全 文 ：林业科学研究摇 圆园员员袁圆源渊圆冤院员远缘 员苑园云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员员冤园圆鄄园员远缘鄄园远
麻疯树 责藻责糟基因正义尧反义植物表达
载体构建与功能初步分析
范正琪员袁 卢孟柱圆袁 李纪元员袁 田摇 敏员袁 李辛雷员袁 吴开云员袁 陈东亮员袁 范妙华员
渊员援中国林业科学研究院亚热带林业研究所袁浙江 富阳摇 猿员员源园园曰 圆援中国林业科学研究院林业研究所袁北京摇 员园园园怨员冤
收稿日期院 圆园员园鄄园猿鄄员怨
基金项目院 浙江省重大科技专项重点项目野林源植物脂肪酸合成酶基因工程菌株的开发利用冶渊圆园园远悦员圆园猿园冤
作者简介院 范正琪渊员怨苑远要冤袁女袁浙江桐乡人袁助理研究员袁硕士袁主要从事林木遗传育种及基因工程研究援
摘要院根据麻疯树 责藻责糟基因和植物表达载体的酶切位点特征袁分别将 责藻责糟 基因全长序列 猿 园园园 遭责 正向插入 责悦粤酝鄄
月陨粤圆猿园园袁构建了正义表达载体 责悦粤酝月陨粤鄄允糟责藻责糟袁基因片段 缘怨苑 遭责 反向插入 责月陨员圆员 构建了反义表达载体 责月陨鄄
允糟责藻责糟遥 通过农杆菌介导袁采用叶盘法转化烟草袁通过对转基因植株的 孕悦砸和 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 检测袁表明 责藻责糟 基因已
经正向尧反向插入烟草基因组中遥 测定了转基因烟草的 孕耘孕悦葬泽藻酶活性袁并通过脂肪酸的测定袁转正义 责藻责糟基因烟
草叶片的脂肪酸含量平均比对照降低 源源郾 猿豫 袁转反义 责藻责糟基因植株脂肪酸含量平均比对照增加 圆远郾 猿豫 遥
关键词院麻疯树曰责藻责糟基因曰表达载体构建曰转化曰脂肪酸
中图分类号院杂苑员愿郾 源远 文献标识码院粤
悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤灶早 燥枣 杂藻灶泽藻 葬灶凿 粤灶贼蚤泽藻灶泽藻 责藻责糟 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 灾藻糟贼燥则 燥枣
允葬贼则燥责澡葬 糟怎则糟葬泽 葬灶凿 贼澡藻 栽则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶
云粤晕 在澡藻灶早鄄择蚤员袁 蕴哉 酝藻灶早鄄扎澡怎圆袁 蕴陨 允蚤鄄赠怎葬灶员袁 栽陨粤晕 酝蚤灶员袁 蕴陨 载蚤灶鄄造藻蚤员袁 宰哉 运葬蚤鄄赠怎灶员袁 悦匀耘晕 阅燥灶早鄄造蚤葬灶早员袁 云粤晕 酝蚤葬燥鄄澡怎葬员
渊员援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 杂怎遭贼则燥责蚤糟葬造 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 云怎赠葬灶早摇 猿员员源园园袁 在澡藻躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 粤灶贼蚤泽藻灶泽藻 责藻责糟 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 遭赠 贼澡藻 缘怨苑 遭责 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 责藻责糟 早藻灶藻 造蚤早葬贼藻凿 贼燥
责月陨员圆员 蚤灶 贼澡藻 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 燥则蚤藻灶贼葬贼蚤燥灶援 粤灶凿 泽藻灶泽藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 则藻糟燥皂遭蚤灶藻凿 遭赠 贼澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 渊猿 园园园 遭责冤 泽藻鄄
