全 文 ：书小麦成熟胚离体培养及植株再生技术优化
张小红１，２，赵雪晶１，３，李波１，３，黎飞飞１，３，闵东红１，３
（１．旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西 杨凌７１２１００；２．西北农林科技大学生命科学学院，陕西 杨凌７１２１００；
３．西北农林科技大学农学院，陕西 杨凌７１２１００）
摘要：本实验利用冬小麦品种周麦２７成熟胚进行了愈伤组织诱导和植株再生技术的优化，以提高小麦成熟胚离体
再生频率，为以成熟胚进行遗传转化奠定基础。探讨了外植体不同接种方法、Ｄｉｃａｍｂａ浓度和细胞分裂素种类、转
分化时间和愈伤组织干燥处理等因素对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明，１）小麦成熟胚十字形
切割法接种愈伤组织分化率较高，达到６６．７％，分别是刮胚法和整胚接种的２．１和４．３倍；２）附加２，４Ｄ和Ｄｉｃａｍ
ｂａ均可以高频率诱导成熟胚愈伤组织的形成，但Ｄｉｃａｍｂａ诱导形成的愈伤组织分化率高于２，４Ｄ的达４倍之多，
在Ｄｉｃａｍｂａ浓度为２．０～４．０ｍｇ／Ｌ时愈伤组织诱导和分化效果较好；３）愈伤组织在附加２．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的分化培
养基上分化率最高为４５．８％，其次为在不含激素或含ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ时分化率分别达到３８．５％和３７．０％，而在附
加ＴＤＺ和ＺＴ时分化率较低；４）成熟胚外植体在诱导培养２～３周后进行分化培养，绿苗分化率最高；５）愈伤组织
分化前干燥处理６ｈ愈伤组织分化率略有提高，但与未干燥处理的相比差异不显著，而干燥１２ｈ后分化率却明显
降低。
关键词：小麦；成熟胚；愈伤组织诱导；植株分化
中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｑ９４５．３９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１３）０４０３３４０６
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０４３９
小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）是较难转化的作物之一，基因枪和农杆菌转化法是目前已建立的２种主要方法，都
必须依赖于组织培养和植株再生体系。因此，建立稳定高效的再生体系是小麦遗传转化的关键和基础［１３］。小麦
幼胚是最常用的起始外植体，但每年的取材时间有限，取材时胚的发育状态也较难把握，极大地制约着小麦的转
化研究。小麦成熟胚保存和利用方便，生理状态一致，但其离体培养时再生能力一直较低。因此，建立成熟胚再
生体系，将小麦成熟胚组织培养技术与遗传转化技术相结合对小麦进行遗传改良，已成为近几年的研究热点。
小麦成熟胚离体培养国内外学者已进行了大量研究，使成熟胚的离体再生能力获得了较大提高［３６］，但由于
材料和方法的差异，结果不尽相同。本实验以冬小麦品种周麦２７的成熟胚为外植体对不同接种方法、Ｄｉｃａｍｂａ
浓度、细胞分裂素种类、转分化时间及愈伤组织干燥处理等因素对成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响进行了研
究，以优化小麦成熟胚再生体系，提高愈伤组织分化频率，为利用成熟胚为受体进行小麦遗传改良提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 供试小麦材料
冬小麦品种周麦２７于２０１０年秋季田间正常播种，次年收获。２０１１年利用当年收获的新鲜种子用于本实
验。
１．２ 培养基
愈伤组织诱导培养基（ＭＳＤ）：ＭＳ无机盐及有机成分＋Ｄｉｃａｍｂａ２ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ５００ｍｇ／Ｌ＋Ｖｃ１００ｍｇ／Ｌ＋
蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ；愈伤组织分化培养基（ＭＳＫ）：ＭＳ无机盐及有机成分＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼
脂７ｇ／Ｌ。ｐＨ５．８～６．０，于１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ后，过滤除菌加入植物生长调节剂、水解乳蛋白（ＣＨ）和维生
素Ｃ（Ｖｃ）。
３３４－３３９
