４ａ ０．３３９±０．０３ａ ０．３８２±０．０４ｂｃ ０．３９７±０．０４ｃ
４５ ０．３１７±０．０３ａ ０．３２８±０．０４ａ ０．３３７±０．０２ａｂ ０．３７２±０．０３ｂ
平均 Ｍｅａｎ ０．３１５±０．０２ａ ０．３３０±０．０４ａｂ ０．３４９±０．０３ａｂ ０．３７５±０．０４ｂ
１５～４５ｄ平均值 Ｍｅａｎｄｕｒｉｎｇ１５－４５ｄ ０．３１９±０．０３ａ ０．３３３±０．０４ａｂ ０．３６６±０．０３ｂｃ ０．３９２±０．０４ｃ
表６ 犕犜不同作用时间对奶牛犆犃犜基因表达水平的影响（犆犃犜／犅犲狋犪犪犮狋犻狀）
犜犪犫犾犲６ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犕犜犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犻犿犲狊狅狀犌犛犎犘狓犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊狅犳犱犪犻狉狔犮犪狋狋犾犲
项目Ｉｔｅｍ
时间Ｔｉｍｅ（ｄ）
１ １５ ３０ ４５
Ｉ组 ＧｒｏｕｐＩ ０．３０２±０．０２ａ ０．３１４±０．０３ａ ０．３２６±０．０４ａ ０．３１７±０．０３ａ
ＩＩ组 ＧｒｏｕｐＩＩ ０．３２３±０．０５ａ ０．３３１±０．０３ａ ０．３３９±０．０３ａ ０．３２８±０．０４ａ
ＩＩＩ组ＧｒｏｕｐＩＩＩ ０．２９８±０．０３ａ ０．３７９±０．０３ｃ ０．３８２±０．０４ｃ ０．３３７±０．０２ｂ
ＩＶ组ＧｒｏｕｐＩＶ ０．３２５±０．０３ａ ０．４０６±０．０５ｃ ０．３９７±０．０４ｃ ０．３７２±０．０３ｂｃ
平均 Ｍｅａｎ ０．３１２±０．０３ａ ０．３５８±０．０３ｂ ０．３６１±０．０４ｂ ０．３３９±０．０３ａｂ
ＩＩ～ＩＶ组平均值 ＭｅａｎｏｆｇｒｏｕｐＩＩ－ＩＶ ０．３２４±０．０４ａ ０．３７２±０．０４ｂ ０．３７３±０．０４ｂ ０．３５０±０．０３ａｂ
５３１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
有所提高，但差异也不显著（犘＞０．０５）。而ＩＩＩ和ＩＶ组在正式试验第１５，３０和４５天的ＣＡＴ基因表达水平分别
较试验开始时有极显著（犘＜０．０１）和显著（犘＜０．０５）的提高。就整个正试期不同时间各组ＣＡＴ基因表达水平
平均值以及正式试验开始后第１５，３０和４５天各组ＣＡＴ基因表达水平平均值看，１５和３０ｄ时的ＣＡＴ基因表达
水平均显著（犘＜０．０５）高于试验开始时，而４５ｄ时的ＣＡＴ基因表达水平虽然较试验开始时分别高８．６５％和
８．０３％，但差异均不显著（犘＞０．０５）。说明 ＭＴ对奶牛血液ＣＡＴ基因表达水平影响的时间以１５和３０ｄ为好，
尤以３０ｄ时的效果更佳。
３ 讨论
３．１ ＭＴ对奶牛ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平的影响
本研究之所以探索 ＭＴ对奶牛抗氧化酶ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平的影响，是基于 ＭＴ及抗氧化酶
ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ对机体抗氧化应激的重要性［４，１８２３］。ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ与ＳＯＤ一样都是生物机体内重要的抗氧
化酶即重要的活性氧自由基清除剂，在清除超氧自由基、Ｈ２Ｏ２ 和过氧化物以及阻止或减少羟基自由基形成等方
面发挥重要作用［２４，２５］。ＧＳＨＰｘ是在哺乳动物体内发现的第一个含硒酶，在机体内以硒代半胱氨酸（Ｓｅｃ）的形式
发挥作用，以谷胱甘肽为还原剂分解体内的脂质过氧化物，因而可防止细胞膜和其他生物组织免受过氧化损
伤［２６］。生物体在正常生理条件下将氧还原为Ｈ２Ｏ获取能量，一般要经过Ｏ２→Ｏ２－．→Ｈ２Ｏ２→２Ｈ２Ｏ过程，期间
产生的活性氧如Ｏ２－．、Ｈ２Ｏ２、ＯＨ和单线态氧，除满足机体代谢需要外，不可避免会作用于其他生物分子（如造
成脂质过氧化，引起生物膜损伤，基因突变等），从而引起机体病变。ＧＳＨＰｘ的作用是和ＳＯＤ、ＣＡＴ一起共同构
成生物体内活性氧防御系统。机体对活性氧Ｏ２－．的第一道防线是ＳＯＤ，它将Ｏ２－．转化为过氧化氢和其他氢过
氧化物；第二道防线是ＣＡＴ和ＧＳＨＰｘ，其中ＣＡＴ可清除过氧体系中的 Ｈ２Ｏ２，而ＧＳＨＰｘ分布在细胞的胞液
和线粒体中，可同时清除Ｈ２Ｏ２ 和氢过氧化物，从而有效地保护机体［２７２９］。前人针对实验动物的研究表明，作为
一种天然生理活性物质和高效抗氧化剂，ＭＴ在发挥自身强大抗氧化力的同时，通过清除自由基，增强ＧＳＨＰｘ、
ＳＯＤ和ＣＡＴ等抗氧化酶基因的表达，阻断脂质过氧化链式反应，缓解膜脂质过氧化，从而发挥其提高机体抗氧
化应激能力、减少细胞损伤的作用［３０３２］。业已发现外源性 ＭＴ能够有效地提高抗氧化应激酶ＳＯＤ基因的表达
水平，从而明显提高奶牛热应激的能力［１４］。本研究结果表明外源性 ＭＴ可明显提高奶牛抗氧化应激酶ＧＳＨＰｘ
和ＣＡＴ基因的表达水平，说明外源性 ＭＴ提高奶牛抗氧化应激能力的机制之一是提高了奶牛抗氧化酶基因表
达水平。
３．２ ＭＴ影响奶牛ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达的剂量效应和时间效应
许多生物活性物质和多种药物在动物体内均表现出剂量效应（ｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔ）和时间效应（ｔｉｍｅｄｅ
ｐｅｎｄｅｎｔｅｆｆｅｃｔ）［３３］。这是动物与生物活性物质或药物在特定条件下表现出来的综合生理反应，包括药理效应与
