全 文 ：林业科学研究　2009, 22 (5) : 744～746
Forest R esearch
　　文章编号 : 100121498 (2009) 0520744203
杜仲种仁桃叶珊瑚苷含量的测定及积累规律
杜红岩 1 , 李 　钦 2 , 李福海 1 , 孙彦超 2 , 杜兰英 1
(1. 中国林业科学研究院经济林研究开发中心 ,河南 郑州　450003; 2. 河南大学中药研究所 , 河南 开封　475004)
关键词 :杜仲种仁 ;桃叶珊瑚苷 ;含量测定 ;积累规律
中图分类号 : S759. 3 文献标识码 : A
收稿日期 : 2008212204
基金项目 : 国家“十一五”科技支撑计划 (2006BAD18B03) ;国家 948项目 (2008 - 4 - 66) ;河南省教育厅自然科学基金 (2008A360003)
作者简介 : 杜红岩 (1963—) ,男 ,河南中牟人 ,研究员 ,博士 ,博士生导师。主要从事杜仲培育技术与综合利用的研究.
D eterm ina tion, Forma tion and Accum ula tion of
Aucub in in Eucomm ia u lm oides Seeds
DU Hong2yan1 , L I Q in2 , L I Fu2hai1 , SUN Yan2chao2 , DU Lan2ying1
(1. Non2Timber Forestry Research and Development Center, CAF, Zhengzhou　450003, He’nan China;
2. Institute of Chinese Materia Medica, Hepinan University, Kaifeng　475004, He’nan China)
Abstract: To establish a HPLC method to determ ine the content of aucubin in Eucomm ia u lm oides seeds, to search
for the formation and accumulation of aucubin in Eucomm ia u lm oides seeds, and to p rovide foundation for the
suitable harvest season of aucubin in Eucomm ia u lm oides seeds, the Hypersil GLOD2C18 column ( 250 mm ×4. 6
mm, 5μm) with temperature at 25 ℃was used. The mobile phase was methanol2water (8∶92) , at a flow rate of 1. 0
mL·m in - 1 , and the detective wavelength was 206 nm. The results indicated that the method of HPLC was efficient
, and the average recovery of the aucubin in Eucomm ia u lm oides seeds was 98. 61% , RSD = 1. 14% ( n = 6). The
determ ination of aucubin was gradually raised with the seed growth , while the formation and accumulation from June
25 th to Sep tember 5 th increased slowly, and the determ ination of aucubin from Sep tember 5 th to 25 th raised
quickily, and then kep t relatively stable. Considering the extraction and utilization of aucubin, the date from
Sep tember 25 th to October 25 th was the most suitable period for collecting Eucomm ia u lm oides seeds.
Key words: seed of Eucomm ia u lm oides; aucubin; determ ination; formation and accumulation