２０１３年８月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２２卷 第４期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
收稿日期：２０１２０７０５；改回日期：２０１２１２１２
基金项目：转基因生物新品种培育科技重大专项（Ｎｏ．２００９ＺＸ０８００２００８Ｂ）和西北农林科技大学唐仲英育种基金资助。
作者简介：张小红（１９６８），女，陕西商洛人，副教授，博士。Ｅｍａｉｌ：ｚｈｘｈ２４９３＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｍｄｈ２４９３＠１２６．ｃｏｍ
１．３ 种子消毒及接种
将种子在７０％乙醇中浸泡５ｍｉｎ，无菌水冲洗１次，２５％次氯酸钠消毒３０ｍｉｎ，无菌水冲洗５次后，室温下浸
泡过夜，次日接种前再消毒１次，用解剖刀将胚刮成碎屑接种于 ＭＳＤ培养基上，每处理接种４个培养皿（直径９
ｃｍ），每皿４５～５０个成熟胚。
１．４ 成熟胚愈伤组织诱导和分化
接种后的胚外植体在暗条件下诱导愈伤组织，７ｄ后除去萌发的胚芽和胚根，继续暗培养，至２１ｄ后统计愈
伤组织诱导率，选择生长良好大小均匀的愈伤组织转入ＭＳＫ培养基中，在１６ｈ／ｄ、３０００ｌｘ的光照条件下进行分
化培养，每处理转接３个培养皿，每皿接种３０～４０个愈伤组织，培养温度均为２５℃。
１．５ 实验处理
１．５．１ 不同接种方法的比较 比较上述刮胚法、胚十字切割法（对胚部纵向和横向各切割１刀后将胚取下划伤
面向上接种）和整胚法（完整胚盾片向上接种）３种接种方法对愈伤组织诱导和分化的影响。
１．５．２ Ｄｉｃａｍｂａ浓度对愈伤组织诱导和分化的影响 在 ＭＳＤ培养基中将Ｄｉｃａｍｂａ浓度分别设置为１．０，２．０，
４．０，６．０和８．０ｍｇ／Ｌ，同时以２．０ｍｇ／Ｌ的２，４Ｄ取代Ｄｉｃａｍｂａ，比较Ｄｉｃａｍｂａ和２，４Ｄ对成熟胚愈伤组织诱导
和分化的影响。
１．５．３ 细胞分裂素对愈伤组织分化的影响 在 ＭＳＫ培养基中比较无激素和不同浓度ＫＴ（ｋｉｎｅｔｉｎ）、６ＢＡ（６
ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ）、ＴＤＺ（ｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ）和ＺＴ（ｚｅａｔｉｎ）对愈伤组织分化的影响。其中ＫＴ、６ＢＡ和ＺＴ浓度均为
１．０和２．０ｍｇ／Ｌ，ＴＤＺ浓度为０．２和０．５ｍｇ／Ｌ。
１．５．４ 诱导培养时间对愈伤组织绿苗分化的影响 成熟胚在 ＭＳＤ培养基上分别诱导７，１４，２１和２８ｄ后，将愈
伤组织转入 ＭＳＫ培养基中，比较诱导培养时间对愈伤组织绿苗分化的影响。
１．５．５ 干燥处理对愈伤组织分化的影响 转入 ＭＳＫ培养基前，将愈伤组织摆放在铺有３层无菌滤纸的培养皿
中，置于超净工作台上干燥０，６和１２ｈ再转入 ＭＳＫ培养基中，比较干燥处理对分化的影响。
１．６ 数据统计及分析方法
成熟胚诱导培养２１ｄ后，愈伤组织转入分化培养３０ｄ后，分别统计愈伤组织诱导率和绿苗分化率：
愈伤组织诱导率＝形成的愈伤组织数／接种胚数×１００％
绿苗分化率＝形成绿苗的愈伤组织数／转入分化的愈伤组织数×１００％
统计数据用ＤＰＳ分析软件进行方差分析。
２ 结果与分析
２．１ 接种方法对小麦成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响
结果显示（表１），以完整胚接种时培养效果最差，其脱分化时间较长，愈伤诱导率较低，与其他２种方法相比
胚根和胚芽的萌发率较高，愈伤组织多数呈灰白色水渍状，无再生能力，分化率也最低。以刮胚法和胚十字切割
法接种时，外植体脱分化速度均较快，愈伤组织诱导率也较高。刮胚法能完全抑制胚根胚芽的萌发，形成的愈伤
量较大。胚十字切割法接种时，外植体的胚芽和胚根有少量的萌发，愈伤组织的生长量不及刮胚法的多，但其形
成的愈伤中有较多的颗粒状愈伤，稍硬呈乳白色，分化率最高，达６６．７％，是刮胚法的２．１倍，整胚法的４．３倍
（图１Ａ～Ｃ）。
实验结果表明，小麦成熟胚培养中，对胚进行适当的切割创伤有利于愈伤诱导和分化，十字切割法的培养效
果较好，刮胚法次之，以完整胚接种效果最差。
２．２ Ｄｉｃａｍｂａ浓度对小麦成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响
当２，４Ｄ和Ｄｉｃａｍｂａ均为２．０ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织诱导频率都较高（表２），但Ｄｉｃａｍｂａ诱导形成的愈伤组织
分化频率更高，二者相差４倍之多，说明在小麦成熟胚离体培养上Ｄｉｃａｍｂａ的诱导效果显著优于２，４Ｄ（图１Ｄ，
Ｅ）。