择怎藻灶糟藻 蚤灶泽藻则贼藻凿 贼燥 责悦粤酝月陨粤圆猿园园援 酝藻凿蚤葬贼藻凿 遭赠 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽袁 贼澡藻 泽藻灶泽藻 葬灶凿 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 早藻灶藻泽 憎藻则藻
贼则葬灶泽枣藻则则藻凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 贼燥遭葬糟糟燥 怎泽蚤灶早 造藻葬枣鄄凿蚤泽噪 皂藻贼澡燥凿援 砸藻泽怎造贼泽 燥枣 孕悦砸 葬灶凿 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼憎燥
早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 憎藻则藻 蚤灶贼藻早则葬贼藻凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 贼燥遭葬糟糟燥 早藻灶燥皂藻 蚤灶 贼澡藻 泽藻灶泽藻 葬灶凿 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 燥则蚤藻灶贼葬贼蚤燥灶援 栽澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 孕耘孕鄄
悦葬泽藻 憎葬泽 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿援 陨贼 憎葬泽 枣燥怎灶凿 贼澡葬贼 贼澡藻 枣葬贼 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 憎蚤贼澡 泽藻灶泽藻 责藻责糟 憎葬泽 源源郾 猿 责藻则糟藻灶贼 造燥憎藻则
贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 糟燥灶贼则燥造袁 葬灶凿 贼澡葬贼 憎蚤贼澡 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 责藻责糟 憎葬泽 圆远郾 猿 责藻则糟藻灶贼 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造援
运藻赠 憎燥则凿泽院 允葬贼则燥责澡葬 糟怎则糟葬泽曰 责藻责糟 早藻灶藻曰 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 责造葬灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则曰 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰 枣葬贼贼赠 葬糟蚤凿
麻疯树渊允葬贼则燥责澡葬 糟怎则糟葬泽 蕴援 冤又名小桐子等袁为大
戟科渊耘怎责澡燥则遭蚤葬糟藻葬藻冤麻疯树属渊 允葬贼则燥责澡葬 蕴援 冤植物袁
是多年生的木本油料植物袁种仁中含有丰富的油脂
成分遥 石油资源短缺是全球经济发展乃至人类生存
面临的严峻问题袁麻疯树作为一种主要的产油树种
已在许多国家大面积种植遥 麻疯树在我国为栽培或
半野生状态袁主要分布在广东尧广西尧云南尧贵州尧四
川尧台湾尧福建尧海南等省区的热带及干热河谷地区袁
全国大部分地区均不能种植遥 因此袁为增加生态适
应区麻疯树的单位面积产油量袁提高种子含油量乃
是需要解决的一个研究重点遥
