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Relationship between Growth Traits Heterosis and Genetic Distance among Parents of Pinus elliottii×P.caribaea Based on SSR Molecular Markers

湿加松亲本间遗传距离与杂种优势的相关性分析



全 文 :林业科学研究 2012,25(2):138 143
ForestResearch
  文章编号:10011498(2012)02013806
湿加松亲本间遗传距离与杂种优势的相关性分析
李义良1,赵奋成1,吴惠姗1,张应中1,李福明2,
钟岁英2,李宪政1,蔡 坚1
(1.广东省林业科学研究院林业研究所,广东 广州 510520;2.广东省台山红岭种子园,广东 台山 529200)
收稿日期:20101130
基金项目:国家林业局林业公益性行业科研专项(项目编号:201104014);广东省林业科技创新专项资金项目(项目编号:
2008KJCX00501、2009KJCX00701、2010KJCX00701);广东省科技厅(2007A0202000011)及北京林业大学林木育种国家工程实验室开放课
题项目(FOP20103)共同资助
作者简介:李义良(1979—),男,河北涿州人,博士,研究方向:林木遗传育种.
通讯作者.
摘要:利用SSR标记对17个湿加松亲本无性系进行遗传多样性分析,进而分析亲本遗传距离与子代杂种优势的相
关性。结果表明:14个微卫星标记在湿加松亲本群体中均呈现高度多态,共检测到57个等位基因,多态位点百分
率为87.72%,平均杂合度为0.1444 0.8841,以SSR标记遗传距离聚类,将参试亲本材料划分为2大类群,可以
用于湿加松亲本遗传多样性的评价。树高、胸径、材积的杂种优势与亲本遗传距离相关性达显著或极显著水平,相
关系数分别为0.5420、0.6412、0.6393,决定系数分别为0.2938、0.4110、0.4087。分子标记遗传距离与树高、胸
径、材积的杂种优势相关程度较高,利用SSR标记预测湿加松杂种优势是可行的,为湿加松良种选育及亲本选配提
供参考。
关键词:湿加松;SSR标记;遗传距离;杂种优势
中图分类号:S718.46 文献标识码:A
RelationshipbetweenGrowthTraitsHeterosisandGeneticDistanceamong
ParentsofPinuselioti×P.caribaeaBasedonSSRMolecularMarkers
LIYiliang1,ZHAOFencheng1,WUHuishan1,ZHANGYingzhong1,LIFuming2,
ZHONGSuiying2,LIXianzheng1,CAIJian1
(1.GuangdongAcademyofForestry,Guangzhou 510520,Guangdong,China;
2.TaishanHonglingSeedOrchard,Taishan 529200,Guangdong,China)
Abstract:SeventeenPinuselioti×P.caribaeaparentallineswereassayedbySimpleSequenceRepeat(SSR)
toevaluatethegeneticdiversityanddeterminethecorelationbetweengeneticdistanceandheterosis.Theresultsin
dicatedthattherewereabundantgeneticpolymorphismsat14SSRmolecularmarkersinparentsofhybridpine,57
alelesweredetectedintotal,thepercentageofpolymorphiclociwas87.72%,andtheaverageheterozygosity
rangedbetween0.1444and0.8841,themicrosatelitelocicouldbeusedforgeneticdiversityevaluationinpar
entsofhybridpine.Theresultsshowedthattherewassignificantrelationorextremelysignificantrelationbetween
geneticdistanceandheight,DBHandvolumeofheterosis.Thecorelativecoeficientswere0.5420,0.6412and
0.6393,andthedeterminationcoeficientwere0.2938,0.4110and0.4087.Sincethereexistedarelativeclos
ercorelationbetweenthegeneticdistanceandheight,DBHandvolumeofheterosis,itisfeasibletopredictthehy
bridpinesheterosisbySSRmarkers.
