全 文 ：第 2 卷 第 3 期
1 9 8 9 年 6 月
林业科学研究
FO R E S T R E S E A R C H
Vo l.
JU n
2
,
N o
。
3
。 一 1 9 8 9
杨尺蟆核型多角体病毒理化特性研究
及其在病毒杀虫剂研制中的应用 ‘
于 在 林
(中国林业科学研究院林业研究所 )
摘要 本文系统地综述了作者对杨尺镬核型 多角体病毒A ci N PV 进行理化特性
研究和将其应用于A ci N PV 杀 虫剂研制中的结果。 通过对A ci N PV 进行分离提纯 , 血
清学特性 , 蛋白质结构组成和病毒基 因组研 完 , 获得 了大量的理化特性详细货料 。
文中还就昆虫病寻的同源性关 系, 感染病毒后 的早期检测 , 以及对在我国发展足虫
病毒杀出剂需要解决的 问题 , 提出 了理论依据和实用有效的检刚技术等。
关键词 杨尺坡; 核型多角体病毒, 病毒杀 虫剂
杨尺镬 (A p o c入e葱m a e玄n e, a“。s)广泛分布于我国北方十余个省区 。 是“三北”防护林及用材
林的主要害虫之一。 年发生面积达 6 0 多万亩 , 常爆发成灾 , 严 重危害后可造成树木成片死
亡 。 每年大量使用农药 , 不仅使杨尺蟆产生了抗药性 , 而且严重污染了环境 , 破坏了生态平
衡。 为从根本上解决这一问题 , 对由河北省坝上地区分离到的杨尺蟆核型多角体病毒 (以下简
称A ci N PV )进行了应用研究 [’] 。 A ci N PV 在病毒分类中属杆状病毒科A 亚组 。对 A ci N PV 的
理化特性研究在国内外尚未见报道 。 现系统地综合报道1 9 8 2一19 87 年对 A c iN PV 的分 离 纯
化 , 血清学特性 , 蛋白质和基因组特性的研究结果 [“ 一“J , 并着重于将这些特性应用于生产防
治 , 解决理论上和应用中的实际间题。 作者首先应用了限制性内切酶分析技术 , 使A ci N P V
杀虫剂在全国 9 省市推广应用 g 万余亩 , 取得了1 4 6 6万元的经济效益和明显的社会生态效益 。
本文还报道了对25 株昆虫病毒快速鉴别方法 , 以及限制性内切酶分析 , 分子杂交和血清学技
术用于病毒间同源性检测的结果 。
一 、 材料与方法
(一 ) 毒株及试验来源
本项研究以A ci NPV 为主体。 同时与24 株森林害虫病毒分离株的理化特性进行比较和同
源性测定 。 病毒名称及来源参见表 l 。 生物试剂 、 D N A 和蛋 白质的标准分子量为进口试剂 ,
部分内切酶为中国科学院生产 , SD S 为本室重结晶 , 化学试剂均为分析纯。
(二 ) A eiN P V 理化特性研究
1
。 多角体 、 病毒粒子及核衣壳的纯化 A e iN PV 属 包涵体病毒 , 纯化采用作者建立的
方法[z1 。 病毒粒子从纯化的多角体中分离, 核衣壳则从纯化的病毒粒子中分离获得[z, 7 1。
2
。 多角体N 一P蛋白及 A 、 B 蛋 白分离 多角体蛋白按两种方法制备 : 硫酸钱盐析法[aj ,
本文于1 9 8 8年 1 1月 1 日收到。
· 王贵成 、 吴燕等参加部 分工作 .