当Ｄｉｃａｍｂａ浓度在１．０～８．０ｍｇ／Ｌ范围内时，均可以诱导胚形成愈伤组织，诱导率随浓度升高而升高，在
９１．０～１００％之间。但实验中观察到，Ｄｉｃａｍｂａ浓度在１．０ｍｇ／Ｌ时愈伤组织的体积较小，直径约有０．３ｃｍ，随浓
５３３第２２卷第４期 草业学报２０１３年
表１ 不同接种方法对小麦成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻狀狅犮狌犾犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱狊犺狅狅狋狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀
犳狉狅犿犿犪狋狌狉犲狑犺犲犪狋犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狊
接种方法
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ
脱分化速度
Ｓｐｅｅｄｏｆ
ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（ｄ）
胚根及胚芽萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｒａｄｉｃｌｅ
ａｎｄｅｍｂｒｙｏ（％）
愈伤组织诱导率
Ｃａｌｕｓｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
绿苗分化率
Ｇｒｅｅｎｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ（％）
刮胚法 Ｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｐｉｅｃｅｓｃｕｌｔｕｒｅ ２～３ ０ ９９．４ａ ３２．２ｂ
胚十字切割法 Ｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓｗｉｔｈｃｒｏｓｓｃｕｔｔｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅ ２～３ ５．６ｂ ９９．３ａｂ ６６．７ａ
整胚法 Ｗｈｏｌｅｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓｃｕｌｔｕｒｅ ３～４ １５．７ａ ９１．３ｂｃ １５．６ｃ
注：同列数据后标不同小写字母表示在０．０５水平差异显著。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｓｔａｎｄｆｏｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０５，ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
图１ 小麦成熟胚愈伤组织诱导和绿苗分化
犉犻犵．１ 犆犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱狊犺狅狅狋狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀犳狉狅犿犿犪狋狌狉犲狑犺犲犪狋犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狊
Ａ～Ｃ：不同接种法诱导形成的愈伤组织，分别为刮胚法、十字切割法和整胚法；Ｄ，Ｅ：分别为含２．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ和Ｄｉｃａｍｂａ培养基上形成愈伤的
分化情况；Ｆ，Ｇ：愈伤组织在无激素和６ＢＡ中的分化情况；Ｈ，Ｉ：分别为诱导培养２周和４周愈伤的分化情况。Ａ－Ｃ：Ｃａｌｕｓｆｒｏｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄｅｍｂｒｙｏ，ｃｒｏｓｓｃｕｔｅｍｂｒｙｏｓａｎｄｗｈｏｌｅｅｍｂｒｙｏｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；Ｄ，Ｅ：Ｓｈｏｏｔｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｌｕｓｆｒｏｍ２
ｍｇ／Ｌ２，４ＤａｎｄＤｉｃａｍｂａｍｅｄｉｕｍｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；Ｆ，Ｇ：Ｓｈｏｏｔｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｌｕｓｏｎｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈｏｕｔｃｙｔｏｋｉｎｉｎａｎｄｗｉｔｈ６ＢＡｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；Ｈ，Ｉ：
Ｓｈｏｏｔｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｅｄｃｕｌｔｕｒｅａｆｔｅｒｔｗｏｗｅｅｋｓａｎｄｆｏｕｒｗｅｅｋｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
６３３ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．４
度升高体积增大，在４．０～６．０ｍｇ／Ｌ时体积达最大，
约０．５ｃｍ，而当浓度升至８．０ｍｇ／Ｌ时愈伤组织的体
积略有减小，直径约０．４ｃｍ左右。分化结果显示，Ｄｉ
ｃａｍｂａ在１．０～４．０ｍｇ／Ｌ时形成的愈伤分化率较高，
但在１．０ｍｇ／Ｌ时愈伤组织的诱导率低且体积较小，较
高浓度（６．０～８．０ｍｇ／Ｌ）时不利于愈伤组织分化。因
此，以附加２．０～４．０ｍｇ／Ｌ的Ｄｉｃａｍｂａ效果较好，不
仅有利于愈伤组织诱导而且有利于分化。
２．３ 细胞分裂素对成熟胚愈伤组织分化的影响
在供试的２种浓度范围内，附加６ＢＡ和 ＫＴ时
愈伤组织的分化率要高于附加ＺＴ或ＴＤＺ时的分化
率，但在不含激素的培养基中也获得了较高的分化率
（表３）。其中在６ＢＡ为２．０ｍｇ／Ｌ时，分化率最高，
为４５．８％，其次为无激素的和ＫＴ为２．０ｍｇ／Ｌ的分
化培养基（图１Ｆ，Ｇ）。因此，小麦成熟胚愈伤组织分
化培养时以２．０ｍｇ／Ｌ的６ＢＡ效果最好，其次为无激
素培养基或２．０ｍｇ／Ｌ的ＫＴ。
２．４ 外植体诱导培养时间对绿苗分化的影响
外植体在诱导培养基中培养２～３周后转入分化
培养，约７ｄ后出现绿芽分化（表４），绿苗分化率最高，
达３７．０％～３８．３％，诱导培养４周后再转入分化培
养，分化率有小幅降低，而诱导培养１周的愈伤组织分
化率最低。实验中观察到，外植体脱分化后随培养时
间延长，愈伤组织块迅速增大，培养至３周时大小约
０．５ｃｍ左右，随后体积增加变慢，至４周时大小约０．６
ｃｍ左右，而诱导４周后的愈伤组织转入分化培养后，
分化速度较快，４～５ｄ开始根芽器官分化，根较多（图
１Ｈ，Ｉ）。
２．５ 干燥处理对愈伤组织分化的影响
干燥处理不同时间对愈伤组织分化产生影响不同
（表５）。干燥处理６ｈ，一定程度上提高了小麦成熟胚
愈伤组织的分化率，但和未干燥处理的相比差异不显
著，而干燥１２ｈ分化率却明显降低，不利于愈伤组织
分化，可能由于干燥处理时间过长，使愈伤组织失水较
多，影响了细胞的活性。
３ 讨论
小麦成熟胚培养中，常见的接种方法有整胚法、刮
胚法和切胚法等［６，７］，不同接种方法影响愈伤组织的
质量和分化，而胚芽对形成胚性愈伤组织不利［５，８］，因
此大多数的成熟胚培养时均要对胚进行一定程度的破
坏，抑制原位胚的萌发生长。本实验比较了刮胚法、十
表２ 不同浓度犇犻犮犪犿犫犪对成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响
犜犪犫犾犲２ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狊狅犳犇犻犮犪犿犫犪狅狀
犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱狊犺狅狅狋狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀
犳狉狅犿犿犪狋狌狉犲狑犺犲犪狋犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狊
生长素浓度
Ａｕｘｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
２，４Ｄ Ｄｉｃａｍｂａ
接种
胚数
Ｅｍｂｒｙｏｓ
ｃｕｌｔｕｒｅｄ
愈伤组
织数
Ｃａｌｕｓ
ｎｕｍｂｅｒ
愈伤组织诱
导率Ｃａｌｕｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
绿苗分化率
Ｇｒｅｅｎｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
０ １．０ １３４ １２２ ９１．０ｃ ４０．３ａ
０ ２．０ １３４ １２９ ９６．３ｂｃ ３７．０ａ
０ ４．０ １４８ １４５ ９８．０ａｂ ３９．４ａ
０ ６．０ １９１ １８９ ９９．０ａｂ ３０．２ｂ
０ ８．０ １３７ １３７ １００．０ａ １７．１ｃ
２．０ ０ １３２ １２９ ９７．７ａｂ ９．２ｄ