Keywords:Pinuselioti×P.caribaea;SSRmarkers;geneticdistance;heterosis
第2期 李义良等:湿加松亲本间遗传距离与杂种优势的相关性分析
杂种优势是指2个遗传基础不同的亲本杂交产
生的后代在生活力、生长势、产量、适应性、抗逆性等
方面优于亲本的现象,这种现象在生物界是普遍存
在的。从18世纪中期杂种优势的发现到20世纪30
年代在玉米上首次利用以来,杨属(PopulusL.)、松
属(PinusLinn.)、桉属(EucalyptusL’Hérit)等树种
在生长、抗性等杂种优势利用方面取得了显著成效。
湿地松×洪都拉斯加勒比松(PinuseliotiEngelm.
×P.caribaeavar.hondurensis(Sénécl.)Baret.et
Golfari)在生长方面表现出明显的杂种优势,研究发
现:在我国,杂种子代平均材积比湿地松自由授粉子
代大221.36%[1],湿加松杂种优势的利用得到国内
外普遍关注。在湿加松良种选育过程中,如何选择
优良湿地松、加勒比松种质进行组配,进而选择强优
势组合是关键,杂种优势最可靠的测定方法是通过
测算配合力来估计,此方法虽然直接有效,但需要对
大量组合进行评价,而松树生长周期相对较长,配置
大量杂交组合不仅存在一定的盲目性,而且受环境
影响较大,不仅费时费力,结果也易产生误差。亲本
间遗传距离与后代杂种优势具有一定的相关性已成
为育种学者普遍接受的事实,DNA分子标记因能真
实反应亲本遗传物质差异,已成为预测杂种优势的
有效手段。与玉米[2-3]、水稻[4-5]、油菜[6]、黄瓜[7]、
棉花[8]、小麦[9]等作物的研究相似,一些林木的研
究中也发现亲本间遗传距离与杂种优势同样存在不
同程度的相关性[10-11]。湿加松杂种优势明显,但有
关湿加松亲本遗传距离与杂种优势的研究还未见报
道,本研究利用SSR标记研究湿加松亲本间遗传差
异,探讨分子标记遗传距离与杂种优势的相关关系,
为湿加松良种选育及亲本选配提供参考。
1 试验材料方法
1.1 交配设计、子代测定林营建及生长性状杂种优
势测定
1992年在广东省台山市以生长快、分枝多的洪
都拉斯加勒比松无性系(H03、H05、H06、H07)做父
本,以干性好的湿地松无性系(A01、A02、A03、A05、
B01、B02、B022、B024、B16、B48、B91、B102、B106)
做母本,采用不连续的析因交配设计(4×13)获得
21个种间杂交组合,1995年5月在台山红岭种子园
营建子代测定林,进行了杂交种比较试验。试验采
用随机完全区组设计,5株单行小区,8次重复,株行
距3m×3m。2005年对试验林进行每木调查,测量
树高(H/m)、胸径(D/cm)。利用树高、胸径计算单
株材积(V/m3),V=(f×π×H×D2)/4,式中,π为
圆周率,f为形数,取 f=0.5。杂种优势程度(H)计
算公式为:H=(Fi-OP)/OP×100%,式中,Fi为
任一个杂交组合(家系)的平均值;OP为湿地松自
由授粉子代的平均值。
1.2 DNA的提取和SSR标记
2008年10月,采集上述析因交配设计所用的4
个加勒比松父本和13个湿地松母本当年生侧枝顶
芽,提取DNA进行 SSR标记试验。DNA提取参考
李义良等[12]的方法。用于扩增反应的 SSR引物,均
来自Devey等[13]和 Fisher等[14]开发的火炬松 SSR
引物,从中筛选出多态性高、清晰且重复性好的14
对引物用于遗传距离分析。
SSR扩增程序为:94℃预变性4min;94℃变性
50s,55℃退火50s(引物不同退火温度适当调整),
72℃延伸 1min,35个循环;循环结束后72℃延伸
10min,4℃保存,扩增反应在PTC200型 PCR仪上
进行。PCR反应经过比较和优化确定反应体系为:
10×Taq酶缓冲液,DNA50ng,dNTP0.5mmol·
L-1,引物10μmol·L-1,DNA聚合酶1.5U。扩增