毒性、药物代谢动力学和生物利用度等依剂量和时间而发生的动态变化，这种变化及其规律左右着生物活性物质
或药物的效应和动物机体内外环境的生理平衡，是评判生物活性物质或药物对动物机体作用必须要考虑的重要
因素［３４］。曾有报道，不同剂量的外源性 ＭＴ和 ＭＴ不同作用时间对奶牛抗氧化酶ＳＯＤ基因表达水平有显著的
影响［１４］。在本研究就外源性 ＭＴ对奶牛抗氧化酶ＧＳＨＰｘ、ＣＡＴ基因表达水平影响的探索中也发现了与此相
似的趋势。ＩＩＩ和ＩＶ组奶牛血清中ＧＳＨＰｘ基因表达量分别较对照组（０ｍｇ剂量组）有明显提高。ＩＩＩ组奶牛血
清中ＣＡＴ基因表达水平显著高于对照组；而ＩＶ组奶牛血清中ＣＡＴ基因表达水平又较对照组、ＩＩ和ＩＩＩ组分别
提高了２２．８８％，１７．７１％和７．１０％。而ＩＩ组ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达量与对照组差异均不显著。说明外源性
ＭＴ的剂量对奶牛血清中ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平有明显影响，４．０ｍｇ剂量作用不大，８．０和１２．０ｍｇ剂
量效果明显，尤以１２．０ｍｇ剂量为佳。从本研究的正试期不同时间采样所测的各组奶牛血清ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ
基因表达水平看，在注射外源性 ＭＴ后，各试验组奶牛血清ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因表达水平逐步升高，至３０ｄ达
最高，４５ｄ又有下降。尤其是３０ｄ时的ＧＳＨＰｘ基因表达水平及１５和３０ｄ时的ＣＡＴ基因表达水平均显著高
于正式试验开始前的水平。这进一步说明外源性 ＭＴ不仅能有效调控奶牛血清抗氧化酶ＧＳＨＰｘ和ＣＡＴ基因
表达水平，而且表现出了较为明显的剂量效应和时间效应。这也提示利用外源性 ＭＴ来提高奶牛的抗氧化应激
６３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
能力尚需充分考虑其最佳剂量和最适作用时间。
参考文献：
［１］ ＭｉｎＫＳ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｉｎｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＹａｋｕｇａｋｕＺａｓｓｈｉ，２００７，１２７（４）：６９５７０２．
［２］ ＰａｌｍｉｔｅｒＲＤ．Ｔｈｅｅｌｕｓｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ，１９９８，９５：
８４２８８４３３．
［３］ ＲｏｍｅｒｏｉｓａｒｔＮ，ＶａｓａｋＭ．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｏｒｇａｎｉｃＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
２００２，８８：３８８３９６．
［４］ ＳａｔｏＭ，ＳａａｓｋｉＭ，ＨｏｉｏＨ，犲狋犪犾．Ａｎｔｉｏｘｄａｔｉｖｅｒｏｌｅｓｏｆｍｅｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎａｎｄｍａｇａｎｅｓｅｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｎｕｔａｓｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｕｒｎｅｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９９，８２：７０７７．
［５］ ＹｅＧ，ＭｅｔｒｅｖｅｌｉＮＳ，ＲｅｎＪ，犲狋犪犾．Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｐｒｅｖｅｎｔｓｄｉａｂｅｔｅｓｉｎｄｕｃｅｄｄｅｆｉｃｉｔｓｉｎｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒｅａｃｔｉｖｅ
ｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｐｒｏｄｕｅｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００３，５２（３）：７７７７８３．
［６］ 刘云华，张彬．金属硫蛋白在养殖业的应用前景［Ｊ］．家畜生态学报，２００４，２５（４）：１７９１８２．
［７］ ＡｊｉｊＨＲ，ＫｏｊｉｍａＹ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，１９８７，５２：２５６１．
［８］ ＤｅＳｋ，ＭｃＭａｓｔｅｒＴ，ＡｎｄｒｅｗｓＧＫ．Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｕｔｉｏｎｏｆｍｅｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｉｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９９０，２６５（２５）：１５２６１５３８．
［９］ ＧｒｅｅｎＥＭ，ＡｄａｍｓＨＲ．Ｎｅｗｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｉｎｃｉｒｃｕｌｔｏｒｙｓｈｏｃｋ：Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃｍｅｄｉａｔｏｒｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｅｎ
ｄｏｔｏｘｅｍｉａａｎｄｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｍｅｒｉｃａｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９９２，２００（１２）：１８１７１８２６．
［１０］ ＫｏｎｄｏｈＭ，ＩｎｏｕｅＹ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｂｙｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，２００１，
６９：２１３７２１４６．
［１１］ ＭｉｕｒａＴ，ＭｕｒｏａｋａＳ，ＯｇｉｓｏＴ，犲狋犪犾．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｅｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｒａｔｈｉｏｎｅ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｃｉ
ｅｎｃｅ，１９９７，６０（２１）：３０１．
［１２］ 张彬，谭琼，肖兵南，等．外源性金属硫蛋白对奶牛泌乳性能和抗氧化状况的影响［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（６）：１３７１４３．
［１３］ 张彬，肖定福，李丽立，等．金属硫蛋白在奶牛公犊体内的代谢规律研究［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（６）：７８８４．
［１４］ 张彬，薛立群，李丽立，等．外源金属硫蛋白对奶牛抗热应激调控及ＳＯＤ基因表达的影响［Ｊ］．应用生态学报，２００７，
１８（１）：１９３１９８．
［１５］ 李丽立．一种猪肝金属硫蛋白提取方法：中国，ＺＬ２００４１００１３２１２．Ｘ［Ｐ］．２００６０４１７．
［１６］ 张彬，吴力专，李丽立．一种猪金属硫蛋白的测定方法：中国，ＺＬ２００４１００６１２６５．９［Ｐ］．２００７０５０７．
［１７］ ＪｉｍＧ，ＪｏｈｎＳ．Ｕｓｅｒ’ｓＧｕｉｄｅ：ＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＶｅｒｓｉｏｎ６．１２（ｆｏｕｒｔｈｅｄ）［Ｍ］．Ｃａｒｙ，ＮＣ：ＳＡＳＩｎｓｔｉｔｕｔｅＩｎｃ．，１９９６．
［１８］ ＤａｖｉｓＳＲ，ＣｏｕｓｉｎｓＲＪ．Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｎｉｍａｌｓ：Ａｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｔｒｉ
ｔｉｏｎ，２０００，１３０：１０８５１０８８．
［１９］ ＦｒａｎｋＶ，ＥｖａＶ，ＪａｍｅｓＦＤ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎｐｌａｎｔｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００１，
１６１：４０５４１４．
［２０］ ＲａｖｉｎｄｒａＮ，ＤｉｎｅｎｄｅｒＫ，ＴｉｍａｏＬ，犲狋犪犾．Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｔｈｅｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，
２０００，１５５：１７２６．
［２１］ ＲｏｔｒｕｃｋＪＴ，ＰｏｐｅＡＬ，ＧａｎｔｈｅｒＨＥ，犲狋犪犾．Ｓｅｌｅｎｉｕｍ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｏｌｅａｓａｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ［Ｊ］．Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ，１９７３，１７９：５８８．
［２２］ 郑军恒，李海洋，茹刚，等．金属硫蛋白清除羟自由基功能的研究［Ｊ］．北京大学学报（自然科学版），１９９９，３５（４）：５７３
５７６．
［２３］ 肖定福，张彬，李忠义，等．不同应激因子对小白鼠肝脏金属硫蛋白诱导合成的影响［Ｊ］．中国实验动物学报，２００９，１７（２）：
９０９６．
［２４］ ＬｉＬＬ，ＨｏｕＺＰ，ＹｉｎＹＬ，犲狋犪犾．Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｚｉｎｃｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｔｏｐｒｅｓｌａｕｇｈｔｅｒｓｔｒｅｓｓｅｄｐｉｇｓｉｍｐｒｏｖｅｓ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔａｔｕｓａｎｄｐｏｒｋｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＡｓｉａｎＡｕｓｔｒａｌｉａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００７，２０（５）：７６１７６７．
［２５］ ＭｃｃｏｒｄＪＭ．Ｏｘｙｇｅｎｄｅｒｉｖｅｄｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓｉｎｐｏｓｔｉｓｃｈｅｍｉｃｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＴｈｅＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９８５，
３１２：１５９．