2 6 2 林 业 科 学 研 究 2 卷
裹 1 用于同源性比较的林业昆虫病毒¹
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辽
7 、 8
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16
、
17
美国白蛾 ( H , p 人a o tr ‘a e “” e a )
杨 尺 饭 ( A 尸o e he i沉a e f” 口r a r i “s )
枣 尺 级 ( S u c r a z o ju b a )
木撩尺嫂 ( C “le o la 尸a o t e r ‘a ‘“ : )
油松毛虫 ( D 。。d r o l‘二 。5 t a b“ I。。 f o r 二 , : )
马尾松毛虫 ( D e o d r o l; m “s 尸 u , e t a t“ ‘)
扁 刺 蛾 ( T ho s e a : i o e ”5 15 )
揭边绿刺蛾( T ho : e a b a ‘b a : a ” e e )
双齿绿刺蛾( L a t o i a h‘la r a t )
杨 毒 蚁 s a lf c ‘s )
1I e N P V
\c iN P V
s jN PV
C PN P V
D t e P、r
D PC PV
T s N P V
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L h N P V
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柳 毒 蛾
L e “c o m a
L e u e o 爪 a c a ,: d ‘d a ) I e N P V
舞 毒 蛾
杨扇舟蛾
( L , m a ,l t r ia d ‘s 尸a r )
L d N P V
L d C P V
( M e la lo 夕ha a o a e ho r e t。 ) 加I a a G V
分月扇舟峨( M e la lo p 人a a o a s t o 沉。: ‘: )
M N P V
S N P V
S N P V
S N P V
(二P V
C P V
M N P V
M N P V
M N P V
G V
M N P、尸
M N PV + C P V
M N P V
M N P V
M N PV
C PV
G V
G V
G V
河北 、新扭 、 交叉感染
( 内象 )
山东 、 交叉感染 ( 天 津 )
山东 、 河 南
北 京
浙 江
北 京北 京 一
北京 、 交又感染( 北京 )
北 京
北京 、 交叉感染( 北京 列
北 京
交 叉感染 (北京 )
新 .
北 京
北 京
北 京
交叉感染( 北京 )
贵 州 卜l a G V
、1le
产、/J了,19820345
¹ 部分 病毒 由严静君 、 何 介田 、 陈 吕沽 、 王贵成 、 张 兆 义 、 袁长林惠 , .
分离获得的多角体蛋 白为 N 一P 蛋 白, 等电点分离法 〔. ’, 从多角体中分离 A 、 B 蛋 白。 如先将
A ci N PV 70 ℃水溶30 m in , 再行分离制备的多角体蛋白 , 分别为灭活酶N 一P蛋白和 A 、 B蛋白。
3
.
D N A 的分离纯化 采用 SD S一苯酚法分离D N A 【. ] 。
4 。 柱层析和超 离心 沉降 系数 测 定 对经不同方法分离的病毒 粒子和核衣壳 、 D N A 及多
角体 N 一P , A 、 B 蛋 白等分别用 se p har os e ZB和 6 B 装柱进一步纯化或分析其柱层析行为 。
对溶于蒸馏水中的病毒粒子 , 分别溶于T E 和 1 x S SC中的 D N A , 以及溶于微碱蒸馏水中的
A
、
B 蛋 白 , 在 日立分析型超离心机上分析它们的沉降系数 (S2 0 w ) 。 D N A 应用紫外吸收光
学系统记录溶液的微分和积分变化曲线。 其余用 可见光系统 。
5 。 D N A 含量 、 D N A 热容曲 线 以 及 多角体蛋 白的氛基酸组成分析 用二苯胺改良法测
定多角体中D N A 的含量 , R N A 存在与否 , 用地衣酚显色法进行 。 纯化的D N A i容于0 . l x S SC
中 , 在美国PE R K IN 一E LM E R LA M B D A 7 紫外分光光度计上测定其热溶曲线 , 并示}‘算其
( G + c) %含量及增色效应 。 用氨基酸自动分析仪测定病害各组合中氨基酸组成及含量 ( % ) 。
6 . A ci N PV 的抗血清制 备及 充疲学分析 分别制备了 A ci N PV 各组分的免抗血清 , 兑
疫总量和效价分别为 : ¹ 多角体碱解液 180 m g , 效价 1 : 1 6 0 。; º 多角体蛋 白 20 m g , 效价
1 : 1 6 。。; » 病毒粒子17 0 m g , 效价 1 : 3 20 0 。 检测用抗血清做 l : 4 稀释 。 免疫学分析方法
为琼脂糖双扩散 , 胶 内吸收实验 , 微量免疫电泳和对流免疫电泳。
7 。 S D S一聚丙烯跳胺凝胶 电泳 ( SD S一PA G E )及 琼脂糖凝胶 电泳分析 蛋 白质分析采用
连续和不连续系统的 SD S一PA G E 垂直板状电泳装置分析 , D N A 采用0 . 6一 1 %琼脂糖凝胶
平板电泳分析 。
8
. 电镜现察 采用本实验室常规方法进行 〔“, “, ‘“ J。
3 期 于在林 : 杨尺蟆核型多角体病毒理化特性研究及其在病毒杀虫剂⋯ ⋯ 2 63
9
.
