全 文 ：第 3 卷 第 3 期
1 9 9 0 年 6 月
林 业 科 学研 究
FO R E S T R E S E A R C H
V o l
。
3
Ju n
. ,
,
N o
.
3
1 9 9 0
乌柏金带蛾核型多角体病毒初步研究 ’称
周显明 张金国
(贵 州省林业科学研究所 )
于在林 韩一侬 冯俊现
(中国林 业科学研究院林业研究所 ) (贵州省正安县林业局 )
关健词 鸟伯金带蛾 , 核型 多角体病毒
乌柏金带蛾 (E uP te To te : a Pi vo : 。 Y a n g )俗称合辣子 、乌柏毛虫, 属鳞翅目, 带蛾科。 由
北京农业大学杨集昆教授定名为一新种 I‘l。 主要危害乌柏 、 泡桐 、 杨树等 13 种经济和用材树
种 , 是贵州乌柏产区最严重的害虫 , 年发生面积约 10 多万亩。 不但造成乌柏籽大幅度减产 ,
而且降低乌柏籽出油率近 10 % , 给农林业生产造成巨大的经济损失。
19 8 6年在贵州省务川县乌柏林区采集到催病死亡的乌柏金带蛾幼 虫 。 19 8 8年开始对该病
原进行初步分离和电镜观察 , 证明为一株核型多角体病毒 , 现将结果报道于后 。
一 、 材料与方法
(一 ) 多角体的分离提取
多角体的纯化是将再次感病后所得死虫加水研磨 , 稀释后用 1 20 目尼龙纱布过滤 , 滤液
经 1 o oo r / m in 离心 5 m in , 去沉淀取上清液 , 用4 0 0 o r / m in 离心 2 0 m in , 弃上清液 。 沉淀
物置 4 0 % 一 6 0 % (:。/ : 。) 蔗糖梯度溶液上 , 4 0 0 o r / m in 离心 3 0 m in 。然后抽取多角体悬液 ,
由T r is 一盐酸缓冲液 (T E ) 和 0 . 5 % SD S 溶液及蒸馏水分别洗涤离心 。 所得 灰白色沉淀即为
纯化的病毒多角体。
(二 ) 病毒感染试验
1 9 8 8年 8月在正安县苗圃场内采集 3 ~ 4龄幼虫 , 装入 5 0cl n x 60 cl u 欠 5 0c m 的养虫笼内饲养
4一 6天 , 待幼虫适应后 , 用第一次野外感病死虫分离得到的病毒多角体 , 配成 4 . s x los/ m l、
2
.
5 X 1 0s / m l
、
2
.
S X I护/ m l多角体悬液 , 分别装入小型手持喷雾器内 ,均匀地喷于泡桐叶片上 ,
至不滴水为度 , 阴干后放入养虫笼 。 接毒前 , 笼内幼虫饥饿24 h 。 接毒喂食48 h 后 , 换无毒
泡桐叶继续饲养。 以后每隔 1 一 2 天换取鲜叶一次。 定期观察幼虫活动及发病状况 。
(三 ) 病毒粒子的分离提纯
纯化后的 E sN PV 多角体用 0 . 0 5 M N a zC 0 3 、 0 。 05 M N aC I(PH 一1 ) 的混合液 (l : 1 ) ,
在室溢下碱解 。纯化方法按文献〔2 〕。碱解液笠于 T E 配制的 40 % 一60 %蔗糖梯度上以 40 0 0
才; 文 J几1 9 8 9年1 1 J1 2 1 11 收 51J 。
.
4‘项 研究 为贵州 节f “ 七 I乙”科技 工义关课题 “ r今杆一金带蛾防 砚f宝技术研究” 内容之一 。 参加感 染试验(J 还有遵义地 [(林 业工·)
张本光 。
第 3 卷 第 3 期
1 9 9 0 年 6 月
林 业 科 学研 究
FO R E S T R E S E A R C H
V o l
。
3
Ju n
. ,
,
N o
.