产物变性后经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染
显色。
1.3 数据统计分析
银染后统计带型在相同片段位置上的谱带,按
1/0系统记录,有带为1,无带为0,获得 SSR数据矩
阵。利用得到的 SSR数据矩阵,用 POPGENE软件
计算多态位点百分率(PPL)和 Shannon信息多样性
指数(I)、Nei’s基因多样度指数(HE)。利用SSR数
据矩阵,通过软件NTsys2.01计算亲本间遗传距离,
在MicrosoftOficeExcel中构建生长性状杂交优势
随亲本间遗传距离变化的散点图。通过SAS软件检
测亲本遗传距离与株高、胸径、材积的杂种优势的相
关系数,建立相应的一元线性回归方程。
2 结果与分析
2.1 湿加松杂交亲本间SSR遗传多样性分析
从80对SSR引物中筛选出对17个亲本材料扩
增产物具有明显多态性且带型稳定的引物14对(引
物信息略)。利用14对 SSR引物对2个群体17个
亲本进行PCR扩增,每对引物扩增出的位点数目为
2 10条不等,14对SSR引物在亲本群体中扩增的
总条带数为57条,平均每对引物4.07条,多态条带
931
林 业 科 学 研 究 第25卷
50条,多态位点百分率(PPL)为87.72%,Nei’S基
因多样性指数(HE)为0.5181,Shannon信息多样性
指数(I)为0.8655,类群间平均遗传距离为0.202
9,表明亲本间遗传多样性水平较高。
2.2 亲本间遗传关系分析
利用57对SSR标记多态性片断,通过软件 NT
sys2.01计算17个亲本间的遗传距离(表1),由表1
可以看出:17个亲本遗传距离存在明显差异,遗传
距离为 0.2336 0.6122,平均遗传距离为
0.4290,遗传距离的变异系数为20.90%,表明不
同杂交组合的亲本间遗传距离存在较大差异。B48
与H03的的遗传距离最大(0.6122),其次为 B022
与H03,A01与H05的遗传距离最小(0.2336)。利
用SSR标记遗传距离为原始数据,对17个亲本材料
进行聚类分析,绘制成树状图(图1)。
以0.43为阀值,可将供试材料分为两大类,湿
地松聚为1类,又可分为 4个亚类,即第 1亚类为
A01、A02、A03、A05,第 2亚类为 B01、B02、B91、
B102,第3亚类为 B022、B024,第 4亚类为 B16、
B106、B48;洪都拉斯加勒比松聚为1类,其中,H03、
H05聚为1个亚类,H06、H07聚为1个亚类。
表1 17个亲本间的遗传距离
父本
母本
A01 A02 A03 A05 B01 B02 B022 B024 B16 B48 B91 B102 B106
H03 0.4487 0.5381 0.5705 0.5381 0.5251 0.5251 0.5918 0.4887 0.3820 0.6122 0.5807 0.5807 0.3407
H05 0.2336 0.3653 0.4487 0.4259 0.3387 0.3387 0.4700 0.3849 0.3387 0.4904 0.3788 0.3788 0.3013
H06 0.3466 0.3670 0.4431 0.4848 0.4621 0.3370 0.4644 0.3866 0.5311 0.3670 0.4377 0.3732 0.5544
H07 0.3236 0.3653 0.4487 0.4259 0.3387 0.3387 0.5390 0.4455 0.2781 0.5594 0.4478 0.3788 0.2442
图1 基于SSR分子标记数据的17个亲本的聚类分析
2.3 杂交子代生长性状杂种优势分析
杂种子代树高、胸径、材积的杂种优势见表2。
由表2可看出:材积的优势表现最突出,21个组合
的杂种优势平均值为238.33%,变幅为61.64%
364.16%,仅A01×H6组合低于100%,其余组合均
超过100%,有13个组合超过200%,B024×H6达
到364.16%;其次杂种优势表现较大的生长性状是