D N A 限制性内切酶分析 D N A 溶于酶反应液中 , 加入 5 一10 卜酶 解2 。 s h , 65 ℃ ,
5 m in 灭活酶后冰浴至电泳 。 双酶切则是先用一种酶反应后 , 加热灭活酶 , 再加入第二种酶
作用 。 以 卜D N A 做平行酶切。
(三) 病毒理化特性在病毒杀虫荆研制中的应用
1
. 对 13 株屁虫病毒及交又感染后的有检昆虫 的血清学技术监测 13 株林业昆虫 病 毒见
表 1 及参考文献 〔3习。家蚕、 蜜蜂取食A ci N PV 后 , 取幼虫组织抽提液为待检抗原 。
2
. 对 3 龄幼虫 感染A ci N PV 后的早期检测 以每毫升2 . 5 x 1 0e 多角体 (林间防治使用浓
度)感染杨尺镬 3 龄幼虫 , 12 h 后开始取样 , 随后每隔12 h 取样一次 , 每次20 头 , 幼虫加 10
一2。闪碱解液研磨后直接检测 。
3
.
25 株足虫包涵体病毒的 SD S一PA G E 多肤 图谱 比较 为快速鉴别昆虫病毒为目的 , 选
用比较不同包涵体病毒的结构多肤 SD S PA G E 图谱方法 (制样方法另文报道 ) 。
4
. 限制性内切酶分析及 D N A 分子杂交技术用于病毒的同源性鉴别 A ci NPV 交叉感染
枣尺镬后 , 从中分离出一株 N PV , 这株NPV 与 A ci N PV 之间的关系如何 ? 用限制性内切酶
分析两者的酶切图谱 , 比较两者的同源性 。 采用D N A 一D N A 分子杂交技术 , 用缺口平移法 ,
分别制作了美国白蛾N PV 和A ci NPV 一D N A 的分子探针 , 测定两者之间的同源性 。
5
. 对 A ci N PV 杀虫剂 在连续传递 复制中遗传 变异的检测 从 1 9 8 1一1 9 8 5年连续用 限制
性内切酶对A ci N PV 的基因组进行分析。 1 9 8 1一1 9 8 2年为 一 20 ℃保存材料 , 1 9 8 3年起每年进
行同步检测 。
二 、 结 果
(一 ) A c iN P V 理化特性研究
1
。
Ac iN PV 各组分的分 离提纯 为Ac iN PV 建立的包涵体病毒提纯方法十分有效 , 已扩
大应用于其它类型的包涵体纯化 [z1 。 分离的多角体 N 一P 蛋白和 A 、 B 蛋白、 D N A 、 病毒粒
子、 核衣壳和多角体碱解液均应用柱层析进行再次纯化及特性分析 。 纯化的病毒粒子、 核衣
壳和 D N A 的 se p ha ro se ZB 柱层析均为单一洗脱峰并且典型的紫外 吸收 光谱伪 “J。 多角体
N一P 蛋白和 A 、 B 蛋 白经过se pha rO 8e 6B柱层析后 , 表现不同 。 N 一P蛋白为 3 个峰 , A 、 B
蛋 白为 1 个峰 , A + B 蛋白合并洗脱为 2 个峰 , 且B 蛋白在前峰 , A 蛋白在后峰 [’] 。
超离心沉降分析表明 : 病毒粒子 S 20 w = 7 0 5 , A 、 B 蛋 白 S20 w 分别为4 . 9和8 . 价 D N A
SZ ow = 1 3
.