杂怎早蚤皂燥贼燥等咱员暂曾报道袁大豆渊郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 渊 蕴援 冤
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
酝藻则则援 冤的油脂含量与蛋白质含量呈高度的负相关袁
油菜渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 蕴援 冤中也存在这种情况遥 陈锦
清等咱圆 原 猿暂通过研究提出了野底物竞争冶假说袁认为籽
粒的主要贮藏物质油脂尧蛋白质均来自葡萄糖酵解
的产物要要要磷酸烯醇式丙酮酸渊孕耘孕冤袁二者之间存
在着底物竞争遥 底物竞争的平衡点袁取决于两类物
质代谢的关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶渊 孕耘孕鄄
悦葬泽藻冤和乙酰辅酶 粤 羧化酶渊粤悦悦葬泽藻冤的相对活性遥
孕耘孕悦葬泽藻催化磷酸烯醇式丙酮酸合成草酰乙酸进入
蛋白质代谢曰粤悦悦葬泽藻催化磷酸烯醇式丙酮酸进入脂
肪代谢遥 上述两种酶的相对活性是调控籽粒蛋白
质 辕油脂含量比率的关键遥 因此通过反义抑制技术
控制麻疯树 孕耘孕悦葬泽藻渊责藻责糟冤基因的表达袁是提高麻疯
树种子含油量的有效途径遥 本研究将从麻疯树中克
隆的 责藻责糟基因正向尧反向连接在植物表达载体上袁构
建了 责藻责糟基因正义尧反义表达载体袁采用农杆菌介导
法将 责藻责糟 基因正向尧反向插入烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬鄄
糟怎皂 蕴援 冤基因组袁通过了 孕悦砸和 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 检测袁
并对转基因烟草的脂肪酸成分进行测定袁从正向调
控和反向调控两个方面初步验证了麻疯树 责藻责糟基因
对脂肪酸合成的调控功能袁为进一步开展高油麻疯
树新品种培育奠定基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 试验材料
员援 员援 员摇 基因尧菌株和质粒摇 麻疯树 责藻责糟 基因 糟阅晕粤
由本实验室克隆咱源暂 袁该基因 糟阅晕粤 全长 猿 员源圆 遭责袁其
中袁开放阅读框渊韵砸云冤长 圆 愿怨愿 遭责袁编码了 怨远缘 个氨
基酸袁在 郧藻灶月葬灶噪 的登录号为 耘哉园远怨源员猿袁大肠杆菌
渊耘援 糟燥造蚤冤 阅匀缘琢 购自 栽葬运葬砸葬 公司袁责郧耘酝鄄栽 增藻糟贼燥则
购自 孕则燥皂葬早藻 公司袁植物表达载体 责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄
猿缘杂 是用带 猿缘杂 启动子鄄多克隆位点鄄终止子序列替
换了 责悦粤酝月陨粤圆猿园园 原多克隆位点袁与 责月陨员圆员尧农杆
菌 耘匀粤员园缘 一起为实验室保存遥
员援 员援 圆摇 试剂与酶摇 孕悦砸试剂尧限制性内切酶尧栽源阅晕粤
连接酶和其它工具酶购自 栽葬运葬砸葬 公司袁孕悦砸 引物
由上海生工合成袁凝胶回收试剂盒购自 粤曾赠早藻灶藻 公
司袁杂燥怎贼澡藻则灶杂交试剂盒渊阅陨郧 匀蚤早澡 孕则蚤皂藻 阅晕粤 蕴葬遭藻鄄
造蚤灶早 葬灶凿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 杂贼葬则贼藻则 运蚤贼域冤构自 砸燥糟澡藻公司遥
员援 圆摇 引物设计与 孕悦砸
麻疯树 责藻责糟 基因 糟阅晕粤 全长 猿 员源圆 遭责袁表达载
体 责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄猿缘杂的多克隆位点含 运责灶玉尧杂葬造玉