　　杜仲 ( Eucomm ia u lm oides O liv. )是我国特有的
名贵经济树种 ,杜仲皮、叶、果实、雄花等都是我国十
分珍贵的药用、工业原料和新材料资源 ,具有很高的
经济价值 [ 1 - 3 ]。杜仲果实包括杜仲果皮和种仁 ,果
皮中富含杜仲胶和多糖等 ,对杜仲果皮内杜仲胶的
形成积累规律及其群体变异规律、个体变异规律均
已进行了系统研究 [ 4 - 8 ]。而杜仲种仁中富含油脂、
蛋白 [ 9 ]、亚麻酸和多种生物活性物质。杜仲桃叶珊
瑚苷 (AU)是杜仲种仁中含量最高的一种环烯醚萜
类活性成分 ,具有护肝解毒 [ 10 ]、抗炎 [ 11 ]、抗氧化及
延缓衰老 [ 12 ]、抗骨质疏松 [ 13 ]、神经营养 [ 14 ]等药理活
性。在所有植物中 ,杜仲种仁中桃叶珊瑚苷含量最
高 ,达 8% ～11% [ 1, 15 ]。桃叶珊瑚苷还存在于山茱萸
科 ( Cornaceae ) 和车前草属 ( Plan tago L. ) 植物
中 [ 15 ] ,但对植物中桃叶珊瑚苷积累规律鲜有报道 ,
仅有杜仲雄花桃叶珊瑚苷积累的初步研究 [ 16 ] ,随着
雄花的开放 ,桃叶珊瑚苷含量呈逐步降低的趋势 ;而
对杜仲种仁中桃叶珊瑚苷的形成积累规律尚未见报
道。本文拟建立杜仲种仁中桃叶珊瑚苷的 HPLC测
定方法 ,同时测定不同采收期的杜仲种仁中桃叶珊
第 5期 杜红岩等 :杜仲种仁桃叶珊瑚苷含量的测定及积累规律
瑚苷的含量 ,为杜仲种仁中桃叶珊瑚苷的有效利用
和确定果实的适宜采收期提供参考依据。
1　试验材料
1. 1　仪器
LC22010A型高效液相色谱仪 (日本岛津 ) ,紫外
检测器 (日本岛津 ) , CLASS2VP色谱工作站 (日本岛
津 ) , AG135电子天平 (METILER TOLEDO, 精确至
十万分之一 ) ; KQ5200DA型数控超声波清洗机 (江
苏省昆山市超生仪器有限公司 )。
1. 2　试药
桃叶珊瑚苷对照品 (日本和光纯药业株式会社提
供 ,供含量测定用 ) ;甲醇为色谱纯 (天津四友精细化工
试剂厂 ) ,水为重蒸水 ;其余所用试剂均为分析纯。
1. 3　果实 (种仁 )样品采集
杜仲种仁均采自中国林业科学研究院经济林研
究开发中心商丘梁园区国有林场杜仲研究基地 ,采集
的果实均来自同一杜仲良种 (华仲 6号 ) ,选择典型样
株 6株 , 2007年 6月 5日—2007年 10月 25日每 10
天采集杜仲果实 1次 ,共采样 15次 ,每次选择树冠中
部外围结果枝随机采集杜仲果实各 100 g,采集后至
室内干燥处自然风干 ,然后剥取杜仲种仁备用。
2　试验方法
2. 1　色谱条件
Hypersil GLOD2C18色谱柱 (250 mm ×4. 6 mm, 5
μm ) (美瑞泰克科技有限公司 ) ;保护柱 : JadeGuard
(大连依利特分析仪器有限公司 ) ;流动相为甲醇 -
水 (8∶92) ;柱温为 25 ℃;检测波长为 206 nm;流速
为 1. 0 mL·m in - 1 ;进样量 : 5μL。
2. 2　对照品溶液的制备
精密称取桃叶珊瑚苷对照品 5. 35 mg置 10 mL
的量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备
杜仲种仁研细 ,取约 0. 2 g,精密称定 ,置具塞锥
形瓶中 ,精密加入甲醇溶液 25 mL,称定质量 ,超声
处理 1. 5 h,放冷至室温 ,再称定质量 ,用甲醇补足减
失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,再经 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,
取续滤液 ,即得。
3　结果与分析
3. 1　线性关系考察
分别精密吸取桃叶珊瑚苷对照品溶液 ( 0. 535
mg·mL - 1 ) 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16μL注入色谱仪
中 ,以吸收峰峰面积为纵坐标 ,进样量 (μg)为横坐
标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为 y = 1 180 604. 99x
+ 83 644. 77, r = 0. 999 9, 线性范围为 0. 535
～8. 56μg。
3. 2　精密度和稳定性
精密吸取对照品溶液 5μL,照上述色谱条件 ,
重复进样 6次 ,测定桃叶珊瑚苷峰面积 ,结果 RSD
(相对标准偏差 )为 1. 17%。