7 , 浓度变化范围均不大 [” 弓, 。J。
2
.
D N A 含量 、 D N A 热溶曲线 以及蛋白质氛基酸组成分析 经二苯胺显色 法 测 定 A ci
N PV 多角体中D N A 含量为 6 “g / m g 。不含R N A 。 溶于0 。 1 x S CC中的A ci NPV 一D N A 呈典型
的双链核酸热熔曲线 Ia] 。 D N A 的 T 二值约为 7 0 . 2 ℃ , A 幼 。下的增色效 应 约为 36 % 。 根据
Ma n d e l等公式[川 计算 (G + C ) % = (T 二 一 5 3 . 9 ) x 2 4 4 , 则 A e iN PV 二D N A 的 (G + C )% =
3 9
。
8 %
, 与其它昆虫杆状病毒D N A 的G C 比相近 。
对完整多角体和多角体A 蛋白的氨基酸组成测定表明A ci N PV 中富含天 门冬氨酸 、 谷氨
酸。 完整多角体中富含酪氨酸 , 而 A 蛋 白中则富含亮氨酸。 测定中还注意到两者的氨酸均为
痕量 , 而完全不含脱氨酸[z, 络] 。
3
.
A ci N PV 杭 血清制备及免疚学分析 所制备的三种抗血清 , 多角体碱解 液 , 多角体
2 6 4 林 业 科 学 研 究 2 卷
蛋 白和病毒粒子抗血清效价较高 , 均不与健康幼虫虫体蛋 白及血淋巴有免疫学反应 。 表明抗
血清可直接用于病毒的检测 。 但三种抗血与各抗原之间均有交叉 反 应 。 经胶内吸 收 实验证
明 , 病毒粒子和多角体蛋白之间具有不同的抗原决定簇 。 微量免疫电泳证明 , 病毒粒子抗血
清与多角体碱解液可形成三条沉淀带。 与多角体蛋白形成一条沉淀带。 新鲜制备的病毒粒子
不能泳动入凝胶内 , 在原点与抗血清形成沉淀环 [ 3 ]。
以 N 一P 蛋 白抗血清与 A 、 B 蛋 白和 N 一P 蛋 白做免疫双扩散实验 , 表明A 、 B 蛋白仅与
N 一P 蛋白抗血清形成一条沉淀带 , 且两者溶合。 观察可见 A 蛋 白扩散近抗血清孔 (表明分 子
量小 , 扩散快) , B 蛋 白则靠近抗原孔 (扩散慢 , 分子大 )[ ‘〕。
4
.
A ci N PV 一D N A 电 镜观察和 内切酶分析 A ci N PV 核衣壳经低浓度尿素处理后 , 用
细胞色素C 展层后 , 可见核衣壳膨胀近一倍 , 从一端释放出核酸来 , :也有从核衣壳中间释放
D NA 的现象[.j 。 纯化的 D N A 充分展层后 , 看到环状和线状分子。 环状 D N A 分子 周 长 约
2 7
。
3 8 “m 。 根据此按公式 M = 1 。 9 7L计算A e iN PV 一D N A 分子量约为 5 3 . 9 4 沐 1 0 O d a l。
选用 7 种限制性内切 酶 Ps t l 、 Pv u 五 、 Sa l工 、 E c o R I 、 B g l l 、 X h o 工、 B g ll 分别l
酶切 D N A 产生 4 、 6 、 2 2 、 2 0 、 1 1 、 5 、 7 个片段数 。 B g l l 和 E e o R I 双酶解得到 D N A
片段为26 个。 在某些单酶解图谱中出现了“亚分子片段” [。1。 对E co R I 酶切D N A 的各片段的
分子量进行积加 , 总分子量为56 . 5 x lo . d al 。 相当于8 5 . 7OK bp , 这一结 果与电镜观察一致。
5
。
A ci N PV 蛋 白质特性 对A ci N PV 各组分的结构多肤SD S 一PA G E 分析表明 , 连续和
不连续系统的SD S一PA G E 所得结果一致。 A 、 B 蛋 白和 N一 P蛋 白多肤 图谱一致。 N 一P 蛋白
经柱层析纯化后为一条主带 (3 . 2 x l。名d al )。 多角体蛋 白共有 6 个结 构 多肤 , 病毒粒子和核
衣壳则分别有19 和 7 个结构多肤 , 它们的分子量及SD S一PA G E 图谱见参考文献〔4〕。
70 ℃灭活酶后分离得到的多角体蛋白 , 多了一个7 . 0 火 10’ d al 的肤段 , 而少了一个1 。 25
x 1 0’ 的多肤 。 这表明 A ci N PV 有碱性蛋白酶活性存在 , 对这种酶的研究 、 开发利用需要做
进一步工作。
(二 ) 病 . 理化特性在病毒莱虫荆研制中的应用
1
.