７３１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
［２６］ ＭｉｌｓＧＣ．Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ａｎｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｅｎｚｙｍｅｗｈｉｃｈｐｒｏｔｅｃｔｓｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｆｒｏｍｏｘｉｄａｔｉｖｅｂｒｅａｋｄｏｗｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９５７，２２９：１８９．
［２７］ ＭｉｌｏｓＣＭＤ．Ｅｆｅｃｔｏｆｚｉｎｃｏｎｃｅｌａｎｄｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｃｅｓ［Ｊ］．ＴｈｅＭｅｄｉｃａｌＣｌｉｎｉｃｓｏｆＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ，１９９６，６０（４）：１５６１６０．
［２８］ ＵｒｓｉｎｉＦ，ＭａｉｏｒｉｎｉＭ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｒｏｍｐｉｇｌｉｖｅｒｏｆａｐｒｏｔｅｉｎｗｈｉｃｈｐｒｏｔｅｃｔｓｌｉｐｏｓｏｍｅｓａｎｄｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓｆｒｏｍｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｅｘｈｉｂｉｔｓｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ，１９８２，７１０：１９２．
［２９］ ＨｏｓｏｋａｗａＯ，ＯｋａｂｅＭ，ＳａｉｔｏＳ，犲狋犪犾．ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｒｏｌｅｏｆＭｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｏｎＤＮＡｄａｍａｇｅｉｎｒａｔｋｉｄｎｅｙｃａｕｓｅｄｂｙｃｉｓｄｉａｍ
ｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ［Ｊ］．ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０００，８６（６）：２７６２８２．
［３０］ ＬｅｈｍａｎＭｃＫｅｅｍａｎＬＤ，ＡｎｄｒｅｗｓＧＫ，ＫｌａａｓｓｅｎＣＤ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｒａｔｈｅｐａｔｉｃｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎＩａｎｄｍｅｔａｌ
ｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎＩＩｌｅｖｅｌｓｆｏｌｏｗｉｎｇａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｚｉｎｃ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９８８，９２（１）：１９．
［３１］ ＭｃＫｅｎｎａＩＭ，ＢａｒｅＲＭ，ＷａａｌｋｅｓＭＰ．Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｓａｎｄｌｉｖｅｒｏｆｒａｔｓｔｒｅａ
ｔｅｄｗｉｔｈｃａｄｍｉｕｍ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９６，７（２）：１２１１３０．
［３２］ ＲｉａｚａｎｔｓｅｖａＮＶ，ＮｏｖｉｔｓｋｉＶＶ，ＣｈａｓｏｖｓｋｉｋｈＮ，犲狋犪犾．Ｒｅｄｏｘｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓａｓａｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒ
ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＲｏｓｓｉǐｓｋｉＦｉｚｉｏｌｏｇｉｃｈｅｓｋｉǐＺｈｕｒｎａｌＩｍｅｎｉＩ．Ｍ．Ｓｅｃｈｅｎｏｖａ／ＲｏｓｓｉǐｓｋａｉａＡｋａ
ｄｅｍｉａＮａｕｋ，２００８，９４（６）：７１０７１８．
［３３］ 曹筱佩，程桦，钟女奇．Ｌｅｐｔｉｎ对大鼠肝细胞葡萄糖氧化的剂量效应与时间效应［Ｊ］．中山医科大学学报，１９９９，２０（４）：
２６４２６６．
［３４］ 赵殿铭，李政平，付连霞．药物的时辰药理效应与合理用药［Ｊ］．临床和实验医学杂志，２００３，２（２）：１２３１２５．
犈犳犳犲犮狋狅犳犲狓狅犵犲狀狅狌狊犿犲狋犪犾狅狋犺犻狅狀犲犻狀狅狀犫犾狅狅犱犌犛犎犘狓犪狀犱犆犃犜犵犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犻狀犱犪犻狉狔犮犪狋狋犾犲
ＺＨＡＮＧＢｉｎ１，ＴＡＮＱｉｏｎｇ１，ＬＩＬｉｌｉ２，ＬＩＵＨａｉｌｉｎ３，ＤＥＸｉｎｇｈｏｕ４，ＸＩＡＯＤｉｎｇｆｕ１，
ＣＨＥＮＹｕｇｕａｎｇ１，ＬＵＯＪｉａｊｉｅ１，ＢＩＸｉａｏｙａｎ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＥｃｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２５，