3
1 9 9 0
乌柏金带蛾核型多角体病毒初步研究 ’称
周显明 张金国
(贵 州省林业科学研究所 )
于在林 韩一侬 冯俊现
(中国林 业科学研究院林业研究所 ) (贵州省正安县林业局 )
关健词 鸟伯金带蛾 , 核型 多角体病毒
乌柏金带蛾 (E uP te To te : a Pi vo : 。 Y a n g )俗称合辣子 、乌柏毛虫, 属鳞翅目, 带蛾科。 由
北京农业大学杨集昆教授定名为一新种 I‘l。 主要危害乌柏 、 泡桐 、 杨树等 13 种经济和用材树
种 , 是贵州乌柏产区最严重的害虫 , 年发生面积约 10 多万亩。 不但造成乌柏籽大幅度减产 ,
而且降低乌柏籽出油率近 10 % , 给农林业生产造成巨大的经济损失。
19 8 6年在贵州省务川县乌柏林区采集到催病死亡的乌柏金带蛾幼 虫 。 19 8 8年开始对该病
原进行初步分离和电镜观察 , 证明为一株核型多角体病毒 , 现将结果报道于后 。
一 、 材料与方法
(一 ) 多角体的分离提取
多角体的纯化是将再次感病后所得死虫加水研磨 , 稀释后用 1 20 目尼龙纱布过滤 , 滤液
经 1 o oo r / m in 离心 5 m in , 去沉淀取上清液 , 用4 0 0 o r / m in 离心 2 0 m in , 弃上清液 。 沉淀
物置 4 0 % 一 6 0 % (:。/ : 。) 蔗糖梯度溶液上 , 4 0 0 o r / m in 离心 3 0 m in 。然后抽取多角体悬液 ,
由T r is 一盐酸缓冲液 (T E ) 和 0 . 5 % SD S 溶液及蒸馏水分别洗涤离心 。 所得 灰白色沉淀即为
纯化的病毒多角体。
(二 ) 病毒感染试验
1 9 8 8年 8月在正安县苗圃场内采集 3 ~ 4龄幼虫 , 装入 5 0cl n x 60 cl u 欠 5 0c m 的养虫笼内饲养
4一 6天 , 待幼虫适应后 , 用第一次野外感病死虫分离得到的病毒多角体 , 配成 4 . s x los/ m l、
2
.
5 X 1 0s / m l
、
2
.
S X I护/ m l多角体悬液 , 分别装入小型手持喷雾器内 ,均匀地喷于泡桐叶片上 ,
至不滴水为度 , 阴干后放入养虫笼 。 接毒前 , 笼内幼虫饥饿24 h 。 接毒喂食48 h 后 , 换无毒
泡桐叶继续饲养。 以后每隔 1 一 2 天换取鲜叶一次。 定期观察幼虫活动及发病状况 。
(三 ) 病毒粒子的分离提纯
纯化后的 E sN PV 多角体用 0 . 0 5 M N a zC 0 3 、 0 。 05 M N aC I(PH 一1 ) 的混合液 (l : 1 ) ,
在室溢下碱解 。纯化方法按文献〔2 〕。碱解液笠于 T E 配制的 40 % 一60 %蔗糖梯度上以 40 0 0
才; 文 J几1 9 8 9年1 1 J1 2 1 11 收 51J 。
.
4‘项 研究 为贵州 节f “ 七 I乙”科技 工义关课题 “ r今杆一金带蛾防 砚f宝技术研究” 内容之一 。 参加感 染试验(J 还有遵义地 [(林 业工·)
张本光 。
2 9 8 林 业 科 学 研 究 3 卷
(三 ) 回交感染试验
感病死虫在室内常温下保存一年半后再提纯分离 , 直至两年后其毒力仍较强 (表 1 )。
表 1 乌柏金带峨 E sN PV 感染试验 (正安 , 1 9 8 · 8 , 室 内套笼》
睡毫升核多 角体
供试 虫数
(头 )
校正死亡率
(% )
4
.