胸径,胸径优势变幅为23.52% 79.15%,平均值
为56.30%;与材积、胸径相比,树高的杂种优势相
对较小,变幅为 12.87% 51.83%,平均值为
37.98%,均表现为正向优势,表明湿加松在株高、胸
径、材积方面表现出明显的杂种优势。
041
第2期 李义良等:湿加松亲本间遗传距离与杂种优势的相关性分析
表2 遗传距离、杂种优势及其相关性
亲本组合 遗传距离
杂种优势/%
树高 胸径 材积
B106×H03 0.3407 41.15 59.65 247.09
B91×H03 0.5807 50.02 67.93 305.24
B91×H05 0.3788 34.69 47.75 180.84
B91×H06 0.4377 44.60 67.47 280.41
B01×H05 0.3387 27.95 51.97 193.95
B01×H06 0.4621 37.61 64.07 288.66
B102×H03 0.5807 51.40 76.44 344.84
B102×H05 0.3788 29.37 42.51 169.86
B48×H03 0.6122 51.71 76.15 336.95
B48×H05 0.4904 29.73 45.88 169.50
B48×H06 0.3670 34.60 51.04 233.33
B16×H05 0.3387 28.04 40.87 157.95
B16×H06 0.5311 30.57 65.13 284.63
B02×H05 0.3387 35.59 42.92 175.28
B02×H06 0.3370 43.46 54.79 233.40
B02×H07 0.3386 47.78 53.64 241.57
B02-2×H06 0.4644 46.21 61.79 265.23
B02-4×H06 0.3866 51.83 79.15 364.16
A01×H06 0.3466 12.87 23.52 61.64
A02×H06 0.3670 31.65 43.36 183.19
A05×H06 0.4848 36.68 66.17 287.16
遗传距离与杂种
优势相关性
相关系数r0.5420 0.6412 0.6393
P>r 0.0111 0.0017 0.0018
  注:、分别表示5%和1%显著水平,下同。
2.4 亲本间遗传距离与子代生长性状杂种优势相
关性分析
根据SAS统计分析软件之CORR过程,计算21
个杂交组合亲本群体间遗传距离与其经济性状杂种
优势之间的相关系数,发现 SSR标记遗传距离与树
高、胸径、材积优势之间均呈正相关关系(表2),相
关系数分别为0.5420、0.6412、0.6393,决定系数
分别为0.2938、0.4110、0.4087,相关程度达到显
著或极显著水平,遗传距离与胸径的杂种优势相关
性最高,其次是材积,与树高的相关性偏低,说明本
研究所用的亲本遗传距离能反映实际产量优势的大
小,表明有可能利用这些 SSR标记进行杂种优势
预测。
由图2散点图可以看出:当遗传距离在0.3370
0.6122变动时,随着亲本间遗传距离的增大,树高、
胸径、材积的杂种优势呈显著线性增加。通过回归
分析进一步发现:树高、胸径、材积的杂种优势与亲
本遗传距离间均属直线相关关系(表3);同时,其相
关系数和回归方程的显著性检验表明,它们依次达
到显著或极显著水平。从各性状的杂种优势与遗传
距离的理论方程可以看出:常数项及回归系数均为
正值,表明不管遗传距离多大,杂种树高、胸径、材积
均表现为正向杂种优势,所配置的21个杂交组合均
与本研究结论吻合。
图2 亲本间遗传距离与杂种优势散点图
表3 亲本遗传距离与杂交子代生长性状杂种
优势的一元线性回归方程及参数检验
性状 回归方程(y=a+bx)决定系数(r2)F检验(F值)
树高杂种优势 y=12.026+60.115x 0.2938 7.90
胸径杂种优势 y=13.713+98.641x 0.4110 13.26