Ｃｈｉｎａ；３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙｏｆＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１３１，
Ｃｈｉｎａ；４．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＦａｃｕｌｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，
ＫａｇｏｓｈｉｍａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｇｏｓｈｉｍａ８９０００６５，Ｊａｐａｎ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｏｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅｓｉｎｄａｉｒｙｃａｔｔｌｅｗａｓ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄｗｉｔｈ２４ｌａｃｔａｔｉｎｇＣｈｉｎｅｓｅＨｏｌｓｔｅｉｎｃｏｗｓ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓ（Ａ，Ｂ，Ｃ，
ａｎｄＤ），ａｎｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ０，４．０，８．０，ａｎｄ１２．０ｍｇＺｎＭＴｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ
ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｅｃｔｅｄｅｖｅｒｙ１５ｄａｙｓａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＧＳＨＰｘａｎｄＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｃｏｗｓｗｅｒｅｄｅ
ｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＧＳＨＰｘｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｗｓｉｎｇｒｏｕｐｓＣａｎｄＤ，ａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＣＡＴｇｅｎｅｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｇｒｏｕｐＣｗｅｒｅｇｒｅａｔｅｒ（犘＜０．０５）ｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｇｒｏｕｐＡ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｇｒｏｕｐ
ＤｗａｓｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｇｒｏｕｐｓＡ（犘＜０．０１），Ｂ（犘＜０．０５），ａｎｄＣ（犘＞０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆ
ｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（犘＞０．０５）ｉｎｅｉｔｈｅｒＧＳＨＰｘａｎｄＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓＡａｎｄＢ．Ｔｈｅ
ｌｅｖｅｌｓｏｆＧＳＨＰｘａｎｄＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｅａｋｅｄａｔｔｈｅ３０ｔｈｄａｙａｎｄｄｅｓｃｅｎｄｅｄａｔｔｈｅ４５ｔｈｄａｙａｆｔｅｒｔｈｅｓｕｐ
ｐｌｙｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＧＳＨＰｘｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｔｔｈｅ３０ｔｈｄａｙａｎｄＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎａｔｔｈｅ１５ｔｈｄａｙａｎｄｔｈｅ３０ｔｈｄａｙａｆｔｅｒｔｈｅｓｕｐｐｌｙｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｗｅｒｅｇｒｅａｔｅｒ（犘＜０．０５）
ｔｈａｎｔｈｏｓｅｂｅｆｏｒｅｔｈｅｓｕｐｐｌｙ．ＩｔｉｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｅｘｏｇｅｎｏｕｓＺｎＭＴｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＧＳＨＰｘａｎｄ
ＣＡＴｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄａｉｒｙｃａｔｔｌｅ，ｓｈｏｗｉｎｇａｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｎｄｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｍｅｔａｌｏｅｈｉｏｎｅｉｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ；ＧＳＨＰｘ；ＣＡＴ；ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｄａｉｒｙｃａｔｔｌｅ
８３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３