5 x 1 0 8
2
.
5 x 1 0 8
2
.
5 又 1 0 .
对照(清 水 )
1 2 0
1 2 0
4 5
4 0
一 塑互些葬立蜜一⋯“正““率 ⋯一一竺型塑兰兰一一⋯
(头 ) { (% ) · (% ) l (头 ) r (% ) J
58 , ‘8 · 3 3 ⋯ 3 5 · “ ⋯ , 0 “ { , 。·。” ⋯
‘9 ‘o · 吕3
{
’6 · 。4 」 9 吕 ⋯ “1 · 67 ⋯
‘6 · 刁5 · 5 6 ⋯ ‘9 · ‘5 ⋯ 2 吕 ⋯ “2 · , 2 ⋯” “U I 一 1 1 1 } 2 了· 5 0 }
86
。
2 1
74
.
7 2
47
.
8 9
根据昆虫病毒的分类原则 , 我们将分离获得的这株病毒 , 命名为乌柏金带蛾核型多角体
病毒 , 简称 E s N PV , 属杆状病毒科 , A 亚组 。 属国内外第一次报道协 ‘l。 有关它的利用问题 ,
值得进一步研究。
今 考 文 献
〔1〕杨集昆等 , 1 9 9。, 乌柏金带峨新种记述 , 林 业科学 研究 , 3《2) : 1 42 ~ 1 4 5 。
印〕于在林 等 , 1 9 8 7 , 杨尺级核型多 角体病毒的提 取及某些理化性质分析 , 林业科学 , 2 3( 2 ): 2 21 ~ 2 26 。
一 3〕M a r tig n o n i, M . E . , 1 , 5 6 , A c a ta lo g o f v ir a l d ise a se s o f In se et s a n d M ite s , U S D A fo r e st te e hn ic a l
r e p o r t P N W
一
1 95
.
L4 〕梁东瑞等 , 1 9 8 6 , 中国 昆虫病毒图进 , 14 6 一 1 , 湖南科技出版社。
A PR E LIM!NAR Y S TU D Y O N T HE NPV OF
E U 尸T E R O T E S A 尸I犷O R A
Zh o u X ia n m in g Z h a n g Jin g g u o
( T ho R e se a r e h l , s r‘ro re o j F o r e s tru , G u i之h o u P r o o fo e e )
Y u Z a ilin H a n Y in o n g
(T he R e s e o r c h I o s t‘t“ te o f F o r e : tr , C A F )
Fe n g Ju n x ia n
(T h e F o r e s t B u r ea u o f Z h
e , g a o C o u o rg
,
G u i: h o u P r o v io e e )
A b strac t A n u e le a r po lyhed r o s is V lf U S 、V a S
G u iz h o u
is o la te d
Pro v in e e
fro m the e o rP8 e o f
la rv a o f E 赵p te犷o te s a p iv o r a Y a n g in C hin a
。
T he
in fec t io n sh o w ed th a t th e N PV 15 h ig hly Pa th o罗 n ie to ils e e t 。
ba e k
U n d e f
t fa n sm iS IO n a l d
f a n g es
S h0 W e d
1 5 4 0 ~ 3 3 8 0
s c a n n in g o f
n m a n d th a t
e lec tr o n m ie ros e o Py
,
o f v ir io n s 3 8 0~ 4 6 0
th e
n l l
-
th e
S IZ e
o f Po lyhed r a
U ltr a
一 thin s民tio n s
th a t t h e r e a r e Z
w o r d s E “Pte , o t e
O f 3 V l r lo n S I n
K e y sa p i口。, a Y a n g ;
e a e h b u n d le
.
n u e lea r Po lyhed r os is v ir u s