A ci N P V 与 1 3 株 是虫 病毒分 离株 间的血清学关 系 测定了 1 3 株 林 业 昆 虫病毒与
A ci N PV 之间的血清学关系 , 结果表明 : 三株 CPV 和两株G V 都不与 A ci N PV 抗血清起免疫
学反应 , 表明它们之间无血清学关系 。 但不同的 N PV 与 A ci N PV 之间的关系较为复杂 。 舞
毒蛾N PV 、 英国白蛾 N PV 、 双齿绿刺蛾N PV 与A e iN PV 无交叉反 J花。 而木撩尺镬 N P V (河
南株和山东株 ) 、 枣尺蟒N PV (山东株和天津株)及杨毒蛾 N PV 与 A ci N PV 抗血清有交叉反
应 , 均形成一条沉淀带。 这些 N PV 在形态上似乎与 A ci N P V 略有差 异 (待发表) , 但从沉淀
效价上它们可与A ci N PV 相区别〔3 ] 。
2
. 杨尺 ,丈3 龄 幼虫感染 A ci N P V 的早期检刚 为进行病毒的形成机理 、 环境监测及林
间病毒流行病学调查等项研究做准备 , 进行的早期检测研究表明 , A ci N PV 的最早检出时间
在3 6 h [ 3 1。
3
.
25 株昆虫 包涵体病毒的 SD S一PA G E 多肤 图语比较 首先分析了16 株昆虫病毒 ( 3 株
CPV
、
3 株G V 和 10 株N P V )以及不同地分离株和交叉感染 后获得的 9 株病毒的 SD S一PA G E
多肤图谱 , 比较结果清楚”。 采用我们的制样程序 , 可从蛋白质结构多肤角 度 为 每 种病毒建
I) 于在林 , 2 9忿. , 2 5株昆虫病 毒S D S 一 PA G E 多肤图潜比较 (子寺发 表 )。
3 期 于在林 : 杨尺蟆核型多角体病毒理化特性研究及其在病毒杀虫剂⋯ ⋯ 2 6弓
立一种标准多肤电泳图谱。 将其贮存于计算机中与未知样名的图谱比较来确定同源性 。 本文
仅讨论用这种方法区别A ci N PV 交叉感染非靶昆虫后所分离的病毒同源性比较 。 Ac iN PV 感
染杨扇舟蛾后 , 幼 虫死于 G V 。 S D S一PA G E 分析表明这株 G V 与原病毒株 杨扇舟蛾 G V 一
致 , 而与A ci N PV 的不同。 A ci N PV 感染枣尺蟆后分离的N PV 其图谱与 A ci N PV 不同 , 而
与枣尺蟆N PV 山东株无明显差异 。 这一结果得到内切酶分析证明。 木撩尺蟆 N PV 山东株与
河南株无差异 。 同一科昆虫不同种 , 得到的 SD S一PA G E 图谱也不同 , 但在主要多肤分布上
有些特点可以寻找出来。 详细分析将另文报道。 采用铬银染色技术 , 更大幅度地提高了灵敏
度 , 使样品用量更少。 一滴样品即可进行 SD 导PA G E 分析 , 设备简单 , 因此这一方法极具
推广价值。
4