圆 个酶切位点袁扩增全长时基因 缘爷端加 运责灶玉酶切
位点袁猿爷端加 杂葬造玉酶切位点袁基因长度为 猿 园园园 遭责袁
引物设计为袁 杂云孕院 郧郧郧郧栽粤悦悦栽粤悦悦郧悦栽悦栽栽栽悦栽悦曰
杂砸孕院栽栽粤粤悦悦郧郧栽粤栽栽栽栽郧悦粤栽栽悦悦粤郧遥
以携带 责藻责糟 基因全长 糟阅晕粤 的 责郧耘酝鄄栽 增藻糟贼燥则
为模板袁缘园 滋蕴 反应体系袁反应程序院怨源 益预变性 源
皂蚤灶袁怨源 益 猿园 泽袁缘苑 益 猿园 泽袁苑圆 益 猿 皂蚤灶袁经 猿园 个循环
后袁苑圆 益延伸 苑 皂蚤灶遥
构建反义表达载体设计引物时 缘爷端加上 月葬皂匀
玉袁猿爷端加上 载遭葬玉袁与植物表达载体 责月陨员圆员 的
酶切位点反向对应袁扩增片段长度为 缘怨苑 遭责遥 设计
引物为 粤云孕院郧郧郧郧粤栽悦悦悦栽郧悦栽郧栽悦栽悦栽悦郧栽曰粤砸孕院
郧郧栽悦栽粤郧粤郧栽悦悦粤栽郧悦郧粤粤郧粤栽悦悦粤郧遥
以携带 责藻责糟 基因全长 糟阅晕粤 的 责郧耘酝鄄栽鄄允糟责藻责糟
为模板袁缘园 滋蕴 反应体系袁反应程序院怨源 益预变性 源
皂蚤灶袁怨源 益 猿园 泽袁远员 益 猿园 泽袁苑圆 益 源缘 泽袁经 猿园 个循环
后袁苑圆 益延伸 苑 皂蚤灶遥
员援 猿摇 孕悦砸产物的克隆
利用凝胶回收试剂盒电泳回收 孕悦砸 产物袁并与
栽粤克隆载体 责郧耘酝鄄栽 藻葬泽赠 增藻糟贼燥则 连接袁源 益过夜袁转
化大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态细胞袁在含 载鄄早葬造 的 粤皂责
平板上筛选重组子袁重组子经酶切后作电泳鉴定遥
员援 源摇 正义尧反义表达载体构建
将携带全长基因的 责郧耘酝鄄栽 藻葬泽赠 增藻糟贼燥则 重组质
粒和 责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄猿缘杂 用 运责灶玉尧杂葬造玉双酶切袁携
带反义片段的重组质粒和 责月陨员圆员 用 月葬皂匀玉尧载遭葬玉
双酶切袁电泳回收基因目的片段和载体酶切片段袁用
栽源阅晕粤连接酶连接袁转化大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态细
胞袁提取重组质粒袁酶切鉴定遥
员援 缘摇 对烟草的转化
用冻融法将重组质粒导入农杆菌 耘匀粤员园缘袁转
化烟草采用农杆菌介导的叶盘转化法遥 转基因烟草
在人工气候箱中培养渊温度 圆愿 益袁光照 员远 澡袁相对湿
度 苑缘豫 冤遥
员援 远摇 转基因烟草 孕悦砸 鉴定及 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 杂交
检测
烟草叶片总 阅晕粤提取采用 悦栽粤月 法袁正义转基
因烟草以 杂云孕尧 杂砸孕 为引物袁反义转基因烟草以
粤云孕尧粤砸孕为引物袁以未转化的烟草为阴性对照袁以
含正义尧反义基因的重组质粒为阳性对照袁检测转基
因烟草遥
以反义表达载体为模板袁扩增 员 条 员园缘 遭责 的片
段作为 杂燥怎贼澡藻则灶杂交的探针遥 扩增非转基因植株和
孕悦砸 阳性的转基因植株遥 按 阅陨郧 匀蚤早澡 孕则蚤皂藻 阅晕粤
远远员
第 圆 期 范正琪等院麻疯树 责藻责糟基因正义尧反义植物表达载体构建与功能初步分析
蕴葬遭藻造蚤灶早 葬灶凿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 杂贼葬则贼藻则 运蚤贼域操作步骤探针标
记尧电泳尧转膜尧杂交袁最后进行显影分析遥
员援 苑摇 转基因烟草 孕耘孕悦葬泽藻酶活性测定
酶的提取院按改良的 杂葬赠则藻 等咱缘暂的方法进行袁取
叶片鲜样 园郾 缘 早袁加少量石英砂和 猿 皂蕴 预冷的提取
液进行研磨提取曰过滤曰滤液在 源 益尧员缘 园园园 则窑