表３ 不同细胞分裂素对成熟胚愈伤组织分化的影响
犜犪犫犾犲３ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狔狋狅犽犻狀犻狀狅狀狊犺狅狅狋狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀
狅犳犮犪犾狌狊犳狉狅犿狑犺犲犪狋犿犪狋狌狉犲犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狊
细胞分裂素
Ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
愈伤组织数
Ｃａｌｕｓ
ｎｕｍｂｅｒ
分化绿苗的愈伤数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｃａｌｕｓ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｇｒｅｅｎ
ｓｈｏｏｔｓ
绿苗分化率
Ｇｒｅｅｎｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
无Ｎｏｎｅ ０ １０４ ４０ ３８．５ａｂ
ＫＴ １．０ １０７ ２８ ２６．２ｂｃｄ
２．０ ９２ ３４ ３７．０ａｂｃ
６ＢＡ １．０ ９７ ２１ ２１．６ｃｄ
２．０ １０７ ４９ ４５．８ａ
ＺＴ １．０ １０６ １９ １７．９ｄ
２．０ ９６ ２３ ２４．０ｃｄ
ＴＤＺ ０．２ １１０ ３２ ２９．１ｂｃｄ
０．５ ７１ １８ ２５．４ｃｄ
表４ 外植体诱导培养时间对愈伤组织分化率的影响
犜犪犫犾犲４ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻狀犱狌犮狋犻狅狀犮狌犾狋狌狉犲狋犻犿犲
狅狀狊犺狅狅狋狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀狅犳犮犪犾狌狊
诱导时间
Ｔｉｍｅｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅ
（ｄ）
转接愈伤数
Ｃａｌｕｓ
ｎｕｍｂｅｒ
分化绿苗的愈伤数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｃａｌｕｓ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｇｒｅｅｎ
ｓｈｏｏｔｓ
绿苗分化率
Ｇｒｅｅｎｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
７ １２０ ７０ ２７．４ｃ
１４ １１７ ３２ ３８．３ａ
２１ ９２ ３４ ３７．０ａ
２８ ７８ ２７ ３４．６ａｂ
７３３第２２卷第４期 草业学报２０１３年
字切割法和整胚法３种接种方法，结果发现刮胚法完
全抑制了胚芽的萌发，愈伤生长量最大，而十字切割法
也可以有效抑制胚芽萌发，有利于形成更多的胚性愈
伤组织，分化率达６６．７％，是刮胚法的２．１倍，整胚法
的４．３倍。而整胚接种时胚根和胚芽的萌发率高，愈
伤组织分化率低，培养效果最差。
外源生长调节物质在诱导外植体脱分化和再分化
过程中起着重要的作用。小麦不同外植体脱分化形成
愈伤组织过程中，２，４Ｄ是最常用的外源生长调节剂，
其诱导效果好而且稳定。但在小麦成熟胚培养，Ｆｉｌｉｐ
ｐｏｖ等［４］、Ｙｉｎ等［６］研究发现用Ｄｉｃａｍｂａ替代２，４Ｄ诱
导效果最佳，胚性愈伤组织出愈率和植株再生率都明
表５ 干燥处理对愈伤组织分化的影响
犜犪犫犾犲５ 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犱犲狊犻犮犮犪狋犻狅狀狋狉犲犪狋犿犲狀狋狅狀
犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀狅犳犮犪犾狌狊犳狉狅犿狑犺犲犪狋
犿犪狋狌狉犲犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狊
干燥处理时间
Ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ
ｐｅｒｉｏｄ
（ｈ）
愈伤组织数
Ｃａｌｕｓ
ｎｕｍｂｅｒ
分化绿苗的愈伤数
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｃａｌｕｓ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｇｒｅｅｎ
ｓｈｏｏｔｓ
绿苗分化率
Ｇｒｅｅｎｓｈｏｏｔｓ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