。 限制性内切酶分析及D N A 分子杂 交技术用于病毒的鉴别 A ci N PV 攻毒枣尺镬后 ,
由感病枣尺镬虫体内分离获得一株N PV , 在形态上与A ci N PV 略有不同。 在 SD S一PA G E 多
肤图谱上主带相似 , 次带略有不同。 进一步分离 D N A , 应用限制性内切酶 B gl 亚酶切后 , 在
琼脂糖凝胶电泳图谱上明显可见两者的差异 。 片段数目相同而各片段迁移率不同 [“〕。 由此肯
定其与A ci N PV 不同源 。
对美国白蛾 N PV 与 A ci N PV 之间的同源性测定 , 除了血清学技术 , 蛋 白质多肤比较 ,
限制性内切酶 分 析 D N A 外 , 还采用了更为高级和灵敏的技术 。 分别应 用 缺 口平移法制备
A ci N PV 二D N A 分子探针和美国白蛾 N PV 一D N A 分子探针 2 )。 经分子杂交试验表明各 D N A
分子探针仅与同源 D N A 杂交 。从而证实了限制性内切酶电泳图谱的不同是其同源性的不同。
5
. 对 A ci N PV 杀虫 剂在连续传递复制中 , 遗传变异 的控制技术 从 1 9 8 1一1 9 8 5年 , 连
续将A ci N PV 用于林区生产性防治杨尺蝮 , 同时回收病毒死虫制成杀虫剂用于次年的防治 ,
由此产生了明显的经济效益。 然而病毒是否会在连续传递复制中发生变异 ? 如何检测 ? 也就
成了能否使用这种方法生产病毒杀虫剂的关键 , 因为发生变异后 就 会 影 响到病毒的杀虫毒
力、 宿主范围、 安全性等重大因素。 我们建立了从病毒基因组的限制性内切酶图谱上比较 ,
来检测可能发生的变异 。 连续s a 应用EC o R 工酶切电泳比较结果表明 , 未见明显改变 。 从而
决定了可以回收生产性防治后的病死虫加工生产病毒制剂 。
三 、 讨 论
昆虫病毒尤其是杆状病毒 (N PV 和 G V )在害虫的生物防治中起着重要的作用。 从最新统
计资料来看 , 全世界至少 已从 1 2 0 余种昆虫、 蟀蜗类中发现有 1 8 0 0余种病毒病 3) 。有许多病
毒在理论上和实践中都有可能被开发为病毒杀虫剂。可实际发展到制剂水平的病毒寥寥无几 。
这固然是受多种因素制约 , 但主要是缺乏病毒制剂注册登记所需的完整评价程序 , 在我国尤
其如此。
作者设想[ej 就我国实际情况出发 , 建立一套完整可行的注册登记指标 , 以此使病毒杀虫
剂的开发得以遵循 , 这是首要的任务和前提条件。 作者提出这些指标可归纳为三大项 : 病毒
的鉴别指标 ; 病毒的安全性试验指标以及病毒制剂质量检测指标。 在本文仅结合A ci N PV 理
化特性探讨第一项指标 , 其它见作者另文〔“J。
2 》于在林 , 19 8 8 , 美国自峨N P V 与杨尺级N PV 的D N A 分子杂交研 究(待发表 ).