皂蚤灶 原员条件下离心 员园 皂蚤灶袁上清液用作酶活性测定遥
酶活性测定院参照 月造葬灶噪藻 等咱远暂的方法袁在 猿源园
灶皂波长下测定光密度袁以每分钟吸光度变化 园郾 园园员
为 员 个酶单位 渊 哉冤袁酶活性测定重复 源 次袁取平
均值遥
员援 愿摇 转基因烟草脂肪酸成分分析
烟叶脂肪酸提取及甲酯化方法参照金永明等方
法咱苑暂 遥 将烟叶或烟丝置于烘箱内在 源园 益左右干燥
圆 澡袁粉碎袁混合均匀备用遥 将 员 早 烟末置于 员园园 皂蕴
锥型瓶中袁加入 圆缘 皂蕴 员园豫 匀圆杂韵源鄄悦匀猿韵匀 溶液和园郾 缘 皂蕴己二酸内标溶液袁振荡过夜渊圆圆 澡冤袁过滤袁滤
液倒入盛有 源园 皂蕴 水的 员园园 皂蕴 分液漏斗中袁用
悦匀圆悦造圆 萃取 猿 次袁员园 皂蕴窑次 原 员袁合并有机相袁用 猿园皂蕴饱和 晕葬悦陨溶液洗涤袁在无水 晕葬圆杂韵源 上干燥袁直
接取 员 皂蕴进行气相色谱分析遥
在 粤早蚤造藻灶贼 远愿怨园晕 气相色谱仪上进行脂肪酸分
析袁气相色谱条件院进样口温度院圆圆园 益曰柱温院初始
温度 员源园 益袁源 益窑皂蚤灶 原员升至 圆猿园 益袁再以 缘 益窑
皂蚤灶 原员升至 圆缘园 益袁保持 圆 皂蚤灶曰云陨阅 检测器袁检测器
温度 圆苑缘 益曰进样量 员 滋蕴袁不分流进样遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 麻疯树 责藻责糟基因正义表达载体的构建
本实验室已克隆的 责藻责糟全长基因已在 郧藻灶月葬灶噪
登录袁登录号为 耘哉园远怨源员猿遥 以 杂云孕尧杂砸孕 为引物对
含全长 责藻责糟 基因的质粒 责郧耘酝鄄栽鄄允糟责藻责糟 进行扩增
后袁获得了 员 条 猿 园园园 遭责 的片段遥 将携带该片段
责郧耘酝鄄栽 藻葬泽赠 增藻糟贼燥则重组质粒与 责悦粤酝月陨粤圆猿园园 进行
酶切尧连接尧转化大肠杆菌袁挑取转化子提取质粒袁经
运责灶玉尧杂葬造玉双酶切鉴定袁重组质粒出现了 员 条猿 园园园
遭责左右的片段渊图 员冤袁与扩增片段一致袁可以证明
责藻责糟基因的全长 糟阅晕粤 已经插入 责悦粤酝月陨粤圆猿园园袁命
名该正义植物表达载体为 责悦粤酝月陨粤鄄允糟责藻责糟遥
圆援 圆摇 麻疯树 责藻责糟基因片段的获得及反义表达载体
的构建
以 粤云孕尧粤砸孕为引物对含全长 责藻责糟 基因的质粒
责郧耘酝鄄栽鄄允糟责藻责糟进行扩增后袁获得了 员 条 缘怨苑 遭责 的
图 员摇 植物表达栽体 责悦粤酝月陨粤鄄允葬责藻责糟酶切鉴定
片段袁经过与构建正义表达载体相同的实验步骤后袁
反向插入 责月陨员圆员遥 对重组质粒进行 月葬皂匀玉和 载遭葬
玉双酶切鉴定袁切下 员 条约 远园园 遭责的片段渊图 圆冤袁与
预期结果相符袁表明 责藻责糟 基因的片段已经反向插入
责月陨员圆员 中袁命名该植物表达载体为 责月陨鄄允糟责藻责糟遥
图 圆摇 植物表达栽体 责月陨鄄允糟责藻责糟酶切电泳
圆援 猿摇 转正义尧反义 责藻责糟基因烟草的获得
通过农杆菌介导法进行转化袁用卡那霉素进行
筛选袁其中转正义 责藻责糟 基因获得了卡那霉素抗性苗
员圆 株渊图 猿冤袁转反义 责藻责糟 基因获得了卡那霉素抗性
苗 猿员 株渊图 源冤遥 将这些抗性苗提取基因组 阅晕粤袁
孕悦砸扩增 责藻责糟基因特异性片段遥 结果表明院转正义
责藻责糟基因的植株有 猿 株扩增出了 猿 园园园 遭责左右的片
段渊图 缘冤曰转反义 责藻责糟 基因的植株有 员园 株扩增出
远园园 遭责左右的片段袁图 远 是其中 缘 株转基因植株的
孕悦砸结果袁而未转化的植株不能扩增出这些特异性
条带袁可初步确定正义尧反义 责藻责糟 基因已导入烟草遥
为进一步验证 孕悦砸检测结果的可靠性袁又对 孕悦砸阳
性的转基因烟草进行 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 杂交分析袁全部