材积杂种优势 y=13.642+520.478x 0.4087 13.13
3 讨论
科研工作者在利用杂种优势的同时,从未间断
对杂种优势机理的研究,其中如何评价或预测获得
所配组合的杂种优势已成为育种学家普遍关心的热
点问题。杂种优势预测从早期的数量性状遗传差异
预测、生化标记预测发展到现在的分子标记预测,人
141
林 业 科 学 研 究 第25卷
们开展了大量研究,特别是随着分子标记的发明和
发展,为通过遗传距离预测杂种优势提供可能。研
究表明:杂种优势的大小主要取决于双亲的遗传差
异和性状互补(一定范围内),差异越大杂种优势愈
明显,但大量研究表明,利用 DNA分子标记遗传距
离预测杂种优势结论并不一致。有研究表明:亲本
间遗传距离(或一定的范围内)与杂种优势间存在
一定的相关关系,如 Baril等[15]在桉树杂种优势研
究中发现,亲本间遗传距离处于中等水平时,杂交才
表现为正向优势;李周岐等[16]利用 RAPD标记对鹅
掌揪属种间杂种优势的研究结果表明,亲本遗传距
离与子代苗高和地径均表现为二次曲线相关;Reif
等[17]利用SSR标记进行了亚热带玉米的杂种优势
与遗传距离的有关分析,结果表明 SSR标记可以有
效的预测杂种优势,且实验操作方法简便;但有的学
者也得出亲本间遗传距离与杂种优势不相关,不能
预测杂种优势的结论,在对珍珠粟(Pennisetumamer
icarum(L.)Leeke)的研究表明,RAPD虽然可以用
于育种群体划分,但不能预测杂种优势[18];王晓
阳[19]在利用SSR标记探测鹅掌楸杂种优势的研究
发现,杂种子代苗期生长的杂种优势表现与亲本遗
传距离及子代杂合度之间相关系数均不显著,表明
亲本遗传距离和杂交子代杂合度并非鹅掌楸杂种优
势形成的主要原因。Lanza等[20]利用 RAPD标记研
究玉米亲本遗传距离与杂种生长表现及杂种优势关
系发现,二者之间无相关关系。Riday等[21]对苜蓿
的研究同样发现,所用标记的遗传距离与杂种优势
不仅不相关,而且也没有正确的划分基因型。研究
表明:出现以上结论不一致的原因可能与材料的选
择[11]、材料的来源[22]、亲本的数量、材料亲缘关系
的远近[23]、标记种类[24]、标记数量[10]、标记是否与
性状连锁[23,25,4]、性状及杂交组合不同[19]等有关,这
些因素都会影响杂种优势预测的准确性。另外,除
了影响遗传距离本身的因素外,与杂种优势的形成
机制和基因表达等也存在重要关系。
本试验采用14对SSR引物对杂种F1的亲本进
行多态性扩增,结果表明:SSR遗传距离(0.3370
0.6122)与 F1湿加松树高、胸径、材积的杂种优势
表现为显著或极显著线性正相关,表明随着亲本遗
传距离的增大,子代各生长性状的杂种优势呈线性
增加,结果与玉米[17、26]、水稻[27]、油菜[24]、桉树[15]、
马尾松[10]、杨树[11]等的研究有类似之处。亲本间
的亲缘关系可能影响杂交亲合性,亲缘关系越远,遗
传距离越大,亲和性可能越小,但杂种优势可能越
大。本课题组长期观察发现,在台山红岭湿地松改
良种子园内,湿地松无性系种内自由授粉或种内控
制异交授粉的平均单果有效种子数为20 50粒,
湿地松×洪都拉斯加勒比松(PEE×PCH)杂交组合
的平均单果有效种子数大约为10粒,虽然种间杂交
种子产量相对较低,但杂种优势也相对较大,这种现
象可能与亲本间遗传距离有关,遗传距离、亲和性、
杂种优势之间的关系复杂,需要更多更深入的研究。
本试验所用的标记只有14个,相对于松树全基因组
来说相当有限,可能对遗传距离的准确预测有一定
影响,因此,今后应加大标记的数量,以增强遗传距
离预测的准确性。另外,本研究只是对少数亲本正
向优势组合主要生长性状的杂种优势与亲本间遗传
距离进行了研究,而杂种的选育应重视多性状的综
合改良,在今后研究中应加入材性、松脂产量等重要
性状,对所配置的多个组合进行分析,从而选择综合
性状优良的亲本,组配强优势组合。
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