3 ) 于在林 、 蔡秀玉 , 19 8 , 尾虫病毒病名录 , 中国林业出版社(印刷 中 )o
2 6 6 林 业 科 学 研 究 2 卷
对 A ci N PV 各组分理化特性研究的结果已分别在各篇论文中详细讨论 t‘一。J。在此重点讨
论A ci N PV 杀虫剂研制中是如何应用这些特性的 。同时阐明建立病毒的鉴别指标 , 即选择病毒
本身的特性 , 建立不同的鉴别技术和方法 , 以保证在病毒杀虫剂的研制和野外防治试验中病
毒同源性的一致 。 A ci N PV 杀虫剂建立的鉴别指标有如下几点 :
1
. 固 定纯化多角体 (包涵体 )的程序 采用固定的 (标准的 )纯化程序是比较的 前 提。 为
此针对包涵体病毒建立了一个尿素 、 S D S 和 N al l分别处理多角体的程序 。 用该法提纯的 病
毒制备抗血清 , 经免疫学技术试验 , 抗血清不与健康幼 虫组织蛋白有血清学反应 。 表明该程
序的可靠性 , 并且这种方法同样适用于G V 和 C PV 。
2
. 完整多角体 的氛基酸 组成分析 有了固定程序提纯多角体 , 就可直接进行氨基酸组成
分析。 由于有一致的提纯方法 , 且制样简便 、 仪器操作 , 因而重复性高。 包涵体蛋白分离纯
化手续较繁 , 不易操作规范化 , 纯度缺乏标准。 应取代目前国内外常进行的分离纯化 包涵体
蛋 白而后分析氨基酸用作比较。
3
. 韦.]备标准抗血清 血清学技术用于病毒的同源性检测十分可靠和简便 。本试验 以制备
的 A ci N PV 各组 分 抗 血 清 为标 准 , 观 察 了与13 株昆虫病毒之 间的血清学关系 , 以及对
A ci N PV 交叉感染的有益昆虫(家蚕和蜜蜂 )进行了血清学检测。 有了标准抗血清 , 利用免疫
技术就可对病毒的应用、 野外流行病学调查 、 病毒的同源性进行检测 。
4
. 病毒的SD S一PA G E 分析病毒的结 构多肤图语 病毒的结构多肤是病毒基因组的表达
产物 , 在病毒的鉴定中具有重要的表型特征 (H ar ra p , 1 9 77) [ ‘, l。 对病毒各组分分离提纯后 ,
就可进行电泳 , 了解各组分的结构多肤组成 , 从而得到各具特征的多肤图谱 。 以快速区别鉴
定为目的 , 我们建立了一种快速制样的方法 , 可直接对完整病毒进行结构多肤组成分析。 采
用铬银染色法可大幅度提高灵敏度 , 使样品所需量降至最低程度。 用这种方法对25 株昆虫病
毒 (N PV 、 CPV 、 G V )进行分析 , 结果重复性高 , 区别效果明显。
5
. 病毒墓囚组特性分析 应用限制性内切酶分析技木 , 使杆状病毒的分析简便易行。我
们为A ci N PV 建立了七种单、 双酶解图谱 , 并以此为依据 , 在杀虫剂研制中建立了一种病毒
同源性检测技术。 这种技木做为基因突变的检测指标是可靠的。 1 9 8 1一1 9 8 5年对林间防治后
回收的病毒 , 进行遗传变异检测 , 结果表明 , 连续传递复制的 A ci N PV 内切酶图谱无明显差
异 。 这一应川技术已经受到生产部 门的好评。 还 以此判别了A ci N PV 交叉感染枣尺镬后 , 所
分离的 N PV 与A ci N PV 之间的关系 , 两者的B gl 皿 酶切图谱 , 很易将它们相区别 。 采用 D N A
分子杂交技术测定关国白蛾 N PV 与 A ci N PV 无同源性 , 也验证了内切酶图浩的不同 , 同源
性就不 同。
以上荃本指标是每一种病毒杀虫剂在用于野外防治前都应了解的 , 它们为病毒的应用提
供重要的依据 。
参 考 文 献
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P r o P e r t ie s
,
J
.
In v e rt e b r
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P a th o l
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p o ly he d r o sis v ir u s o f t he e a b b a g e lo o Pe r
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g r a n u lo s is v ir u s o f P ie r f : br a ss ie a e
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J
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In v e rt e b r
‘
P a th o l
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th e g u a n in e p lu s e y t o s in e e o n te n t o f D N A
,
In : L
.
G r o s s m a n a n d K
.
M o ld a v e (e d
.
)
,
M
et h o d s
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A d y
.
V ir u , R e s
, ,
2 5 : 2 7 3一35 5 .
ST UD IE S ON B 10 CH E MICAL AND B IOPH YSICAL
CH AR AC TE R IST ICS OF A NU CLE AR POLYHE D R O S IS
V .RU S OF A PO CH E IM A C IN E R A R IU S AND T HE
USE .N T HE R E SE AR C H OF V IR AL !NSE CT IC ID E S
Y u Z a ilin
(T he R e se a re h I o s t‘才u fe o f F o r e s r叨 C A F )
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