（％）
０ ９２ ３４ ３７．０ａｂ
６ ８２ ３３ ４０．２ａ
１２ ７０ １１ １５．７ｃ
显提高。本实验结果表明，Ｄｉｃａｍｂａ在２～４ｍｇ／Ｌ范围内对小麦成熟胚愈伤组织诱导及再生较好，再生率比
２，４Ｄ高４倍之多。ＺＴ、６ＢＡ、ＫＴ及ＴＤＺ对小麦愈伤组织分化的影响均有报道，但结论不尽相同［９１２］。本实验
结果显示，小麦成熟胚愈伤组织在２．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ时分化率最高，达４５．８％，其次为ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ，分化率为
３７．０％，而在不含激素的培养基中，也获得了３８．５％的较高分化率，而在含ＴＤＺ和ＺＴ时分化率较低。
关于成熟胚诱导培养多长时间转分化较好，文献报道较少。Ｆｉｌｉｐｐｏｖ等［４］比较了诱导培养２１和２８ｄ的愈伤
组织的分化，认为２１ｄ后分化最好，２８ｄ时胚性愈伤最多但生长素抑制了芽的分化，愈伤组织也有褐变。本实验
结果显示，诱导７ｄ的愈伤分化率最低，２８ｄ后的愈伤根芽分化速度较快，但分化率下降，１４～２１ｄ的愈伤分化效
果最好。
有报道认为分化前将愈伤组织干燥处理可明显提高芽分化频率［１１，１３］。但在本实验中干燥处理６ｈ分化率有
一定提高，但差异不明显，１２ｈ反而使其分化率明显降低。认为愈伤组织适度干燥，使其处于轻微的胁迫但不影
响细胞活性，可能会促进其分化能力的提高，但由于培养基状态和渗透压不同，愈伤组织含水量不同，而处理时空
气湿度、风速、温度等条件难以控制，导致效果不稳定，愈伤组织长时间暴露也增加了污染的机会。因此，在实际
操作中不建议采取。
本实验结果表明，小麦成熟胚培养时采用胚十字形切割法，在含２～４ｍｇ／Ｌ的Ｄｉｃａｍｂａ培养基中诱导２～３
周后，转入附加２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的培养基中分化，有利于提高小麦成熟胚愈伤组织的诱导和再生频率。
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犗狆狋犻犿犻狕犪狋犻狅狀狅犳犪狉犲犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀狊狔狊狋犲犿犳狅狉犿犪狋狌狉犲犲犿犫狉狔狅犮狌犾狋狌狉犲狅犳狑犺犲犪狋
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２７ｗｉｎｔｅｒｗｈｅａｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆＺｈｏｕｍａｉｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｓｈｏｏｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｃａｌｕｓｆｒｏｍｍａｔｕｒｅｅｍ
ｂｒｙｏｓｗｉｔｈｃｒｏｓｓｃｕｔｔｉｎｇｗａｓ６６．７％，２．１ａｎｄ４．３ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｆｒｏｍｆｒａｇｍｅｎｔｅｄｅｍｂｒｙｏｓａｎｄｗｈｏｌｅ
ｅｍｂｒｙｏｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｌｔｈｏｕｇｈ Ｄｉｃａｍｂａａｎｄ２，４Ｄｉｎｄｕｃｅｄｃａｌｕｓｆｒｏｍ ｅｘｐｌａｎｔｓｗｉｔｈｈｉｇｈｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
（９６．３％－９７．７％），Ｄｉｃａｍｂａｗａｓｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｕｓ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｃａｌｕｓｄｉｆｆｅｒ
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ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｒａｔｅｓｌｉｇｈｔｌｙ，ｂｕｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｗｈｅａｔ；ｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏ；ｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
９３３第２２卷第４期 草业学报２０１３年