样品杂交结果均呈阳性袁图 苑 为 猿 株转正义 责藻责糟 基
因的烟草袁图 愿 为 缘 株转反义 责藻责糟基因的烟草袁说明
苑远员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
麻疯树正义尧反义 责藻责糟基因已整合到烟草基因组中遥
图 猿摇 转正义 责藻责糟基因卡那霉素抗性烟草
图 源摇 转反义 责藻责糟基因卡那霉素抗性烟草
图 缘摇 转正义 责藻责糟基因烟草 孕悦砸检测
图 远摇 转反义 责藻责糟基因烟草 孕悦砸检测
图 苑摇 转正义 责藻责糟基因烟草 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶检测
图 愿摇 转反义 责藻责糟基因烟草 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶检测
圆援 源摇 转基因烟草中 孕耘孕悦葬泽藻酶活性的变化
麻疯树 责藻责糟基因的导入可能会改变 孕耘孕悦葬泽藻蛋
白的表达量袁从而引起 孕耘孕悦葬泽藻 酶活性的变化遥 通
过对转基因烟草叶片 孕耘孕悦葬泽藻 酶活性的测定袁猿 株
转正义 责藻责糟 基因的转基因烟草中袁有 圆 株的 孕耘孕鄄
悦葬泽藻酶活性相对于野生型植株有明显的提高袁均提
高了 圆猿豫左右袁仅 猿 号转基因植株 孕耘孕悦葬泽藻 酶活性
稍有降低渊图 怨冤遥 员园 株转反义 责藻责糟 基因的转基因
烟草中袁源 株转基因烟草 孕耘孕悦葬泽藻 酶活性提高袁缘 株
孕耘孕悦葬泽藻酶活性均有不同程度的降低袁猿 号植株降低
了 员怨郾 猿圆豫 袁 缘 号降低了 圆园郾 员圆豫 袁 远 号降低了
圆猿郾 圆圆豫 袁苑 号降低了 员源郾 源怨豫 袁下降最大的是 愿 号植
株袁降低了 猿苑郾 缘员豫 渊图 员园冤遥
图 怨摇 转正义 责藻责糟基因烟草中的 孕耘孕悦葬泽藻活性变化
图 员园摇 转反义 责藻责糟基因烟草中的 孕耘孕悦葬泽藻活性变化
愿远员
第 圆 期 范正琪等院麻疯树 责藻责糟基因正义尧反义植物表达载体构建与功能初步分析
圆援 缘摇 转基因烟草中脂肪酸含量
将经过 孕悦砸 和 孕悦砸鄄杂燥怎贼澡藻则灶 检测为阳性的转
基因植株进行脂肪酸测定袁气相色谱分析结果表明院
烟叶中的脂肪酸有 员远 种成分袁主要成分为亚麻酸尧
十四酸尧棕榈酸尧亚油酸尧硬脂酸尧油酸袁其中亚麻酸
含量最高渊表 员冤遥 对照野生型干烟叶的脂肪酸含量
为 苑员郾 圆员 皂早窑早 原员遥 转正义 责藻责糟 基因的 猿 株转基因
烟草中袁有 圆 株转基因烟草的脂肪酸含量明显下降袁
与 孕耘孕悦葬泽藻酶活性提高的 圆 株转基因烟草相对应袁
平均含量为 猿怨郾 远源 皂早窑早 原员袁低于对照 源源郾 猿豫 遥 转
反义 责藻责糟基因的 员园 株转基因烟草中袁有 源 株转基因
烟草的脂肪酸含量增加袁与 孕耘孕悦葬泽藻 酶活性降低的
源 株转基因烟草对应袁平均含量为 愿怨郾 怨苑 皂早窑早 原员袁
高于对照 圆远郾 猿豫 遥
表 员摇 转基因烟草叶片主要脂肪酸成分及平均含量
皂早窑早 原员
脂肪酸 转正义 责藻责糟基因 转反义 责藻责糟基因 对照
亚麻酸渊悦员愿院猿冤 圆源援 猿缘 缘园援 猿苑 源园援 远园
十四酸渊悦员源院园冤 猿援 源源 员远援 苑员 员园援 源园
棕榈酸渊悦员远院园冤 缘援 远怨 员员援 园圆 怨援 源愿
亚油酸渊悦员愿院圆冤 圆援 源员 源援 员猿 源援 苑猿
硬脂酸渊悦员愿院园冤 员援 园源 圆援 员缘 员援 远猿
油酸渊悦员愿院员冤 园援 远园 园援 愿圆 员援 园缘
总量 猿怨援 远源 愿怨援 怨苑 苑员援 圆员
摇 摇 注院脂肪酸平均含量指脂肪酸在每克烟叶干样中的平均含量遥
猿摇 结论与讨论
自从发现植物种子中油脂含量与蛋白质含量的