精密称取杜仲种仁适量 (批号 : 070925) ,照 2. 3
项下的方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件 ,分别
于 0, 2, 4, 6, 8 h,进样 5μL,测定 ,桃叶珊瑚苷峰面积
积分值 RSD为 1. 63% ,说明供试品溶液中桃叶珊
瑚苷 8 h内稳定。
3. 3　重复性和加样回收率
精密称取已测含量的杜仲种仁 (批号 : 070925)
适量 , 6份 ,按 2. 3项下的方法制备供试品溶液 ,照
上述色谱条件测定 ,按桃叶珊瑚苷的含量计算 RSD
为 0. 94% ,表明重复性良好。
精密称取已知含量的杜仲种仁 (批号 : 070925)
适量 , 6份 ,分别加入一定量的对照品溶液 ,按 2. 3
项下的方法制备供试品溶液 ,照上述色谱条件测定 ,
计算桃叶珊瑚苷平均加样回收率为 98. 61% , RSD
为 1. 14%。
3. 4　种仁中桃叶珊瑚苷的含量测定及其积累规律
分别精取各样品溶液 5μL,按 2. 1色谱条件测
定 ,以外标法按峰面积计算样品的含量 ,实验重复 3
次 ,取其平均值。结果见图 1、图 2和表 1。测定结
果表明 ,杜仲种仁中桃叶珊瑚苷含量随着果实的生
长不断发生变化。由表 1可以看出 ,从 6月 25日开
始 ,杜仲种仁中桃叶珊瑚苷含量总体呈逐步增加的
趋势 ,而从 9月 15日 —9月 25日有一个快速增长的
过程 ,桃叶珊瑚苷含量从 87. 0 mg·g- 1迅速提高到
表 1　不同采收期杜仲种仁桃叶珊瑚苷含量
采收期 种仁千粒质量 / g 桃叶珊瑚苷含量 / (mg·g - 1 )
2007 - 06 - 25 4. 86 62. 3
2007 - 07 - 05 6. 52 81. 7
2007 - 07 - 15 9. 29 83. 5
2007 - 07 - 25 11. 37 73. 6
2007 - 08 - 05 14. 01 85. 9
2007 - 08 - 15 14. 95 79. 5
2007 - 08 - 25 16. 52 84. 8
2007 - 09 - 05 19. 07 84. 4
2007 - 09 - 15 21. 23 87. 0
2007 - 09 - 25 23. 75 113. 0
2007 - 10 - 05 24. 65 109. 4
2007 - 10 - 15 23. 29 111. 2
2007 - 10 - 25 24. 52 113. 1
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林 　业 　科 　学 　研 　究 第 22卷
113. 0 mg·g- 1 , 9月 25日 —10月 25日桃叶珊瑚苷
含量基本趋于稳定。而从杜仲种仁生长发育规律来
看 (表 1) ,种仁千粒质量随果实的生长稳步提高 , 9
月 25日以后种仁千粒质量达到高峰并基本保持稳
定 ,这与“杜仲种子的生长进入 9月中旬以后 ,果实
千粒质量变化不大 ,果实 (种仁 )生长基本结束 [ 4 ] ”
的结论一致。从提取和利用桃叶珊瑚苷的角度考
虑 ,从 9月 25日开始就可以采集杜仲的果实。
图 1　桃叶珊瑚苷对照品溶液 HPLC图
图 2　杜仲种仁供试品溶液 HPLC图
4　小结与讨论
本文建立的杜仲种仁中桃叶珊瑚苷的 HPLC测
定分析方法可行 ,供试品溶液中桃叶珊瑚苷可达到
理想的分离。
杜仲种仁是杜仲中桃叶珊瑚苷含量最高的器官
(部位 ) ,本研究测定的成熟杜仲种仁桃叶珊瑚苷含
量高达 11%以上 ,具有较大的开发潜力和良好的应
用前景 [ 1, 9, 15 ]。实验结果显示 ,不同采收期的杜仲种
仁桃叶珊瑚苷的含量有明显差异。杜仲种仁中桃叶
珊瑚苷的含量从 9月 25日 —10月 25日均保持较高
的水平。根据杜仲果实和种仁的生长发育情况 ,在
9月中旬以后果实和种仁基本停止生长 ,产果量和
种仁产量达到高峰并保持稳定 [ 4 ]。从提取和利用桃
叶珊瑚苷的角度考虑 , 9月 25日 —10月 25日为采
集杜仲果实的适宜时期 ,这与实际生产中杜仲种子
的采收期吻合 [ 1 ]。
在河南商丘 ,杜仲果实中胚的形成从 6月 5日
以后开始 ,胚形成之初生长速度较慢 , 6月 5日和 6
月 15日所采集的杜仲果实风干后没有能够取到种
仁样品。因此 ,种仁样品中桃叶珊瑚苷的含量从 6
月 25日开始测定。
桃叶珊瑚苷含量的变化是由桃叶珊瑚苷的特殊
结构所决定的 ,易被氧化分解 ,与光照、温度等因素
的相关性 ,有待进一步研究。
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