负相关性及与 孕耘孕悦葬泽藻 的关系袁人们开始关注采用
责藻责糟基因的反义抑制技术调控脂类合成袁通过这个
技术获得了转 责藻责糟 基因的油菜咱圆 原 猿袁愿暂 尧大豆咱怨暂 尧水稻
渊韵则赠扎葬 杂葬贼蚤增葬 蕴援 冤 咱员园暂等作物袁作物籽粒的油脂含量
得到了提高遥 在细菌中同样存在这样的规律袁候李
君等咱员员暂将蓝藻的正反义 责藻责糟粤 基因导入大肠杆菌袁
转基因的大肠杆菌呈现的脂类和蛋白质间的此消彼
长与 责藻责糟基因表达密切相关袁野底物竞争冶假说得到
了进一步的证实遥 本研究构建了麻疯树 责藻责糟基因的
正义尧反义表达载体袁并获得了正向尧反向插入麻疯
树 责藻责糟基因的转基因烟草遥 结果表明院孕耘孕悦葬泽藻 酶
活性的变化与脂肪酸含量成反比袁一些转基因植株
脂肪酸含量的变化幅度较大袁麻疯树 责藻责糟 基因表达
的加强和减弱直接影响了烟草中脂类的合成袁责藻责糟
基因过量表达抑制了脂肪酸的合成袁而转反义 责藻责糟
基因促进了脂肪酸的合成袁表现出脂类合成与 责藻责糟
基因表达的负相关性袁与野底物竞争冶假说相符遥 一
些转基因植株的 孕耘孕悦葬泽藻酶活性和脂肪酸含量未出
现预期的结果袁这可能与转基因沉默现象有关袁目前
正在对各个转基因植株的蛋白及子代分离作进一步
的分析遥
本研究植物表达载体中的启动子是 悦葬酝灾 猿缘杂
组成型启动子袁能使外源基因在植物中组成型表达袁
责藻责糟基因是植物光合作用的关键酶袁理论上反义
责藻责糟基因的组成型表达可能会导致植物生长受抑袁
但事实上并非如此遥 以油菜为例袁由亲本浙油 苑缘愿
转化组成型反义 责藻责糟基因育成的超高油油菜超油 员
号袁其含油量比亲本提高了 怨郾 远源豫 袁而主要特性和
农艺性状与亲本相仿袁有的性状甚至比亲本更好袁如
植物高大尧千粒质量高出亲本 园郾 缘怨 早等咱员圆暂 遥 本研究
中转基因烟草与非转基因烟草间的表型基本一致袁
转基因烟草没有出现生长抑制的现象遥 这可能是因
为在油菜尧烟草等 悦猿 植物中袁光合作用的关键酶是砸怎遭蚤泽糟燥袁孕耘孕悦葬泽藻 在光合作用中并不起主要作用袁
责藻责糟基因的抑制不会对光合作用造成很大的影响遥
此外袁反义 责藻责糟基因只是抑制了部分植物原有 责藻责糟
基因的表达袁对植物生长的影响很小曰但从长远的育
种目标来看袁种子特异启动子启动反义 责藻责糟 基因的
表达具有重要作用袁已经从油菜咱员猿暂 尧大豆咱员源暂中克隆
了种子特异性启动子袁其中油菜已把种子特异启动
子和反义 责藻责糟 基因同时构建在同一载体上咱员缘暂 遥 目
前已经从麻疯树中分离了麻疯树毒蛋白基因渊 糟怎则鄄
糟蚤灶冤的启动子袁在烟草中的基因功能分析表明袁它是
在麻疯树种子中特异表达的启动子咱员远暂 遥 本研究中
的 责藻责糟基因来自麻疯树袁转化烟草是为验证麻疯树
责藻责糟基因的功能袁但最终要转化到麻疯树中去遥 目
前袁从麻疯树的子叶尧下胚轴尧叶柄尧茎段尧叶片中均
已诱导出不定芽咱员苑 原 员愿暂 袁并开展了麻疯树的遗传转化
工作咱员怨 原 圆员暂 袁这些结果为本研究下一阶段的工作提供
了实验依据袁可望为利用反义抑制技术获得高油麻
疯树新品种袁从而为生产生物柴油提供更理想的生
物资源遥
参考文献院
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咱圆暂 陈锦清袁 黄锐之袁 郎春秀袁 等援 油菜 孕耘孕 基因的克隆及 孕耘孕 反
义基因的构建咱允暂 援 浙江大学学报院农业与生命科学版袁 员怨怨怨袁
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林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
咱猿暂 陈锦清袁 郎春秀袁 胡张华袁 等援 反义 孕耘孕 基因调控油菜籽粒蛋
白质 辕油脂含量比率的研究咱 允暂 援 农业生物技术学报袁 员怨怨怨袁苑
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咱源暂 范正琪袁 李纪元袁 田 敏袁 等援 麻疯树磷酸烯酮式丙酮酸羧化酶
责藻责糟 基因全长 糟阅晕粤 克隆及序列分析 咱 允暂 援 林业科学研究袁
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咱苑暂 金永明袁 张明福袁 刘百战援 烟草中多元酸和高级脂肪酸的分析
咱允暂 援 烟草科技袁 圆园园圆袁 员苑苑渊源冤院 圆员 原 圆源
咱愿暂 郎春秀袁胡张华袁 刘智宏袁 等援 油菜农杆菌转基因体系的建立及
转 孕耘孕反义基因油菜的获得咱允暂 援 浙江农业学报袁 员怨怨怨袁员员渊圆冤院
缘缘 原 缘愿
咱怨暂 赵桂兰袁 陈锦清袁 尹爱萍袁 等援 获得转反义 孕耘孕 基因超高油大
豆新材料咱允暂 援 分子植物育种袁 圆园园缘袁猿渊远冤院 苑怨圆 原 苑怨远
咱员园暂 吴关庭袁 郎春秀袁 胡张华袁 等援 应用反义 孕耘孕基因表达技术提
高稻米脂肪含量咱 允暂 援 植物生理与分子生物学学报袁 圆园园远袁猿圆
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咱员员暂 候李君袁施定基袁蔡泽富袁等援 蓝藻正反义 责藻责糟粤基因导入对大
肠杆菌中脂类合成的调控咱 允暂 援 中国生物工程杂志袁 圆园园愿袁 圆愿
渊缘冤院 缘圆 原 缘愿
咱员圆暂 郎春秀袁 王建民袁 胡张华袁 等援 反义 孕耘孕转基因油菜超油 员 号
的品系特性和栽培要点咱 允暂 援 浙江农业科学袁 圆园园远 渊源冤院 源员员
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咱员猿暂 熊兴华袁 官春云袁 李 恂袁 等援 油菜种子特异表达 灶葬责蚤灶 基因启
动子的克隆及序列分析咱允暂 援 生物技术袁 圆园园猿袁 员猿渊猿冤院 源 原 缘
咱员源暂 财音青格乐袁 李明春袁 蔡摇 易袁 等援 大豆种子特异性启动子的
分离及结构分析咱允暂 援 中国农业科学袁 圆园园缘袁 猿愿渊猿冤院 源缘源 原 源远员
咱员缘暂 张志刚袁 白德朗袁 陈烈臣袁 等援 甘蓝型油菜 责藻责 基因片段的克
隆和种子特异性反义表达载体的构建咱 允暂 援 湖南农业大学学
报院自然科学版袁 圆园园缘袁 猿员渊猿冤院 圆源怨 原 圆缘圆
咱员远暂 秦小波袁 高继海袁 徐摇 莺袁 等援 麻疯树 糟怎则糟蚤灶 启动子的分离及
其在转基因烟草中的功能分析咱 允暂 援 植物学通报袁 圆园园愿袁 圆缘
渊源冤院 源园苑 原 源员源
咱员苑暂 秦摇 虹袁 宋松泉袁 龙春林袁 等援 小桐子的组织培养和植株再生
咱允暂 援 云南植物研究袁 圆园园远袁圆愿渊远冤院 远源怨 原 远缘圆
咱员愿暂 刘伯斌袁 卢孟柱袁 李摇 玲袁 等援 麻疯树叶盘法高效再生的研究
咱允暂 援 林业科学研究袁 圆园员园袁 圆猿渊猿冤院 猿圆远 原 猿圆怨
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咱圆园暂 李美茹袁 李洪清袁 吴国江袁 等援 影响农杆菌介导的麻疯树基因
转化因素的研究咱 允暂 援 分子细胞生物学报袁 圆园园远袁 猿怨渊员冤院 愿猿
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咱圆员暂 刘伯斌袁 卢孟柱袁 陈介南袁 等援 麻疯树基因转化研究进展咱 允暂 援
林业实用技术袁 圆园园怨渊缘冤院 猿园 原 猿圆
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